微生物常规鉴定技术(带图片)
微生物图谱
科玛嘉念珠菌显色培养基的菌落颜色：
菌种菌落颜色
热带念珠菌灰蓝色
白色念珠菌绿色
克柔念珠菌粉红色
光滑念珠菌紫红色
其他念珠菌白色
更多>>药物敏感性试验
常规药敏图片常规药敏图片药敏试验图片大肠杆菌药敏图双纸片确证试验大肠杆菌双纸片大肠杆菌ESBL筛大肠杆菌ESBL确苯唑西林耐药散苯唑西林和头孢ESBL确证试验ESBL确证试验D-试验〔葡萄球DNA酶试验
表皮葡萄球菌金黄色葡萄球菌β溶血性链球菌肺炎链球菌〔α溶血菌落图片奴卡菌金黄色葡萄球菌炭疽杆菌血涂片化脓性链球菌肺炎链球菌衣氏放线菌炭疽杆菌串珠试炭疽杆菌炭疽杆菌荚膜形炭疽杆菌炭疽杆菌
炭疽杆菌炭疽杆菌炭疽病〔呼吸道炭疽杆菌
葡萄球菌蜡样芽孢杆菌炭疽杆菌炭疽杆菌
放线杆菌
副流感嗜血杆菌梭形芽孢杆菌枯草芽孢杆菌波斯坦芽孢杆菌矮小芽孢杆菌变形杆菌周身鞭浅黄假单胞菌产色素铜绿假单产色素铜绿假单产金黄色色素栖铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌鼠伤寒沙门氏菌破伤风梭菌淋球菌霍乱弧菌
大肠埃希菌大肠埃希氏菌淋球菌鲍氏志贺菌
白色念珠菌和红衣原体细菌的鞭毛细菌L型菌落类型炭疽杆菌流感嗜血杆菌流感嗜血杆菌流感嗜血杆菌
流感嗜血杆菌流感嗜血杆菌淋球菌立克次体霍乱弧菌黄曲霉弧状菌铜绿假单胞菌L型大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌鲍氏志贺菌
L型细菌油煎蛋样L型细菌L型细菌L型细菌。
临床微生物学检验技术(85页)
应用：常用于肠杆菌科内某些种属的鉴别，如大肠埃希菌和产气肠杆菌，前者为阳性，后者为阴性。肠杆菌属和哈夫尼亚菌属为阴性，而沙门菌属、志贺菌属、枸橼酸杆菌属和变形杆菌属等为阳性。
4．β-半乳糖苷酶试验（ONPG试验） 原理：乳糖发酵过程中需要乳糖通透酶和β－半乳糖苷酶才能快速分解。有些细菌只有半乳糖苷酶，因而只能迟缓发酵乳糖，所有乳糖快速发酵和迟缓发酵的细菌均可快速水解邻硝基酚-β-D-半乳糖苷（O-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside,ONPG）而生成黄色的邻硝基酚。用于枸橼酸菌属、亚利桑那菌属与沙门菌属的鉴别。 方法：将待试菌接种于ONPG肉汤中，35℃水浴或孵箱孵育18~24h，观察结果。
3．甲基红（MR）试验 原理：某些细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸进一步被分解为甲酸、乙酸和琥珀酸等，使培养基pH下降至4.5以下时，加入甲基红指示剂呈红色。如细菌分解葡萄糖产酸量少，或产生的酸进一步转化为其他物质（如醇、醛、酮、气体和水），培养基pH在 5.4以上，加入甲基红指示剂呈桔黄色。 方法：将待试菌接种于葡萄糖磷酸盐蛋白胨水中，35℃孵育48~96h后，于5ml培养基中滴加5~6滴甲基红指示剂，立即观察结果。
二、染色标本
细菌标本经染色后，除能清楚看到细菌的形态、大小、排列方式外，还可根据染色反应将细菌进行分类，因此染色标本的检查在细菌的初步鉴定中应用最广，起着非常重要的作用。 （一）常用染料：酸性染料、碱性染料、复合染料。 （二）常用的染色方法：革兰染色、抗酸染色、 荧光染色。
革兰染色
二、培养接种
（一）划线接种 1.方法 斜线法 、曲线法 、方格法 、放射法 、四格法。
斜线法
微生物的鉴定ppt课件
微生物的鉴定（identification）:
借助于现有的微生物分类系统，通过特 征测定，确定未知的、或新发现的、或未 明确分类地位的微生物所应归属分类群的 过程。
烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的 健康皮 肤进行 自体移 植，但 对于大 面积烧 伤病人 来讲， 健康皮 肤很有 限，请 同学们 想一想 如何来 治疗该 病人
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该法常用于肠道菌、噬菌体和病毒的分类鉴定。 利用此法，已将伤寒杆菌、肺炎双球菌等菌分成数 十种菌型。
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4．生态学特征
生态学特征主要包括它与其它生物之间的关系（是 寄生还是共生？寄主范围以及致病的情况）、在自然界 的分布情况（pH情况、水分程度等）、渗透压情况（是 否耐高渗、是否有嗜盐性等）。
在具体鉴定时，可参看中国科学院微生物研究所 细菌分类组编著的《一般细菌常用鉴定方法》一书。
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3．要有合适的鉴定方法
微生物种类繁多，特征各异，性状有主次之分。 因此，在鉴定某种微生物时，要选用合适的鉴定方法， 确定主要的测试项目。
微生物常规鉴定技术课件 (一)
微生物常规鉴定技术课件 (一)微生物常规鉴定技术是微生物学领域中的一项重要技术，在许多领域中具有广泛的应用。
微生物常规鉴定技术的课件包括什么内容？以下是关于“微生物常规鉴定技术课件”的详细介绍。
一、细菌培养基在微生物常规鉴定技术中，选择适合微生物生长的培养基是非常重要的。
在微生物课件中，常规菌落计数法和筛选比较常用的培养基有营养琼脂平板、大肠杆菌选择性培养基、血液琼脂平板、青霉素和链霉素琼脂平板等。
二、细菌涂片染色方法细菌涂片染色是细菌鉴定中的重要步骤。
在这里，我们需要掌握常见的染色技术，如革兰染色法、酸快染色法、氧化肽染色法、吉姆萨染色法等。
在微生物常规鉴定技术中，我们还需要学习用于特殊细胞结构和菌种的染色方法，如荧光染色法、免疫染色法等。
三、细菌鉴定在微生物常规鉴定技术中，我们需要通过观察细菌形态、菌落形态、培养特性和生化特征等方面的特点来鉴定细菌种类。
这里，微生物课件中常用的鉴定方法有革兰氏阳性和阴性鉴定、氧化能力测试、葡萄糖结果测试等。
四、抗生素敏感性试验抗生素敏感性试验是细菌鉴定中的另一项重要的测试。
在这里，我们需要学习抗生素敏感性试验的原理和方法。
这种方法可以帮助医生们选择最合适的抗生素来治疗感染。
五、它盘分析它盘分析是微生物课件中的另一个重要方面。
它可用于确定抗生素的最低抑制浓度（MIC），这对于选择最佳的治疗方案非常重要。
总之，微生物常规鉴定技术是微生物学领域的一个非常重要的技术，它可以帮助我们确定微生物的种类、特征和抗生素敏感性等方面的信息。
掌握微生物常规鉴定技术的课件是学习微生物学的必要步骤，也是在微生物领域中取得成功的关键所在。
微生物的常规鉴定技术共23页文档
1、战鼓一响，法律无声。——英国 2、任何法律的根本；不，不成文法本 身就是 讲道理 ……法 律，也 ----即 明示道 理。— —爱·科 克
3、法律是最保险的头盔。——爱·科 克 4、一个国家如果纲纪不正，其国风一 定颓败 。—— 塞内加 5、法律不能使人人平等，但是在法律 面前人 人是平 等的。 ——波 洛克
Thank youБайду номын сангаас
6、最大的骄傲于最大的自卑都表示心灵的最软弱无力。——斯宾诺莎 7、自知之明是最难得的知识。——西班牙 8、勇气通往天堂，怯懦通往地狱。——塞内加 9、有时候读书是一种巧妙地避开思考的方法。——赫尔普斯 10、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。——笛卡儿
微生物分类鉴定方法 ppt课件
t课件
13
核酸分子杂交
定义
按碱基互补配对的原理，用人工方法对两条不同来源 的单链核酸进行复性，以构建新的杂合双链核酸的技 术，成为核酸杂交。包括DNA-RNA、DNA-rRNA、 rRNA-rRNA分子间的杂交。
ppt课件
14
核酸分子杂交
DNA是除少数RNA病毒以外的一切微生物的遗传信息载体。每一种微 生物均有其自己特有的、稳定的DNA即基因组的成分和结构，不同种 微生物间基因组序列的差异程度代表着它们之间亲缘关系的远近、疏密。 因此可以用基因组的一些指标作为鉴定微生物类别的依据。
ppt课件
9
微生物分类鉴定中的现代方法
DNA碱基比例测定 核酸分子杂交法 rRNA寡聚核苷酸编目
微生物分类鉴定方法
ppt课件
1
微生物分类鉴定方法
从不同层次（细胞的、分子的），用不同学科（化学、物理学、遗传学、 免疫学、分子生物等）的技术方法来研究和比较不同微生物的细胞、细 胞组分或代谢产物，从中发现的反映微生物类群特征的资料。
在微生物分类中，任何能稳定地反映微生物种类特征的资料，都有分类 学意义，都可以作为分类鉴定的依据。
以往各种界级分类不同的新系统，称为三域学说，
"域"是一个比界更高的界级分类单元，过去曾称原界。 三个域指的是细菌域(以前称"真细菌域")、古生菌域 (以前称古细菌域)和真核生物域。
ppt课件
17
rRNA寡核苷酸数目
定义
一种通过分析原核或真核细胞种最稳定的rRNA寡 核苷酸序列同源性程度，以确定不同生物之间的 亲缘关系和进化谱系的方法。
微生物常规鉴定技术与方法
微生物常规鉴定技术与方法微生物常规鉴定技术与方法是指一系列用于鉴定微生物种类及其特征的实验方法和技术。
通过对微生物的形态特征、生理特性、生化反应和分子生物学等方面的研究，可以进行微生物的鉴定和分类。
以下将介绍常见的微生物常规鉴定技术与方法。
一、形态特征鉴定形态特征鉴定是利用光学显微镜观察微生物的形态特征来进行鉴定的方法。
包括观察细胞形态、大小、颜色、有无芽孢、纤毛、胞内结构等。
形态特征鉴定主要用于细菌、真菌、微藻和鞭毛虫等微生物的鉴定。
二、生理特性鉴定生理特性鉴定是通过观察微生物生长特性和代谢反应来进行鉴定的方法。
其中包括鉴定微生物的生长速度、产酸或产气能力、耐受盐浓度、耐温范围、对氧气的需求等。
生理特性鉴定常用于细菌的分类和鉴定。
三、生化反应鉴定生化反应鉴定是利用微生物在特定条件下的代谢反应来进行鉴定的方法。
通过观察微生物产生酶的能力和对特定底物的降解效果等生化特性，可以鉴定微生物的种类。
常用的生化反应鉴定方法包括培养基的成分、酶活性测定、氧化还原反应等。
四、免疫学鉴定免疫学鉴定是利用抗原与抗体的特异性反应来进行鉴定的方法。
通过检测微生物的抗原或抗体反应，可以确定微生物的种类。
免疫学鉴定主要用于病原微生物的鉴定，如细菌、病毒和寄生虫等。
五、分子生物学鉴定分子生物学鉴定是通过检测微生物基因组的特异序列来进行鉴定的方法。
主要包括核酸杂交、聚合酶链反应(PCR)和基因测序等技术。
这些技术可以直接从微生物的DNA或RNA提取物中进行特异序列的扩增、测序和比对，从而确定微生物的种类。
分子生物学鉴定方法具有高特异性和敏感性，已经成为微生物鉴定的重要工具。
除了以上常见的微生物常规鉴定技术与方法，还有一些特殊的鉴定方法，如：细胞色素C氧化酶试验、革兰染色、脂多糖检测、生物膜形成能力检测等。
这些方法结合已有的鉴定技术，可以进一步提高微生物鉴定的准确性和可靠性。
微生物检验ppt课件
目 录
• 微生物检验概述 • 微生物检验的基本原理与方法 • 微生物检验的样品采集与处理 • 微生物检验的常用技术与操作 • 微生物检验的质量控制与保证 • 微生物检验的挑战与发展趋势
01
微生物检验概述
微生物检验的定义与重要性
定义
微生物检验是对环境中的微生物进行定性、定量和鉴定的一种技术，通过特定 的方法和技术手段，对微生物的种类、数量、生理生化特性、遗传物质等进行 分析和研究。
。
04
微生物检验的常用技术与操作
显微镜技术
光学显微镜
01
利用可见光和光学透镜成像，可观察细菌、真菌等微生物的形
态和结构。
电子显微镜
02
利用电子束成像，能够观察更细微的结构，如病毒、细菌的超
微结构等。
相差显微镜
03
利用光的相位差原理，可观察无色透明的微生物，如支原体、
衣原体等。
培养基制备技术
01
补体结合试验
利用补体参与抗原抗体反 应，形成复合物并激活补 体系统，用于检测微生物 抗原或抗体。
微生物的分子生物学检测方法
PCR技术
应用聚合酶链式反应（PCR）技术扩 增微生物特异性基因片段，实现快速 、灵敏的微生物检测。
生物信息学分析
应用生物信息学方法对微生物基因组 数据进行挖掘和分析，揭示微生物种 类、进化关系等信息。
脱羧酶试验等。
酶活性检测
检测微生物产生的特定酶活性 ，如过氧化氢酶试验、氧化酶
试验等。
抗生素敏感性试验
检测微生物对抗生素的敏感性 ，以指导临床用药。
微生物的血清学试验
凝集试验
应用特异性抗体与微生物 抗原结合，形成可见的凝 集现象，用于鉴定微生物 种类。
卫生微生物检测的基本技术优秀课件
一 、实验目的
1、掌握无菌操作、平板制备、接种、革兰氏染色及镜 检技术。
2、熟悉革兰氏染色的原理。 3、了解革兰氏染色在细菌分类鉴定中的重要性。
二、实验仪器与材料
• 大肠杆菌、芽胞杆菌 • 革兰氏染色液 • 载玻片 • 显微镜等
三、实验内容
1、无菌技术
火焰周围10厘米
合液残渍。 ④ 将物镜镜头转成“八”字形。载物台降至
最低。
四、 注意事项
制片的注意事项： 1. 载玻片要洁净无油迹。 2. 滴生理盐水不要过多。 3. 挑菌量宜少。 4.涂片要均匀，菌膜宜薄。 5.涂菌的动作要轻，防止菌液迸溅。 6. 沾有细菌的接种环要及时火焰灭菌。
革兰染色的注意事项
1.选用培养18-24小时菌龄的细菌为宜，若细菌太 老，由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈 阴性反应
碘液媒染 1min，水洗， 滤纸吸干。
95%酒精脱色 20-30s，水洗， 滤纸吸干。
•滴加：轻轻摇动，一般30s •流加：流出的乙醇无紫色。
番红复染 1-2min，水洗， 滤纸吸干。
步骤5: 镜检 干燥后，油镜观察。以分散开的细菌颜色为准。
染色结果
4、显微镜的使用
① 滴加香柏油。转动转换器时，不要用手指扳动物镜镜头。 ② 从侧面注视，上升载物台，使油镜前端浸入香柏油中并
（双色笔）
革兰染色
试剂 A B
C
D
步骤2：干燥
涂好的菌膜在室温下自然干燥。也可在酒精灯上 方稍微加热（10面向上，在火焰最热部分 迅速通过2-3次，待玻片冷却后方可染色。
步骤4: 染色
结晶紫染色 1min
刚好覆盖为宜
水洗，用滤纸吸干。
水洗时，不要直接冲菌膜面，而应使水 从载玻片的一端流下，水流不宜过 急，以免涂片薄膜脱落。
微生物常规鉴定技术(带图片)
微生物常规鉴定技术一、形态结构和培养特性观察１、微生物的形态结构观察主要是通过染色，在显微镜下对其形状、大小、排列方式、细胞结构（包括细胞壁、细胞膜、细胞核、鞭毛、芽孢等）及染色特性进行观察，直观地了解细菌在形态结构上特性，根据不同微生物在形态结构上的不同达到区别、鉴定微生物的目的。
２、细菌细胞在固体培养基表面形成的细胞群体叫菌落（colony）。
不同微生物在某种培养基中生长繁殖，所形成的菌落特征有很大差异，而同一种的细菌在一定条件下，培养特征却有一定稳定性。
，以此可以对不同微生物加以区别鉴定。
因此，微生物培养特性的观察也是微生物检验鉴别中的一项重要内容。
１）细菌的培养特征包括以下内容：在固体培养基上，观察菌落大小、形态、颜色（色素是水溶性还是脂溶性）、光泽度、透明度、质地、隆起形状、边缘特征及迁移性等。
在液体培养中的表面生长情况（菌膜、环）混浊度及沉淀等。
半固体培养基穿刺接种观察运动、扩散情况。
２）霉菌酵母菌的培养特征：大多数酵母菌没有丝状体，在固体培养基上形成的菌落和细菌的很相似，只是比细菌菌落大且厚。
液体培养也和细菌相似，有均匀生长、沉淀或在液面形成菌膜。
霉菌有分支的丝状体，菌丝粗长，在条件适宜的培养基里，菌丝无限伸长沿培养基表面蔓延。
霉菌的基内菌丝、气生菌丝和孢子丝都常带有不同颜色，因而菌落边缘和中心，正面和背面颜色常常不同，如青霉菌：孢子青绿色，气生菌丝无色，基内菌丝褐色。
霉菌在固体培养表面形成絮状、绒毛状和蜘蛛网状菌落。
革兰氏染色:革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立的。
革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G—）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。
该染色法所以能将细菌分为G+菌和G—菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。
G—菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经蕃红复染后就成红色。
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微生物常规鉴定技术一、形态结构和培养特性观察１、微生物的形态结构观察主要是通过染色，在显微镜下对其形状、大小、排列方式、细胞结构（包括细胞壁、细胞膜、细胞核、鞭毛、芽孢等）及染色特性进行观察，直观地了解细菌在形态结构上特性，根据不同微生物在形态结构上的不同达到区别、鉴定微生物的目的。
２、细菌细胞在固体培养基表面形成的细胞群体叫菌落（colony）。
不同微生物在某种培养基中生长繁殖，所形成的菌落特征有很大差异，而同一种的细菌在一定条件下，培养特征却有一定稳定性。
，以此可以对不同微生物加以区别鉴定。
因此，微生物培养特性的观察也是微生物检验鉴别中的一项重要容。
１）细菌的培养特征包括以下容：在固体培养基上，观察菌落大小、形态、颜色（色素是水溶性还是脂溶性）、光泽度、透明度、质地、隆起形状、边缘特征及迁移性等。
在液体培养中的表面生长情况（菌膜、环）混浊度及沉淀等。
半固体培养基穿刺接种观察运动、扩散情况。
２）霉菌酵母菌的培养特征：大多数酵母菌没有丝状体，在固体培养基上形成的菌落和细菌的很相似，只是比细菌菌落大且厚。
液体培养也和细菌相似，有均匀生长、沉淀或在液面形成菌膜。
霉菌有分支的丝状体，菌丝粗长，在条件适宜的培养基里，菌丝无限伸长沿培养基表面蔓延。
霉菌的基菌丝、气生菌丝和孢子丝都常带有不同颜色，因而菌落边缘和中心，正面和背面颜色常常不同，如青霉菌：孢子青绿色，气生菌丝无色，基菌丝褐色。
霉菌在固体培养表面形成絮状、绒毛状和蜘蛛网状菌落。
革兰氏染色:革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立的。
革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G—）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。
该染色法所以能将细菌分为G+菌和G—菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。
G—菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经蕃红复染后就成红色。
G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色步骤：（1）涂片：涂片方法与简单染色涂片相同。
（2）晾干：与简单染色法相同。
（3）固定，与简单染色法相同（4）结晶紫色染色：将玻片置于废液缸玻片搁架上，加适量（以盖满细菌涂面）的结晶紫染色液染色1分钟。
（5）水洗：倾去染色液，用水小心地冲洗。
（6）媒染：滴加卢哥氏碘液，媒染1min。
（7）水洗：用水洗去碘液。
（8）脱色：将玻片倾斜，连续滴加95%乙醇脱色20—25s至流出液无色，立即水洗。
（9）复染：滴加蕃红复染5min。
（10）水洗：用水洗去涂片上的蕃红染色液。
（11）晾干：将染好的涂片放空气中晾干或者用吸水纸吸干。
（12）镜检：镜检时先用低倍，再用高倍，最后用油镜观察，并判断菌体的革兰氏染色反应性。
（13）实验完毕后的处理：①将浸过油的镜头按下述方法擦拭干净，a.先用擦镜纸将油镜头上的油擦去。
b.用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头擦2—3次。
c.再用干净的擦镜纸将镜头擦2—3次。
注意擦镜头时向一个方向擦拭。
②看后的染色玻片用废纸将香柏油擦干Aseptic technique:Streak plate:Pour plateSpread plateThe method of a serial dilutions for viable counting二、生理生化试验微生物生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。
因此微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一。
微生物检验中常用的生化反应有：1、尿素酶（Urease）试验有些细菌能产生尿素酶，将尿素分解、产生2个分子的氨，使培养基变为碱性，酚红呈粉红色。
尿素酶不是诱导酶，因为不论底物尿素是否存在，细菌均能合成此酶。
其活性最适pH为7.0。
试验方法：挑取18~24h待试菌培养物大量接种于液体培养基管中，摇均，于36±1℃培养10，60和120min，分别观察结果。
或涂布并穿刺接种于琼脂斜面，不要到达底部，留底部作变色对照。
培养2，4和24h分别观察结果，如阴性应继续培养至4天，作最终判定，变为粉红色为阳性。
2、氧化酶（Oxidase）试验氧化酶亦即细胞色素氧化酶，为细胞色素呼吸酶系统的终末呼吸酶，氧化酶先使细胞色素C氧化，然后此氧化型细胞色素C再使对苯二胺氧化，产生颜色反应。
试验方法：在琼脂斜面培养物上或血琼脂平板菌落上滴加试剂1~2滴，阳性者Kovacs氏试剂呈粉红色~深紫色，Ewing氏改进试剂呈蓝色。
阴性者无颜色改变。
应在数分钟判定试验结果。
注意事项：（1）盐酸二甲基对苯撑二胺溶液容易氧化，溶液应装在棕色瓶中，并在冰箱保存，如溶液变为红褐色，即不宜使用。
（2）铁、镍铬丝等金属可催化二甲基对苯撑二胺呈红色反应，若用它来挑取菌苔，会出现假阳性，故必须用白金丝或玻璃棒（或牙签）来挑取菌苔。
（3）在滤纸上滴加试剂，以刚刚打湿滤纸为宜，如滤纸过湿，会防碍空气与菌苔接触，从而延长了反应时间，造成假阴性。
3、过氧化氢酶的测定过氧化氢酶又称接触酶，能催化过氧化氢分解水和氧。
1．试剂：3－10％过氧化氢（H2O2）2．菌种培养：将测试菌种接种于合适的培养基斜面上，适温培养18－24h。
3．试验方法：取一干净的载波片，在上面滴1滴3－10％的H2O2，挑取1环培养18－24h的菌苔，在H2O2溶液中涂抹，若有气泡（氧气）出现，则为过氧化氢酶阳性，无气泡者为阴性。
也可将过氧化氢溶液直接加入斜面上，观察气泡的产生。
4．注意事项：过氧化氢酶是1种以正铁血红素作为辅基的酶，所以测试菌所生长的培养基不可含有血红素或红血球。
4、甲基红（Methyl Red）试验肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基PH值下降至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红。
试验方法：挑取新的待试纯培养物少许，接种于MR－VP生化鉴定管，于36通用培养基，培养于36±1°C或30°C（以30°C较好）3~5天，从第二天起，每日取培养液1ml，加甲基红指示剂1~2滴，阳性呈鲜红色，弱阳性呈淡红色，阴性为黄色。
迄至发现阳性或至第5天仍为阴性、即可判定结果。
甲基红为酸性指示剂，pH围为4.4~6.0，其pK值为5.0。
故在pH5.0以下，随酸度而增强黄色，在pH5.0以上，则随碱度而增强黄色，在pH5.0或上下接近时，可能变色不够明显，此时应延长培养时间，重复试验。
5、V-P试验某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V－P（+）反应。
试验方法：１）O’Meara氏法：将试验菌接种于通用培养基，于36±1°C培养48h，培养液1ml加O’Meara试剂（加有0.3%肌酸Creatine或肌酸酐Creatinine的40%氢氧化钠水溶液）1ml，摇动试管1~2min，静置于室温或36±1°C恒温箱，若4h不呈现伊红、即判定为阴性。
亦有主在48~50°C水浴放置2h后判定结果者。
２）Barritt氏法：将试验菌接种于通用培养基，于36±1°C培养4天、培养液2.5ml先加入5°Cα萘酚（2-na-phthol）纯酒精溶液0.6ml,再加40%氢氧化钾水溶液0.2ml，摇动2~5min，阳性菌常立即呈现红色，若无红色出现，静置于室温或36±1°C恒温箱，如2h仍不显现红色、可判定为阴性。
３）快速法：将0.5%肌酸溶液2滴放于小试管中、挑取产酸反应的三糖铁琼脂斜面培养物一接种环，乳化接种于其中，加入5%α-萘酚3滴，40%氢氧化钠水溶液2滴，振动后放置5min，判定结果。
不产酸的培养物不能使用。
本试验一般用于肠杆菌科各菌属的鉴别。
在用于芽胞杆菌和葡萄球菌等其它细菌时，通用培养基中的磷酸盐可阻碍乙酰甲基醇的产生，故应省去或以氯化钠代替。
6、含碳化合物的利用细菌能否利用某些含碳化合物作为唯一碳源，反映该菌是否产生代谢这种化合物的有关酶系，因而作为鉴定依据。
测定的基础培养基配方很多，因种而异。
现介绍1种合成的基础培养基，有些细菌还可适当补加各种维生素。
培养基可制成液体，分装试管，也可制成固体平板。
可用于测定的底物种类很多，有单糖、双糖、糖醇、脂肪酸、羟基酸及其他有机酸、醇、各种氨基酸类胺类以及碳氢化合物等。
糖的含量一般为1％，醇类酚类等的含量一般为0.1－0.2％，氨基酸的含量一般为0.5％。
因碳氢化合物不溶于水，可在液体培养基中振荡培养，或加入到45℃的固体培养基中，振荡后立即倒成平板。
有些底物不宜用高压灭菌，可用过滤法灭菌后加入已灭菌的基础培养基中，某些醇类和酚类不必灭菌。
接种和观察结果：菌种最好做成悬液，避免带入少量碳源干扰试验结果。
平板培养用接种环点种，液体培养则用直针接种。
每一测定菌必须接种未加碳水化合物的空白基础培养基作对照。
适温培养2、5、7天后观察，凡测定菌在有碳水化合物的培养基中生长情况，明显超过空白培养基的生长量为阳性，否则为阴性。
假若两种培养基上生长情况差别不明显，开在同一培养基上连续移种3次，如差别仍不明显则以阴性论。
7、葡萄糖的氧化发酵试验在细菌鉴定中，糖类发酵产酸是1项重要依据。
细菌对糖类的利用有2种类型：1种是从糖类发酵产酸，不需要以分子氧作为最终受氢体，称发酵型产酸；另一种则以分子氧作为最终受氢体，称氧化型产酸。
前者包括的菌种类型为多数。
氧化型产酸量较少，所产生的酸常常被培养基中的蛋白胨分解时所产生的胺所中和，而不表现产酸。
为此，Hugh和Leifson提出一种含有低有机氮的培养基，用以鉴定细菌从糖类产酸是属氧化型产酸或发酵型产酸。
这一试验广泛用于细菌鉴定。
一般用葡萄糖作为糖类代表。
也可利用这一基础培养基来测定细菌从其他糖类或醇类产酸的能力。
（1）接种：以18－24h的幼龄菌种，穿刺接种在上述培养基中，每株菌接4管，其中2管用油封盖（凡士林：液体石蜡＝1：1混合后灭菌），约加0.5－1厘米厚，以隔绝空气为闭管。
另2管不封油为开管，同时还要有不接种的闭管作对照。
适温培养1、2、4、7天观察结果。
（2）结果观察：氧化型产酸――仅开管产酸，氧化作用弱的菌株往往先在上部产碱（1－2d），后来才稍变酸。