人脂肪干细胞体外培养特性及成脂成软骨分化

人皮下脂肪干细胞的成骨、成脂分化诱导及鉴定

中国组织工程研究第19卷第32期 2015–08–06出版Chinese Journal of Tissue Engineering Research August 6, 2015 Vol.19, No.32ISSN 2095-4344 CN 21-1581/R CODEN: ZLKHAH 5155www.CRTER .org肖建红，女，1980年生，四川省绵阳市人，羌族，2012年中山大学毕业，博士，主治医师，主要从事造血干细胞抑制、干细胞与组织工程，以及免疫性血小板减少性紫癜的临床研究和基础研究。

通讯作者：张阳春，硕士，主治医师，中山大学附属第一医院东院下肢骨科，广东省广州市 510700中图分类号:R394.2 文献标识码:A 文章编号:2095-4344 (2015)32-05155-07 稿件接受：2015-07-01 Xiao Jian-hong, M.D., Attending physician, Department of Internal Medicine, Eastern Branch of the First Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University, Guangzhou 51000, Guangdong Province, ChinaCorresponding author: Zhang Yang-chun, Master, Attending physician, Department of Lower limbs Orthopedics, Eastern Branch of the First Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University, Guangzhou 51000, Guangdong Province, ChinaAccepted: 2015-07-01人皮下脂肪干细胞的成骨、成脂分化诱导及鉴定肖建红1，张阳春2，张常然1，杨兴2(中山大学附属第一医院东院，1普通内科，2下肢骨科，广东省广州市 510700)文章亮点：1 实验通过密度梯度离心和贴壁筛选法相结合，对人脂肪干细胞进行分离、体外培养及扩增。

人脂肪干细胞的体外培养鉴定及分化特性

ＡｂｔａｔＯｂｅｔｅｏｏｓｒｅｍｏｐｏｏｙｉｅｔｙｃｌｓｒｃｒｅｎｅｔｔｅａｉｙｏｐｏｉｒｔｎａｄｓｒｃ：ｊｃｉＴｂｅｖｒｈｌｇ，ｎｉｅｌｕｆｅＣＤｍａｋｒａｄｔｓｈｂｌｆｒｌａｉｎｖｄｆａｉｔｆｏｅ
ＺＨＡＯｉｎｕｉＬｏ￣Ｊａ —ｈ ’ Ｉｎｇ，，ＬＹＡＮＹＹａｇ，ｅｎ — ｎ ’ ＡＯｉｎｓｅｎ ’ Ａｅ’ ＩｉＧＵＯｎ ’ ＹＩＣｈｇｇａｇ，ＤＩＪａ－ｈｇ，ＸｌＷｉＬＵＢｅ’ ，，Ｓｈｕｚｎ — ｈｏｇ
Ｅｉｏｃｕｔｅ，ｄｅｎｉｃｉｎａｎｆｅｎｉｉｎｏｕｍａｎａｄｐｅｄｅｒｅｄｓｅＷｓｒｘｖｖｌｕｒｉｔｉａｔｄｄｉｅｒｔｏｆｈｆｏｆａｔｉｏｓｉｖｔｒｔｏｍａｌｅｌｃｌｓ
示：Ｄ９，Ｄ１，Ｄ４，Ｄ４，Ｄ一Ｃ４Ｃ１６，Ｄ３；Ｔ示ＡＣ生长增殖活性强；Ｃ２Ｃ３一Ｃ３Ｃ４Ｃ４，Ｄ９，Ｄ一Ｃ１一ＭＴ显５０３Ｓｓ细胞周期检测结果显示：１８．Ｇ＝６
ＤｐｒｎｆａａｄＭａｉｆｃａＳｒｅｙＳｈｏｏｔｍａｏｏｙＴｅＦｕｔＭｉａｙＭｅｉａＵｉｒｉ）ｅａｔｔｌｎｘｌａｉｌｕｇｒ，ｃｏｌｆｏｔｌｇ，ｈｏｒｌｒｍｅｏＯｒｌｏＳｈｉｄｃｌｎｅｓｙｔｖｔ
．
ａｐｌｄｔｏｔｅｅｐｒｎｓｐｉｏｄｈｘｅｉｅｍｅｔ：ＨＥｓａｎｎｆｗｙｏｅｒ，Ｔｍｅｈｄａｄｃｌｃｃｅｔｓｉｇ．Ｂｓｄｓｐｓａｅ３ｃｌｔｉｉｇ，ｌｃｔｍｔｙＭＴｔｏｎｅｌｙｌｅｔｏｎｅｉｅ．ａｓｇｅｌｓｗｅｅｎｃｄｏｉｅｅｔｔｉｔｌｏｙｅａｄｓｅｃｔｓＯｉｅｓａｎｎｗａａｐｉｄｏｘｍｉｅｄｉｏｅｉｒｉｄｕｅｔｄｆｒｎｉｅｎｏｉｃｔｓｎｏｔｏｙｅｆａｐＩｄｔｉｉｇｒｓｐｌｔｅａｎａｐｇｎｃｅ

人脂肪干细胞的体外培养鉴定及分化特性_赵建辉

自从２００１年Ｚｕｋ等［１］人从抽脂脂肪中发现脂肪干细胞（ａｄｉｐｏｓｅｄｅｒｉｖｅｄｓｔｅｍ／ｓｔｒｏｍａｌｃｅｌｌｓ，ＡＳＣｓ）以来，关于ＡＳＣｓ的研究迅速增多，现已成为整形美容外科研究热点之一。

ＡＳＣｓ是一群成纤维细胞样的基质干细胞，能分化为不同的细胞系［２］，包括脂肪细胞［３］、骨细胞［４］、软骨细胞［５］、骨骼肌细胞［６］、心肌细胞［７］、内皮细胞［８］、神经细胞［９］等等。

ＡＳＣｓ不仅在整形外科应用于自体脂肪移植、创面愈合等，而且在心肌缺血、神经系统疾病、组织工程等领域中也有着广泛的用途。

Ｋｏｔａｒｏ等［１０－１４］从２００３年就开始采用细胞辅助脂肪移植术（ｃｅｌｌ－ａｓｓｉｓｔｅｄｌｉｐｏｔｒａｎｓｆｅｒ，ＣＡＬ），将ＡＳＣｓ应用到自体脂肪移植隆胸和软组织填充中，取得了不错的临床效果。

随着研究的不断深入，ＡＳＣｓ将是很有临床应用前景的干细胞。

1材料和方法１．１实验材料１．１．１主要试剂：ＤＭＥＭ－ＨＧ培养基（Ｈｙｃｌｏｎｅ），胎牛血清（Ｇｉｂｃｏ），胰酶消化液（碧云天），Ⅰ型胶原酶（Ｓｉｇｍａ），青－链霉素（Ｈｙｃｌｏｎｅ），苏木精（上海蓝季科技公司），曙红Ｙ（Ｓｉｇｍａ，ｗｏｌｓｅｎ分装），牛胰岛素（Ｓｉｇｍａ），吲哚美辛（Ｓｉｇｍａ），地塞米松（Ｓｉｇｍａ），β－甘油磷酸钠（Ｓｉｇｍａ），左旋抗坏血酸（科昊生物），３－异丁基－１－甲基黄嘌呤（Ｓｉｇｍａ），茜素红（天津科密欧），Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（碧云天）。

１．１．２主要仪器：细胞培养孵箱（Ｔｈｅｒｍｏ），超净工作台（江苏苏净集团有限公司ＳＷ－ＣＪ－１ＦＢ），台式低速离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司ＴＤＺ５－ＷＳ），空气恒温摇床（上海福玛实·基础研究··论著·人脂肪干细胞的体外培养鉴定及分化特性赵建辉１，李龙２，杨阳１，易成刚１，刁建升１，夏炜１，刘蓓１，郭树忠１（１．第四军医大学西京医院全军整形外科研究所陕西西安７１００３２；２．第四军医大学口腔医院口腔颌面外科）[摘要]目的：在体外从脂肪块中分离出脂肪干细胞（ａｄｉｐｏｓｅｄｅｒｉｖｅｄｓｔｅｍ／ｓｔｒｏｍａｌｃｅｌｌｓ，ＡＳＣｓ），对其进行形态观察、干细胞鉴定、增殖和分化能力检测。

人脂肪干细胞的生物学特性及分化研究

人脂肪干细胞的生物学特性及分化研究
人脂肪干细胞是从人体脂肪组织中分离得到的未分化多能干细胞，拥有自我复制和多
向分化的潜能。

其具有多种生物学特性，包括：
1.自我更新：脂肪干细胞具有自我更新功能，可以复制更多相同的干细胞，维持其种
群的存在。

2.多向分化：脂肪干细胞可以分化为多种不同的细胞类型，包括成骨细胞、软骨细胞、肌肉细胞、神经细胞等。

3.增殖能力：脂肪干细胞具有较强的增殖能力，可以快速扩增，为后续的细胞治疗提
供足够的细胞数量。

4.成活率高：脂肪干细胞具有高成活率，可以在移植后长期存活并发挥其功能。

除了以上生物学特性，脂肪干细胞的分化研究也是目前生物医学领域的热点之一。

通
过诱导脂肪干细胞分化为特定的细胞类型，可以为组织修复和再生治疗提供新的可能性。

例如，研究发现将脂肪干细胞进行软骨分化后，可以用于治疗关节软骨损伤或疾病。

脂肪干细胞通过向软骨细胞分化并成为新生软骨，为治疗提供了新的选择。

此外，脂肪干
细胞还可以通过向成骨细胞分化，促进骨组织再生和修复。

总之，人脂肪干细胞具有多种生物学特性和分化潜能，其应用在组织修复和再生治疗
等领域具有广阔的前景。

人脂肪干细胞的生物学特性及分化研究

人脂肪干细胞的生物学特性及分化研究1. 引言1.1 研究背景人脂肪干细胞具有自我更新和多向分化能力，能够分化成多种细胞类型，如脂肪细胞、软骨细胞、骨细胞等，这为其在组织工程和再生医学中的应用提供了坚实的基础。

脂肪干细胞还具有较强的免疫调节功能和促进组织修复的能力，显示出其在临床应用中具有巨大的潜力。

深入研究人脂肪干细胞的生物学特性和分化机制对于推动干细胞疗法和再生医学的发展具有重要意义。

本文将探讨人脂肪干细胞的特性、分化潜能、分化机制以及其在组织工程和再生医学中的应用，旨在为未来的临床治疗和疾病治疗提供更多可能性和选择。

1.2 研究意义人脂肪干细胞具有较强的增殖和分化潜能，能够自我更新并向多种细胞类型分化。

这为其在组织工程和再生医学中的应用提供了广阔空间，可以用于修复和重建各种组织和器官。

人脂肪干细胞来源广泛且易获取，不仅存在于脂肪组织中，还可以通过脂肪等组织的抽取获得。

这种便利的获取方式使其在临床应用中具有很大优势，可以大幅减少移植时的操作限制和并发症风险。

研究人脂肪干细胞的生物学特性及分化机制，不仅可以为干细胞治疗提供重要的科学依据，还可以推动再生医学的发展，为各种疾病的治疗和康复带来新的希望。

深入研究人脂肪干细胞的生物学特性和分化机制，对于推动干细胞研究和再生医学的发展具有积极意义，对于促进医学领域的进步和人类健康具有重要意义。

2. 正文2.1 人脂肪干细胞的特性人脂肪干细胞是一种具有多能性和自我更新能力的成体干细胞，具有以下特性：1. 来源广泛：人脂肪干细胞来源于脂肪组织，可以通过吸脂手术获取，且脂肪组织在体内分布广泛，容易获取。

2. 多能性：人脂肪干细胞具有多向分化潜能，可以分化为多种细胞类型，如脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞、肌肉细胞等，适用于多种组织工程和再生医学应用。

3. 自我更新：人脂肪干细胞具有自我更新能力，可以持续不断地分裂和产生新的干细胞，保持干细胞储备。

4. 免疫调节作用：人脂肪干细胞具有免疫调节作用，可调节炎症反应，减轻组织损伤，促进修复和再生。

不同年龄人群脂肪干细胞体外成脂、成骨诱导分化能力的比较的开题报告

不同年龄人群脂肪干细胞体外成脂、成骨诱导分化能力的比较的开题报告一、研究背景和问题：随着人们生活质量的改善和寿命的延长，老龄化问题越来越严重，其中骨质疏松和肥胖是常见的老年人健康问题。

而脂肪干细胞（adipose-derived stem cells, ADSCs）是一种广泛应用于再生医学和组织工程学领域的成体干细胞，具有成脂、成骨和成肌等多向分化能力。

因此，研究不同年龄人群的ADSCs体外成脂、成骨诱导分化能力的差异，对于深入了解老年骨质疏松和肥胖的发病机制，以及开展相关干细胞治疗具有实际意义。

二、研究目的：本研究旨在比较不同年龄人群ADSCs的体外成脂、成骨诱导分化能力，探讨年龄对ADSCs多向分化潜能的影响，为老年骨质疏松和肥胖的干细胞治疗提供理论依据和实验基础。

三、研究方法：1. 实验对象：分别从10名20-30岁、10名40-50岁和10名60-70岁健康志愿者的腹部皮下脂肪组织中，提取ADSCs。

2. 培养和验证：将不同年龄组别的ADSCs培养至第三代，通过流式细胞仪检测干细胞表型（CD29、CD44、CD90阳性，CD34、CD45阴性），验证其干细胞特性。

3. 分化诱导：将ADSCs分为对照组、成脂组、成骨组，按不同分化培养液分别培养一定时间。

分别以油红O染色和碱性磷酸酶(ALP)染色，检测其成脂和成骨分化能力。

4. 数据统计分析：使用SPSS 21.0统计软件对实验结果进行统计和分析，采用方差分析和多重比较等方法比较不同年龄组别的ADSCs在成脂、成骨分化能力上的差异。

四、预期成果：本研究旨在比较不同年龄人群ADSCs的体外成脂、成骨诱导分化能力，预计可以获得以下成果：1. 实验成功提取不同年龄组别的ADSCs，并验证其为干细胞特性。

2. 分别检测不同年龄组别ADSCs在成脂组和成骨组的体外分化能力。

3. 比较不同年龄组别ADSCs在成脂、成骨分化能力上的差异。

四、创新性和意义：1. 首次比较不同年龄人群ADSCs体外成脂、成骨诱导分化能力，揭示年龄对ADSCs多向分化潜能的影响。

人皮下脂肪干细胞的成骨、成脂分化诱导及鉴定

人皮下脂肪干细胞的成骨、成脂分化诱导及鉴定肖建红;张阳春;张常然;杨兴【摘要】背景：脂肪干细胞是从脂肪组织中分离得到的一种具有多向分化潜能的间充质干细胞，在组织工程中比骨髓间充质干细胞具有更多优势，是当今的研究热点之一。

目的：在体外建立一种分离纯化人皮下脂肪来源脂肪干细胞的方法，进行体外培养扩增及诱导其向成骨、成脂细胞分化。

方法：通过密度梯度离心和贴壁筛选法相结合，对人脂肪干细胞进行分离、体外培养及扩增。

倒置显微镜下观察人脂肪干细胞的细胞形态和生长特性。

选取第2代及第5代细胞，用CCK-8法检测细胞活性，绘制细胞生长曲线，用流式细胞仪检测细胞表面抗原标记。

选取第5代细胞，分别进行成脂及成骨诱导分化，以确定其多向分化潜能。

结果与结论：①采用密度梯度离心和贴壁培养相结合方法，可成功从人脂肪组织中获得纯度较高的人脂肪干细胞。

②人脂肪干细胞经历了生长滞缓期、对数增殖期和生长平台期，符合正常细胞的生长规律，且其生长具有对数生长期，其倍增时间较短。

③人脂肪干细胞表达干细胞表面抗原标记，具有低免疫原性，且具有成脂成骨多向分化潜能。

④DAPI是一种简单、有效的标记人脂肪干细胞的方法，DAPI不损伤细胞活性，对细胞标记率高。

%BACKGROUND:Adipose-derived stem cels are a kind of mesenchyam stem cels with multipotent differentiation capacity, which have more advantages than bone marrow mesenchymal stem cels in tissue engineering research. OBJECTIVE: To establish a method to isolate and purify adipose-derived stem cels from human subcutaneous adipose tissues folowed byin vitro amplification and osteoblastic/adipogenic differentiation. METHODS: Adipose-derived stem cels were isolated from human subcutaneous adipose tissue andcultured by density gradient centrifugation and adherent culture. Cel morphology and growth features were observed under inverted microscope. Adipose-derived stem cels at passages 2 and 5 were selected for viability measurement using cel counting kit-8 method, and then cel growth curves were drawn. The immunophenotype identification was analyzed by flow cytometry. Passage 5 cels underwentosteoblastic/adipogenic induction to confirm the multi-differentiation potential. RESULTS AND CONCLUSION: (1) Using density gradient centrifugation and adherent culture method, high-purity human adipose-derived stem cels can be successfuly isolated from human adipose tissues.(2) The growth process of human adipose-derived stem cels includes stagnant phase, logarithmic phase and plateau phase, which meets the growth rhythm of normal cels. Moreover, the population doubling time is shorter. (3). Human adipose-derived stem cels are positive for stem cel-related antigens, with low immunogenicity and the multi-differentiation potential. (4) Labeling human adipose-derived stem cels with DAPI is a simple efficient labeled method, and the labeling rate is high but the cytotoxicity is low【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2015(000)032【总页数】7页(P5155-5161)【关键词】干细胞;脂肪干细胞;人来源的脂肪干细胞;细胞分化;脂肪组织;细胞培养;细胞鉴定;国家自然科学基金【作者】肖建红;张阳春;张常然;杨兴【作者单位】中山大学附属第一医院东院普通内科，广东省广州市 510700;中山大学附属第一医院东院下肢骨科，广东省广州市 510700;中山大学附属第一医院东院普通内科，广东省广州市 510700;中山大学附属第一医院东院下肢骨科，广东省广州市 510700【正文语种】中文【中图分类】R394.2文章亮点：1 实验通过密度梯度离心和贴壁筛选法相结合，对人脂肪干细胞进行分离、体外培养及扩增。

人脂肪干细胞的生物学特性及分化研究

人脂肪干细胞的生物学特性及分化研究人脂肪干细胞（adipose-derived stem cells, ADSCs）是一类存在于脂肪组织中的成体干细胞，具有多能性分化潜能，可以向多种细胞类型分化，包括成骨细胞、软骨细胞、肌肉细胞、脂肪细胞等，因此被广泛应用于再生医学和临床治疗。

本文将从人脂肪干细胞的来源、生物学特性、分化研究及应用前景等方面进行阐述。

一、来源人脂肪干细胞来源于脂肪组织，脂肪组织是成体中最富含干细胞的组织之一。

脂肪组织来源方便，易获取，可以通过抽脂手术等方式获得大量的脂肪组织，在此基础上分离出人脂肪干细胞。

人脂肪干细胞的来源广泛，不同部位的脂肪组织中的干细胞数量和分化潜能有所不同，一般来说，腹部和臀部等部位的脂肪组织中的干细胞数量较多，具有较强的再生潜能。

二、生物学特性人脂肪干细胞具有多能性分化潜能和自我更新能力。

人脂肪干细胞具有多能性分化潜能，可以向成骨细胞、软骨细胞、肌肉细胞、脂肪细胞等多种细胞类型分化，这使得人脂肪干细胞在再生医学领域备受关注。

人脂肪干细胞具有自我更新能力，可以不断分裂并产生新的干细胞，保持其数量和功能不变。

人脂肪干细胞还具有多种分泌因子和细胞外基质，可以修复和再生受损组织，具有抗炎、抗纤维化和抗氧化等多种生物学功能，对组织修复和再生具有重要作用。

三、分化研究近年来，人脂肪干细胞的分化研究取得了重要进展。

研究表明，通过适当的培养条件和生物学因素的调控，可以诱导人脂肪干细胞向特定的细胞类型分化。

通过添加特定的生长因子和细胞外基质，可以诱导人脂肪干细胞向成骨细胞分化，并形成成骨组织。

还可以诱导人脂肪干细胞向软骨细胞、肌肉细胞等多种细胞类型分化，从而为组织修复和再生提供了新的途径。

一些研究表明，通过基因编辑和基因调控技术，可以调控人脂肪干细胞的分化潜能和分化方向，使其更加适合特定的组织修复和再生需求。

这为人脂肪干细胞的临床应用提供了新的思路和手段。

四、应用前景人脂肪干细胞还可以作为药物筛选和药物研发的重要工具，通过模拟疾病模型、评价药物毒性和药效，加速新药的研发过程。

体外培养人脂肪干细胞生物学特性的初步探究

ｓｅａｒｃｈａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＡＤＳＣｓｗｅｒｅｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｄｉｓｃａｒｄｅｄｆａｔｏｆｔｈｅｌｉｐｏｓｕｃｔｉｏｎａｓｐｉｒａｔｅｓｏｆｈｕｍａｎ．Ａｆｔｅｒｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｒｉｎｓｅ．ｔｈｅｐｕｉｒｉｆｅｄＡＤＳＣｓｗｅｒｅｃｕｌｔｕｒｅｄ．Ｔｈｅｂｉｏ — ｃｈｒａａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆＡＤＳＣｓｗｅｒｅａｎａ．１ｙｚｅｄ．ｎｌｅｓｕｒｆａｃｅａｎｔｉｇｅｎｓｏｆＡＤＳＣｓｗｅｒｅｃｏｎｉｆｒｍｅｄｂｙｉｍｍｕｎｏｌｆｕｏｒｅｓｃｅｎｔｌａｂｅｌｉｎｇｏｆＣＤ４４ａｎｄＣＤ２９．Ｔｈｅｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄｕｎｄｅｒｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ．ＴｈｅｇｒｏｗｔｈｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｔｈｅＡＤＳＣｓｗｅｒｅｄｅｓｃｉｒｂｅｄｗｉｔｈｔｈｅＭＴＴｍｅｔｌ１０ｄ．ＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｅｘｐｅｉｍｅｒｎｔｏｆＡＤＳＣｓｗａｓｃｏｎｄｕｃｔｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ｒＩｌｅｉｍｍｕｎｏｌｆｕｏｒｅｓｃｅｎｔａｓｓａｙｄｅｍｏｎ．ｓｔｒａｔｅｄｔｈａｔＡＤＳＣｓｗｉｔｈｐｏｓｉｔｉｖｅｓｕｒｆａｃｅｍａｒｋｅｒｓＣＤ４４ａｎｄＣＤ２９ｉｎｓｔｅｍｃｅｌｌｓ．ＴｈｅｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｏｆｔｈｅＡＤＳＣｓｗｅｒｅｓｉｍｉｌａｒｔｏｔｈｅｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｃｅｌｌｓ．ｈｅＴｙｗｅｒｅｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄｉｎｔｏｔｈｅａｄｉｐｏｃｙｔｅｓ．Ｔｈｅｇｒｏｗｔｈｏｆｔｈｅ

人脂肪来源干细胞的分离、培养及成骨分化的研究

骨诱导分化，为临床骨组织重建提供种子细胞。方法
组织中提取ｈＡＳＣｓ。ＭＴＳ法绘制ｈＡＳＣｓ生长曲线；利用流式细胞术检测ｈＡＳＣｓ表面标志；以低糖ＤＭＥＭ含１Ｏ
ＦＢＳ及１青／链霉素为基础培养基，含ｌｎＭ地塞米松，１０ｍＭ磷酸甘油，０．０５ｍＭ维生素Ｃ的条件培养基连续培养
ｂｒｏｓｉｓ［Ｊ］．ＡｍＪＰｈｙｓｉｏｌＲｅｎａｌＰｈｙｓｉｏｌ，２００２，２８２（３）：４３１．［１３］ＰａｔｅｌＳ，ＤｏｂｌｅＢ，ＷｏｏｄｇｅｔｔＪＲ．Ｇｌｙｃｏｇｅｎｓｙｎｔｈａｓｅｋｉｎａｓｅ一３ｉｎｉｎ —
文章编号：１００７ —４２８７（２０１３）０４ —０６３９ —０５
人脂肪来源干细胞的分离、培养及成骨分化的研究
赵强，吕爽，翟颖仙。，高振平。，石英爱。
（吉林大学ｌ＿第一临床医院儿外科，吉林长春１３００２１；２．白求恩医学院病理生物学教育部重点研究室；３．白求恩医学院解剖教研室）
［１２］ＳｕｒｅｎｄｒａｎＫ，ＭｃＣａｕｌＳＰ，ＳｉｍｏｎＴＣ．ＡｒｏｌｅｆｏｒＷｎｔ４ｉｎｒｅｎａｌｆｉ —

人脂肪间充质干细胞体外培养鉴定与诱导分化的初步研究

究
郭常敏，王达利，魏在荣，龙艳
（遵义医学院烧伤整形外科，贵州遵义５６３０９９）
［摘
要］目的分离培养人脂肪间充质干细胞（ａｄｉｐｏｓｅｄｅｒｉｖｅｄｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ，ＡＤＳＣｓ），观测表型及表达
长状态好，仍保持良好干性，经诱导可多向分化，表明ＡＤＳＣｓ可作为良好的细胞治疗或组织工程种子细胞的来源，
且有潜在广泛应用前景。
【关键词】脂肪阃充质干细胞；体外培养；人；鉴定
［中图法分类号］Ｒ３２９［文献标识码］Ａ［文章编号】１０００－２７１５（２０１３）０１－０３２－０５
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］０ｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｓｏｌａｔｅａｎｄｃｕｌｔｕｒｅｈｕｍａｎａｄｉｐｏｓｅｄｅｉｒｖｅｄｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ（ＡＤＳＣｓ）
特异性蛋白与多向诱导分化的能力。方法取人脂肪组织，机械法与酶消化法分离、培养，观察细胞形态及增殖活力，免疫细胞化学和ＦＣＭ检测其标志蛋白。第９代ＡＤＳＣｓ向成脂、成软骨和成骨细胞诱导分化。结果原代细胞贴壁后多呈多角形，传代后呈均一梭形。免疫细胞化学结果显示：ＡＤＳＣｓ不表达ＣＫ１９，而波形蛋白（Ｖｉｍｅｎｔｉｎ）阳性表达，间充质干细胞表面标志ＣＤ１０５、ＣＤ９０、ＣＤ４４、ＣＤ７３均高表达，ＣＤ４５十３４＋１ｌｂ＋ｌ９＋ＤＲ为０．４８％。第９代ＡＤＳＣｓ诱导培养后分别出现脂肪、软骨、骨细胞特征性染色阳性。结论酶消化法可有效分离ＡＤＳＣｓ，第９代生

体外培养的人脂肪间充质干细胞生物学特性的研究

体外培养的人脂肪间充质干细胞生物学特性的研究目的：了解体外培养的人脂肪问充质干细胞的生物学特性及其体外成脂和成骨的能力。

方法：体外培养人脂肪间充质干细胞并传代计数，行成骨和成脂诱导，流式细胞仪检测其细胞增殖周期与表面分子。

结果：人脂肪干细胞经过体外培养均一的阳性表达CD44、CDl06，而CD49d、CD34、CD45和HLA—DR表达阴性。

细胞周期分析表明：G0／G1、s和G2／M所占比例分别为79．1％、19．7％和1．3％。

分离细胞在诱导体系下可以向成骨和戍脂方向分化。

结论：脂肪间充质干细胞具有特殊的生物学特点，体外能够向成骨和成脂方向分化。

标签：脂肪间充质干细胞；分化；脂肪细胞；成骨细胞间充质干细胞最初由Friedensrein等Ⅲ发现，其广泛分布于肌肉、血管、胰腺和脂肪等组织中，而且证实在体外可以分化为成骨细胞和成脂细胞。

其中脂肪来源的间充质干细胞取材方便，痛苦小，在细胞治疗和组织工程方面有广阔的前景因而日益引起研究者的重视。

本研究通过分离脂肪组织的间充质干细胞，研究其生物学特性及体外成脂及成骨的能力，为其作为组织工程的种子细胞提供理论依据。

1材料和方法1．1材料与试剂1．1．1细胞培养体系：MEM培养基(GIBC0)，10％胎牛血清(兰州明海生物公司)，100IU／L青、链霉素。

1．1．2细胞表面分子鉴定相关试剂：CD44、CD49d、CD34、CD45、CDl06和HLA-DR(鼠抗人cALTAG)FITC(羊抗鼠ZYMED)1．1．3细胞周期测定相关试剂：R Nase A(TakaRa)、碘化丙啶(PI，Sigma)。

1．1．4其他试剂：胰酶、地塞米松、β－甘油磷酸钠、维生素C、胰岛素、卜甲基3－异丁基一黄嘌呤、吲哚美辛、胶原酶I(sigma)。

1．2方法1．2．1脂肪间充质干细胞的分离纯化与培养：脂肪组织来源于兰州军区兰州总医院美容中心行脂肪抽吸术的患者，身体健康，无任何疾病。

人体脂肪干细胞培养及成骨诱导分化

人体脂肪干细胞培养及成骨诱导分化人体脂肪干细胞培养及成骨诱导分化引言干细胞是一类具有自我更新和多能性的细胞，可以不断分化生成各种不同类型的细胞。

人体脂肪组织中存在一种特殊类型的干细胞，即人体脂肪干细胞（human adipose-derived stem cells，hADSCs）。

与其他干细胞相比，hADSCs具有较高的抽取和培养效率，而且可以从自身脂肪组织中获得，不需要侵入性手术。

因此，hADSCs成为研究人体再生医学和组织工程领域的热门课题之一。

本文将介绍人体脂肪干细胞的培养方法以及成骨诱导分化的研究进展。

人体脂肪干细胞培养1. 来源和提取人体脂肪组织富含脂肪干细胞，因此从脂肪组织中提取hADSCs是最常用的方式之一。

提取过程通常通过脂肪抽吸或手术操作完成。

在脂肪抽吸中，通过低压吸引脂肪组织，并用特殊工具将其收集。

手术操作则需要进行小切口，直接收集脂肪组织。

提取得到的脂肪组织需要经过一系列处理，如洗涤、消化、离心等，以获得单个细胞悬浮液。

2. 培养条件提取得到的hADSCs需要在适宜的培养条件下进行扩增。

通常，使用营养丰富的培养基，如DMEM/F12，加入适量的胎牛血清和抗生素，以提供必需的生长因子和营养物质。

细胞培养的环境需要保持在37℃，5% CO2的恒温恒湿条件下。

培养过程中，需要定期更换培养基以保持细胞的生长和代谢活性。

3. 鉴定和鉴定为了确认提取得到的细胞为hADSCs，需要进行鉴定和鉴定。

常用的方法包括油红O染色、免疫细胞化学染色和流式细胞术分析。

油红O染色可用于检测细胞中脂滴的积累情况，免疫细胞化学染色可检测特定表面标记物的表达水平，流式细胞术则可对细胞表型进行全面的分析。

人体脂肪干细胞成骨诱导分化人体脂肪干细胞具有向多个细胞系分化的潜力，其中包括成骨细胞。

为了将hADSCs诱导分化为成骨细胞，需要在体外提供特定的诱导因子。

1. 前处理在进行成骨诱导前，需要对hADSCs进行适当的前处理。

人脂肪干细胞(ADSCs)体外培养的研究及应用进展

人脂肪干细胞（ADSCs）体外培养的研究及应用进展作者：徐巧瑜等来源：《中国美容医学》2012年第13期干细胞是一类具有自我更新与增殖能力的细胞，按其分化阶段不同分为胚胎干细胞与成体干细胞，目前对成体干细胞的研究较为广泛。

人的脂肪干细胞（adipase derived stem cells，ADSCs）是来源于脂肪组织的干细胞，具有自我更新及多向分化的能力，在适宜诱导条件下可以分化为成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞等。

自从2001年ZUK[1]首次通过吸脂术抽取脂肪组织悬液培养出多能干细胞，ADSCs因其取材方便，一次取材获取的细胞数量大，对供体创伤小等优点已成为近年来种子细胞的研究热点。

1 ADSCs的获取脂肪组织是人体中含量最丰富的组织，占正常体重的10%～29%[2]。

它的存在主要有两种形式：棕色脂肪组织及白色脂肪组织。

其中棕色脂肪组织仅在婴儿期发挥作用，而白色脂肪组织在人体起到储存及释放能量的调节器作用，主要分布在腹腔内的网膜、肠、肾周及臀部、大腿、腹部的皮下区域[3]。

因此研究重点集中在白色脂肪组织。

目前，ADSCs主要通过局部脂肪切除术及抽脂术后的脂肪组织中获取，但Vallee等[4]发现由抽脂术获得的脂肪有更好的成脂潜力、重建三维脂肪替代物能力。

供者的年龄也是影响ADSCs的因素。

一般来说供者的年龄越小，细胞增生能力越好，反之亦然。

然而，AustL等[5]却认为ADSCs的衰老与供体的体质指数呈负相关，而与年龄无关。

取材部位不同，ADSCs数量凋亡倾向也不同。

Schipper等[6]发现人前臂脂肪组织中含有更多的脂肪干细胞，而腹部的ADSCs不容易凋亡；腹部似乎比臀部或大腿更有利于获取ADSCs[7]。

2 ADSCs分离培养2.1分离：目前常用的是酶消化法，将脂肪组织剪碎后采用胶原酶或胰酶消化、过滤离心后，使用含血清的培养基将沉淀重悬后接种于培养瓶中。

沉淀物是多种细胞的混合物，又称为血管基质成分（Stromal vascular fraction，SVF），其中含有内皮细胞、周细胞、平滑肌细胞、前脂肪细胞、间充质干细胞及血液来源的细胞，常需传代来纯化。

脂肪干细胞的体外培养

脂肪来源间充质干细胞(ADSC) 血液来源间充质干细胞(PBMSC)
自体应用无免疫排斥反应
采集安全, 对病人造成痛苦少，来源广泛（血液干细胞库）
脂肪来源干细胞
脂肪来源干细胞
脂肪来源干细胞的命名
脂肪来源血管基质成分
(Stromal Vascular Fraction,SVF) 富含大量的CD34+细胞, 从脂肪组织直接获得
脂肪来源干细胞
(Adipose Derived Stem Cell, ADSC)
富含一定量的CD34+细胞,SVF培养P0-P2
不同的试验结果结果有不同，但这种差异可能是在细胞分离、培养、纯正化方法不同，以及免疫组化技术和流式细胞仪敏感性的不同而造成。总的来说，PAL细胞的免疫表型与已经报道的骨髓间充质干细胞是相似的。
脂肪干细胞的体外培养
脂肪干细胞在脂肪组织中含量很低，要利用脂肪干细胞就必须进行体外分离培养扩增。常用的方法是将剪碎的脂肪组织消化离心，倾去上层脂肪及上清，获得基质血管层，将其收集到培养瓶中培养，除去未贴壁的红细胞和残渣，剩余的细胞群体称为加工过的脂肪吸取物。原代培养的细胞中贴壁的细胞较少，细胞生长至融合后传代，传代后的细胞称为脂肪干细胞。平均每300mL脂肪组织可获得2×108～ 6×108 个这样的细胞。体外培养条件下，ASC的培养不像BMSC对培养基中胎牛血清的来源和质量有严格要求，DMEM、αMEM、RPMI1640是ASC的常用培养基。一般只添加体积分数为10％的胎牛血清，并且血清无生产批号限制。在传代培养中，平均倍增时间为60h。并表现低水平衰老，1代时细胞没有出现衰老现象，10代时少于5％细胞出现衰老，15代时衰老细胞比例仍低于15％，这表明脂肪ASC体外扩增能力很强，传代培养易于获得大量有分化能力的细胞。

体外培养人脂肪来源干细胞增殖及成脂分化应用富血小板血浆的效果分析

体外培养人脂肪来源干细胞增殖及成脂分化应用富血小板血浆的效果分析本文通过探究体外培养人脂肪来源干细胞增殖及成脂分化应用富血小板血浆的效果观察。

所选资料随机选自无传染病和内分泌病的成人腹部和大腿脂肪的脂质提取的人脂肪来源干细胞，把细胞分成研究组和对照组，研究组予以不同浓度自体富血小板的血浆培养液的条件干预，对照组未予以富血小板的血浆培养液，分析细胞的形态学、细胞的增殖以及细胞的成脂活性。

通过分析研究组细胞胞浆丰富、胞体丰满，密度比较大；研究组和对照组培养增殖OD值差异明显（P ＜0.05），其中研究组10%PRP增殖最显著；同时研究组染色分化比例（45.9±6.3）%，对照组分化比例（16.2±5.1）%，比較差异具统计学上的意义（P ＜0.05）。

认为对人脂肪来源干细胞体外培养，予自体富血小板的血浆培养液的条件干预，能有效促进细胞的增殖及成脂分化相关活性，具有一定临床应用和研究价值。

标签：人脂肪来源干细胞；成脂分化；富血小板血浆本文主要对无传染病和内分泌病的成人腹部和大腿脂肪的脂质提取的人脂肪来源干细胞（ADSCS），予不同浓度自体富血小板的血浆培养液的条件干预，并进行细胞的形态学、细胞的增殖以及细胞的成脂活性分析，报道如下。

1资料与方法1.1一般资料资料随机选自无传染病和内分泌病的成人腹部和大腿脂肪的脂质，予以酶消化方法进行人脂肪来源干细胞提取，脂肪相关抽取物为50ml，抽取者的性别没有限制，年龄20~49岁，平均年龄（32±6.34）岁。

1.2试剂和设备的选择Gibco提供的胎牛的血清、DMEM的培养基和PBS，由美国的Molecular Probe lnc提供的DiI应用液，Sigma提供的I型的胶原酶、胰蛋白酶、凝血酶和四氮唑的复合物(XTT)，Beckman提供的高速低温的离心机，以及日本Rader提供的酶标仪。

1.3方法将无传染病和内分泌病的成人腹部和大腿脂肪的脂质，予酶消化方法进行人脂肪来源干细胞提取，选择二次离心方法进行自体富血小板的血浆制备。

《人脂肪干细胞(ADSCs)的分离培养及多向分化潜能研究》范文

《人脂肪干细胞（ADSCs）的分离培养及多向分化潜能研究》篇一一、引言随着再生医学和细胞治疗领域的不断发展，干细胞的研究成为了当前医学领域的热点之一。

其中，人脂肪干细胞（ADSCs）因其易于获取、低免疫原性、多向分化潜能等特点，受到了广泛关注。

本文旨在探讨人脂肪干细胞的分离培养方法以及其多向分化潜能的研究。

二、材料与方法1. 材料实验所需材料包括：人脂肪组织、细胞培养基、胰酶、抗生素等。

2. 方法（1）人脂肪干细胞的分离与培养取健康成年人皮下脂肪组织，采用胶原酶消化法将脂肪组织分散成单个细胞。

通过差速贴壁法，将ADSCs从其他细胞中分离出来。

将分离出的ADSCs接种于培养瓶中，加入适量的培养基，置于37℃、5% CO2的培养箱中培养。

（2）多向分化潜能研究对培养的ADSCs进行成骨、成脂、成神经等多向分化诱导，观察其分化情况，并通过相关指标检测其分化效果。

三、实验结果1. 人脂肪干细胞的分离与培养通过差速贴壁法，成功从人脂肪组织中分离出ADSCs。

在培养过程中，ADSCs呈现典型的成纤维细胞形态，生长旺盛，无污染。

2. 多向分化潜能研究（1）成骨分化经过成骨诱导后，ADSCs逐渐形成矿化结节，ALP等成骨相关指标明显升高，表明ADSCs具有成骨分化的能力。

（2）成脂分化成脂诱导后，ADSCs内出现大量脂滴，Oil Red O染色呈红色，表明ADSCs具有成脂分化的能力。

（3）成神经分化成神经诱导后，ADSCs表达神经元特异性标志物，如NeuN、MAP2等，表明ADSCs具有成神经分化的潜能。

四、讨论人脂肪干细胞因其易于获取、低免疫原性、多向分化潜能等特点，在再生医学和细胞治疗领域具有广阔的应用前景。

本实验成功地从人脂肪组织中分离出ADSCs，并对其多向分化潜能进行了研究。

实验结果表明，ADSCs具有成骨、成脂、成神经等多向分化的能力，为其在再生医学和细胞治疗领域的应用提供了理论依据。

然而，ADSCs的分化机制仍需进一步研究。

人脂肪干细胞体外培育及向软骨细胞诱导分化的实验研究

人脂肪干细胞体外培育及向软骨细胞诱导分化的实验研究王中兴，鹿均先，熊传芝【摘要】目的：观看人脂肪基质干细胞（ADSCs）体外分离培育及成脂、成软骨诱导分化的生物学性状，探讨其作为软骨组织工程种子细胞的可行性。

方式：（1）人脂肪组织来源于健康成年女性腹部吸脂术，酶消化法分离出ADSCs,体外培育扩增。

（2）取第3代ADSCs,测细胞生长曲线,流式细胞仪测原代细胞表面标记；成脂和成软骨诱导分化。

（3）倒置显微镜观看油红O、阿尔辛蓝（AB PSA）染色和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色检测分化情形；RT PCR检测相关标志基因表达。

结果：（1）体外培育的ADSCs细胞形态均一,传代稳固。

（2）经成脂诱导,细胞内显现空泡,油红O染色呈红色,RT PCR检测到有Leptin、PPARγ表达；经成软骨诱导,AB PSA染色呈紫红色,Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色胞浆呈棕黄色,RT PCR检测COLLⅡ、SOX9和aggrecan表达。

结论:脂肪干细胞能向软骨细胞方向诱导分化,可作为软骨组织工程种子细胞。

【关键词】脂肪基质干细胞; 分化; 软骨; 组织工程最近几年来组织工程学进展迅速，为骨科医治恶疾带来了新的希望，可是如何取得大量的种子细胞却一直制约其进展，通常骨组织工程所用的骨髓基质干细胞（BMCs）由于难以分离和培育，限制了其成为良好的组织工程种子细胞来源。

本实验通过对成人皮下脂肪组织来源干细胞的分离、培育、鉴定及向软骨定向诱导，以期成立获取脂肪来源干细胞和诱导其向软骨细胞分化的方式，为组织工程软骨的构建提供新的种子细胞。

1 材料和方式材料本实验所用脂肪组织来自于东南大学医学院附属徐州医院整形外科腹部吸脂者，均为女性，年龄20～45岁。

Ⅰ型胶原酶为美国Worthington公司产品，DMEM粉剂为GIBCO公司产品，胎牛血清(FBS)为HYCLONE公司产品，兔抗人Ⅱ型胶原多克隆抗体及免疫组化试剂盒购自北京中杉金桥生物技术,逆转录试剂盒购自日本TaKaRa公司。

《人脂肪干细胞(ADSCs)的分离培养及多向分化潜能研究》范文

《人脂肪干细胞（ADSCs）的分离培养及多向分化潜能研究》篇一一、引言随着再生医学和细胞治疗领域的快速发展，干细胞的研究已成为当前生物医学领域的热点。

人脂肪干细胞（ADSCs）作为一种具有多向分化潜能的干细胞，其分离培养及分化潜能的研究对于再生医学和细胞治疗具有重要意义。

本文旨在探讨人脂肪干细胞的分离培养方法及其多向分化潜能，为临床应用提供理论依据。

二、材料与方法1. 材料人脂肪组织、培养基、试剂、抗体等。

2. 方法（1）ADSCs的分离与培养从人脂肪组织中分离出ADSCs，采用组织块贴壁法进行原代培养，观察细胞的生长情况，并进行传代培养。

（2）ADSCs的多向分化潜能研究通过诱导分化法，将ADSCs诱导为成骨细胞、成脂细胞和成软骨细胞，观察细胞的形态变化及分化情况，并通过相关指标进行鉴定。

三、实验结果1. ADSCs的分离与培养通过组织块贴壁法，成功从人脂肪组织中分离出ADSCs，并在培养基中成功培养。

在显微镜下观察，可见细胞呈纺锤形或圆形，生长旺盛。

经过传代培养，细胞增殖速度逐渐加快，细胞形态更加均一。

2. ADSCs的多向分化潜能研究（1）成骨细胞分化将ADSCs诱导为成骨细胞后，细胞形态发生变化，出现钙化结节。

通过相关指标检测，证实了成骨细胞的分化。

（2）成脂细胞分化将ADSCs诱导为成脂细胞后，细胞内出现大量脂滴，细胞形态变大。

通过油红O染色和PCR检测，证实了成脂细胞的分化。

（3）成软骨细胞分化将ADSCs诱导为成软骨细胞后，细胞形态呈现圆形或椭圆形，并形成软骨样结构。

通过相关指标检测，证实了成软骨细胞的分化。

四、讨论本实验成功地从人脂肪组织中分离出ADSCs，并进行了多向分化潜能的研究。

实验结果表明，ADSCs具有成骨细胞、成脂细胞和成软骨细胞的分化潜能。

这一发现为再生医学和细胞治疗提供了新的思路和方法。

同时，ADSCs的分离培养方法为临床应用提供了重要的技术支持。

然而，ADSCs的分化机制和临床应用仍需进一步研究。