免疫组化对照设计
免疫组化染色阳性对照的设立、制作与应用
Ｃ Ｄ ３ ４ 粘 膜下层血 管 内皮 阳性 ； Ｄ ２ — ４ ０ 、 Ｆ ａ ｃ ｔ ｏ ｒ Ⅷ为淋 巴 管 内皮 阳 性 ； Ｌ Ｃ Ａ、 Ｃ Ｄ ２ ０ 、 Ｃ Ｄ ７ ９ ａ 、 Ｃ Ｄ Ｉ Ｏ淋 巴 细 胞 阳 性， Ｃ Ｄ ２ １ 、 Ｃ Ｄ ２ ３在 固有 层 的淋 巴小 结 滤 泡 生 发 中 心
外 膜等 结 构 。将 阑尾 、 乳 腺 和 扁 桃 体 组 织 分 成 Ａ、
和扁桃体 等不同类型的组织 ， 通 过 ＨＥ切 片 观 察 ， 选取合适 相应抗原表达 的区域 ， 将 组织切成 ０ ． ３ ｃ ｍ ＊０ ． ３ ｃ ｍ 大小 ， 重 新 作 石
蜡包埋 ， 连续切片厚 ４ ｍ， 贴在待检查组织旁边作 为对照 ， 进行 Ｃ Ｋ、 Ｃ Ｋ１ ９ 、 Ｓ ＭＡ、 Ｃ Ｄ ２ ０ 、 Ｃ组 化
口］
。
经来 源 的抗 体有 Ｖｉ ｍｅ ｎ ｔ ｉ ｎ 、 Ｓ — １ ０ ０ 、 ＮＳ Ｅ、 Ｃ Ｄ５ ６ ， 标记 血 管 及 淋 巴 管 内皮 的 抗 体 有 Ｃ Ｄ３ １ 、 Ｃ Ｄ３ ４ 、 Ｄ ２ — ４ Ｏ 、 Ｆ ａ ｃ ｔ ｏ ｒ Ⅷ， 淋 巴瘤相关抗 体有 Ｌ Ｃ Ａ、 Ｃ Ｄ２ ０ 、 Ｃ Ｄ ７ ９ ａ 、
２ ．方法
选 取 的组 织 通过 ＨＥ染 色 观 察 ， 根 据合 适 相 应
抗 原 表达 的 区域 ， 将 各 组 织 切成 ０ ． ３ ｃ ｍ ×０ ． ３ ｃ ｍ 大 小 进行 再 包埋 ， 保 证 各 组 织包 埋 面含 有 相 应 的组 织 成分 ， 如 阑尾组 织 应 含 有 粘 膜层 ， 粘膜下层 ， 肌 层 和
刘 妮 李 淑 华 梁 英 杰 杨 诗 聪
（ 中 山大 学 附 属 第一 人 民 医院 病 理 科 广州 ５ １ ０ ０ ８ ０ ） ［ 摘要］ 目的 探 讨 如 何 设 立 免 疫 组 化 染 色 的 阳 性 对 照 ， 使 操作更 简单 、 结 果 可 靠 和 方 法 实 用 。方 法 选 取 阑 尾 、 乳 腺
免疫组化常用的对照方法
免疫组化常用的对照方法
免疫组化（immunohistochemistry，IHC）是一种用于检测组织或细胞中特定蛋白质表达的技术。
在进行免疫组化实验时，对照组是非常重要的，它可以帮助确定实验结果的准确性和可靠性。
以下是免疫组化常用的对照方法：
1. 阴性对照，阴性对照是使用不含目标蛋白的组织样本或细胞作为对照。
这可以帮助排除假阳性结果，即实验结果中出现的信号并非由于目标蛋白的存在所致。
2. 正性对照，正性对照是使用已知含有目标蛋白的组织样本或细胞作为对照。
这可以确保实验条件下目标蛋白的免疫反应性，并验证实验方法的可靠性。
3. 内部对照，内部对照是在同一组织样本或细胞中使用与目标蛋白不同但稳定表达的蛋白作为对照。
这有助于纠正实验中可能存在的变异性，如组织处理、染色效果等。
4. 同型对照，同型对照是使用与目标蛋白相同种属来源的免疫球蛋白（IgG）作为对照。
这可以帮助排除实验中可能存在的非特异
性结合或交叉反应。
以上是免疫组化常用的对照方法，正确选择和使用对照可以有效地确保免疫组化实验结果的准确性和可靠性，为科研工作提供有力的支持。
免疫组化中的阳性对照与阴性对照如何设置
免疫组化中的阳性对照与阴性对照如何设置问题：免疫组化中的阳性对照与阴性对照如何设置？参考见解1：阳性对照：已知含有要测的抗原的组织。
阴性对照：可以做几种：空白对照：免去一抗代替对照：免疫前血清代替一抗已知阴性组织抑制试验：未标记抗体要发文章建议做代替对照。
参考见解2：楼上回答的真好，不过组织内对照的合理使用可以免去设置实验对照的很多麻烦！问题：免疫组化技术(IHC)的优点是什么参考见解：1．特异性强免疫学的基本原理决定了抗原与抗体之间的结合具有高度特异性，因此，免疫组化从理论上讲也是组织细胞中抗原的特定显示，如角蛋白（keratin）显示上皮成分，LCA显示淋巴细胞成分。
只有当组织细胞中存在交叉抗原时才会出现交叉反应。
2．敏感性高在应用免疫组化的起始阶段，由于技术上的限制，只有直接法、间接法等敏感性不高的技术，那时的抗体只能稀释几倍、几十倍；现在由于ABC法或SP法的出现，使抗体稀释上千倍、上万倍甚至上亿倍仍可在组织细胞中与抗原结合，这样高敏感性的抗体抗原反应，使免疫组化方法越来越方便地应用于常规病理诊断工作。
3．定位准确、形态与功能相结合该技术通过抗原抗体反应及呈色反应，可在组织和细胞中进行抗原的准确定位，因而可同时对不同抗原在同一组织或细胞中进行定位观察，这样就可以进行形态与功能相结合的研究，对病理学研究的深入是十分有意义的。
免疫组化常见问题的处理参考意见：当免疫组化染色没有出现预期结果时，应系统地查找原因，而每一次只能排除一种可能的原因。
对照/标本无染色①确认是否忽略了应该加的某种试剂，包括一抗、二抗、三抗及底物等。
②确认所有的试剂是否按正确的顺序加入，是否孵育了足够的时间。
③对照抗体的标签确认是否使用了正确的抗体，以及所用的检测系统是否和一抗匹配，这一点是非常重要的。
比如，如果一抗是兔来源的抗体，二抗一定要用抗兔的二抗来匹配；或一抗是小鼠的IgM一抗，二抗必须是山羊/兔抗小鼠的IgM（不是IgG）二抗。
免疫组化il-1β实验步骤
免疫组化il-1β实验步骤免疫组化（Immunohistochemistry，IHC）是一种用来检测组织中特定蛋白质表达的方法。
IL-1β是一种重要的细胞因子，它在免疫和炎症过程中发挥着重要作用。
进行IL-1β的免疫组化实验需要严格遵循一系列步骤，以确保实验结果的准确性和可靠性。
1. 样本处理，首先，需要准备组织样本，可以是组织切片或细胞培养物。
对于组织样本，需要进行固定、脱水和包埋等处理，以保持样本的完整性和稳定性。
2. 抗体处理，选择合适的IL-1β抗体，确保其特异性和敏感性。
将样本切片或细胞培养物与IL-1β抗体孵育，使抗体与目标蛋白结合。
3. 洗涤，将样本进行洗涤，去除未结合的抗体和其他杂质。
4. 二抗处理，加入与IL-1β抗体结合的二抗，如辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗，以增强IL-1β的检测信号。
5. 显色反应，加入适当的显色底物，使IL-1β呈色反应产生，常用的底物包括DAB（二氧化苯胺）或VIP（维克罗尼亚紫）。
6. 停止反应，在IL-1β显色适当程度后，通过停止反应来终止显色过程，常用的方法是将样本浸入脱离液中。
7. 脱水和封片，对样本进行脱水、透明化处理，并最终封片，以便于显微镜观察和图像获取。
需要注意的是，在整个实验过程中，需要严格控制实验条件，包括温度、时间、试剂浓度等，以确保实验的重复性和可比性。
此外，还需要进行负对照和阳性对照实验，以验证实验结果的准确性和特异性。
总之，IL-1β的免疫组化实验是一个复杂而精细的过程，需要熟练的操作和严谨的态度。
通过严格遵循上述步骤，可以获得准确可靠的IL-1β表达情况，为相关研究提供重要的实验数据支持。
免疫组化判读方法
免疫组化判读方法
免疫组化结果的判读方法如下：
1. 必须设阳性对照和阴性对照。
阳性对照是已知的阳性标本，用于验证试剂和技术方法的可靠性；阴性对照是已知不含待测抗原的标本，用于确定本底情况。
如果阳性对照阴性，表明检测操作方法可能有误，需要重新检测。
2. 抗原表达必须在特定部位。
有些免疫组化的定位在细胞膜，有些在细胞质，有些在细胞核，所以在特定部位阳性表明是真正阳性；如果在非特定部位阳性，或者整个切片阴性，都会判定免疫组化是阴性，或者是假阳性。
此外，根据使用的染色方法不同，判读方法也有所不同。
例如ABC法（卵
白素-生物素-过氧化物酶复合物法）和SP法（抗生物素蛋白链酶素-过氧化物酶复合物法）。
以上信息仅供参考，如果您还有疑问，建议咨询专业人士。
免疫组化全攻略
免疫组化全攻略：新手必读从技术上讲，IHC的原理很简单。
首先固定样品，以保留细胞完整性，之后与封闭液共同孵育，避免抗体的非特异结合。
随后将样品先后与一抗和二抗孵育，并通过显微镜分析观察信号。
然而，这并不意味着实验很好做。
如何设计一个成功的IHC/ICC实验，请看免疫组化全攻略。
在上世纪30年代，免疫组织化学（Immunohistochemistry，简称IHC）的原理就已经为人所知，但直到1942年，第一个IHC研究成果才正式发表。
这也被誉为免疫荧光技术的里程碑。
哈佛大学医学院的Albert Coons在《免疫学杂志》上发表文章，利用FITC标记的抗体来鉴定感染组织中的肺炎球菌抗原。
自那以后，组织固定方法、检测标记和显微镜都在不断改进，让免疫组化成为诊断和研究中的一个必备工具。
在病理科，利用特异的肿瘤标志物，医生通过IHC诊断肿瘤是良性还是恶性，确定肿瘤的分期和分级，并确定细胞类型和转移的来源，以便找到原发肿瘤的位置。
同样，IHC也能用于药物开发，通过检测疾病靶点的上调或下调来判断药物疗效。
免疫组化指的是根据抗体与抗原特异结合的原理来检测组织切片中的抗原（如蛋白）。
immuno的词根来自操作中所使用的抗体，而histo意味着组织。
另一种类似的技术是免疫细胞化学（Immunocytochemistry，简称ICC）。
这两个词大家经常混着用，看着好像差不多，但实际上还是有点区别。
这里顺便说说。
IHCvs. ICC对于IHC，组织是来自患者或动物，经过冷冻或石蜡包埋。
将这些组织制成约4μm厚的切片，封片后再处理。
通过这种方法，研究人员可观察细胞组分的定位，同时维持周围组织的原先结构。
对于ICC，大部分细胞外基质及其他基质组分被去除，只剩下整个细胞来染色。
ICC的来源可以是细胞悬液，来自患者或动物（如血涂片、拭子等），或在实验室中进行的组织培养细胞系。
除了生物学来源，IHC和ICC在样品处理的程度上也有所不同。
免疫组化pdca案例
免疫组化pdca案例
免疫组化（Immunohistochemistry，IHC）是一种用于检测组织
标本中特定蛋白质的方法。
PDCA（Plan-Do-Check-Act）是一种持续
改进的管理方法。
结合免疫组化和PDCA方法，可以在临床和科研领
域中发挥重要作用。
举例来说，假设我们想要研究一种特定蛋白在肿瘤组织中的表
达情况，并且希望通过持续改进的管理方法来优化实验流程。
首先，我们需要制定计划（Plan）。
这包括确定研究的目的、
选择合适的抗体、优化染色条件等。
在这一阶段，我们需要考虑实
验的整体设计和所需的资源。
接下来是执行阶段（Do）。
在这个阶段，我们会进行免疫组化
实验，使用选择的抗体对肿瘤组织标本进行染色，并进行显微镜观察。
这个阶段需要严格控制实验条件，确保实验的可重复性和准确性。
然后是检查阶段（Check）。
在这个阶段，我们会评估实验结果，检查染色的质量和准确性。
我们会比较不同样本之间的差异，确保
实验结果的可靠性。
最后是行动阶段（Act）。
根据检查阶段的结果，我们可能需要调整实验方案，优化染色条件，或者重新选择抗体。
这个阶段的目标是持续改进实验流程，确保获得可靠的研究结果。
总的来说，免疫组化PDCA案例可以帮助我们在研究特定蛋白在组织中的表达时，通过持续改进的管理方法，优化实验流程，提高实验结果的准确性和可靠性。
这种方法可以在肿瘤学、免疫学和其他医学研究领域发挥重要作用。
免疫组化对照原则
免疫组化对照原则让我们了解一下什么是免疫组化对照。
在免疫组化实验中，对照是指用已知表达目标蛋白的组织或细胞作为阳性对照，用不表达目标蛋白的组织或细胞作为阴性对照。
通过与对照样本同时进行免疫染色，我们可以评估实验的特异性和灵敏性，以及抗体的效能。
免疫组化对照原则主要包括以下几个方面：1.阳性对照的选择：阳性对照应该是已知表达目标蛋白的组织或细胞。
在选择阳性对照时，我们需要考虑目标蛋白在不同组织或细胞中的表达情况，并选择最合适的阳性对照样本。
例如，如果我们想检测一种特定的癌细胞标志物，在选择阳性对照时可以选择已知表达该标志物的癌细胞系。
2.阴性对照的选择：阴性对照应该是不表达目标蛋白的组织或细胞。
选择阴性对照样本时，我们需要确保目标蛋白在该样本中没有表达。
通常，选择与阳性对照样本来源相同的组织或细胞作为阴性对照样本是一个常见的选择。
3.对照实验的设计：在进行免疫组化实验时，阳性对照、阴性对照以及待测样本应该同时进行染色。
这样可以确保实验条件的一致性，比较各样本之间的差异。
同时，还应该包括一些技术对照，如用不同浓度的抗体进行染色，以评估抗体的特异性和灵敏性。
4.数据解读和结果分析：在免疫组化实验中，对照样本的染色结果应该与待测样本进行比较和解读。
阳性对照样本应该显示明显的阳性染色，而阴性对照样本应该没有或只有很少的阳性染色。
通过对照样本的比较，我们可以确定实验结果的可靠性，并根据阳性对照的强度和分布来定量待测样本中目标蛋白的表达水平。
免疫组化对照原则的正确应用对于实验结果的准确性和可靠性非常重要。
通过选择合适的阳性和阴性对照样本，并严格控制实验条件，我们可以排除假阳性和假阴性结果的可能性，确保实验结果的可重复性和可比性。
此外，对照实验还可以评估抗体的特异性和灵敏性，为后续实验提供参考。
免疫组化对照原则是免疫组化实验中的重要环节。
正确选择和应用阳性和阴性对照样本，严格控制实验条件，以及准确解读和分析实验结果，可以确保实验结果的准确性和可靠性。
免疫组化基本技术
上千种，一种抗体可以有数家公司生产，
其质量的好坏也存在很大差异，首先应选
择一家好的生产公司，根据文献提供的信 息，选择所需试剂的型号。
2.购置抗体的注意事项 (1)种属：单克隆抗体，多克隆抗体 (2)能否用于石蜡切片
(3)稀释度
(4)特异性，交叉反应
(5)用何种组织前处理形式
(6)包装单位，价格
3.抗体的大致分类
片需经如下脱蜡才能做IHC。
二甲苯Ⅰ10min，二甲苯Ⅱ10min， 二甲苯10minⅢ，无水乙醇2min，95％
乙醇2min，85％乙醇2min，75％乙醇 2min，流水冲洗。
五、内源性酶的消除方法
(一)内源性过氧化物酶的消除方法：
1. 0.3%～3%H2O2甲醇液20min 2. 1％ H2O2 20min 3. 3％苯肼溶液 37℃ 1h 4. 0.075%盐酸甲醇液 30min
2.列出IHC实验操作流程，选择何种IHC前 处理方式。 3.通过预实验寻找第一抗体的最佳稀释度， 应设置何种对照。
4.每批实验应用同一稀释度的一抗，孵育 时间和温度，同一的显色时间。 5.列出阳性判定的标准
6.预期达到的目标
组织与细胞材料的制备
1.手术切除标本的取材： 抗原在组织中的分布常不均一，取材 时应考虑：主要病灶，病灶与正常组织交 界处，远离病灶的正常组织。 组织大小：长1cm×宽1cm×厚0.2～0.3cm。
《免疫组化基本技术》
主要内容
一、实验的设计
二、石蜡切片的脱蜡至水
三、内源性酶的消除方法
四、IHC的非特异性染色
五、抗原的暴露和修复 六、抗体的购置及注意事项
七、抗体最佳稀释度的测定和保存
八、显示系统及衬染剂的选择和配制
免疫组化IHC对照实验设置
免疫组化（IHC）技术因其灵敏度高、特异性好、定位准确等优点，已经成为免疫检测中一种常用的实验技术，在IHC实验过程中，设计合理的对照实验是必不可少的。
那么，为什么要设计对照实验呢？第一，多种因素会造成切片的非特异性染色比如在一些样本中存在自发式荧光物质或内源酶干扰；抗体蛋白与组织的非特异性吸附，免疫原的交叉反应，IgG或者天然抗体的交叉反应；组织处理不当，如固定不及时，流程操作不规范，血清或分泌型抗原的干扰等这些因素可能会使实验结果产生假阳性。
第二，多种因素会造成切片的假阴性在IHC实验中，抗体特异性、实验条件以及实验人员自身操作的差异，都有可能产生不一致的染色结果，导致结论不准确。
比如组织处理不当，抗原损失过多或被遮蔽；抗体失活、效价过低或稀释倍数不合适等；染色步骤的差错或其他试剂的问题，如显色剂，缓冲液的离子强度及pH值等，则会产生假阴性结果。
为了避免上述情况影响实验结果，在IHC实验过程中应当设计哪些对照试验呢？第一、阳性对照。
这一对照设计是为了验证所用IHC染色流程有效以及排除假阴性。
实验设计原理：选择已经被证实含有目的抗原的同源和不同源的组织切片，与待检实验切片同步进行IHC实验操作以及免疫染色。
对染色结果进行对比，如果结果为阳性则实验过程合理。
第二、阴性对照。
这一对照设计是为了检测实验结果是否存在非特异性信号和假阳性。
实验设计原理：选择不表达目的抗原的组织切片，与待检切片进行同步处理和免疫标记染色，对比实验结果，如果为阴性则操作合理。
第三、同型对照。
这一对照设计的主要目的，是为了确定目的蛋白与一抗的结合，是特异性而不是非特异性的Fc受体或其他蛋白质之间的相关作用。
实验设计原理：使用与一抗种属来源一致、亚型相同、免疫球蛋白相同的抗体，在IHC实验中使用相同的抗原浓度，如果实验结果为阴性，则目的蛋白与一抗特异性结合。
第四、空白对照。
有时根据对照设计的不同，也会称为替代对照或无一抗对照。
免疫组化实验注意事项
免疫组化实验注意事项
免疫组化实验注意事项如下：
1. 样本处理：确保样本的新鲜度，避免长时间的暴露在空气中，以防样本的退化。
同时，样本的切割要尽可能的薄，以便于抗体的渗透。
2. 抗体选择：选择特异性强、质量好的抗体，以保证实验结果的准确性。
同时，要注意抗体的稀释比例，过高或过低的稀释比例都可能影响实验结果。
3. 染色过程：染色过程中要保持湿润，避免干燥。
同时，要避免过度染色，以免背景过深，影响结果的观察。
4. 洗涤过程：洗涤过程要充分，以去除未结合的抗体，减少非特异性染色。
5. 对照设置：实验中应设置阳性对照和阴性对照，以验证抗体的特异性和实验操作的正确性。
6. 结果解读：结果的解读要结合实验设计、样本特点和染色结果，不能仅凭单一指标进行判断。
7. 实验记录：详细记录实验过程和结果，以便于后期的数据分析和问题追溯。
8. 实验室安全：遵守实验室安全规定，正确使用和处理化学试剂，避免可能的安全风险。
免疫组化ki67值对照表
免疫组化里面Ki67是一个代表细胞增殖的指标，一般这个指标越高说明肿瘤细胞的恶性程度越高，所以正常值可能是没有或者检测不出来。
另外，免疫组化里面还有其它指标，也是判断肿瘤的类型、后续治疗方法的重要依据。
像乳腺癌免疫组化，雌激素受体ER、孕激素受体PR，如果这两项都是阳性，提示可以用内分泌治疗的药物。
如果都是阴性，则不能用内分泌治疗。
还有HER2，也就是人表皮生长因子受体-2，如果是阳性，过度扩增，可以考虑用靶向药物赫赛汀，阴性则只能够考虑配合术后化疗，Ki67越高说明肿瘤的恶性程度越高。
免疫组化实验步骤及配方
免疫组化实验步骤及配方免疫组化实验是一种用于检测和定位特定蛋白质在细胞、组织或器官中表达的技术。
免疫组化实验包括一系列步骤，如抗原修复、非特异性结合抑制、免疫原和次级抗体处理、显色/荧光染色等。
下面将详细介绍免疫组化实验的步骤及配方。
1.抗原修复：抗原修复是为了恢复因组织固定而引起的抗原性损失。
一般使用高温或酶解方法进行抗原修复。
-高温方法：将组织切片置于高温缓冲液中加热，一般在95°C下加热15-20分钟。
-酶解方法：如胰酶消化、蛋白酶消化等。
例如，可以使用0.1%胰酶在37°C下进行酶解。
2.非特异性结合抑制：非特异性结合抑制是为了防止免疫试剂（如次级抗体）与非特异性蛋白结合，从而降低假阳性结果。
一般使用正常动物血清或胶体等进行非特异性结合抑制。
-正常动物血清：根据动物源种类（如小鼠、兔子等）选择相应的正常动物血清。
-胶体：如牛血清蛋白、牛血清白蛋白等。
可以在最终稀释液中加入1-2%的胶体。
3.免疫原处理：免疫原处理是为了增强目标抗原与抗体的结合效率，一般通过与次级抗体或酵素结合。
根据具体实验需求，可以选择荧光标记、酶标记或金标记等不同的方式进行免疫原处理。
-荧光标记：如荧光素等。
-酶标记：如辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶（AP）等。
-金标记：如胶体金、纳米金等。
4.次级抗体处理：次级抗体处理是为了增强免疫原与目标抗原之间的结合效应。
一般使用来自其他物种的抗体作为次级抗体。
根据不同实验需求，可以选择与荧光标记、酶标记或金标记结合的次级抗体。
-荧光标记：如青蒿素标记的抗兔荧光标记抗体等。
-酶标记：如HRP标记抗体、AP标记抗体等。
-金标记：如碳标记抗体、金标记抗体等。
5.显色/荧光染色：显色/荧光染色是为了可视化目标抗原的分布和定位。
根据不同的免疫标记试剂，可以选择适当的染色方法。
-显色：如DAB（3,3'-二氨基联苯）染色。
-荧光染色：根据使用的荧光标记试剂选择相应的染色方法，如DAPI 染色、FITC染色等。
免疫组化实验结果分析
免疫组化实验结果分析免疫组化实验是一种用特异性抗体与目标蛋白质相互作用的技术，通过对细胞内或组织切片中目标分子的免疫染色来观察、分析目标分子在细胞或组织中的表达与定位情况。
本文将对免疫组化实验结果进行分析，以揭示其在研究领域中的应用与意义。
1. 实验设计与控制免疫组化实验前，首先需要进行实验设计。
在实验设计过程中，应明确需要检测的目标分子以及合适的抗体选择。
同时，合理设定实验组与对照组，用以对比分析不同处理条件下目标分子的表达变化。
控制变量的同时，还需确保实验操作的准确性和可重复性。
2. 结果解读与定量分析在免疫组化实验中，常见的结果表达形式是显微镜下对目标分子免疫染色的图像。
通过观察图像，可以初步判断目标分子在不同组织、细胞种是否存在表达，并探讨其表达差异。
同时，需着重对结果进行定量分析，使用专业软件对图像进行数字化处理，计算光密度或荧光强度等指标，以实现对不同样品之间的比较与分析。
3. 结果分析与比较在进行免疫组化实验结果分析时，需要将不同样品之间的实验结果进行对比与分析，以探究目标分子的表达变化与信号定位。
常见的分析方法包括：(1) 目标分子的表达量分析：通过计算光密度或荧光强度等指标，对不同样品中目标分子的表达量进行定量比较。
可以使用统计学方法对数据进行处理，比如均值、标准差等分析，以评估目标分子的表达水平是否存在显著差异。
(2) 信号定位与定量：通过观察光学显微镜下的染色结果图像，可以初步判断目标分子在细胞或组织中的定位情况。
同时，也可以使用数字化图像分析软件，对染色信号进行定位与定量，以精确描述目标分子在特定位置的表达情况。
(3) 目标分子与疾病发生的关联性：通过对不同疾病样本中目标分子的表达和定位进行研究，可以分析目标分子与疾病的关联性。
比如，某一分子在肿瘤组织中的高表达与某种癌症的发生相关性等。
4. 结果讨论与展望在对免疫组化实验结果进行分析后，可以从结果出发进行讨论与展望，以揭示目标分子的功能与潜在作用。
免疫组化的判读标准
免疫组化的判读标准
免疫组化的判定标准如下：
1、做免疫组化之前会设定一个阳性对照，比如ER、PR、HER-2，如果阳性对照阳性、肿瘤阴性，表明肿瘤是真阴性；如果阳性对照阴性，表明检测操作方法可能有误，需要重新检测；
2、抗原表达必须在特定部位，有些免疫组化的定位在细胞膜，有些在细胞质，有些在细胞核，所以在特定部位阳性表明是真正阳性；如果在非特定部位阳性，或者整个切片阴性，都会判定免疫组化是阴性，或者是假阳性；
3、分析其表达强度，临床通常会用1+、2+、3+等来表达阳性强度。
阴性表示没有抗原，细胞里没有这种抗原。
1+、2+、3+分别代表细胞里抗原表达的强弱；
4、免疫组化判定的意义也不能绝对化，要参考实验室条件、每个人的操作方法、标本的前期处理。
免疫组化阴性也不要完全判定其是阴性，要结合其形态学改变，综合判断才能判定免疫组化操作的正确性。
免疫组化完整方法归总
免疫组化染色(免疫组织化学染色)一、染色前需要配制的溶液：○1柠檬酸盐缓冲液（抗原修复液）：✈储存液：A：4.2g柠檬酸C6H8O7·H2O用蒸馏水定容至200mlB：7.35g柠檬酸钠Na3C6H5NO3O7·2H2O用蒸馏水定容至250ml✈工作液：9mlA液+41mlB液+450mlDW=500ml。
（ph值应为6.0+0.1）○2Tris—Hcl (PH应为7.2)✈储存液：A：Tris液：Tris 4.85g 用蒸馏水定容至200mlB：Hcl ：体积分数35%Hcl1ml+99ml蒸馏水✈工作液：25mlA + 45 mlB + 30 ml蒸馏水（PH应为7.2 ）*○30.05%DAB：0.005g DAB + 10 ml Tris—Hcl （也即：0.005g DAB+ 2.5ml（Tris—Hcl）A液+4.5ml（Tris—Hcl）B+3ml蒸馏水）（应于-200C避光保存或避光现配现用，最好现配现用，否则可能在空气中因氧化而由无色变为棕色）*○4显色剂：0.05%DAB与H2O2（0.3%），即5ml 0.05%DAB中加一滴3%H2O2（0.05ml）{此步骤稍提前准备，现配现用}○5磷酸盐缓冲液配制（在此需用0.01 mol/l磷酸盐缓冲液）✈储存液：A液：磷酸二氢钠溶液 6.24gNaH2PO4·2H2O溶于蒸馏水并稀释至200mlB液：磷酸氢二钠溶液17.9gNa2HPO4·12H2O溶于蒸馏水并稀释至250ml✈工作液：9.5 ml A + 40.5 ml B + 8.5gNaCl 以蒸馏水定容至1000ml （工作液用时370C预热）○6HCl-乙醇：1ml体积分数为36%的盐酸与99ml70%纯乙醇混合○73%双氧水：购买的双氧水基本上为此浓度（若需配制，最好现用现配，40C避光保存）○8适当比例一抗（山羊血清）配制✈一抗可分别稀释为50倍（即1份抗体<20ul>与49份PBS<980ul>混合）、100倍（即1份抗体<10ul>与99份PBS<990ul>混合）、200倍（即1份抗体<5ul>与199份PBS<995ul>混合）。
免疫组化对照
免疫组化对照来源：阿里巴巴生意经在进行免疫组化染色时，必须证实组织内显示的反应产物，确实是抗原与相应的特异性抗体反应所产生的。
由于免疫组织化学染色中影响抗原、抗体和免疫反应的因素很多，因此对免疫组织化学染色结果的评价必须设置对照组才能做出正确的判断。
常用的对照组有以下几种：一、阳性对照：用已证实含用待测抗原的组织，与待检标本做同样处理后，进行免疫组化染色，结果应为阳性，称为阳性对照。
每次实验都应做阳性对照，通过阳性对照可证明靶抗原有一定活性，染色过程中各个步骤以及所用的试剂都合乎标准，染色方法可靠。
特别是当待检的标本为阴性结果时，阳性对照呈阳性反应，可排除待检标本假阳性的可能。
所以若预期染色结果是阴性时，就必须设阳性对照。
二、阴性对照：用确知不存在待检抗原的组织切片染色，结果为阴性。
阴性对照可证实组织内若不含靶抗原，就不应染色，可排除在染色过程中由于非特异性染色或交叉反应等因素造成的“假阳性”结果。
三、空白对照：是最常用的对照，用不加一抗的缓冲液，如PBS 替代一抗，染色结果应为阴性，说明染色方法可靠，可排除组织的内源性过氧化物酶、碱性磷酸酶、自发荧光等物质引起的非特异性显色。
四、替代对照：用与第一抗体来源的同一动物免疫前血清，如第一抗体用的是兔抗人GFAP的IgG抗体，对照中用非免疫性的正常IgG 血清来替代一抗，以相同的稀释倍数进行对照染色。
这可证明待检切片中阳性结果不是抗体以外混杂的血清成分所致，而是所用特异性抗体与组织细胞内待检抗原的特异性反应的结果。
但使用的商品抗体往往不能用同一种动物的免疫前血清做替代对照，也可用未经免疫的同种动物血清，即非免疫血清替代一抗。
五、吸收试验对照：用过量已知相应的纯化抗原与第一抗体反应，抗体结合点全部被抗原结合，这种被抗原吸收的抗体不能再与组织内的抗原反应，故再做免疫组化染色时，结果应为阴性。
六、自身对照：用同一组织切片上与待检抗原无关的其它结构做对照。
阴性反应与阴性结构同在一个视野中，相互印证，这本身就是对阳性反应的特异性对照。
免疫组化染色结果
免疫组化染色结果免疫组化染色是一种常用的研究细胞和组织中蛋白质表达及分布的方法。
通过特异性抗体与目标蛋白结合，再加上相应的检测试剂，可以在显微镜下观察到染色反应产生的颜色或荧光信号。
本文将从实验设计、样品处理、染色步骤、结果解读等方面进行详细介绍。
一、实验设计在进行免疫组化染色前，需要明确实验目的和问题。
根据不同的目标蛋白和样品类型，选择合适的抗体和检测试剂。
同时，还需要考虑以下几个方面：1. 阳性对照：选择已知表达目标蛋白的组织或细胞作为阳性对照，以确保实验条件正确。
2. 阴性对照：选择未表达目标蛋白的组织或细胞作为阴性对照，以排除假阳性结果。
3. 抗体稀释：根据厂家建议和自身实验经验确定抗体最佳稀释倍数。
4. 检测试剂选择：根据抗体种类选择适合的检测试剂，如辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗或碱性磷酸酶（AP）标记的二抗等。
二、样品处理样品处理是免疫组化染色中非常重要的步骤，它直接影响到染色结果的质量和可靠性。
下面介绍几个常见的样品处理方法：1. 组织固定：将组织切片或细胞培养物固定在载玻片上，以保持其形态和结构不变。
常用的固定剂包括乙醛、甲醛、乙酸等。
2. 抗原修复：某些蛋白质在组织固定后会发生变性或降解，导致其表达水平降低或失去表达。
为了恢复抗原活性，可以使用热水浴加压或胰蛋白酶消化等方法进行抗原修复。
3. 脱蜡：对于已经进行了石蜡包埋的组织切片，需要先进行脱蜡处理，以便于抗体与目标蛋白结合。
一般采用xylene和乙醇等有机溶剂进行脱蜡。
三、染色步骤免疫组化染色的步骤主要包括抗体处理、检测试剂处理和显色反应。
下面将具体介绍每个步骤的操作方法：1. 抗体处理：将待测抗体稀释至最佳浓度后，加到载玻片上的组织切片或细胞培养物上，放置在湿润的孵育盒中，进行孵育反应。
2. 检测试剂处理：根据抗体类型选择合适的检测试剂，如HRP标记的二抗或AP标记的二抗等。
将检测试剂加到载玻片上，进行孵育反应。
3. 显色反应：根据检测试剂类型选择合适的显色方法，如使用DAB显色产生棕黄色沉淀物或使用BCIP/NBT显色产生紫蓝色沉淀物等。
病理科室日常工作中免疫组化组织对照的设计与应用分析
病理科室日常工作中免疫组化组织对照的设计与应用分析摘要：近些年，免疫组织在我国已经得到了广泛的发展、应用，几乎在所有病理科室的日常工作过程中都需做许多免疫组织来辅助病理的诊断，免疫组织化学成为了医院病理科室工作中不可或缺的一项重要辅助技术，其不但可以让病理诊断的结果更加精确，便于对肿瘤类型进行正确的分类，而且还可以对部分肿瘤预后进行有效的预测、提供更加有效的治疗依据。
本文主要就病理科室日常工作中免疫组化组织对照的设计与应用进行详细的分析，进而使免疫组化在诊断、研究、鉴别工作中的作用得到真正发挥。
关键词：免疫组化；组织对照；设计；应用有效、科学、合理的应用、设计组织对照是控制免疫组化质量的关键，其能够使实验过程中使用的所有试剂效用性得到保障，且可以使病理诊断更加准确、实验结果更加真实。
不论是免疫组化的室间控制还是室内质控，只要是合理的使用组织对照即可让免疫组化实验、工作中存在的问题全面、客观的体现出来。
但是，若将组织对照应用在病理科室日常的免疫组化的染色工作中，会增加相关人员的工作量及科室的成本。
参照免疫组化中染色结果的不同判读原则，即定性判读和半定量判读来设计不一样的免疫组化对照组织。
1.免疫组织技术的基本原理利用免疫学中的抗原、抗体的结合反应，且采用特异性的抗体，如多克隆或者单克隆对细胞、组织中的相关抗原物质进行检测，可以形成抗体、抗原有机结合的复合物。
该复合物中带有事先做好的标记物，利用与标记物对应的系统对其进行检测之后，如果酶底物产生显色反应则可以使其现象出某种颜色，进而就能够将组织细胞中的抗原检测出来，达到鉴别、诊断、研究的具体目的。
2.半定量判读原则下的免疫组化组织对照设计半定量判读原则下的免疫组化组织对照是针对相应组织中细胞增值的指数测定、激素受体的含量、药物的分子靶等一些肿瘤治疗、用于预后的免疫组化染色，在此类染色中除了需对其是否属于阳性进行判读之外，还必须判定阳性染色强度及染色细胞数，为此可以选择多点组织对照。
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原则上讲，所有实验都应该设置阳性对照（用以检验染色过程成功），阴性对照（用以检验阳性结果为真阳性），空白对照（用以排除非特异背景染色）。
不过，由于样本选取的复杂性，国内多数实验室以及国外多数小实验室，都无法做到规范的阴性对照，所以普遍以空白对照代替阴性对照，而这种方法也在国内外得到承认。
1）空白对照：第一抗体由PBS取代。
2）严格的阴性对照：用已知的确定不表达你所要检测的抗原的其他组织的切片做阴性对照3）回收实验阴性对照：已知抗原与相应的第一抗体混合，发生结合沉淀，再用此沉淀抗体复合物进行免疫组化实验，结果为阴性。
4）同型抗体替代对照：用于第一抗体同种动物的血清或非免疫IGg代替第一抗体结果为阴性。
5）自身对照在同一切片上，应将不同组织成分中的阴性结果与检测的目的物对照比较不过目前绝大多数人都是用PBS来代替一抗作为阴性对照，其实质是空白对照，因为这样做如果结果是阴性，也只是排除了二抗引起的非特异而已，但至于一抗是否会产生非特异，那只通过空白对照是不得而知的。
因此你就必须做严格意义上的阴性对照。