干细胞的体外培养

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饲养层与干细胞的体外培养

饲养层与干细胞的体外培养岑妍慧;蓝丽霞【摘要】The culture of stem cells in vitro requires the maintenance of stem cell undifferentiated state and potent proliferative capacity.Therefore, primary or initial culture of stem cells in vitro depends on feeder cells and growth factors secreted by stem cells.Feeder cells can promote the attachment of embryonic stem cells and simultaneously release some cytokines that enhance stem cell proliferation but suppress differentiation.The feeder cells used for the culture of stem cells in vitro vary greatly among laboratories.%干细胞的体外培养要求在保持其未分化状态的同时,还要保持其旺盛的分裂增殖能力,所以在原代或初期培养时,干细胞的体外培养依赖饲养层细胞及其分泌的生长因子,饲养层细胞一方面可促进胚胎干细胞的附着,另一方面可分泌一些促干细胞增殖并抑制其分化的细胞因子,不同实验室在体外培养干细胞过程中所使用的饲养层细胞有所不同,故在此予以综述.【期刊名称】《医学综述》【年(卷),期】2011(017)009【总页数】2页(P1292-1293)【关键词】饲养层;干细胞;体外培养【作者】岑妍慧;蓝丽霞【作者单位】广西中医学院组织学与胚胎学教研室,南宁,530001;广西中医学院组织学与胚胎学教研室,南宁,530001【正文语种】中文【中图分类】R326干细胞可来源于胚胎、胎儿组织和成年组织，是一类具有自我更新能力、多向分化潜能和保持未分化状态的细胞。

人胚胎生殖干细胞的体外培养研究

１６０１１０，Ｃｈｎ．ｉａ
【ｂｔｃ】ＴｉｅｅｍｎａｅｔｎｒｉｄａａｓｅｏｅｃｙｔｄｒＧｃｌｒｓｃｎｉｎｕｅｔｇｉｔｎｂｃｉＡｓａｔｈｐｒｅｔｆｒｈｇｅｌｅｌｉｔｍｓｓｎｅＥｅｉｄｉ，ｓｅｒｎａｏｌｋａｅｒｓｘｉｔｅｅａｚｎｙｓｈｄｔｂａｉｌａｅｏｔｏｓｈｏａｚｉｏｒｓ
格床和实验医学毒志２００９耳３月弟８卷弟３期
・９・
Hale Waihona Puke 人胚胎生殖干细胞的体外培养研究
陈明玉（大连铁路卫生学校辽宁大连１６０）１０１
【要】本实验在综合分析目国内外人胚胎生殖细胞（Ｇ细胞）摘前Ｅ的培养条件后，采用组织块培养法，同源胚胎以
ｗｉｈｅｍｏｓｏｍａｅｔｅｒｉｉｇｌｖｌｕｏｒｉｅｅｈｔｒｇｎｏｓｐｏｅｎｐｌｕｉｎｗｈｃｈｙｔｍｒａｅ．Ｔｉｉｂｕｓｂｉｈｓｔｅｈｔｔｕｅｔｋａｓｎｅ，ｂｔｔａｓｄｔｅｅｏｅｅｕｒｔｉｏｌｔｏｉｈｔｅｓｓｅｃｅｔｄｈｓｓａｏｔｅｔｌｅｈｅｈａｓｈ
ｔｅｎｉｉｏｒｉｅｔｈｕｎＥｃｌ．ＴｅｃｌｒｄｓｓｅｇａａｔｅｅｈｍａｉｓｏｎｖｔａｓｏｔｅｈｍａＧｅ１ｈｕｔｅｙｔｍｕｒｅｄｔｕｎＥＧｅｌｈｄｔｅｓｆｉｉｎｒｇｎｉｈａｓｒｃｓ，ｈｓｒｕｎｈｃｌａｕｃｅｔｏｉｉｎｔｅｒｅｐｏｅｓａｈｉ

体外培养单个造血干细胞实验方法的建立

体外培养单个造血干细胞实验方法的建立李乔;高瀛岱;纪庆;王金宏;许静;田晨;程辉;刘延风;张娜;程涛【摘要】Aim To explore the effect of nomegestrol acetate ( NOMAc ) on the apoptosis of endometriosis ( Ems ) in rat models and its mechanism. Methods The rat models of NOMAc were established by surgical operation method; histopathologic changes of ectopic endometrium were tested by HE staining; the level of antiendometrium antibody ( EMAb ) was tested by Elisa; the expression levels of apoptosis factors were tested by Western blot. Results NOMAc ( 0. 5,1. 5, 15 mg ·kg-1 ) shriveled ectopic endometrium; the number of endometrial gland was fewer; glandular cavity was smaller in NOMAc groups than those of modelgroups. NOMAc reduced dose-dependently the endometrial thickness and the level of EMAb. NOMAc( 0. 5, 1.5,15 mg · kg-1 ) increased Caspase-9, Caspase-3 and Bax protein expression and reduced Bcl-2 protein expression. Conclusion The inhibitory effect of NOMAc on ectopic endometrium of rat models may be related to reducing the level of EMAb, increasing Bax, reducing Bcl-2 protein expression, and activating Caspase-9 and Caspase-3 protein expression in endogenous apoptosis pathway.%目的通过建立一种体外稳定培养单个造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)的实验方法,在未来筛选可以促进HSC体外扩增的化合物.方法通过配制HSCs体外培养液并结合流式分选技术,我们建立了一种在体外不需要基质细胞支持的,稳定的,高通量培养单个HSC形成一个血细胞集落的实验方法.结果只需培养10~14 d即可观察到化合物对HSC的作用,并结合流式细胞分析技术替代人工计数血细胞分化情况,进一步节省人力,具有客观、重复性强的特点,满足了高通量筛选药物的要求,为后续的研究和化合物筛选工作打下基础.为了验证此方法的可靠性,使用BIO(一种通过抑制糖原合成酶激酶-3,进而可以促进HSC自我更新的化合物)时,实验结果与文献报道的研究结果一致.结论该实验方法在有关造血干细胞体外扩增的药物筛选方面具有很好的应用价值.【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2012(028)003【总页数】4页(P435-438)【关键词】单个HSC培养;流式细胞分选与分析;血细胞涂片;p18;小分子;干细胞扩增【作者】李乔;高瀛岱;纪庆;王金宏;许静;田晨;程辉;刘延风;张娜;程涛【作者单位】中国医学科学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室,天津,300020;中国医学科学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室,天津,300020;中国医学科学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室,天津,300020;中国医学科学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室,天津,300020;中国医学科学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室,天津,300020;中国医学科学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室,天津,300020;中国医学科学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室,天津,300020;中国医学科学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室,天津,300020;中国医学科学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室,天津,300020;中国医学科学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室,天津,300020【正文语种】中文【中图分类】R329.24;R329.28;R341;R965.1造血干细胞一直是成体干细胞研究中的热点。

兔骨髓间充质干细胞的分离、体外培养、成骨诱导与鉴定

（广西医科大学第一附属医院创伤骨科手外科，广西南宁５３００２１）
摘要：目的建立一种兔骨髓间充质干细（Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌ１．ＭＳＣ）体外分离培养、扩增及鉴定的方法。方法采用全骨髓贴壁培养法分离
原代和传代培养的ｒＢＭＳＣｓ具有活跃的增殖能力，成骨成脂诱导后，碱性磷酸酶染色、茜素红染色、ｖｏｎＫｏｓｓａ法染色、Ｉ型胶原免疫细胞化学
检测和油红。染色均呈阳性。成骨诱导电镜检测呈阳性。结论全骨髓贴壁培养法操作相对简单，可大量分离、纯化、扩增骨髓间充质干细胞，
ＭｅｔｈｏｄｓＢＭＳＣｓｆｒｏｍｒａｂｂｉｔｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄ，ｃｕｌｔｕｒｅｄａｎｄｐｕｒｉｆｉｅｄｂｙｔｈｅｗｈｏｌｅｂｏｎｅｍａｒｒｏｗａｄｈｅｒｅｎｃｅｍｅｔｈｏｄ，ＴｈｅｃｅｌｌｇｒｏｗｔｈｗａｓｏｂｓｅｒｖｅｄｕｎｄｅｒＰｈｓｅａ — ｃｏｎｔｒａｓｔｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅａｎｄｔｈｅｇｒｏｗｔｈｃｕｖｅｒｏｆｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｗａｓｄｒａｗｎａｃｃｏｒｄｉｎｇｌｙ．ＢＭＳＣｓｗｅｒｅｉｎｄｕｃｅｄｔｏｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｉｎｔｏｏｓｔｅｏｂｌｓｔａｓａｎｄａｄｉｐｏｃｙｔｅｓａｎｄｄｅｔｅｃｔｅｄＡｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔｓｅａａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆｄｉｆｅｒｅｎｔｔｉｍｅｐｏｉｎｔｓ．ＲｅｓｕｌｔｓＢＭＳＣｓｆｒｏｍｒａｂｂｉｔｓｗｅｒｅｓｐｉｎｄｌｅｃｅｌｌ — ｂａｓｅｄ，ｓｈｏｗｉｎｇｒａｄｉａｌｃｏｌ Байду номын сангаас ｎｙａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔ．Ｔｈｅｒｏｇｔｈｗｃｕｒｖｅｗｅｒｅｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔ￣；ｉｔｈｔｈｅｒｏｇｗｔｈｃｈａｒａｃｔｅｉｓｒｔｉｃｓａｎｄｇｏｏｄａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｎｏｒｍａｌｃｅｌｌｓ．Ｆｏｌｌｏｗｉｎｇｉｎｄｕｃｔｉｏｎ，ｏｉｌｒｅｄＯ

神经干细胞体外培养技术

神经干细胞体外培养与鉴定一前言神经干细胞(Neural stem cells, NSC S)是神经系统内能产生神经元和胶质细胞的未分化原始细胞【1-2】。

文献报道，NSC具有无限增殖、自我更新和多向分化能力，在适宜的环境条件下，能分化形成各种靶组织细胞【3-5】。

此外，NSC 还可用作为是细胞移植治疗的有效载体，被广泛用于神经疾病细胞或载体治疗。

根据目前的研究结果，其主要作用包括下列三方面：①NSC分化成宿主细胞来替代丢失细胞的作用；②分泌多种细胞因子发挥生物学功能；③桥接作用【6-8】。

基于NSC的上述特性，从而奠定了NSC在细胞替代治疗中有广泛应用前景，而如何获取NSC则是科学研究和临床实践中首先面临的关键问题。

本实验拟建立绿色荧光蛋白（Green fluorescent protein，GFP）转基因小鼠NSCs原代和传代培养技术，为后面的实验提供方法支持。

二实验所需仪器、试剂及其配制（一）实验仪器光学显微镜（Olympus,Japan）倒置荧光显微镜（LEICA DMIRB）冰冻切片机（Leica CM1900，Germany）光明DZKW型电热恒温水浴锅（北京市光明医疗仪器厂）XK96-A快速混匀器（姜堰市新康医疗器械有限公司）HT-200 电子天平（成都普瑞逊电子有限公司川制）FA1004型精密电子天平(上海良平仪器仪表有限公司)MP 8001单臂脑立体定位仪(深圳市瑞沃德科技有限公司)10μl微量进样器（Pressure-Lok，PRECISION SAMPLINGCORP，BATON ROUGE，LOUISIANA，Made in USA）0.5ml、1ml Eppendorff管（Ependorff）手术器械：眼科剪、解剖剪、显微剪、显微有齿镊及无齿镊、蚊式钳、刀柄刀片等。

（二）试剂1. DMEM/F12，Hank's液（Hyclone），N2（Gibico），bFGF（Invitrogen）。

人表皮干细胞的体外分离、培养及鉴定

人表皮干细胞的体外分离、培养及鉴定何黎顾华昆明医学院第一附属医院皮肤性病科云南[摘要]目的：探索实验条件下人表皮干细胞的体外分离、培养及鉴定。

方法：利用细胞工程方法进行组织分离及细胞培养：通过免疫组化方法，利用角蛋白单克隆抗体对培养的角质形成细胞进行鉴定，并利用表皮干细胞的相对特异标识分子——CK19对其进行检测分析。

结果：表皮自真皮较完整分离，电镜及免疫组化证实培养细胞为角质形成细胞，免疫组化结果显示：CK反应阳性，部分细胞CK19阳性，表明有表皮干细胞存在。

结论：体外分离、培养角质形成细胞成功，且分离得到的角质形成细胞中有表皮干细胞存在。

[关键词]：角质形成细胞表皮干细胞细胞培养角蛋白——19对于烧伤、急性创伤、某些疾病导致的皮肤缺损，尤其是大面积烧伤一直以自体皮移植作为首选方案，而自体皮肤不足是临床遇到的主要问题。

随着细胞培养技术和组织工程的出现，使许多脏器或组织体外重建成为可能。

人工皮肤的研制就是一个典型例子。

在这一技术中，种子细胞——角质形成细胞的体外培养，以及体外分离到的角质形成细胞中是否有在体外能大量增殖的表皮干细胞决定了能否成功构建人工皮肤。

为此本课题采用组织分离方法及细胞培养方法进行角质形成细胞体外分离及培养；通过免疫组化方法，利用人广谱单克隆抗体对培养细胞进行鉴定；并利用CK19对体外培养细胞中是否有表皮干细胞进行检测。

材料和方法一、材料1、取材选择6-26岁健康男性，行包皮环切术切除的包皮。

2、主要培养基及试剂(1)磷酸盐缓冲溶液（PBS和D-Hank’s液）：（2）培养基：K-SFM（Gibco公司），编号：37010，内含2.5ug表皮细胞生长因子（EGF）和25mg小牛垂体(BPE)：（3）分离酶：dispase（4）胰蛋白酶；（5）抗人广谱角蛋白单克隆抗体；（6）CK19单克隆抗体；（7）SP 超敏免疫组化试剂盒。

二、方法1、取材将包皮环切术切除的健康包皮组织放入50ml离心管中（内装10mlDMEM培养基，含青、链酶素及硫酸庆大酶素）。

人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)的分离、体外培养及诱导分化

万方数据
万方数据
人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)的分离、体外培养及诱导分化
作者：丛姗，宋瑾，张惠娟，李岩，白立恒，曹贵方， CONG Shan， SONG Jin， ZHANG Hui-Juan， LI Yan， BAI Li-Heng， CAO Gui-Fang
作者单位：丛姗,宋瑾,张惠娟,李岩,曹贵方,CONG Shan,SONG Jin,ZHANG Hui-Juan,LI Yan,CAO Gui-Fang(内蒙古农业大学兽医学院/动物组织胚胎学与发育生物学实验室,呼和浩特,010018)，白立恒,BAI Li-Heng(内蒙古
妇幼保健医院妇产科,呼和浩特,010020)
刊名：
农业生物技术学报
英文刊名：Journal of Agricultural Biotechnology
年，卷(期)：2015,23(1)
引用本文格式：丛姗.宋瑾.张惠娟.李岩.白立恒.曹贵方.CONG Shan.SONG Jin.ZHANG Hui-Juan.LI Yan.BAI Li-Heng.CAO Gui-Fang 人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)的分离、体外培养及诱导分化[期刊论文]-农业生物技术学报 2015(1)。

干细胞培养

干细胞体外培养的基础研究意义：干细胞体外培养为研究干细胞生物学和分子机制提供了机会。通过维持干细胞的自我更新能力和多向分化潜能，科学家们可以探索干细胞的起源、增殖机制和分化途径。此外，干细胞体外培养还可用于研究干细胞在不同环境因子下的行为和相互作用，揭示细胞信号传导和基因调控网络的复杂性。这些基础研究的成果有助于加深我们对干细胞生物学的理解，并为未来的应用研究提供坚实的基础。
结论：干细胞体外培养技术在再生医学领域具有重要的意义和潜力。它为基础研究提供了探索干细胞生物学的平台，为疾病研究提供了研究模型，并为组织修复和再生医学的应用开辟了新的道路。随着技术的不断发展和创新，干细胞体外培养将继续发挥重要作用，推动再生医学领域的进展，为人类健康带来无限的可能性。
干细胞培养
引言：干细胞是一类具有自我更新和多向分化潜能的特殊细胞，对于再生医学和组织工程具有重要意义。干细胞体外培养技术的发展为科学家们提供了研究和应用干细胞的重要平台。通过在体外培养条件下维持干细胞的特性和功能，我们能够深入了解其生物学特性，并开展从疾病研究到组织修复的广泛应用。本文将探讨干ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ胞体外培养的意义及其在再生医学领域的潜力。
干细胞体外培养在疾病研究中的应用：干细胞体外培养技术为疾病的研究和药物筛选提供了重要工具。通过将患者来源的干细胞进行体外培养，科学家们可以模拟和研究多种疾病的发生机制和病理过程。例如，使用干细胞体外培养技术可以生成疾病特定的细胞类型，如心肌细胞、神经元和肝细胞，以研究心脏病、神经退行性疾病和肝病等疾病的发展机制。此外，干细胞体外培养还可用于评估药物的疗效和毒性，加速药物发现和开发过程。
干细胞体外培养在组织修复和再生医学中的前景：干细胞具有巨大的再生潜能，可以分化成多种细胞类型，并在组织修复和再生过程中发挥重要作用。干细胞体外培养为组织工程和再生医学提供了关键技术支持。通过将干细胞体外培养并定向分化成特定细胞类型，科学家们可以生成可用于移植的特定组织和器官细胞，如心脏组织、胰岛细胞和骨组织。这种个体定制的再生医学方法有望为疾病治疗和组织修复提供更有效的解决方案。此外，干细胞体外培养还可以用于开发新型材料和生物支架，用于组织工程和再生医学的应用。

大鼠表皮干细胞体外分离培养结果观察

*基金项目:辽宁省科技厅科研项目(2009225009-22)作者单位:1.沈阳医学院基础医学院解剖学教研室,辽宁沈阳110034;2.沈阳医学院何氏视觉科学学院解剖学教研室作者简介:王效杰(1961-),女,辽宁沈阳人,教授,硕士,研究方向:组织工程与器官移植。

=实验研究>大鼠表皮干细胞体外分离培养结果观察*王效杰1,田伟1,王云锋2摘要:目的研究表皮干细胞体外分离培养,为组织工程皮肤的体外构建提供实验依据。

方法利用冷热交替消化法对W i star大鼠幼鼠表皮细胞进行培养,然后观察细胞在体外的生长和分化,并且分离表皮干细胞,通过B1整合素、K15以及p63细胞免疫荧光组化染色及扫描电镜对其进行观察及鉴定。

结果细胞培养过程中,先后出现梭状细胞、角状细胞和呈集落生长的小圆细胞,集落中心出现竹节状的毛发;B1整合素、K15以及p63均呈阳性表达,表皮干细胞克隆形成率为(1513?213)%,对照组细胞为(616?111)%,差异有统计学意义(P<0101);超微结构观察符合表皮干细胞生物学特性,细胞培养体系稳定,利于表皮干细胞生长和分化;在培养体系中出现皮肤附属器。

结论体外分离培养的表皮干细胞生物学特点明显,容易发生分化,并产生皮肤附属器。

关键词:表皮干细胞;实验研究;分离培养中图分类号:R32912文献标志码:A文章编号:1001-0580(2011)05-0595-03Iso l ation and cu ltu re of epider m al stem ce lls fro m i mm atureW istar rat in v itro W ANG X i ao-jie,T I A N W ei,W A NG Y un-feng.D epa rt m ent o f Hu m an Ana tom y,Shenyang M edica l C o llege(Shenya ng110034,China)Abstract:Ob jective T o study ep i der m a l stem cell iso lati o n and cu lture i n vitro in o rder to pro v i de exper i m enta l ba sis fo r tiss ue eng i neer i ng of skin.M e thods W ith hea-t coo l a lternative m ethod and trypsi n digesti on o f tissue m ass,theep i der m a l ste m ce lls w ere cultured and o bserv ed co nti nuousl y i n v itro.T he iso lated cells w ere i nv estiga ted o n m o lecu l e B1 integ r i n,K15and p63by i m m unoh ist o che m istry sta i n i ng and scanni ng m icro scope.R esu lts T he po siti v e expressi ons o f m o l ecule B1i n t eg rin,K15,and p63and t he sp i nd l e-and ang ul a r like ce lls i n c l ust e r g row t h w e re obse rv ed w ith scanni ng m icro scope.The cult ure sy stem w a s stab l e fo r t he g row t h and classi f ica ti on o f t he ste m cells and t here ex isted aff iliated o rgan o f t he sk i n i n the culture sy st em.Conc l usion W ith t he cu lt ure sy ste m dev e l oped,t he ep i der m a l stem cells iso lated presents obv ious bio log ic feature s and d ifferenti a tive trend w it h t he fo r m a tion o f a ffili a ted s k i n organ.K ey word s:epide r m a l st em ce l;l ex per i m enta l st udy;iso lati on and culture近年来,随着慢性皮肤溃疡及皮肤病患者增多,以及烧伤及意外创伤所造成的皮肤缺损,临床上对皮肤移植的需求越来越大,因此,表皮干细胞(ep i der m a l stem cel,l ESC)分离培养的研究逐渐成为国内外学者关注的焦点112。

大鼠骨髓间充质干细胞的培养与鉴定

大鼠骨髓间充质干细胞的培养与鉴定干细胞研究一直是生物医学领域的前沿热点，其中骨髓间充质干细胞（BMSCs）因其具有多向分化潜能和低免疫原性而备受。

在众多研究中，大鼠BMSCs的体外培养和鉴定方法为其在科研和临床领域的应用提供了基础。

本文将就大鼠BMSCs的培养、鉴定方法进行详细介绍，并结合实验数据进行阐述。

BMSCs是一种成体干细胞，具有自我更新和多向分化潜能，可以分化为多种细胞类型，如成骨细胞、脂肪细胞、肌肉细胞等。

因其来源广泛，免疫原性低，大鼠BMSCs已成为再生医学、免疫调节等领域的重要研究对象。

近年来，随着生物技术的不断发展，BMSCs的培养和鉴定方法也得到了不断优化和改进。

BMSCs的培养需要无菌环境，常用的培养基为DMEM、F12等，添加适量的生长因子和抗生素以维持细胞的生长和存活。

细胞的鉴定主要包括形态学观察、表面标志物检测和多向分化潜能的证实。

其中，表面标志物如CDCD90等可用来区分BMSCs和其他细胞，多向分化潜能的证实包括成骨、成脂和成肌等方向的诱导分化。

本实验采用大鼠BMSCs的常规体外培养方法。

具体步骤如下：采集大鼠骨髓：在无菌环境下，用注射器抽取大鼠股骨和胫骨骨髓，加入肝素抗凝。

细胞分离：将采集的骨髓用密度梯度离心法分离出单个核细胞。

细胞培养：将单个核细胞接种于培养瓶中，用含10%血清、1%抗生素和1%谷氨酰胺的培养基培养。

细胞鉴定：经过约7-10天的培养，细胞达到80%-90%融合时，进行细胞鉴定。

通过形态学观察、表面标志物检测和多向分化潜能的证实，对BMSCs进行鉴定。

通过观察细胞的形态和生长情况，发现培养的BMSCs呈典型的长梭形，且细胞间连接紧密（图1）。

经表面标志物检测，BMSCs表达CD29和CD90等间充质干细胞表面标志物（图2）。

在多向分化潜能的证实中，我们发现BMSCs经成骨、成脂和成肌诱导后，可分别形成矿化结节、脂肪滴和肌纤维（图3）。

这些结果说明所培养的细胞为BMSCs。

胚胎干细胞体外培养

胚胎干细胞体外培养(一)胚胎干细胞的来源目前胚胎干细胞的主要来源有：①囊胚的ICM及受精卵发育至桑葚胚之前的早期胚胎细胞；②从胚胎生殖嵴及肠系膜中分离原始生殖细胞PGCs后培养建系的胚胎生殖细胞(embryonic germ cells，EG细胞)，也具有ESCs的特性，可以分化为各种类型的成熟细胞；③体细胞核转移(somatic cell nuclear transplantation，SCNT)至去核卵母细胞后培育出来的全能细胞。

其中囊胚的ICM最为常用。

(二)胚胎干细胞的分离1.分离获取ESCs的时间：以既保证ESCs的全能性又要有足够的细胞数量为原则来确定ESCs分离获取的最佳时间。

以ICM为ESCs来源时：小鼠取3～5天囊胚；猪取9～10天囊胚；羊取7～8天囊胚；牛取6～7天桑葚胚或早期囊胚；人取7～10天囊胚。

以PGCs取ES细胞时：小鼠取12.5天胎儿生殖嵴；大鼠可取10.5天尿囊、中胚层组织块、12.5天背肠系膜或13.5～14.5天生殖嵴；牛取29～35天胎儿生殖嵴；人取35～63天的生殖嵴。

2.分离获取ESCs的方法：从PGCs分离ESCs的方法常为机械剪切与消化相结合法，即把采取的胚胎组织充分剪碎，采用EDTA、EDTA/胰酶消化。

从囊胚分离ICM的方法主要有三种：(1)免疫外科学方法：体外培养的小鼠胚泡去除透明带后，经兔抗JCR小鼠脾脏细胞抗血清(抗H-26)作用30分钟，移至1∶6稀释的新鲜豚鼠血清中作用30分钟，Hank’s液冲洗，此时胚泡的滋养外胚层呈空泡状，用眼科手术刀挑去死了的滋养层细胞，留存ICM 细胞用于培养。

这种方法利用囊胚腔对抗体的不通透性，通过抗体、补体结合对细胞的毒性杀伤作用，去除滋养层细胞，保留ICM细胞进行培养。

(2)组织培养法：在小鼠受精2.5天后切除卵巢，给予外源激素，使胚胎继续发育，但延缓着床，4～6天后，由子宫冲取胚泡进行培养。

结果滋养层细胞生长并推开饲养层细胞，在培养皿底壁上铺展；而ICM细胞增殖，垂直向上生长，形成卵圆柱状结构，在显微镜下用细玻璃针挑出这种柱状结构，消化传代。

造血干细胞体外培养

造血干细胞体外培养
在进行造血干细胞体外培养时，首先需要从骨髓、外周血或者
胎盘血等来源中获得含有造血干细胞的细胞样本。

然后，这些细胞
样本会被经过特定的处理和分离步骤，将造血干细胞分离出来。

接
下来，这些分离出来的造血干细胞会被放入含有适当营养物质和生
长因子的培养基中进行培养。

培养基的配方和条件需要精确控制，
以提供细胞增殖和生长所需的理想环境。

在体外培养的过程中，研究人员需要定期检测和评估造血干细
胞的生长状态、纯度和活性。

他们可能会对培养条件进行调整，以
确保造血干细胞能够在体外保持其干细胞特性和功能。

造血干细胞体外培养的成功对于临床移植和疾病治疗具有重要
意义。

通过体外培养，可以获得足够数量和质量的造血干细胞，用
于移植到需要再生造血系统的患者体内，如白血病或骨髓衰竭患者。

此外，体外培养也为研究人员提供了研究和了解造血干细胞生物学
特性的重要工具，有助于深入探究造血系统疾病的发病机制和开发
新的治疗方法。

总的来说，造血干细胞体外培养是一个复杂而重要的过程，它
在临床和科研领域都具有重要意义，对于促进医学进步和治疗疾病具有深远影响。

造血干细胞体外培养

造血干细胞体外培养
首先，造血干细胞体外培养的过程通常涉及到从骨髓、外周血或者脐带血等来源中分离出造血干细胞。

这些干细胞随后会被置于含有适当营养物质和生长因子的培养基中进行培养。

培养基的配方需要精确控制，以提供适当的营养和环境条件来促进干细胞的增殖和分化。

其次，体外培养的过程中需要严格控制培养条件，包括温度、湿度、氧气浓度等因素。

这些条件对于干细胞的生长和分化至关重要，因此需要精确监控和调节。

此外，体外培养的过程也需要考虑到细胞的纯度和活性。

在培养过程中，需要定期检测和评估干细胞的纯度和活性，以确保其符合临床应用的要求。

在实际应用中，体外培养的造血干细胞可以用于干细胞移植，用于治疗白血病、淋巴瘤、贫血等血液系统疾病。

此外，体外培养的造血干细胞也被用于研究干细胞生物学以及药物筛选等领域。

总的来说，造血干细胞体外培养是一项复杂而重要的技术，它
为干细胞移植和血液系统疾病治疗提供了重要的支持，同时也推动了干细胞生物学和临床应用的发展。

随着技术的不断进步，相信体外培养技术将在未来发挥更加重要的作用。

人骨髓间充质干细胞体外不同分离与培养方法的比较

ｗｉｈａｎｖｒｅｃｏｃｐｅｅｃｙ．ＴｈｕｆｃｒｒｆＢＭＳｒｄｎｉｅｂｍｍｕｃｔｃｍｉａｅｈｑ．Ｔｈｅｅｐｅ — ｔｎｉｅｔｄｍｉｒｓｏａｈｄａｅｓｒａｅｍａｋｅｓｏＣｓｗｅｅｉｅｔｆｄｙｉｉｎｏｙｏｈｅｃｌｔｃｎｉｕｅｘｒｓｓｏｆｓｒａｅｍｏｅｕｌｓｗａｘｍｉｅｙｆｏｃｔｍｅｒＲｅｕｔＢＭＳＣｓｗｅｅｉｉｒｙｌｎｐｉｄ］ｈｐｄａｄ（ｌｃｌｉｓｉｎｏｕｆｃｌｃｅｓｅａｎｄｂｗｙｏｔｙ．ｌｓｌｓｒｎｕｎｆｍｌｏｇｓｎｅｓａｅｎ：ｌｏｏｎｅｏｅ
作者简介：贤华，，９１年出生。博士，管技师。主要从事临床刘女１７主
分子生物学检验专业。
作者单位：００９北京，警总医院：．验科，．１０３武１检２医学工程科，．３烧伤整形科通讯作者：白晓东，ｍａ：ａｉｔｕｙｈｏＣＷ．ｎＥ— ｉｂｉａｍ＠ａｏ．Ｏ１ｃｌｘｏ
Ｃ２、Ｄ４表达为阳性。ＣＤ９Ｃ４ｏ照射处理的培养瓶结合采用全骨髓贴壁法分离培养法获得的骨髓干细胞活性高，殖力强，增克
隆形成早，传代时间短。结论
全骨髓贴壁法和密度梯度离心法均可获得高纯度贴壁生长的骨髓干细胞，中ｃ照射处理其ｔ，

干细胞的培养和分化研究

干细胞的培养和分化研究干细胞是一种具有自我更新和分化为多种细胞类型潜能的细胞。

它们是医学和生物技术领域中备受关注的一种细胞类型，其在组织修复和再生、疾病治疗等方面具有潜在应用价值。

而干细胞的培养和分化研究，则是实现这一潜在应用价值的重要前提。

一、干细胞的培养干细胞的培养是指将干细胞体外培养至一定数量和状态的过程。

这个过程对于干细胞研究和应用来说是至关重要的。

目前，干细胞的培养方法主要包括以下几种。

1. 传统培养法传统培养法是指将干细胞放置在含有适宜营养物质的培养液中，促进其增殖和生长。

这种方法简单易懂，适用于许多种干细胞（如造血干细胞、神经干细胞、胚胎干细胞等）的培养。

它的缺点是，培养液中含有的营养物质无法完全满足干细胞生长的需要，使得其增殖和分化存在一定的限制。

2. 三维培养法三维培养法是指将干细胞种植在一种支架材料或胶体中，形成三维空间结构，促进干细胞的增殖和分化。

这种方法可以模拟体内环境，并提供更多的生长空间，有利于干细胞的生长和分化。

但是其操作比较复杂，需要大量的支架材料和胶体，而且其空间结构可能会影响干细胞的增殖和分化。

3. 其他培养法除了传统培养法和三维培养法外，还有许多其他的培养方法，如基质培养法、表面培养法、微载体培养法等。

这些方法都有其独特的优点和缺点，可以根据不同的需求和应用选择适宜的培养方法。

二、干细胞的分化干细胞的分化是指将其分化为不同类型的成熟细胞，如神经元、心肌细胞、肌肉细胞等。

干细胞的分化是干细胞研究和应用的最终目标，也是最具挑战性的问题之一。

1. 诱导分化法诱导分化法是指通过特定的诱导因子和培养条件，促进干细胞向特定的细胞类型分化。

例如，在干细胞培养液中加入特定的生长因子和培养条件，可以促进胚胎干细胞向神经元、心肌细胞等方向分化。

这种方法非常具有前景，可以实现干细胞的精准分化。

但是其操作比较复杂，需要精细的控制和紧密的监测。

2. 基因编辑法基因编辑法是指通过基因编辑技术（如CRISPR/Cas9技术），改变干细胞的基因编码序列，促进干细胞向特定的细胞类型分化。

造血干细胞体外培养

造血干细胞体外培养全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：造血干细胞是一类多能干细胞，能够自我更新并分化成各种类型的血液细胞，包括红细胞、白细胞和血小板。

这些干细胞的体外培养技术在医学研究和临床应用中具有重要意义。

造血干细胞体外培养技术是通过模拟人体骨髓或外周血中的生长环境，使干细胞在实验室中继续分化和增殖。

这种技术可以大幅增加干细胞数量，为临床干细胞移植和其他治疗方法提供更多的细胞来源。

造血干细胞体外培养的关键是提供适当的细胞培养基和生长因子。

细胞培养基需要包含足够的营养物质和生长因子，以维持细胞的生长和增殖。

生长因子是一类对细胞生长和分化起到重要作用的蛋白质分子，比如血细胞生成素、干扰素等。

在体外培养中，这些生长因子可以被加入到培养基中，以促进干细胞的增殖和分化。

另外，适当的细胞培养条件也是造血干细胞体外培养的关键。

温度、湿度、气体含量和pH值等因素都会对细胞的生长和分化产生影响。

保持培养环境的稳定和适宜可以提高干细胞的存活率和培养效率。

目前，造血干细胞体外培养技术已经广泛应用于临床医学领域。

例如，干细胞移植是一种治疗白血病、淋巴瘤等血液系统疾病的有效方法，而通过体外培养技术可以获得足够数量和质量的造血干细胞，为移植手术提供保障。

此外，造血干细胞还可以用于疾病模型的建立和药物筛选等研究领域。

然而，目前造血干细胞体外培养技术仍面临一些挑战。

一是干细胞的复杂性和多样性，不同类型的干细胞对于生长因子和培养条件的需求可能有所不同，需要进一步的研究和优化。

二是细胞培养的质量和成本问题，目前大规模生产合格的造血干细胞仍需要花费大量时间和成本。

因此，未来的研究和发展应该致力于解决这些挑战，提高造血干细胞体外培养技术的效率和质量，为临床和科研提供更好的干细胞资源。

同时，加强干细胞培养和应用规范化的研究也是未来发展方向之一，以确保干细胞治疗的安全和有效性。

希望在不久的将来，造血干细胞体外培养技术能够取得更大的突破，为医学和生命科学领域带来更多的福祉。

成体肝脏干细胞的体外分离、培养及鉴定

成体肝脏干细胞的体外分离、培养及鉴定吕国悦;张平;李红;李爽;王广义【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2007(011)050【摘要】BACKGROUND: Multipotency of hepatic stem cells is of important value in liver transplantation. Stem cells have been successfully identified and isolated from the animal livers. However, reports on whether stem cells exist in human hepatic tissue and how to isolate and identify them ars few.OBJECTIVE: This study was in attempt to isolate hepatic stem cells from human para-cancerous tissues of hepatoma and in vitro culture them, also to identify the stem cell surface marker, in order to find a new source of heptatic stem cells.DESIGN: Cell observation experiment.SETTING: Department of Common Surgery, First Hospital, Jilin University; Department of Common Surgery,Dongfeng Hospital of Traditional Chinese Medicine.PARTICIPANTS: Samples were harvested from 10 patients with hepatoma admitted to Department of hepatobiliary surgery, First Clinical College, Jilin University between October 2005 and June 2006, with age of 45 to 58 years.Hepatic tissue 2 cm away from cancer nest was cut when patients underwent hepatectomy, and it was pathologically confirmed as carcinoma-free tissue. Written informed consents were obtained from each patient. DMEM/F12 dry powder used for cell culture was provided by Hyclone Company, USA. Fresh fetal bovine serum was prepared byLianxing Biotech Co.,Ltd, Tianjin. Various cell growth factors were the products of Cytolay Company, USA.METHODS: Para-cancerous tissues of hepatoma was cut into pieces, rinsed with Hank's solution and digested with type Ⅳ collagenase. Then the isolated cells were re-suspended in the DMEM/F12 medium supplemented with 0.1 volume fraction of fetal bovine serum, and hepatocyte growth factors, epidermal growth factors and α- fibroblast growth factors of 25 μg/L each were added in the above medium. When the cultured cells covered 2/3 of bottom,they were digested with trypsinase for passage and inoculated at 2×107 L-1. When cells propagated to the 3rd and 4th generations, 2.60×109 L-1 cell suspension prepared with trypsinase was added, and subsequently, anti-human C-kit antibody, immunomagnetic beads and Buffer solution were added in order. C-kit+ cells were preliminarily isolated by immunomagnetic bead separation. Haematoxylin-eosin staining and immunofluorescent histochemical double-staining were used for detecting the hepatic stem cells in para-cancerous tissues.MAIN OUTCOME MEASURES: ① Observation of cell morphology. ② Identification of hepatic stem cells from para-cancerous tissues. ③ Identifi cation of C-kit+ cells by immunofluorescent histochemical double-staining.RESULTS :① After primarily cultured for 2 weeks, the adherent cells grew in colony. After one half of culture medium was renewed, mature hepatocytes were gradually broken and disappeared. Small round cells propagated, and most of them were located in the center and arranged in cluster. Most cells were found with one big nucleus in each, less cytoplasm and clear cell boundary. Whencells propagated to the 1st and 2nd generations, they still grew in colony, but fast. Each C-kit+ cell isolated by immunomagnetic bead separation presented a spherical cell body with a very big nucleus and less cytoplasm. After in vitro cultured for 1 week, it presented broken pieces and apoptotic symptoms.② After para-cancerous tissue was stained by haematoxylin-eosin, atypically proliferated biliary tracts with small round cells could be seen in the portal area. After para-cancerous tissue was stained by immunofluorescent histochemical double-staining, small round cells in the biliary tracts proliferated in the portal arsa co-expressed red fluorescence AFP and green fluorescence cytokeratin (CK) 19 with yellow superposition arsa. ③ After C-kit+ cells were stained by fluorescence immunocytochemisty, cytoplasm expressed alpha-fetoprotein (AFP) red granules and CK19 green granules. The superposition area of both presented yellow fluorescence of AFP+/CK19+-positive cells.CONCLUSION: Hepatic stem cells exist in human para-cancerous tissues of hepatoma. Therefore, expressions of C-kit+/AFP+/CK19+, the surface markers of hepatic stem cells, can be used for identifying and isolating hepatic stem cells. Small round cells obtained by in vitro isolation and culture, i.e. hepatic oval cells possess bipotential differentiation of hepatocyte and hepatobiliary epithelial cells.%背景:肝脏干细胞的多能性在肝脏移植方面具有重要价值.目前已经成功地鉴定并分离出动物肝脏干细胞,但人肝脏组织是否存在干细胞、如何对其进行分离鉴定的报道不多.目的:尝试从人类肝癌旁组织中分离和体外培养肝脏干细胞,并对其表面标志物进行鉴定,寻找肝脏干细胞新的来源.设计:细胞观察实验.单位:吉林大学第一医院普外科,东丰县中医院普外科.材料:①组织来源:10例标本来自2005-10/2006-06吉林大学第一临床学院肝胆外科收治的肝细胞癌患者,年龄45～58岁,在行肝叶切除术时切取距癌巢边2 cm处的肝组织,经病理证实无癌细胞,对本实验均签署知情同意书.②主要试剂:细胞培养用DMEM/F12干粉由美国Hyclone公司提供,新鲜胎牛血清由天津联星生物技术有限公司配制,各种细胞生长因子为美国Cytolay公司产品.方法:将肝脏癌旁组织剪碎,Hank's液冲洗,Ⅳ型胶原酶溶液消化后将细胞悬浮在含体积分数为0.15胎牛血清的DMEM/F12培养液中,加入肝细胞生长因子、表皮生长因子、α-成纤维细胞生长因子,浓度均为25μg/L.待培养细胞约铺满2/3瓶底后,胰蛋白酶消化传代,按2×107 L-1密度接种继续培养.细胞传至3～4代时,加入胰酶制成浓度为2.60×109 L-1细胞悬液,依次加入抗人C-kit抗体、免疫磁珠、Buffer液,免疫磁珠法初步分离C-kit+细胞.HE染色和免疫荧光细胞化学染色检测癌旁组织中是否存在肝脏干细胞.制备C-kit+细胞爬片,免疫荧光化学染色鉴定肝脏干细胞表面标志物CK19及AFP的表达.主要观察指标:①细胞形态观察.②癌旁组织肝脏干细胞的鉴定.③C-kit+细胞免疫荧光化学鉴定.结果:①原代培养2周,贴壁细胞呈集落样生长,换液后成熟肝细胞逐渐破碎、消失,小圆形细胞增殖成片,多位于集落中央,呈簇状排列,多数细胞只有1个核,胞核较大,胞浆较少,细胞边界清楚.传至1～2代时仍可见细胞呈集落样生长,生长速度加快,经免疫磁珠分离获得的C-kit+细胞呈类圆形,胞核较大,胞浆较少,体外培养1周后呈栅栏状、漩涡、片状或不规则样生长.②癌旁组织HE染色后汇管区内可见不典型增生的小胆管,其内部存在小圆形细胞;免疫荧光细胞化学染色后癌旁组织汇管区内增生的小胆管内的小圆形细胞共表达红色荧光AFP和绿色荧光CK19,二者叠加部分呈黄色.③C-kit+细胞免疫荧光化学后,胞浆内表达AFP红色颗粒与CK19绿色颗粒,二者重叠部分即AFP+/CK19+双阳性细胞,呈黄色荧光.结论:人类肝癌旁组织中存在肝脏干细胞,可联合其表面标志物的表达,将C-kit+/AFP+/CK19+作为鉴定分离肝脏干细胞的一种方法.体外分离培养得到的小圆形细胞即卵圆细胞,具备向肝细胞及胆管上皮细胞双向分化的潜能.【总页数】4页(P10169-10172)【作者】吕国悦;张平;李红;李爽;王广义【作者单位】吉林大学第一医院普外科,吉林省长春市,130021;吉林大学第一医院普外科,吉林省长春市,130021;吉林大学第一医院普外科,吉林省长春市,130021;东丰县中医院普外科,吉林省辽源市,136300;吉林大学第一医院普外科,吉林省长春市,130021【正文语种】中文【中图分类】R735.7【相关文献】1.奶牛乳腺成体干细胞的体外分离培养及鉴定试验 [J], 刘昌菊;董雅娟;龚宜超;李兴芳;柏学进2.人成体肝脏干细胞体外分离、培养及鉴定 [J], 吕国悦;张平;李红;李爽;王广义3.乳腺成体干细胞的体外分离、培养及鉴定 [J], 王英超;付士波;张虹;韩猛;石爱平;王有德4.成体小鼠肠神经嵴干细胞体外分离、培养及鉴定 [J], 肖莉;高亚;刘勇5.乳腺成体干细胞的体外分离、培养及鉴定 [J], 王英超;付士波;张虹;韩猛;石爱平;王有德因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。