乌骨藤提取物抑制裸小鼠胃癌模型肿瘤生长的实验研究_周艳艳

第 26 天 24. 785 ± 3. 597 23. 908 ± 1. 368 23. 760 ± 1. 557
第 29 天 25. 041 ± 3. 610 24. 024 ± 1. 122 23. 896 ± 1. 356
第 33 天 25. 586 ± 3. 675 24. 171 ± 1. 036 24. 394 ± 2. 024
人胃癌细胞 MKN45 株 由 南 昌 大 学 一 附 院 消 化 研究所提供，培养在含 10% 小牛血清的 DMEM 培养 液中，于 5% CO2 ，37℃ 恒 温 孵 育 箱 中 常 规 培 养、 传代。 1. 4 方法 1. 4. 1 麻醉： 用解放军农牧大学军事兽医研究所提 供的速 眠 新 846 合 剂，按 0. 5 mg / kg 剂 量 腹 腔 注 射 麻醉裸小鼠。 1. 4. 2 荷瘤鼠模型的建立： 将人胃癌细胞 MKN45 2 × 107 细 胞 悬 液 接 种 裸 鼠 左 侧 腋 窝 外 侧 皮 下，待 裸 鼠皮下可 触 及 10 mm3 大 小 为 成 瘤。 实 体 瘤 模 型： 将成瘤裸鼠处死，取肿瘤组织直 径 为 1 mm 大 小，移 植 于 裸 鼠 右 侧 腋 窝 外 部 皮 下［2］ 。 1. 4. 3 分组给药： 接种后的裸小鼠第 5 天按体质量 随机分为对照组，水提组和水提醇沉组共 3 组，每组
乌骨 藤 是 萝 藦 科 牛 奶 属 植 物 通 光 藤，含 有 多 种
甾 体 酯 苷 、生 物 碱 、有 机 酸 、多 糖 、树 脂 及 色 素 等 化 学 成分，C21 甾体苷 是 一 类 广 泛 存 在 于 萝 藦 科 植 物 中 的化合物［3 ～ 5］，研究发现其具有明显的 抗 肿 瘤、免 疫 调节、抗生育、抗癫 痫 等 多 项 生 物 活 性 和 药 理 作 用。 现代药理研究表明： 乌骨 藤 中 所含 的 C21 甾 体 苷 是 乌骨藤中抗肿瘤作用的主要活性物质。乌骨藤所含 的三萜和多糖成分也具有抗肿瘤活性。乌骨藤提取 物 对 胃 癌 、食 管 癌 、白 血 病 细 胞 等 肿 瘤 细 胞 均 有 抑 制 作 用 ，高 浓 度 时 肿 瘤 抑 制 率 与 某 些 化 疗 药 物 相 当 ，高 浓度消癌平对食管癌细胞株 Ec-9706 有直接生长抑 制作 用，用 MTT 比 色 法 测 定 药 物 抗 癌 活 性 及 IC50 值，发现其高浓度 时 的 抑 制 率 与 顺 铂 相 仿［6］。 乌 骨 藤 还 可 抑 制 肿 瘤 细 胞 增 殖 ，诱 导 肿 瘤 细 胞 分 化 ，促 进 肿瘤细胞凋亡，达到多重治疗 作 用［7 ～ 8］。食 管 癌 Ec9706 细胞在消 癌 平 作 用 后，形 态 变 化，细 胞 体 积 变 小，细胞间接触变 松，折 旋 光 性 及 贴 壁 能 力 减 弱，胞 内颗粒增多，出现凋亡小体，说明消癌平可诱导 Ec9706 细胞凋 亡［6］。 乌 骨 藤 提 取 物 具 有 刺 激 胸 腺 和 脾 脏 细 胞 增 生 的 作 用 ，可 改 善 免 疫 功 能 ，这 可 能 与 其 实现抗 肿 瘤 作 用 有 关［9 ～ 10］。 乌 骨 藤 与 化 疗 药 物 协
收稿日期： 2012 － 08 － 28 * 基金项目： 江西省自然科学基金项目（ No． 2010 GZY0116 ） 作者简介： 周艳艳（ 1984 － ） ，硕士。研究方向： 药理药效学研究。E-mail： 285146103@ qq． com 通信作者： 褚 芳（ 1947 － ） ，研究员。E-mail： chufang0791 @ 163． com
1 材料和方法
1. 1 受试物 乌骨 藤 水 提 物 和 乌 骨 藤 水 提 醇 沉 物，由 本 所 天
然室提供。 1. 2 实验动物
BALB / c（ nu-nu） 小鼠，SPF 级，由 中 国 药 品 生 物 制 品 检 验 所 实 验 动 物 中 心 提 供，许 可 证 号： SCXK （ 京） 2005-004。实验动物饲养在江西省药物研究所 IVC 笼 具 内，使 用 许 可 证： SYXK （ 赣 ） 2008 – 0005。 本实 验 使 用 BALB / c （ nu-nu ） 裸 小 鼠 24 只，鼠 龄
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第 29 卷 第 5 期 2012 年 10 月
櫴櫴櫴櫴毷 研究报告
实验动物科学 LABORATORY ANIMAL SCIENCE
Vol． 29 No． 5 October 2012
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乌骨藤提取物抑制裸小鼠胃癌模型肿瘤生长的实验研究*
周艳艳 李玉云 李 良 范其坤 丁 琦 禇 芳
（ 江西省药物研究所，南昌 330029 ）
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实验动物科学
29 卷
8 只，分别灌 胃，对 照 组 给 予 动 物 饮 用 水、其 余 两 组 分别灌胃 给 予 乌 骨 藤 水 提 取 物 和 乌 骨 藤 水 提 醇 沉 物，0. 5 mL / 只，每日 1 次，连续 30 d。 1. 4. 4 观察指标 1. 4. 4. 1 测量体质量及肿瘤大小： 给药后每周称鼠 体质量，测 量 肿 瘤 大 小 两 次； 裸 鼠 最 后 一 次 给 药 后 3 周处死荷瘤鼠称体质量，测 量 肿 瘤 大 小，计 算 肿 瘤 的 体 积 ，并 称 瘤 体 质 量 。
乌 骨 藤 又 名 通 光 藤 ，是 萝 藦 科 牛 奶 属 植 物 ，性 味 苦，微寒，入 肺 胃 膀 胱 经，具 有 消 炎，清 热 解 毒，散 结 止 痛 等 功 效 。 乌 骨 藤 含 有 多 种 甾 体 酯 苷 、生 物 碱 、有 机酸、多糖、树脂及 色 素 等 化 学 成 分，民 间 草 医 在 临 床诊疗中发现其具 有 较 好 的 抗 肿 瘤 作 用，曾 用 于 治 疗肝癌、胃癌等消 化 系 统 肿 瘤，具 有 一 定 的 疗 效，引 起肿瘤 学 界 的 高 度 关 注［1］。 为 进 一 步 有 效 开 发 和 利用中药乌骨藤的 抗 肿 瘤 作 用，我 们 采 用 了 不 同 方 法 提 取 乌 骨 藤 成 份 ，观 察 其 抗 肿 瘤 的 药 效 。
照组比较均无明显差异（ P ＞ 0. 05） （ 见表 1）
表 1 乌骨藤提取物对胃癌裸小鼠体质量的的影响（ g）
时间
n
对照组
8
水提醇沉组 8
水提组
8
第8天 21. 620 ± 4. 734 22. 475 ± 1. 017 23. 135 ± 2. 403
第 12 天 24. 285 ± 3. 496 23. 474 ± 1. 639 22. 993 ± 1. 449
3 讨论
胃癌 是 消 化 道 常 见 的 恶 性 肿 瘤 之 一，严 重 危 害 人类健康。化学合 成 抗 癌 药 物 不 仅 价 格 昂 贵，且 毒 副 作 用 大 ，天 然 药 物 在 癌 症 治 疗 中 的 地 位 日 益 重 要 。 随着对中药抗肿瘤 研 究 的 重 视 和 深 入，寻 找 中 药 抗 肿瘤活性成分和明确其抗癌作用机制成为研究的重 点和热点领域。
摘要： 目的 观察乌骨藤提取物对人胃癌细胞 MKN45 裸 鼠 模 型 肿 瘤 的 抑 制 作 用。方 法 采 用 人 胃 癌 细 胞 MKN45 实体瘤接种方法建立裸鼠胃癌模 型，用 乌 骨 藤 水 提 取 物 和 乌 骨 藤 水 提 醇 沉 物 灌 胃 0. 5 mL / 只，每 日 1 次，连 续 30 天。每周连续测量体质量和肿瘤大小 2 次，最后一 次 给 药 后 3 周 处 死 小 鼠，解 剖 称 其 肿 瘤 质 量，计 算 抑 瘤 率，观 察 乌骨藤水提取物和乌骨藤水提醇沉物对荷瘤的抑制作用。结果 乌骨藤水提取物和乌骨藤水提醇沉物对裸鼠荷 瘤均有明显的抑制作 用。 结 论 乌 骨 藤 水 提 取 物 和 乌 骨 藤 水 提 醇 沉 物 有 抑 制 人 胃 癌 细 胞 MKN45 肿 瘤 生 长 的 功效。 关键词： 乌骨藤提取物； 胃癌模型； 抗肿瘤作用 中图分类号： Q95-33 文献标识码： A 文章编号： 1006 － 6179（ 2012） 05-0013-03
6 ～ 8 周龄，体质量 18 ～ 25 g，SPF 级。 饲料 由 南 昌 市 安 康 牧 业 科 技 有 限 公 司 提 供，许
可证号： SCXK（ 赣） 2009 – 0002． 饲料、饮水、垫料均 经过高压蒸汽灭菌 121° 20 min，取出垫料再 放 入 电 热鼓风干燥箱干燥后使用。水和饲料自由饮食。 1. 3 人胃癌细胞株 MKN45 株
表 3 乌骨藤提取物对裸小鼠瘤体质量的影响及抑瘤率
组别
n
瘤体质量（ g）
对照组
8
水提醇沉组
8
水提组
8
0. 698 ± 0. 225 0. 414 ± 0. 165* 0. 316 ± 0. 202 ＊＊
注： 与对照组比较 * P ＜ 0. 05 ＊＊ P≤0. 01 ．
抑瘤率（ % ）
40. 69 54. 73
0. 046 ± 0. 037 ＊＊ 0. 091 ± 0. 066 ＊＊ 0. 155 ± 0. 102 ＊＊ 0. 272 ± 0. 179 * 0. 400 ± 0. 238
2. 3 乌骨藤提取物对瘤体质量的影响 乌骨藤水提取物和水提醇沉提取物对裸小鼠肿
瘤具有明显的抑制 作 用，水 提 组 和 水 提 醇 沉 组 裸 小 鼠的瘤体质量明显小于对照组，具 有 显 著 性 差 异 （ P ＜ 0. 05） （ 见表 3） 。
第 15 天 22. 971 ± 3. 159 23. 070 ± 1. 917 23. 306 ± 1. 573
第 19 天 24. 586 ± 3. 404 23. 351 ± 1. 197
3. 370 ± 1. 525
第 22 天 23. 484 ± 3. 453 23. 374 ± 1. 703 23. 沉提取物和水提取物后的肿瘤增长明
表 2 乌骨藤提取物对裸小鼠肿瘤生长的影响（ cm3 ）