分离蛋白质的高效强阳离子交换色谱填料的合成及性能研究
(完整word版)高效液相色谱在蛋白质分离中的应用
高效液相色谱在蛋白质分离中的应用蛋白质是一种长链高分子化合物,相对分子量大，在溶液中扩散系数大，易变性，者增加了普通方式分离蛋白质的困难。
高效液相色谱在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器,因而具备高速、高效、高灵敏度的特点.已被广泛应用于分离蛋白质。
蛋白质在物理、化学及功能上的差异为蛋白质的分离检测提供了基础.根据蛋白质的大小、电荷、疏水性等特性，可以选择不同模式来分离目标蛋白。
反向高效液相色谱在高效液相色谱中应用广泛。
由于反相高效液相色谱固相载体的疏水性，它可以根据流动相中被分离物质分子疏水性的不同而发生强弱不同的相互作用,从而使不同分子在反相柱中彼此分离.疏水性弱的样品，分子和固定相间的作用弱，因而较快流出。
在反相液相色谱中，蛋白质分子在通过色谱柱时会发生或多或少的去折叠，使得蛋白质分子内部某些疏水残基暴露，并与固定相相互作用.这是反相液相色谱在蛋白质分离中的一个有力因素.同时蛋白质有一个特殊的保留机制,这是由吸附机制与分配机制共同作用的结果。
在蛋白质的分离中，初始洗脱条件下洗脱液中有机成分的浓度较低，分子与固定相疏水作用强,几乎完全被固定相吸附；而一旦洗脱液中有机成分达到特定浓度，使得蛋白质与固定相的作用小于它与流动相间的相互作用时,分子完全从固定相上洗脱。
正是由于蛋白质的这种特殊的保留机制，洗脱液成分极微小的改变就会大大影响蛋白质的保留行为从而保证蛋白质得以完全分离。
蛋白质通常是强极性的化合物，与碳十八色谱柱结合较困难。
另外，反相液相色谱常用的流动相,如甲醇、乙腈等都能使蛋白质变性沉积而使色谱柱报废。
因此，在反相液相色谱用于蛋白质分离时，一般使用低pH流动相,室温或较高温度以及使用乙腈或异丙醇作为有机部分，三氟乙酸作为流动相添加剂.离子交换色谱是最早被用于蛋白质分离的一种方法。
离子交换色谱法是利用离子交换原理和液相色谱技术的结合来测定溶液中阳离子和阴离子的一种分离分析方法。
因为离子交换色谱要求分离样品具有带电性质的差异。
离子交换色谱技术——分离和纯化生物大分子的必备技术
离子交换色谱技术——分离和纯化生物大分子的必备技术随着人体基因组序列的解读以及各种细胞、组织和器官的高通量技术的发展，对于生命科学研究者而言，研究生物分子、生物大分子和蛋白质化合物的质量和纯度变得越来越重要，以达到提供更准确的实验数据和信息的目的。
因此，从海量混合物中纯化目标化合物的技术在生命科学和制药领域中变得越来越关键。
离子交换色谱技术出现了，它成为了生物大分子分离纯化的必备技术之一。
简介离子交换色谱技术是一种分离和纯化离子型物质的技术，适用于各种蛋白、核酸、多肽以及酶联免疫吸附试验等生物分子的分离与纯化。
其中，“离子交换”指离子交换树脂，是一种高分子化合物，在水中能够形成水合结构。
正负离子交换树脂有阴离子交换树脂和阳离子交换树脂两种。
在离子交换色谱过程中，该技术通过离子交换柱秉承离子两级的交换作用，从混合物中选择性地移除目标化合物以进行分离和纯化。
离子交换色谱技术的基本原理离子交换色谱技术的基本原理是根据生物大分子表面带有特定电荷的性质，使其与离子交换树脂上的反离子相互作用这种特定的性质相结合。
离子交换树脂本身可以引发这种特定性质，在某些情况下还可以与氢离子或氢氧根离子进行交换。
离子交换柱的结构和工作原理离子交换柱的工作原理是通过离子交换树脂选区性捕捉目标化合物，并通过某些方法从其中释放出来。
离子交换柱由含有离子交换树脂的柱子组成，内部环境包括真空等稳定环境。
离子交换柱根据生物分子在离子交换树脂表面的电荷状态选取不同的离子交换树脂和运行条件。
使用离子交换色谱和高效液相色谱使组分沿着离子交换柱进行分离。
组分的分离可以通过更改溶液中的化学物质来调节离子交换柱上的电位或链的溶解度。
离子交换色谱技术的应用离子交换色谱技术在分别提取多肽药物、血红蛋白和其他蛋白质、核酸序列、酶、低等生物细胞、孔雀石绿和甘草酸等天然产物中都有良好的应用效果。
其中，离子交换柱多用于从血红蛋白、细胞提取物和蛋白质混合物中分离纯化蛋白质，主要分为两个方面。
离子交换高效液相色谱技术在蛋白纯化中的应用
离子交换高效液相色谱技术在蛋白纯化中的应用离子交换高效液相色谱技术（Ion Exchange High Performance Liquid Chromatography，简称IE-HPLC）是一种常用的分离和纯化蛋白质的方法。
该技术基于蛋白质与离子交换树脂之间的相互作用，通过调节溶液pH和离子浓度来实现蛋白质的分离纯化。
离子交换高效液相色谱技术在蛋白纯化中具有广泛的应用，本文将着重介绍其在蛋白纯化中的应用和优势。
一、IE-HPLC工作原理及基本步骤IE-HPLC是一种基于离子交换作用的色谱技术，其工作原理是利用固定在色谱柱中的离子交换树脂对蛋白质的吸附和解吸进行分离。
一般包括样品处理、样品加载、洗脱和再生等步骤。
在色谱柱中，离子交换树脂表面带有正或负电荷的离子交换基团。
当样品溶液通过色谱柱时，带有相反电荷的蛋白质会与离子交换基团发生静电作用而被吸附。
随后，通过改变洗脱缓冲液的离子浓度和pH 值，使蛋白质从离子交换树脂上解离，实现蛋白质的分离纯化。
二、IE-HPLC在蛋白纯化中的优势1. 高选择性：离子交换树脂具有特定的离子交换性能，能够选择性地吸附目标蛋白质，从而实现对杂质的去除。
2. 高效性能：离子交换树脂的表面积大，特殊的孔隙结构，以及高效的液相流动系统，使得IE-HPLC具有良好的分离效果和高效的纯化能力。
3. 较强的适应性：IE-HPLC对溶液pH和离子强度的适应性较强，能够适应多种样品条件下的蛋白质纯化需求。
4. 可控性强：能够通过调节洗脱缓冲液的pH值和离子浓度来实现蛋白质的特异性洗脱，从而满足对目标蛋白质纯化的需求。
三、IE-HPLC在蛋白纯化中的应用1. 分离纯化近纯的蛋白质：IE-HPLC能够将目标蛋白质与杂质有效地分离，从而获得近纯的蛋白质样品。
2. 提取特定蛋白质亚型或同工酶：离子交换树脂的选择性对蛋白质的亚型或同工酶有很好的分离效果，能够有效地提取目标蛋白质的特定亚型。
高效液相色谱在蛋白质分析中的应用
高效液相色谱在蛋白质分析中的应用蛋白质是生命体内最重要的分子之一，它参与了几乎所有细胞生物过程，包括信号传导、代谢调控和结构支持等。
因此，研究蛋白质的结构和功能对于深入理解生物学的基本原理至关重要。
而高效液相色谱（HPLC）作为一种广泛应用于蛋白质分析的技术，具有高分辨率、高精确性和高灵敏度等优势，已经成为蛋白质分析的重要工具之一。
HPLC是一种在液相中进行分离和定量的色谱技术。
它可以通过对样品中的分子进行溶解和分离，得到各个组分的峰值，并通过峰的面积或高度来确定样品中目标分子的含量。
在蛋白质分析中，HPLC可以用来实现多种分离方式，包括离子交换、逆向相和亲和层析等。
这些技术可以根据不同的样品特性和分析目的来选择，从而实现对蛋白质的有效分离和定量。
离子交换色谱是HPLC常用的一种技术，在蛋白质分析中具有重要的应用。
该技术通过样品中蛋白质与固定在色谱柱填料上的离子交换基团之间的相互作用，实现分离和定量。
具体来说，当样品溶液通过填料时，离子交换基团会与蛋白质表面的带电部分发生静电作用，使得带电的蛋白质分子在固定相和流动相之间进行反复吸附和解吸附。
通过改变流动相的pH值和离子浓度等条件，可以调控蛋白质在离子交换柱上的保留和洗脱，从而实现对不同蛋白质的分离和纯化。
逆向相色谱也是常用的HPLC技术之一，可用于蛋白质的分离和定量。
逆向相色谱的原理是将样品中的目标蛋白质与填料上的疏水基团发生相互作用，从而实现分离。
与离子交换色谱不同的是，逆向相色谱需要通过有机溶剂和缓冲液的梯度洗脱来控制目标蛋白质的保留和洗脱。
逆向相色谱具有较高的选择性和灵敏度，可以实现对多个蛋白质的同时分离和定量，适用于复杂样品的分析。
亲和层析是HPLC中常用的一种选择性分离技术，通过特定配体与目标蛋白质之间的特异性结合而实现对蛋白质的分离。
亲和层析可以通过配体的特异性识别目标蛋白质的结构域或功能基团，从而实现高效分离。
例如，将金属离子与亲和剂配合，可以选择性地吸附含有特定金属结合位点的蛋白质；将抗体或受体蛋白固定在填料上，可以选择性地捕获与之结合的配体或激素蛋白质。
高亲水性强阳离子交换色谱填料的制备及其在蛋白质分析中的应用
６ ０℃ 下搅 拌 反 应 １ ２ ｈ， 进 行 微 球 表面 环 氧 基 水解 ， 产 物用 超纯 水洗 涤后 真空 干燥 备用 。取 一定 量水解 后的 Ｐ Ｇ ＭＡ— Ｅ Ｄ ＭＡ微球 ， 在 碱性 条件 下加 入一 定 比 例 量 的烯丙基 缩 水 甘 油 醚搅 拌 反 应 ， 即制 得 烯 丙基
的表 面 修饰 ， 以进行 肝素 与抗 凝血 酶 Ｉ Ｉ Ｉ的动态 相互 作用 研 究 。虽然 Ｐ Ｇ ＭＡ基 质 在 生 化 分 离分 析 中
显示 了较好 的应 用 前 景 ， 但 其 骨 架 中 的疏 水 性 结 构
条件 下进 行反 应 ， 产 物 乙醇 、 超 纯 水 充 分 清洗 后 ，
丙酯（ Ｐ Ｇ ＭＡ） 的环 氧 基 团具 有 很 高 的反 应 活性 ， 环 氧基水 解 产生 的二 醇基 团可 提 高其 生 物 相容 性 ， 用 于生 物 大分 子 的快 速 分 离 与 分 析 。Ｚ ｈ ａ ｏ等 。 ¨ ’ 利 用 无孔 Ｐ Ｇ ＭＡ微 球作 为亲 和 色谱 基 质 ， 用 于 多 肽 的高效 筛选 ， 基 于其 低非 特异 性 吸 附 ， 获得 了高选择 性 的 多肽探 针 。Ｚ ｈ ｏ ｕ等 利 用 反胶 团溶 胀 法 制备 了超 大孔 Ｐ Ｇ ＭＡ微 球 ， 非 常适 于生 物大 分 子 的 快速
化 Ｐ Ｇ ＭＡ — Ｅ Ｄ ＭＡ微 球 。 配制 ３ ｍｏ ｌ ／ Ｌ的 焦 亚硫 酸 钠 溶 液 ， 用 浓 Ｎａ Ｏ Ｈ 溶液 调 节 ｐ Ｈ至 ５ ． ５ 。将烯 丙基 化 Ｐ ＧＭＡ － Ｅ Ｄ ＭＡ微 球分 散 于焦 亚硫 酸钠 溶 液 中 ， 在 氮 气 保 护 下 于 室温
高亲水性强阳离子交换色谱填料的制备及其在蛋白质分析中的应用
高亲水性强阳离子交换色谱填料的制备及其在蛋白质分析中的应用刘吉众;黄嫣嫣;杨博;常建华;刘国诠;赵睿【摘要】Based on the needs of new packing materials for rapid and efficient separation, purification and analysis of biomacromolecules, a novel sulfonic acid-type strong cation exchange resin (SP-G-PGMA SCX resin) was prepared. The porous poly( glycidyl methacrylate) micro-spheres (PGMA) were selected as the matrix and glucose was used as the hydrophilic modifier to block the hydrophobic domains of PGMA beads. Glucose modification on PGMA beads improved the biocompatibility and reduced the non-specific adsorption so as to increase the recoveries of protein. The PGMA beads possess the porous structure and the relatively high specific surface area, which make the PGMA-based resins good permeability and high loading capacity. The application of such SP-G-PGMA SCX resin for the chromatographic separation of biomacromolecules was explored. Four basic proteins were baseline separated within 6 min with the column size of 100 mm × 4. 6 mm. The adsorption capacity of lysozyme on SP-G-PGMA SCX resin was determined as 39. 5 g/L. The results make the material promising for the separation and purification of biomacromolecules.%以具有双孔结构的聚甲基丙烯酸环氧丙酯(PGMA)微球为基质,以葡萄糖进行表面亲水改性,制备了强阳离子交换色谱填料,并将其用于复杂生命体系中生物大分子的快速而高效的分离、分析与纯化.葡萄糖亲水改性增进了填料的生物相容性,提高了蛋白质样品的回收率；双孔结构及较高的比表面积赋予填料良好的柱渗透性和样品负载量.以标准蛋白质为样品,考察了该填料对生物样品的分离性能.以100mm×4.6 mm的色谱柱分离4种蛋白质,在6 min内实现了基线分离；以溶菌酶为样品,填料的吸附容量为39.5 g/L,在蛋白质快速分离纯化分析中显示了良好的应用前景.【期刊名称】《色谱》【年(卷),期】2013(031)004【总页数】7页(P310-316)【关键词】强阳离子交换;固定相;聚甲基丙烯酸环氧丙酯微球;葡萄糖改性;蛋白质分析【作者】刘吉众;黄嫣嫣;杨博;常建华;刘国诠;赵睿【作者单位】中国科学院化学研究所,中国科学院活体分析化学重点实验室,北京100190【正文语种】中文【中图分类】O658随着生命科学和生物工程技术的飞速发展，复杂生命体系中活性生物大分子的分离、分析和纯化已成为分析化学和分离科学面临的一个重要任务［1，2］。
常用的蛋白质纯化方法和原理
常用的蛋白质纯化方法和原理蛋白质的纯化是生物化学研究中非常重要的一步，纯化蛋白质可以用于结构解析、功能研究、动态过程研究等各种生物学实验。
常用的蛋白质纯化方法有盐析法、凝胶过滤法、离子交换色谱法、亲和色谱法、逆渗透法和层析法等。
下面将对这些方法的原理和步骤进行详细阐述。
1. 盐析法盐析法是根据蛋白质在溶液中的溶解性随盐浓度的变化而变化的原理进行蛋白质的纯化。
该方法是利用蛋白质在高盐浓度下与水结合能力降低，使其从溶液中沉淀出来。
应用盐析法时，需要先调节溶液的盐浓度使蛋白质溶解，然后逐渐加入盐使其过饱和，蛋白质便会析出。
最后通过离心将蛋白质的沉淀物分离，得到纯化的蛋白质。
2. 凝胶过滤法凝胶过滤法是利用凝胶的pores 来分离蛋白质的一种方法。
凝胶通常是聚丙烯酰胺（也称作Polyacrylamide）或琼脂糖。
研究者将蛋白质样品加入到过滤膜上，较小的蛋白质能够通过pores，较大的分子则被排出。
通过选择不同大小的凝胶孔径，可以根据蛋白质的大小来选择合适数目的过滤膜。
凝胶过滤法需要进行缓冲液体积的连续换流，将蛋白质与其他杂质分离开来。
3. 离子交换色谱法离子交换色谱法是利用蛋白质与离子交换基质之间静电吸引力的不同而分离的方法。
离子交换基质通常是富含正离子或负离子的高分子材料。
在离子交换色谱法中，样品溶液在特定的pH 下流经离子交换基质，带有不同电荷的蛋白质能够与基质发生反应，吸附在基质上。
为了获得纯化蛋白质，需要通过梯度洗脱，逐渐改变缓冲液pH 或离子浓度，使吸附在离子交换基质上的蛋白质逐渐释放出来。
4. 亲和色谱法亲和色谱法是利用蛋白质与特定的配体相互作用特异性进行分离的方法。
配体可以是天然物质，如金属离子、辅酶或抗体，也可以是人工合成的结构。
在亲和色谱法中，样品溶液经过含有配体的固定相，与配体发生特异性相互作用，蛋白质与其它组分分离。
然后可以通过改变某些条件（如pH、温度或离子浓度）来洗脱纯化的蛋白质。
阳离子交换色谱技术在分离和纯化中的应用
阳离子交换色谱技术在分离和纯化中的应用色谱技术是化学分离和纯化中最常用的技术之一。
近年来，随着生物技术和制药工业的发展，对纯度和分离效果的要求越来越高。
阳离子交换色谱技术（Cation Exchange Chromatography，CEX）在分离和纯化中的应用越来越广泛。
1.背景和原理阳离子交换色谱技术是基于样品中的带正电荷的离子与阳离子树脂中的离子交换而实现的。
在该技术中，分离工质通过与载荷相同的阴离子树脂交互作用，与离子交换树脂中的正离子相互作用。
根据样品中离子的大小、形状和电荷的强弱，可实现针对不同组分的分离和纯化。
阳离子交换色谱技术主要包括弱阳离子交换和强阳离子交换两种类型。
弱阳离子交换一般用于蛋白质、多肽和核酸的纯化，强阳离子交换则可适用于离子性低分子化合物的纯化。
2. 应用阳离子交换色谱技术在制药、生物技术、食品工业、农业和环境保护等领域都有广泛的应用。
2.1 生物技术阳离子交换色谱技术在生物技术中的应用最为广泛。
其应用范围包括：（1）蛋白质纯化：蛋白质在中性或弱碱性条件下存在。
利用阳离子交换树脂，可将中性物质与酸性物质区分开来，从而实现蛋白质的纯化和分离。
（2）核酸纯化：核酸分子具有负电性，可以与身胺基阴离子交换树脂相互作用。
利用此特性，可将核酸从混杂物中分离出来。
（3）多肽合成：多肽是生物大分子中重要的组成成分。
阳离子交换色谱技术可以将不同的多肽进行分离和纯化，从而实现多肽的合成。
2.2 制药工业制药工业是阳离子交换色谱技术的另一个重要应用领域。
该技术可以用于药物的分离、纯化和检验中。
尤其是在复杂药物的分离和纯化中，阳离子交换色谱技术有着独特的优势。
2.3 食品工业在食品工业中，阳离子交换色谱技术主要用于少糖饮食、人工甜味剂和低盐饮食等领域的生产和工艺控制。
通过阳离子交换色谱技术的应用，可以实现对工业生产过程中必须隔离的离子或化合物的分离和纯化。
2.4 农业和环境保护在农业和环境保护中，阳离子交换色谱技术主要应用于土壤和水样中氨、锌、铜、铁、钙等离子的分离和检测。
高效液相色谱法在蛋白质分离检测中的应用
高效液相色谱法在蛋白质分离检测中的应用植物丁颖班何健伟 200930700207摘要 :对近年来高效液相色谱法分离和测定蛋白质技术作一综述，比较详细地介绍了各种HPLC模式、检测器,以及联用技术的应用情况。
对今后高效液相色谱法在蛋白质研究方面的作用作一展望。
关键词：高效液相色谱检测模式蛋白质分离测定联用技术前言：蛋白质是生命有机体的主要成分,在生命体生长发育的各个阶段都起着重要作用。
所以蛋白质的分离和检测一直是人们研究的热点。
然而蛋白质是一种长链高分子化合物,相对分子量大,在溶液中的扩散系数小、黏度大、易变性,这增加了蛋白质分离、分析的困难。
目前，高效液相色谱法广泛用于蛋白质的分离和检测。
高效液相色谱(HPLC)具有分析速度快、分离效能高, 检测灵敏度高样品适用范围广等优点因此在药学研究和生物医学测定中都得到了广泛的应用。
在高效液相色谱技术中,分配色谱、亲和色谱、离子交换色谱和凝胶排阻色谱都能够用于蛋白质的分离与鉴定。
本文对这几种色谱作一简要介绍。
1 HPLC基本原理HPLC由液体输送系统、进样系统、色谱柱和检测系统 4部分所组成。
输液泵将流动相以稳定的流速 (或压力)输送至分析体系 ,在进入色谱柱之前通过进样器将样品导人 ,流动相将样品带人色谱柱 ,在色谱柱中各组分依照分配系数、吸附力大小、带电性质 ,乃至分子量大小的差异而被分离 ,并依次随流动相流至检测器 ,将检测到的信号送至数据系统记录、处理或保存。
随着HPLC技术的日趋成熟,它已成为分离和检测蛋白质的重要工具。
2 蛋白质的HPLC分离模式物理、化学功能等特征差异是蛋白质分离、检测的基础。
根据蛋白质的大小、形状、电荷、疏水性功能等特性以及蛋白质的来源、实验要求等可以选择不同的模式来分离目标蛋白质2.1 反相高效液相色谱 (RP-一HPLC)RP_HPLC在HPLC各种模式中的应用最为广泛,但目前比较流行的色谱柱在蛋白质的检测方面并不多见。
蛋白质色谱分离技术
蛋白质色谱分离技术
蛋白质色谱分离技术是一种常用的蛋白质分离纯化技术，主要依据蛋白质的特定位点的差异进行分离。
该技术主要包括以下几种：
1. 凝胶过滤色谱（Gel filtration chromatography，GFC）：也称为尺寸排阻色谱（size exclusion chromatography，SEC）。
这种技术根据分子的流体动力学体积或大小差异来进行分离，适用于分离纯化蛋白质（包括酶类）、核酸、多糖、激素、氨基酸和抗生素等物质。
同时，这种技术也可以用于测定蛋白质的分子量。
通过单一凝胶床可以将分子大小相差25％的样品完全分开。
此外，凝胶过滤色谱还可以用于样品的浓缩和脱盐去热源和脱色等。
2. 亲和色谱：这是蛋白质检测中最专一的分离技术，可以从复杂的混合物中直接分离出目标蛋白质分子。
3. 疏水相互作用色谱（Hydrophobic Interaction Chromatography，HIC）：这种技术利用样品中各组份与色谱填料上配基相互作用力的差异，在洗脱时由于各组份移动速度的不同而达到分离的目的。
其分离机制类似于反相液相色谱，只是用水性缓冲液代替了有机溶剂。
每种蛋白质色谱分离技术都有其独特的应用和限制，因此在选择和应用时需要根据具体情况进行考虑。
蛋白质色谱分离方法
蛋白质色谱分离方法摘要蛋白质是生命有机体的主要成分，在生命体生长发育的各个阶段都起着重要作用。
所以分离和检测蛋白质一直是人们研究的热点。
依据蛋白质的物理、化学及生物学特性，已有多种分离手段，如：超滤法、SDS-PAGE、亲和层析等，其中，液相色谱分离技术由于具有重复性好、分辨率高等优势在蛋白质分离检测中得到了广泛的应用。
关键词高效液相色谱高效离子交换色谱反相高效液相色谱高效凝胶过滤色谱高效亲和色谱一、引言蛋白质在组织或细胞中一般都是以复杂的混合物形式存在，每种类型的细胞都含有成千种不同的蛋白质。
蛋白质的分离和提纯工作是一项艰巨而繁重的任务，到目前为止，还没有一个单独的或一套现成的方法能把任何一种蛋白质完全的从复杂的混合物中提取出来，但对任何一种蛋白质都有可能选择一套适当的分离提纯程序来获取高纯度的制品。
1、蛋白质纯化的总战略考虑蛋白质回收要采用简便易行的方法尽可能多地将目标蛋白从细胞培养上清液、细菌破碎液或组织匀浆中提取出来，收率至少达到90%以上。
然后进一步作精纯化，这第一步要求去掉大部分杂蛋白，同时要使样品的体积得到充分浓缩，一般要求要浓缩几十到几百倍，粗提液的体积大大缩小，便于下一步精纯化。
而且每一步都要做电泳判断纯化效果。
2、蛋白质分离纯化技术的选择要尽可能多地了解目标蛋白的结构、氨基酸组成、氨基酸序列，以及蛋白质的空间结构所决定的物理、化学、生物化学和物理化学性质等信息，根据不同蛋白质之间的性质差异或者改变条件使之具有差异，利用一种或多种性质差异，在兼顾收率和纯度的情况下，选择最佳的蛋白质提纯方法。
二、色谱技术简介1、色谱分离技术基本概念色谱分离技术又称层析分离技术或色层分离技术，是一种分离复杂混合物中各个组分的有效方法。
它是利用不同物质在由固定相和流动相构成的体系中具有不同的分配系数，当两相作相对运动时，这些物质随流动相一起运动，并在两相间进行反复多次的分配，从而使各物质达到分离。
当流动相中携带的混合物流经固定相时，其与固定相发生相互作用。
强阳离子交换树脂在蛋白质分离纯化中的应用
强阳离子交换树脂在蛋白质分离纯化中的应用
卜春苗;朱金霞;龚波林
【期刊名称】《宁夏工程技术》
【年(卷),期】2006(005)001
【摘要】为了进一步考察流动相中盐种类、体积流量及有机溶剂等对蛋白质保留的影响,采用新的化学方法将3.0μm无孔单分散亲水性交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯树脂改性为一种新型的强阳离子交换色谱填料;实验分析了该填料对标准蛋白的分离性能,有机溶剂、流动相盐种类和体积流量等对蛋白质保留的影响.实验结果表明:当体积流量为3 mL/min时,在1.5 min线性梯度时间内可快速分离四种标准蛋白质,且蛋白质的保留符合阳离子交换色谱规律.该填料的动力学吸附容量为7.13 mg/mL,将其应用于快速纯化鸡蛋清中的溶菌酶和猪心中细胞色素-C,可取得较好的效果.
【总页数】5页(P60-64)
【作者】卜春苗;朱金霞;龚波林
【作者单位】宁夏大学,能源化工重点实验室,宁夏,银川,750021;宁夏大学,能源化工重点实验室,宁夏,银川,750021;宁夏大学,能源化工重点实验室,宁夏,银川,750021;宁夏大学,生物技术重点实验室,宁夏,银川,750021
【正文语种】中文
【中图分类】TQ323;Q503
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高效阳离子交换色谱法分离纯化蛋清中的溶菌酶
收稿日期:2001210231作者简介:李 蓉,女,1971年生,讲师,博士研究生.通讯联系人:陈国亮,副研究员,电话:(029)8373129,E 2mail :xidacgl @.基金项目:陕西省科委基金资助(96H09),研究成果获1999年陕西省教育委员会科技进步一等奖、2001年陕西省科技进步三等奖.高效阳离子交换色谱法分离纯化蛋清中的溶菌酶李 蓉, 陈国亮(西北大学化工系,陕西西安710069)摘要:建立了用高效阳离子交换色谱分离纯化蛋清中溶菌酶的新方法,讨论了纯化的工艺条件。
蛋清样品匀浆后,用氯化钠初步纯化,然后用弱阳离子交换柱XIDACE 2WCX 分离。
结果表明,被纯化的溶菌酶和杂蛋白得到很好分离。
经活性检测,溶菌酶过柱后的活性回收率为107%,蛋白的比活为15467U/mg ,纯化倍数提高了516倍。
用尺寸排阻色谱(SEC )鉴定,得到的溶菌酶呈均一性。
该法较传统软基质低压离子交换色谱分离速度快,纯化效率高。
关键词:高效阳离子交换色谱;溶菌酶;蛋清中图分类号:O658;Q51 文献标识码:A 文章编号:100028713(2002)0320259203Separation and Purif ication of Lysozyme from Egg White byHigh Performance C ation 2Exchange ChromatographyL I Rong ,CHEN Guo 2liang(Depart ment of Chemical Engineering ,Northwest U niversity ,Xi ’an 710069,China )Abstract :A new method used to separate and purify lysozyme from egg white by high performance cation 2exchange chromatography has been established.The process conditions for purifying lysozyme were also discussed in detail.The procedure involved that homogenization of the egg white sample ,preliminary purification with sodium chloride ,and chromatographic separation by the weak cation ex 2change column (XIDACE 2WCX ).The experimental results showed that the purified lysozyme and other impurity proteins were completely separated.By using bioactivity assay ,the recovery of lysozyme was 107%,and the specific activity was 15467U/mg through the column.Its purity was raised 5162fold.The collected fraction with activity was detected by size 2exclusion chromatography (SEC ).The purified lysozyme was pared with the traditional soft 2based low pres 2sure ion 2exchange chromatography ,the developed method is rapid and effective.K ey w ords :high performance cation 2exchange chromatography ;lysozyme ;egg white 溶菌酶是一种能够溶解细菌胞壁的碱性蛋白,在医学上具有重要的应用价值,可用来制备消炎药,与抗菌素合用可以治疗溃疡、口腔和鼻腔粘膜炎。
强阳离子交换色谱法从牛初乳中 分离纯化乳铁蛋白的研究
强阳离子交换色谱法从牛初乳中分离纯化乳铁蛋白的研究卢蓉蓉1,2，许时婴2，王 璋2，杨瑞金1,2(1.江南大学 食品科学与技术国家重点实验室，江苏 无锡 214122；2.江南大学食品学院，江苏 无锡 214122)摘 要：本实验研究了离子交换色谱技术大规模纯化乳铁蛋白的色谱条件。
选用的SP Sepharose Fast Flow离子交换剂对乳铁蛋白有很好的吸附选择性，洗脱速度可达到2L/h。
以pH值为7.7～8.0，10mmol/L的磷酸盐为起始缓冲液，通过改变离子强度进行分步洗脱。
先采用0.5mol/L的NaCl溶液选择性洗脱分泌型免疫球蛋白A和乳过氧化物酶组分，再采用1mol/L的NaCl洗脱LF组分。
经SDS-PAGE测定，所得乳铁蛋白组分显示为单一区带，相对分子质量为80400Da。
经等点聚焦测定，所得乳铁蛋白的等电点为8.65。
中试生产的精制品中乳铁蛋白的纯度和回收率分别为94.20%和75.45%。
关键词：乳铁蛋白；分离纯化；强阳离子交换色谱；中试规模Purification of Lactoferrin from Bovine Colostrum with Strong Cation ExchangeChromatography on Pilot ScaleLU Rong-rong1,2，XU Shi-ying2，WANG Zhang2，YANG Rui-jin1,2(1.State Key Laboratory of Food Science and Technology, Jiangnan University, Wuxi 214122, China；2.School of Food Science and Technology, Jiangnan University, Wuxi 214122, China)Abstract ：A stepwise procedure for purification of lactoferrin (LF) extracted from bovine colostrum by ion exchange chromatography on a pilot scale was investigated. SP Sepharose Fast Flow (SP Sepharose FF) of excellent absorption speciality for LF, was chosen as the ion exchanger with elution rate of 2 L/h. 0.5 mol/L NaCl aqueous solution was used to elute the secretory immunoglobulin A and lactoperoxidase. Then, lactoferrin was eluted with 1.0 mol/L NaCl aqueous buffer. Lactoferrin fraction is shown as a single band in SDS-PAGE with molecular weight of 80400 Da. The isoelectric point of lactoferrin is 8.65 determined by isoelectric focusing. The purity of refined LF on pilot production is 94.20% with a yield of 75.45%.Key words：lactoferrin；purification；strong cation exchange chromatography；pilot scale中图分类号：TS252.1 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2007)07-0048-06应用色谱技术从牛初乳中分离乳铁蛋白(lactoferrin，以下简称L F)的方法很多。
快速蛋白液相色谱填料
快速蛋白液相色谱填料
快速蛋白液相色谱填料是一种用于蛋白质分离和纯化的填料。
它具有高效、高分辨率、高载荷能力和高压力耐受性的特点，适用于高通量的蛋白质分离。
常见的快速蛋白液相色谱填料包括以下几种：
1. 球形填料：球形填料具有均匀的粒径分布和较大的表面积，能够提供更好的质量传递和分离效果。
常见的球形填料有糖胶、琼脂糖和琼脂糖凝胶。
2. 亲和层析填料：亲和层析填料以特定的亲和配体与目标蛋白质相互作用，实现目标蛋白质的选择性捕获和纯化。
常见的亲和层析填料有金属螯合填料、抗体填料和亲和标记填料等。
3. 反相填料：反相填料是指填料表面具有亲水性，样品在与填料相互作用时，较易被洗脱。
常见的反相填料有C18和C4等。
4. 离子交换填料：离子交换填料是以填料表面的离子交换基团与样品中的离子进行反应，实现样品的分离和纯化。
常见的离子交换填料有阴离子交换和阳离子交换填料。
快速蛋白液相色谱填料的选择应根据样品的性质、目标蛋白质的需求和实验条件等综合考虑，以获得最佳的分离和纯化效果。
蛋白质在合成阳离子交换剂上的色谱特性研究
! ! 可以看出， 合成 的 色 谱 柱 比 商 品 柱 具 有 更 高 的 分 辨 能 力。 + 种 标 准 蛋 白 以 及 012/0 的 杂 蛋 白 在 >89*0?/@0> 柱上得到很 好 分 离， 而 用 "3#%/;&CD @0>/# 和 ;671 0*E* 柱不能将 012/0 和 +,&-. 分 开， 也 分 离 不 出 012/0 的 杂 蛋 白。 利 用 >89*0?/ @0> 和 "3#%/;&CD @0>/# 柱 分 离 蛋 清 中 的 溶 菌 酶， 前者以很高的 活 性 回 收 率 将 溶 菌 酶 与 杂 蛋 白 完 全分开， 而后者溶菌酶和杂蛋白峰发生重叠
［!］
谱特性、 热力学性质、 与金属离子的作用。
Байду номын сангаас
!" 实验部分
! ? !" 仪器和试剂 & & */). ( 型高 效液相 色谱 仪 （ 日本 岛津） ； 匀浆 填 充装置 （ /;894:" ， 日本） ； 7PK)#"! 型 原 子 吸 收 分 光光度计 （ 沈阳分析仪器厂） 。 & & 硅胶 （ 粒度 , ! 9 ， 孔径 $" -9 ， 北京化学试剂研 究所） ； （ 2*OJ ， 辽 " ) 缩水甘油 氧 丙 基 三 甲 氧 基 硅 烷 宁盖县化工 研 究 所 ） ； 亚氨基二乙酸 （ 化 学 纯， 湖州 生物化学厂） ； 其他试剂均 为 分 析 纯 （ 西安化学试剂
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高效离子交换色谱柱在蛋白质分离与纯化过程中的再生体现
高效离子交换色谱柱在蛋白质分离与纯化过程中的再生体现摘要：在我国社会经济和科技技术飞速发展中，生物技术应用水平越来越高，并且随着市场发展提出的要求，加大了有关技术理念的探索力度。
现如今，生物技术已被大量引用到蛋白质生产工作中，如发酵、基因等，但针对蛋白质的分离和纯化依旧存在较多问题。
因此，本文在了解当前生物技术发展与蛋白质生产情况的基础上，结合高效离子交换色谱柱设计相关实验，并分析其实验结果。
关键词：高效；离子交换色谱柱；蛋白质；分离；纯化0引言：蛋白质作为一种高分子化合物，具备长链特性，与其他同类化合物对比分析可知，最终的分子质量非常大，并且在溶液当中因为粘度过高而无法扩散，因此在生产制造期间很容易出现变性现象。
现如今，大部分制造企业都无法对其进行正确分离和纯化。
这一特征主要集中在以下几点：首先蛋白质活性强，在分离纯化过程中会受各种因素的影响发生变化；其次，物料构成也有极强的多变性，且蛋白质本身含量很低；再次，物料并没有极强的平稳性，料液当中的蛋白水解酶容易降解本就不多的蛋白质；最后，目前人类应用蛋白质的形式主要集中在医药和食品两大领域中，因此实践操作的要求极高。
下面利用高效的离子交换色谱柱对蛋白质的分离纯化实验进行解析。
1.背景介绍针对蛋白质进行色谱分离与纯化，不管是所选材料的价格还是应用时长都是现场实验研究人员需要关注的焦点。
因为蛋白质的样品构成较为复杂，各类大分子和功能基因的作用特征之间存在较大差异，尤其是蛋白质在规定表面上的不可逆吸附与疏水结合，都会影响利用色谱柱进行再生实验的效果[1]。
由于这一问题很难在试验操作中正确处理，所以柱子的再生与恢复都极为困难。
利用非线性色谱方式处理分离纯化工作时，因为进样量要超过常见的线性色谱，柱子必然会受到更多不可逆吸附的影响，所以如何对色谱柱进行有效再生是现如今实验探究关注的焦点。
结合以往实验案例分析可知，处理色谱柱最常见的洗脱液有：第一，具有强酸或弱酸性的碱性溶液；第二，高盐溶液；第三，具备有机溶剂的缓冲溶液；第四，具有极高洗脱强度的容积；第五，含尿素溶剂；第六，表层活性剂等；第七，某些蛋白质变性剂等。
分离生物大分子液相色谱填料的合成和评价的开题报告
分离生物大分子液相色谱填料的合成和评价的开题报告1.研究背景分离生物大分子（如蛋白质、多肽、核酸等）是现代分子生物学和生物医学研究中的重要任务之一。
液相色谱作为一种有效的物质分离技术，在生物大分子分离与纯化方面得到广泛应用。
色谱填料作为液相色谱分离柱的核心部件，其分离性能直接影响分离效果。
2.研究意义分离生物大分子液相色谱填料的合成和评价，可以提高液相色谱分离纯化生物大分子的效率和准确度，为生命科学研究提供重要实验手段。
3.研究内容（1）生物大分子液相色谱填料的合成：选用不同材料，通过选择合适的交联剂和功能化试剂制备色谱填料。
（2）生物大分子液相色谱填料的评价：通过测试色谱填料的表面积、孔径大小、表面性质和稳定性等指标，评价其分离性能。
同时，通过模型物和实际物质进行分离实验，验证填料在生物大分子分离中的应用价值。
4.研究方法（1）合成生物大分子液相色谱填料：通过文献调研和实验考察选用适宜的交联剂和功能化试剂，利用交联技术制备色谱填料。
（2）评价填料性能：采用比表面积测试仪、孔径分布分析仪、扫描电镜等仪器测试填料的表面性质、孔径大小、表面积等性能指标，并利用其他分析仪器如HPLC、SDS-PAGE、UV-Vis等分析各种模型物和实际物质在填料上的分离效果，评价填料的分离能力和稳定性。
5.研究预期通过合成和评价生物大分子液相色谱填料，可以得到高分辨率、高稳定性的色谱填料，为分离生物大分子提供更好的手段，同时对填料的材料和功能化合成提供理论和实验参考。
6.研究难点（1）生物大分子液相色谱填料的合成，需要对填料成分、交联体系、添加剂等进行全面考虑。
（2）生物大分子液相色谱填料的评价，需要设计复杂样品和多种指标的测试方法，进行全方位的性能评价。
单克隆抗体亲和填料的制备及其在血浆高丰度蛋白分离中的初步研究的开题报告
单克隆抗体亲和填料的制备及其在血浆高丰度蛋白分离中的初步研究的开题报告一、研究背景和意义：血浆是体内含有大量蛋白质和其他生物大分子的液体，其中含有丰富种类的蛋白质。
但血浆蛋白质种类和浓度级别的差异使其在临床血液检测和新型药物研发方面具有重要意义。
高丰度蛋白质对于潜在低丰度生物标志物的检测和诊断影响很大，因此，需要对血浆中的高丰度蛋白进行有效分离。
传统的血浆高丰度蛋白分离方法主要包括沉淀、电泳、凝胶层析、超滤及吸附等方法，但这些方法存在的问题包括低分离效率、低样品处理量、低选择性、操作难度大等。
而单克隆抗体亲和填料则可以通过特异性识别和结合高丰度蛋白，实现高丰度蛋白的有效分离。
因此，开发单克隆抗体亲和填料在血浆高丰度蛋白分离中的应用具有重要意义。
二、研究内容和目标：本研究旨在制备一种利用单克隆抗体亲和填料分离血浆高丰度蛋白的新方法。
具体研究内容包括：1. 制备单克隆抗体亲和填料：利用纯化的目标蛋白质作为抗原，构建与其相应的单克隆抗体。
通过化学交联、亲和层析等方法制备单克隆抗体亲和填料。
2. 优化单克隆抗体亲和填料的制备工艺：包括决定填料的理化特性、交联度、亲和力等，同时考虑到填料的稳定性与重复使用的可行性。
3. 对单克隆抗体亲和填料进行血浆样品处理和高丰度蛋白分离测试：通过血浆样品处理，对单克隆抗体亲和填料进行高丰度蛋白分离测试，包括分离效率、通量、选择性等性能测试。
4. 对单克隆抗体亲和填料在临床应用中的可能性进行初步的探索：针对临床应用，测试不同类型（疾病、年龄、性别等）人群的血浆样品，分析不同临床应用场景下，单克隆抗体亲和填料在高丰度蛋白分离中的优势和局限性。
三、研究方法：本研究采用以下研究方法：1. 蛋白质纯化方法：差凝、离心、凝胶层析等方法纯化目标蛋白，提取纯蛋白。
2. 酶消化法：对纯蛋白进行酶消化，产生多肽作为抗原。
3. 单克隆抗体的制备：将抗原免疫小鼠，经过细胞融合、筛选、扩展培养等步骤，获得与抗原特异性结合的单克隆抗体。
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上
学试剂 研究所） 缩水甘油 醚基 丙基三 甲氧基硅烷
１ 前 言
我们曾报道 过分 离蛋白质的羧基型弱阳离子和 麟 酸基型 中强 阳离子交 换色谱填 料的研究“ 。文 献 Ｃ３ ４ 报道 的磺酸基 型硅腔基 质强 阳离子交换 色谱
（ 盖县化工研究所） 溶苗酶和核糖核酸酶 （Ｉ ， － 海生物
Ｉ
ｏＨ
鲁 Ｓｉ ｉＣＨ ＯＳ （ ）ＯＣＨ ＣＨＣＨ ＯＲＯＳ Ｈ Ｏ｛
其 中 Ｈ ＯＨ为 丁二醇时 ， 料代 号为 Ｓ Ｘ ６为 聚 ＯＲ 填 Ｃ 一；
乙二醇 ４ ０时 ， ０ 填料代号为 Ｓ Ｘ ７ Ｃ 一
的保 留值 明显大于 Ｓ 一 ， Ｓ Ｘｖ ＣＸ ６柱 而 Ｃ ６柱上蛋 白质 的半 峰宽 远小于 Ｓ Ｘ一 柱 （ Ｃ ７ 见表 １ 。这 就再次证 明 ）
易离 解 ， 以本文 的填料在 不破坏基 质和配 基链的 所 ｐ 值条件下 皆可使用 。ｐ 值使用范 围为 ２ ｊ 。 Ｈ Ｈ ． ～８ 分离标准蛋 白质和酶 将 本文 合成的强阳离子
交换 色谱填料用 于蛋 白质和酶 的分离 时 ， 离性 能 分 优于文献 ：～ ３ 的弱 阳离子和 中强阳离子交换色谱 １ ］
ＯＨ （ ｃＨ２ ３ ） 。ｃＨ ２
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色 谱 条 件 同 图 １ 样 品 ： 因重 组 人 干扰 寮 ｙ的 粗 品 脱 盐 酸 基 胍 后 的 样 品 Ｔｈ ｈｏ ａｏ ｒｐ ｉ ｃｎ ｋｏ ａ ｔｅｓｍｅ ｅｃｒ ｍ ｔｇａ ｈｃ ｏ ｄ ｉ￣ 托 ｈ ａ
ａ ｎ Ｆｉ．１ Ｔｈｅ ｓｍ ｐｅ ｉ ｈ ｒ ｄｅｐ ｏ ｕｃ ｆｒｌ ８ ｉ ｇ ． ａ ｌ ｓ ｔ ｅｃ ｕ ｒ ｄ ｔｏ ＦＮ一
２ 实验部 分
２ １ 仪器与试剂 ． 戗器 Ｌ 一Ａ型 高教 液相色谱 仪 （ｌ Ｃ６ Ｅ本岛 津） ，
条 件下 与氯 磺酸反 应， 得古 磺酸基 的强 阳离子交换
色谱 填料 ， 反应如下 ：
兰 ｏ＋叫 Ｈ ‘
兰 ｓｉ 。ｓ
ｃ ｏ — 一 岂 ｏ 。 ｃ ０ ｓ ３Ｈ ＼／ ｏ ０ Ｃ ｃ Ｈ － 。
酶 。 ｃｕ ：０ ｒｍ ×４１ Ｃ ｉｍｎ １ ０ ａ ． ｍｍ ， ｂｌ ｈ ｓ ｍｏ ｉ ｐ ａｅＡ：． ２ ＬＬ ｅ ０ ０ｍｏ ． ＂ Ｎａ Ｐ ，Ｈ６５ ｍｏｉ ｈ ｓ ０ ０ ｍｏ／ Ｈ２ Ｏ‘ Ｈ：Ｏ｛ｐ ． ， ｈ ｅｐ ａｅＢ：． ２ ｌＬ Ｎａ Ｐ ＋ ｌ
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分离蛋白质的高效强阳离子交换色谱填料的合成及性能研究
建兰
（ 西北 大 学 化 学 系 提
却ｊ囊一
西安 ７０６） ］ ０ ９
要 带 端 羟 基 的 太 孔 硅 腔 与 氟 磺 酸 反 应 制 得分 离 蛋 白质 的强 阳离 子 交 换 色 谱 填 料 。填 料 分 离 度 高 ， 白 质 蛋
Ａｂ ｔａ ｔ Ｉ ｈ ｓ ｐ ｐ ｒ ｈ ｔ ｄ ｅ ｎ ｔ ｅ ｓ ｎ ｈ ｓｓ ｈ ｏ ｔ ｇ ａ ｈ ｃ ｃ ａ ａ ｔ ｒ ｔ ｓａ ｄ ａ ｐ ｉａ ｉ ｎ ｏ ｅ ｍ ｒ ｃ ｎ ｔ ｉ ａ ｅ ，ｔ ｅ ｓ ｕ ｉ ｓｏ ｈ ｙ ｔ ｅ ｉ ，ｃ ｒ ｍａ ｏ ｒ ｐ ｉ ｈ ｒ ｃ ｅ ｉ ｉ ｎ ｐ ｌ ｔ ｆｎ ｗ ｓｃ ｃ ｏ
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４ Ｃａ ｄ ，Ｒｏ ｓ ｔＲ—ＪＣｈ ｏ ａｏ ｒＳ ｉ ９７ １ ： ０ ｕ ｅＭ ｓｅ ｒｍ ｔｇ ｅ ，１ ７Ｆ ５ ４ ５
Ｓ ｕ ｉ ｓｏ ｈ ｃ ｎｇ ｆ Ｈｉ ｈ Ｐｅ ｆ ｍ ａ ｅ Ｓ ｒ ｎｇ Ｃａ ｉ ｎ ｔ ｄ ｅ ｎ ｔ ｅ Ｐａ ｋｉ ｓ ｏ ｇ ｒ ｏｒ ｎｃ ｔ ｏ ｔｏ Ｅｘ ｈ ｎｇ ｒ ｍ ａ ｏ ｒ ｐ ｏｒｔ ｅ Ｓ ｐａ ａ ｉ ｎ ｏ ｏ ｅｎｓ ｃ ａ ｅ Ｃｈ ｏ ｔ ｇ ａ ｈｙ ｆ ｈ ｅ ｒ ｔｏ ｆＰｒ ｔ ｉ
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２ ２ 柱子装填 、 白质活性 回收率和柱窖测定方法 ． 蛋
见 文 献 ［ ，］ １２。
２ ３ 填料 的台成 ．
的硅胶与 氯磺酸反 应 ， 备得 到分离 蛋白质的强 阳 制 离子交换 色谱填料 。合成方法简便 分离性 能较好 。
经过酸洗处理的硅胶先与 缩水 甘油醚基 丙基
三 甲氧基硅 烷反应 物在三氟化 硼 催化下与二元 产 薛 或聚乙二醇加成 ， 得端羟基硅 胶。 后让 其在无水 然
３ ２ 蛋 白质 活性回收率 ． 强 阳离 子交 换色 谱填 料的蛋白质活性 回收率 明
辜 絮器
昌 蹭豁
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显低 于弱 阳离子和 中强阳离子交换色谱填料 。以溶
桂为 ８ ， 在弱 阳离子和 中强 阳离子交换色谱填 ｏ 而
菌酶为样 品，ｃ ６ 的活性 回收率 为 ７ ，ｃ ７ 。 料中蛋白质活性 回收率都大于 ８ “ 。 ｓ ｘ一 柱 ６ ｓ ｘ一 ９ 叫：
ｏ ｒ ｔ ｉ ｓ ｈ ｖ ｅ ｎ ｒ ｐ ｒ ｅ ．Ｔｈ ｉ ｃ ｔ ｈ ｎ ｙ ｒ ｘ ｌｇ ｏ ｐ ｒ ａ ｔ ｄ ｗ ｔ ｈ ｏ ｏ ｕ ｌ ｎ ｃ ａ ｉ ｎ ｌｐ ｏ ｅｎ ａ ｅ ｂ ｅ ｅ ｏ ｔ ｄ ｅ ｓｌ ａ ｗｉ ｈ ｔ ｅ ｅ ｄ ｈ ｄ ｏ ｙ ｒ ｕ ｅ ｃ ｅ ｈ ｃ ｌ ｒ ｓ ｌｏ ｉ ｃ ａ ｄ ｉ ｉ ｄ
填粹 。Ｓ Ｘ一 填料分离性能优 于 Ｓ Ｘ一 （ Ｃ ６ Ｃ ７ 见图 １ 。 ） 用于基 固重组人干扰素 ７的分 离 本文 合成的
田 １ 置 白质在 ｓ ｘ ６ ｅ 一 柱上的色谱田
Ｆｉ Ｔｈ ｈ ｏ ｔ ｇ ａ ｏｆｐ ｏ ｅ ｎ ｕ ｅ ｘ一 ｏ ｕ ｕ ｇ １ ｅ ｃ ｒ ｍａ ｏ ｒ ｍ ｒ ｔ ｉ ｓ ｏ ｓ ６ ｃ ｌｍ
’ ａ ｇ Ｊａ ｈ ａ ａ ｄ Ｇｕ ｈ 。ｎ Ｃｈ ｎ ｉｎ ｕ ｎ ｏ Ｚ ｉ ａ
（ ｅ ａ￣ ｍ ｏ ｈｍｉ ｒ — ｒ ｗｅ ｉ ｒｉ Ｘｉ ｎ ｔ７ ０６ ） Ｄ ｐ ｒｍｅ ｆＣ ｅ ｓ ｙ Ｎｏｔ ｓ Ｕｎｖ ｓｙ— ’ ， １ ０ ９ ｔ ｈ ｔ ｅ ｔ 口
容量为 ２ ． ｇ Ｌ ６９／ 。 ３ ４ 填料 的应 用 ． 填料 ｐ Ｈ值 的使 用范 围 由于 磺酸基在水 中极
ｌ 常建华 ， 刘新华．色谱， ９ ４ （ ）４ ６ １９ Ｈ２ ６ ：３ ２ 常建华 ， 韩亚萍 高等学校化学学报 ，９ ４ １ （） １ １ １９ ・３ ９ ：３ ７ ９ 常建华 高等学校化学学报 ，９ ５ １ （２ ：９ １ １ ９ ｜６ １ ７ １ １
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弓ｚ ３
第１ ５卷第 ４期
１９ 年 ７月 ９７ ’ 岛 ｉ ｌ ｌ
Ｖｏ ． ５ １ １ ＮＯ ４ ．
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Ｊ ｌ ９ ７ ｕｙ １ ９
ａ ｔ ｒｅ ｉ ｆ ａ ｉｎ ｏ ｄ ｏ ｈ ｏ ｅ ｇｕ ｒ ｄ ｎ ｆｅ ｌ ｒ ｎ ｔ ｆｈｙ ｒ ｃ ｌ ￣ｄ ａ ｄ ｉ ｅ ｔｉ ｏ
３ ｉ ｕｎ ｇｌｂｎ ｌ ｏ ｔ ｍｉ 一ｉｏａ ｃｅ ￣ ｌ ６ －ｍｍ ｏ ｏ ／￣ ４ ｃ ｎａｂｕ ｎ ｉ ｒｂ ｕ ｉａ ． ５
化学研 究所 ）其它标准 蛋白质为 Ｓｇ ， ｉｍａ产品。
填料 的合成是 用硅胶与端 乙烯 基有机硅烷 反应 ， 产 物与苯 乙烯和二 乙烯 基苯 聚合后磺 化得 到的 。虽然 这 种填 料柱 容量大 ， 离 度高 ， 分 但配 基 链疏水 性 太
强， 并不十分适合分 离蛋白质。 本文研究 了带端羟基
３ 结 果与 讨论
３ １ 结构对保 留值及半峰宽的髟响 ．
Ｓ ｘ一 和 Ｓ Ｘ一 ｃ ６ Ｃ ７填料 踪配 基链 结构 和长 度不 同外 ， 其它 部分 完全 相同。但 蛋 白质在 Ｓ Ｘ一 柱上 Ｃ ７
离子 交换色谱 中除起 主导作用 的静 电力外 ， 有其 还 它力参与 ， 料配基对蛋 白质的保 留有影响 。 填