HPLC法测定红茶和绿茶葵瓜子中的食用合成色素

将混合标准溶液 0． 20、0． 40、0． 60、0． 80、1． 00 mL 分别置 1 mL 容量瓶中，各加水稀释至刻度，摇 匀，得诱惑红浓度分别为： 9． 30、18． 60、27． 90、37． 20、46． 50 μg / mL； 赤 藓 红 浓 度 分 别 为： 10． 04、20． 08、30． 11、40． 15、50． 19 μg / mL； 其余各合成色素的 浓 度 分 别 为： 10． 00、20． 00、30． 00、40． 00、 50． 00 μg / mL的系列混合标准溶液。
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粮油食品科技 第 22 卷 2014 年 第 2 期
质量安全
（ 2） 空白溶液的制备 将制得的红茶瓜子，绿茶瓜 子脱壳后分别粉碎，按 1． 4． 2 操作，即得各空白溶液。 1． 5 测定 1． 5． 1 色谱条件
色谱柱： Agilent C18 （ 5 μm，4． 6 mm × 250 mm） ；
1． 3． 2 混合标准溶液 诱惑 红 标 准 溶 液： 精 密 称 取 诱 惑 红 标 准 品
5． 812 mg，置 10 mL 容量瓶中，加 pH 6 的水到刻度， 摇匀，即得 0． 4650 mg / mL 的诱惑红标准溶液。
赤藓 红 标 准 溶 液： 精 密 称 取 赤 藓 红 标 准 品 5． 473 mg，置 10 mL 容量瓶中，加 pH 6 的水到刻度， 摇匀，即得 0． 5019 mg / mL 的赤藓红标准溶液。
流动相： 甲醇 － 0． 02 mol / L 乙酸铵溶液（ pH4． 0） 梯 度洗脱（ 0 min →10 min →17 min →23 min →23． 01 min→30 min，甲醇 15% →35% →98% →98% →15% →15% ） ； 检测波长： 254 nm； 流速： 1． 0 mL / min，柱 温 35 ℃ ； 进样体积： 10μL。 1． 5． 2 色谱分析
批号 12001 08001 09001 12001 08002 70905 90825
表 1 色素标准品
含量 0． 5 mg / mL 0． 5 mg / mL 0． 5 mg / mL 0． 5 mg / mL 0． 5mg / mL
80． 0% 91． 7%
来源 中国计量科学研究院 中国计量科学研究院 中国计量科学研究院 中国计量科学研究院 中国计量科学研究院 Dr． Ehrenstorfer GmbH Dr． Ehrenstorfer GmbH
1． 4 样品 1． 4． 1 菜市 1 红茶瓜子（ A 样） 、菜市 2 绿茶瓜子（ B 样） 、菜市 3 红茶瓜子（ C 样） 、菜市 4 红茶瓜子（ D 样） 、菜市 5 绿茶瓜子（ E 样） 、普通葵瓜子： 均为市售。 1． 4． 2 样品溶液的制备
（ 1） 试样处理。瓜子壳： 分别称取剥离后的瓜 子壳和经粉碎混匀后的样品约 5 g，放入 100 mL 小 烧杯中，用热水 20 mL 反复洗涤色素，直到试样无色 素为止，合并色素漂洗液为壳试样溶液。瓜子仁： 分 别称取剥 离 后 的 瓜 子 仁，经 粉 碎 混 匀 后 的 样 品 约 5 g，放入 100 mL 小烧杯中，用热水反复洗涤色素， 高速离心，取上清液，残渣继续用热水反复洗涤和高 速离心，到试样无色素为止，合并上清液，用 20 mL 石油醚萃取 2 次，弃去石油醚层，水层为仁试样溶 液。
甲醇（ 色谱纯） ： 购自 J＆K SCIENTIFIC LTD； 其 它试剂均为分析纯； 实验用水为超纯水（ 电阻率值 为 18． 2 MΩ． cm） 。 1． 3 色素标品溶液 1． 3． 1 色素标准品
本试验使用的色素标准品的来源和含量见表 1。
名称 柠檬黄 日落黄 苋菜红 胭脂红
亮蓝 诱惑红 赤藓红
收稿日期： 2013 － 09 － 24 作者简介： 秦庆芳，1971 年出生，女，副主任药师］、 薄层色谱法［10］、紫外—可见分光光度法［11］、液—质 联用法［12］等，提取方法有聚酰胺吸附法［6 － 9］、用水 直接 溶 解 法［3 － 4］、QuEChEＲS 法［5］ 等。 本 文 参 考 GB / T 5009． 35—2003《食 品 中 合 成 着 色 剂 的 测 定》［13］，用聚酰胺吸附法提取合成色素，建立红茶瓜 子和绿茶瓜子中非法添加柠檬黄、日落黄、苋菜红、 胭脂红、亮蓝、诱惑红、赤藓红 7 种成分的高效液相 色谱分析方法。
混合标准溶液： 临用时精密量取柠檬黄、苋菜 红、胭脂红、日落黄、亮蓝、诱惑红、赤藓红标准溶液 各 1． 00 mL，置于同一 10 mL 容量瓶中，加水至刻 度，摇匀。制成含柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、 亮蓝各 50． 00 μg / mL，诱惑红 46． 50 μg / mL 和赤藓 红 50． 19 μg / mL 的混合标准溶液。 1． 3． 3 系列混合标准溶液
含赤藓红的试样提取。将制备好的试样溶液放 入分液漏斗中，加 2 mL 盐酸、20 mL（ 5% ） 三正辛胺 正丁醇溶液，振摇提取，分取有机相，重复提取至有 机相无色，合并有机相，用饱和硫酸钠溶液洗 2 次， 每次 10 mL，分取有机相，倒入蒸发皿中，水浴加热 浓缩至 10 mL，转移至分液漏斗中，加 60 mL 正己 烷，混匀，加浓氨水提取 2 ～ 3 次，每次 5 mL，合并氨 水溶液层（ 含水溶性酸性色素） ，用正己烷洗 2 次， 氨水层加乙酸调成中性，水浴加热蒸发至近干，加水 溶解，定容至 5 mL，经滤膜 0． 45 μm 过滤，即得。 1． 4． 3 空白溶液的制备
（ 2） 色素提取。取试样溶液加入柠檬酸溶液，将 pH 值调到 6，加热至 60 ℃ ，将适量的聚酰胺粉加少 量水调成粥状，倒入试样溶液中，搅拌片刻，使色素 完全吸附于聚酰胺粉中，以 G3 垂熔漏斗抽滤，用 60 ℃ 、pH = 4 的水（ 水加柠檬酸溶液调 pH 值到 4） 洗涤 5 次，然后用甲醇 － 甲酸混合溶液（ 6 + 4） 洗涤 5 次， 再用水洗至中性，用适量的乙醇∶ 浓氨∶ 水混合溶液 （ 7 + 2 + 1 ） 解吸 5 次，收集解吸液，加乙酸中和至 pH 值约为 7，蒸发至近干，加水溶解，定容至 5 mL （ 测定时超出线性范围的样品，应加水进行二步稀 释） ，经 0． 45 μm 滤膜过滤，即得色素提取液。
（ 1） 空白红茶瓜子、绿茶瓜子的制备 分别准确 称取未染色的红茶叶、绿茶叶各 12 g、甘草各 1． 50 g，切成体 积、厚 薄 大 致 均 匀 的 薄 片，用 粉 碎 机 粉 碎 后，分别倒入 200 mL 沸水中，浸泡 30 min，用纱布过 滤，除去茶叶渣和甘草渣，得到茶叶甘草浸提液，加 入 1． 5 g 食盐，制得浸泡液。将红茶、绿茶浸泡液煮 沸，分别倒入生瓜子 100 g，浸泡 5 h。再将浸泡液滤 除，晾干，炒至香脆即制得红茶瓜子，绿茶瓜子空白 对照样品。
Determination of edible synthetic pigments in black tea and green tea sunflower seeds by HPLC
QIN Qing － fang （ Guangxi Liuzhou Institutes for Foods and Drug Control，Liuzhou Guangxi 504006）
粮油食品科技 第 22 卷 2014 年 第 2 期
质量安全
HPLC 法测定红茶和绿茶葵瓜子 中的食用合成色素
秦庆芳
（ 广西柳州食品药品检验所，广西 柳州 504006）
摘 要： 建立 HPLC 法测定红茶、绿茶葵瓜子中食用合成色素的方法。样品溶液经聚酰胺吸附，用 氨∶乙醇∶水溶液解吸附，中和后用水浴浓缩，定量，过滤。采用 Agilent C18 柱，以 0． 02 mol / L 醋酸铵 溶液 － 甲醇为流动相，梯度洗脱，流速为 1． 0 mL / min，柱温 35 ℃ ，检测波长 254 nm。进样体积为 10 μL。在选定的色谱条件下，柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、亮蓝、诱惑红、赤藓红 7 种色素均可 得到良好分离； 7 种色素在 10． 0 ～ 50． 0 μg / mL 范围内均呈较好的线性关系； 平均回收率（ n = 9） 瓜 子壳的为 88． 8% ～ 97． 3% ，瓜子仁的为 83． 0% ～ 92． 6% 。该方法准确可靠，可用于瓜子中合成色 素测定。 关键词： 高效液相色谱法； 人工合成色素； 红茶葵瓜子； 绿茶葵瓜子 中图分类号： Ｒ 115． 5 文献标识码： A 文章编号： 1007 － 7561（ 2014） 02 － 0067 － 04
Abstract： The synthetic pigments in black tea and green tea sunflower seeds were determined by HPLC． Sample solution was absorbed by polyamide，then desorbed by ammonia － ethanol － water，after neutralization concentrated by water bath，quantified and filtered． The gradient elution was performed with an Agilent C18 column，0． 02 mol / L ammonium acetate － methanol as mobile phase，at the flow rate of 1． 0 mL / min，column temperature of 35 ℃ ，detection wavelength of 254 nm，and injection volume of 10 μL． Seven kinds of pigments （ lemon yellow，sunset yellow，amaranth red，rouge red，bright blue，fancy red， erythrosine） can be separated by chromatographic resolution． The linear ranges of them were all between 10． 0 μg / mL and 50． 0 μg / mL，and the average recovery rate （ n = 9） of sunflower seeds shell 88． 8% ～ 97． 3% ，kernel of sunflower seeds 83． 0% ～ 92． 6% ． The method is accurate and credibility，which can be applied to detect synthetic pigment in sunflower seeds． Key words： HPLC； synthetic pigment； black tea sunflower seed； green tea sunflower seed