HPLC法测定雷贝拉唑钠肠溶微丸的有关物质

碱降解：配制溶液时加入 ３ ｍｏｌ ／Ｌ ＮａＯＨ 溶液 ５ ｍＬ，放置 ２４ ｈ 后，加入 ３ ｍｏｌ ／Ｌ 盐酸溶液 ５ ｍＬ 中和；其他操作同未降解。
１畅８ 样品测定 取本品 ２０ 粒，打开胶囊壳，倾出内容物， 精密称定，混合均匀，取适量（约相当于雷贝拉唑钠 ２５ ｍｇ），精密 称定，置 １００ ｍＬ 量瓶中，加 ０畅１ ｍｏｌ ／Ｌ ＮａＯＨ 溶液 ６０ ｍＬ，充分振 摇使溶解，加 甲 醇 适 量， 冷 却 至 室 温， 再 加 甲 醇 稀 释 至 刻 度， 摇 匀，离心，取上清液作为供试品溶液，临用新制。 精密量取供试 品溶液 １ ｍＬ，置 １００ ｍＬ 量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，作为 对照溶液，临用新制。 取对照溶液 １０ μＬ，注入液相色谱仪，调节 检测灵敏度，使主成分峰的峰高约为满量程的 １０％ ～２０％；再精 密量取对照溶液及供试品溶液各 １０ μＬ，分别注入液相色谱仪， 记录色谱图。 用自身对照法计算各杂质量及杂质总和。
作者简介：马延，男，在职硕士，研究方向：化学药物质量标 准的 研究， Ｅ－ｍａｉｌ：ｍａｙａｎｓｔｕｄｅｎｔ＠１２６．ｃｏｍ；傅强，通 讯 作 者，男，博 士，教 授，研 究 方 向：药 物 色 谱 分 析 、药 品 质 量 标 准 和 毒 物 分 析 ，Ｅ －ｍａｉｌ ：ｆｕｑｉａｎｇ ＠ ｍａｉｌ畅ｘｊｔｕ畅ｅｄｕ畅ｃｎ。
［ Ａｂｓｔｒａｃｔ ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａｎ ＨＰＬＣ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｌａｔｅｄ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ ｏｆ ｒａｂｅｐｒａｚｏｌｅ ｓｏｄｉｕｍ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｏｎ ａ Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ ｃｏｌｕｍｎ畅Ｔｈｅ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ｃｏｎｓｉｓｔｅｄ ｏｆ ２ ｇ ／Ｌ ａｍｍｏｎｉｕｍ ａｃｅｔａｔｅ－ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ （９５砄５） ａｎｄ ２ ｇ ／Ｌ ａｍｍｏｎｉｕｍ－ ｍｅｔｈａｎｏｌ（１５砄８５） ， ｗｉｔｈ ｌｉｎｅａｒ ｇｒａｄｉｅｎｔ ｅｌｕｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ｏｆ １畅０ ｍＬ ／ｍｉｎ畅Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ２９０ ｎｍ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｒｅｌａｔｅｄ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ ｗｅｒｅ ｃｏｍｐｌｅｔｅｌｙ ｓｅｐａｒａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｍａｉｎ ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔ畅Ｔｈｅ ｌｉｍｉｔ ｏｆ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｒａｂｅｐｒａｚｏｌｅ ｗａｓ ０畅２５ ｎｇ ａｎｄ ｔｈｅ ｌｉｍｉｔ ｏｆ ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｗａｓ ０畅７５ ｎｇ，ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ ０畅０１％ ａｎｄ ０畅０３％ ｏｆ ｔｅｓｔ ｓａｍｐｌｅ ａｎｄ ｍｅｔ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ畅Ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｓｏｌｖｅｎｔｓ， ｐｒｉｎｃｉｐａｌ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙ ａｎｄ ｇｏｏｄ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ畅Ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｗａｓ ｎｏｔ ｓｔａｂｌｅ ａｔ ｒｏｏｍ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ｓｉｍｐｌｅ， ｒａｐｉｄ ａｎｄ ａｃｃｕｒａｔｅ， ａｎｄ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｃｏｎｔｒｏｌ ｔｈｅ ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ ｒａｂｅｐｒａｚｏｌｅ ｓｏｄｉｕｍ ｅｎｔｅｒｉｃ－ｃｏａｔｅｄ ｐｅｌｌｅｔｓ．
１畅４ 样品制备方法 １畅４畅１ 溶剂的选择［１１］ ：雷贝拉唑钠肠溶微丸胶囊是采用流 化床对空白丸芯上药和包衣的方法，对空白丸芯包载药层、隔离 层和肠溶层而制成的肠溶微丸胶囊。 文献中采用 ０畅０５ ｍｏｌ ／Ｌ 氢 氧化钠－甲醇（４０砄６０）和 ｐＨ １１畅３ 缓冲液－乙腈（８０砄２０） 作为溶 剂，采用这 ２ 种溶剂配制样品分别作为供试品溶液 １ 和供试品 溶液 ２。 另外考察溶剂 ０畅０５ ｍｏｌ ／Ｌ 氢氧化钠－甲醇（６０ 砄４０） 和 ０畅１ ｍｏｌ ／Ｌ 氢氧化钠－甲醇（６０砄４０），分别配制样品作为供试品溶 液 ３ 和供试品溶液 ４，取以上供试品溶液各 １０ μＬ，注入高效液相 色谱仪，记录色谱图。 采用不同溶剂配制的供试品溶液 ｐＨ 值不同。 供试品溶液 １ 总杂质为 ２畅１２％，其它供试品溶液杂质个数均为 ８，总杂质量基 本一致，分别于 ０、２、４ ｈ 考察供试品溶液 ２、３、４ 的稳定性，取各 供试品溶液 １０ μＬ，注入液相色谱仪，记录色谱图。 １畅４畅２ 超声与振摇：取雷贝拉唑钠肠溶微丸适量（ 约相当 于雷贝拉唑钠 ２５ ｍｇ），精密称定，置 １００ ｍＬ 量瓶中，加 ０畅１ ｍｏｌ ／Ｌ ＮａＯＨ 溶液 ６０ ｍＬ，分别采用超声和振摇的方式使其溶解，加甲醇 适量，冷却至室温，再加甲醇稀释至刻度，摇匀，离心，取上清液 作为供试品溶液。 取各供试品溶液 １０ μＬ，注入液相色谱仪，记 录色谱图，结果超声处理后的供试品杂质数为 １１ 个，杂质量为 ０畅８９％；振摇处理后的供试品杂质数为 ８ 个，杂质量为 ０畅６０％。 １畅５ 检测限和定量限 称取雷贝拉唑钠对照品适量，加溶 剂制成 ０畅２５ ｍｇ ／ｍＬ 的对照品储备液，并稀释成系列浓度，精密 量取不同体积，注入液相色谱仪，记录色谱图，测定结果。 １畅６ 专属性试验 １畅６畅１ 溶 剂 和 空 白 辅 料： 称 取 空 白 辅 料 约 ４５０ ｍｇ， 置 １００ ｍＬ的量瓶中，加入 ０畅１ ｍｏｌ ／Ｌ ＮａＯＨ ６０ ｍＬ，加甲醇适量，冷却 至室温，再加甲醇稀释至刻度，摇匀，离心，取上清液作为空白辅 料溶液。 取该溶液和空白溶剂 １０ μＬ，注入液相色谱仪，记录色 谱图。 １畅６畅２ 系统 适 用 性 溶 液： 精 密 称 取 雷 贝 拉 唑 钠 对 照 品 约 １２畅５ ｍｇ 和间氯过氧苯甲酸约 ５ ｍｇ，置 ５０ ｍＬ 量瓶中，加溶剂溶 解并稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液。 立即进样 １０ μＬ， 记录色谱图。
［ Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ｒａｂｅｐｒａｚｏｌｅ ｓｏｄｉｕｍ ｅｎｔｅｒｉｃ－ｃｏａｔｅｄ ｐｅｌｌｅｔｓ； ｒｅｌａｔｅｄ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ；ＨＰＬＣ
雷贝拉唑钠（ ｒａｂｅｐｒａｚｏｌｅ ｓｏｄｉｕｍ） 为苯并咪唑类质子泵抑制 剂，临床上用于伴有出血或严重侵蚀性活动性十二指肠溃疡、胃 溃疡的治疗；侵蚀性或溃疡性的胃食道返流病（ ｇａｓｔｒｏｅｓｏｐｈａｇｅａｌ ｒｅｆｌｕｘ ｄｉｓｅａｓｅ，ＧＥＲＤ） 的短期治疗［１－３］ 。 中国药典未收载雷贝拉 唑钠肠溶 微 丸 的 标 准， 国 家 标 准 仅 收 载 了 其 肠 溶 片 标 准［４］ ， Ｕ畅Ｓ畅Ｐ 论坛中也提到了雷贝拉唑钠肠溶片的质量标准［５］ 。 国内 关于雷贝拉唑钠有关物质和含量测定报道很多［６－１０］ ，但在测定 有关物质时，大都采用等度洗脱的方式进行有关物质的检测，且 对主要降解杂质没有进行定位定性，存在一定的局限性。 本文 在文献方法的基础上，对雷贝拉唑钠肠溶微丸中有效成分的提 取方式和提取溶剂进行了考察，以梯度洗脱的方式进行有关物 质的检测，并对已知杂质进行定位，采用自身对照法进行定量， 进一步优化并建立 ＨＰＬＣ 法对雷贝拉唑钠中杂质的检测方法，并
光照降解：将配制好的溶液置强光（４５００ ±５００ ＬＸ） 下照射 ２４ ｈ，其他操作同未降解；
氧化降解：配制溶液时加入间氯过氧苯甲酸约 １０ ｍｇ，其他 操作同未降解；
高温降解：将配制好的溶液于 ９０ ℃水浴加热 ２ ｈ，冷却至室 温，再加甲醇定容，其他操作同未降解；
酸降解：配制溶液时加入 １ ｍｏｌ ／Ｌ 盐酸 ４ ｍＬ，其他操作同未 降解；
时间 ／ｍｉｎ
Ａ ／％
Ｂ ／％
０
１００
０
２０
０
１００
２５
０
１００
２５畅１
１００
０
３２
１００
０
１畅３畅２ 杂质定位：分别取杂质 Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ 各 １０ ｍｇ，精密 称定，置同一 ５０ ｍＬ 量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，精密吸 取 ２５０ μＬ，置含雷贝拉唑钠对照品 ２５ ｍｇ 的 １００ ｍＬ 量瓶中，加溶 剂稀释至刻度，摇匀，进样 １０ μＬ，记录色谱图。
中国生化药物杂志 ２０１５ 年第 ４ 期 总第 ３５ 卷
ＨＰＬＣ 法测定雷贝拉唑钠肠溶微丸的有关物质
生化药物技术
马延１，２ ，王媛２ ，畅瑞苗１ ，曾爱国１ ，傅强１Δ
（１畅西安交通大学药学院，陕西 西安 ７１００６１；２畅西安新通药物研究有限公司，陕西 西安 ７１００７７）
［ 摘要］ 目的 建立 ＨＰＬＣ 法测定雷贝拉唑钠肠溶微丸的有关物质。 方法 采用 Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ （４畅６ ×１５０ ｍｍ，５ μｍ）色谱柱，流动 相采用 ２ ｇ ／Ｌ 乙酸铵溶液－乙腈（９５砄５）与 ２ ｇ ／Ｌ 乙酸铵溶液－甲醇（１５砄８５），梯度洗脱，流速为 １畅０ ｍＬ ／ｍｉｎ，检测波长为 ２９０ ｎｍ。 结果 该色谱条件下，主成分与各已知杂质分离度良好。 雷贝拉唑钠的检测限为 ０畅２５ ｎｇ，定量限为 ０畅７５ ｎｇ，为供试品进样量的 ０畅０１％和 ０畅０３％，满足杂质检测和控制。 在选定的溶剂中，主成分能被有效提取且稳定性良好。 在室温下，供试品溶液不稳定，应现用现配。 结论 方法简便、快速、准确，可用于雷贝拉唑钠肠溶微丸的质量控制。
［ 关键词］ 雷贝拉唑钠肠溶微丸；有关物质；高效液相色谱法 ［中图分类号］ Ｒ９２７畅２ ［文献标识码］ Ａ ［文章编号］ １００５ －１６７８（２０１５）０４ －０１６５ －０４
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｒｅｌａｔｅｄ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ ｏｆ ｒａｂｅｐｒａｚｏｌｅ ｓｏｄｉｕｍ ｅｎｔｅｒｉｃ－ｃｏａｔｅｄ ｐｅｌｌｅｔｓ ｂｙ ＨＰＬＣ
对该法进行了全面的方法学研究，拟建立一种专属性强、灵敏度 高、法 １畅１ 仪器 岛津 ＬＣ－２０１０ＡＨＴ 高效液相色谱仪，岛津 ＬＣ－ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ 色谱工作站（日本岛津公司）。 １畅２ 药品与试剂 雷贝拉唑钠肠溶微丸（ 西安新通药物研 究有限公司，批号：１２０９０１，１２０９０２，１２０９０３ ） ； 雷贝 拉 唑钠 对 照品 （ 中国药品生物制品检定所，批号：１００６５８－２０１２０３）；杂质 Ａ（ 西安 新通药物研究有限公司，批号：１２０７１６）；杂质 Ｂ（ 西安新通药物 研究有限公司，批号：１２０８０４）；杂质 Ｃ（ 西安新通药物研究有限 公司，批号：１２０８０２）；杂质 Ｄ（西安新通药物研究有限公司，批号 １２０７０６）；杂质 Ｅ（ 西安新通药物研究有限公司，批号：１２０７０３）。 乙腈、甲醇为色谱纯，购自 Ｍｅｒｃｋ 公司；水为重蒸馏水；其他试剂 均为分析纯。 １畅３ 方法 １畅３畅１ 色谱条件：采用 Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ （１５０ ×４畅６ ｍｍ，５ μｍ）， 流动相采用 Ａ：２ ｇ ／Ｌ 乙酸铵溶液－乙腈（９５砄５）、Ｂ：２ ｇ ／Ｌ 乙酸铵