血清尿素氮BUN谷氨酸脱氢酶测定法作业指导书
(第五册)生化室作业指导书
ISO15189质量管理体系范本文件（第五册）生化室作业指导书文件编号：PYK-3-SH-01~61第I版编制：郭莎莎审核：郭莎莎批准：杨到凤生效日期：2016年6月1日濮阳市第二人民医院检验科目录修订页血清总胆红素(T-BIL)测定1. 实验原理血清中的胆红素分为直接（结合）胆红素和间接（未结合）胆红素。
大多数方法是在1883年Ehrlich提出的重氮法胆红素测量法1，一些改良的方法已被用来增进反应。
这些改良的方法是使直接胆红素直接和重氮化合物进行反应，生成一种有颜色的化合物，而间接胆红素需要一种溶剂，如表面活性剂后才能进行反应。
申能总胆红素试剂是改良的重氮法。
使用一种稳定的重氮盐，2,4-二氯苯胺重氮盐（DCA），与胆红素反应，形成红色偶氮化合物，它在540nm吸光度最大。
在540/600nm时的吸光度与标本中总胆红素的浓度成正比。
胆红素+DCA 红色偶氮化合物表面活性剂2. 标本：2.1 病人准备：无特殊要求。
最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。
2.2 类型：血清、肝素或EDTA血浆，应避光保存。
3. 标本存放：15～25℃保存可稳定2天；2～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定3个月，如冰冻保存，不可反复冻融！。
4. 标本运输：常温条件下避光保存运输。
5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染、脂血、非避光保存运输的标本。
6. 实验材料6.1 试剂：申能总胆红素试剂盒（141 0817170 1 试剂1＋试剂2）6.1.1 试剂组成试剂1：6×64 ml磷酸缓冲液40mmol/L氯化钠9g/L表面活性剂,稳定剂适量试剂2：6×16 ml2,4-二氯苯胺重氮盐1mmol/L盐酸30mmol/L表面活性剂适量6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂有效期为18个月。
试剂2必需避光保存。
试剂不可冰冻。
血、尿液尿素氮(BUN)测定作业指导书
血、尿液尿素氮（BUN）测定作业指导书1.实验原理Vitros BUN/UREA试剂是一种干燥，多涂层的，在透明的聚合物支撑基片上涂有分析成份的化学干片。
将一滴患者样品滴于干片上，分布层会使之均匀地分布。
水和非蛋白质成份进入下面的试剂层，与尿素酶反应生成氨。
半透膜只允许氨进入呈色反应层，与指示剂发生反应。
经过一段固定的孵育时间后，通过测定呈色剂的反射强度可间接求出尿素氮的含量。
测定方式：比色法波长：670nm测试时间和温度：37℃约５分钟反应过程：尿素酶非蛋白质成份＋水—————→氨+ 二氧化碳氨＋氨指示剂—————→呈色剂2. 标本：2.1 病人准备：血清无特殊要求。
要留取24小时尿样。
2.2 样品类型：血清；肝素锂/钠和EDTA抗凝血浆。
定时收集的，稀释后的尿样。
2.3 标本采集与处理：2.3.1 血清和血浆样品特别要注意的是：血清；肝素锂/钠和EDTA抗凝血浆；不要用氟化钠作防腐剂，因为氟会抑制尿素酶。
样品采集后4小时内要离心标本，吸出血清。
处理样品时要将其当成生物污染品。
2.3.2 尿液样品定时或随时采集的尿液，特别要注意的是：不能使用以下防腐剂：冰醋酸，浓盐酸，硼酸，硼粉或甲酸钠硼酸，样品在测试前要冷藏。
测试前将1份样品加20 份试剂级别的水进行稀释。
将测试结果乘以21，就得到原始样品中尿素氮的浓度。
冷藏的样品不能立即测试。
处理样品时要将其当成生物污染品。
3. 标本的存放：血清、血浆室温下最多1天；4～8℃冷藏最多5天；-18℃冷冻保存可长达6个月。
尿液样品在测试前要冷藏。
4. 标本的运输：样品要放在带盖的容器内以防污染和蒸发。
5. 标本拒收的标准：污染、抗凝剂、防腐剂不符合要求，标本放置时间过长。
6. 试验材料：6.1测试BUN所需的物品包括：Vitros化学定标物Kit1；Vitros特制质控液；Vitros 7%BSA稀释液。
xx厂家提供原装进口，试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。
实验十三血清尿素氮测定(脲酶—Berthelot比色法)
实验十三血清尿素氮测定（脲酶—Berthelot比色法）一、实验目的与要求1 了解血液尿素氮（BUN）在人体营养学上的生理学意义及其在代谢上的重要性。
2 掌握血液尿素氮测定方法及721分光光度计或AT648半自动生化多用仪的使用方法和现代生化检测试剂盒的应用。
二、实验原理尿素在脲酶作用下分解生成氨。
在碱性条件下，经次氯酸氧化生成的氯胺与苯酚被亚硝基铁氰化钠催化生成蓝色的靛酶。
其反应式为： CH2NH2N尿素O+HOH脲酶NH3彩+CHOH2N氨基甲酸O-2NH3+CO2氨NH3+OCl-NH2Cl+OH-次氯酸氨胺催化剂NH2Cl+OH+OH-Cl-+H2O+HONH2苯酚P胺基苯酚HONH2+OH-+O2==N——O-+H2O酚靛三、实验仪器与试剂1 仪器（1） AT648半自动生化分析仪1台；（2） 4孔恒温水浴锅1个；（3）振动摇床1台。
2 分组及仪器2人一组，每组仪器包括：（1）试管架1个；（2） 2ml试管10个；（3） 20μl微量加样器1个；（4） 1ml移液管1个；（5） 5ml移液管2个；（6）吸耳球1个；（7）搪瓷盘1个；（8）微量加样滴头；（9）吸水纸。
3 本试剂盒内含5种试剂：（1）脲酶（冻干） 2瓶（2） pH 8.0缓冲液：由乙二胺四乙酸二钠盐和磷酸氢二钾组成 1×46ml（3）显色剂Ⅰ：由苯酚和亚硝基铁氰化钠组成 1×225ml（4）显色剂Ⅱ：由氢氧化钠和安替福民组成 1×225ml（5）尿素氮标准液（20mg/dl） 2×2ml四、实验步骤1 血清（1）取脲酶一瓶，用23.0ml pH 8.0缓冲液溶解。
（2）于一系列试管中，按下表加入各溶液。
表131系列反应管中所加溶液的量空白管标准管样品管样品（μl）——20标准液（μl）—20—酶液（μl）0.50.50.5 （3）于37℃水浴中保温15min，然后各管分别加入显色剂Ⅰ和显色剂Ⅱ各2.5ml。
检验科sop-生化室作业指导书(SOP)
郾城微检综合门诊部生化检验作业指导书文件编号：YCWJZHMZB-2编制：刘桂菊审核：周风霞编辑日期：2017 年8月20日生效日期：2017 年8月30 日郾城微检综合门诊部检验科目录修订页8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见生化检验CS-6400生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2 仪器操作步骤：参见生化检验CS-6400生化分析仪操作规程.SOP文件检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。
11. 计算方法以TruCal U复合校准品校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果无需手工计算，以μmol/L报告。
手工测定计算方法为：△Au直接胆红素(μmol/L) =--------×校准液浓度△As12. 参考值范围：≤6.8mol/L参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。
根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。
13. 临床意义：胆红素是血红蛋白的降解产物。
游离胆红素非极性很强，几乎不溶解于水。
在血液中与白蛋白形成复合物由脾脏向肝脏运输。
在肝脏中，胆红素与葡萄糖醛酸结合,生成可溶性胆红素葡萄糖醛酸酯由胆管排入肠道。
溶血（肝前黄疸）、实质的肝损伤（肝性黄疸）和胆管堵塞（肝后黄疸）都会导致血液胆红素增高，形成高胆红素血症。
人群中常见先天性慢性高胆红素血症，称为Gilbert综合症。
由于胆红素降解酶的功能滞后以及出生后红细胞破碎增多，使60～70%的婴儿血液出现总胆红素增高。
常用的胆红素检测方法能检测总胆红素和直接胆红素。
直接胆红素的测定主要检测水溶性的结合胆红素，因此可以根据总胆红素和直接胆红素的差来估计游离胆红素的含量。
14. 操作性能14.1 线性范围：1.7～171mol/L14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法5，AU1000批内精密度小于4%或SD≤0.04，总精密度小于5%或SD≤0.07。
血清尿素氮BUN谷氨酸脱氢酶测定法
血清尿素氮BUN谷氨酸脱氢酶测定法1.实验原理脲酶-谷氨酸脱氢酶（Urease-GLDH）连续监测法。
尿素被脲酶水解产氨。
在NADH的存在下，氨和α-酮戊二酸反应生成谷氨酸，NADH同时被氧化成NAD＋。
NADH 的减少和样品中尿素浓度成正比。
本法是连续监测法。
脲酶尿素+ 2H2O 2 NH4＋+ 2 HCO3－谷氨酸脱氢酶NH4＋+α-酮戊二酸+NADH L-谷氨酸+NAD＋+H2O2 标本：2.1 病人准备：血清无特殊要求。
要留取24小时尿样。
2.2 类型：血清、血浆（不可使用肝素铵）、新鲜尿液。
无溶血和凝块的血清，如果必须使用血浆，建议使用无铵离子的抗凝血剂，如EDTA和肝素钠。
用新鲜尿液作样品时，用蒸馏水作1:100稀释。
3. 标本存放：血清或血浆稳定性：4～25℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1年。
尿液稳定性：20～25℃保存可稳定2天；4～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1个月。
4. 标本运输：常温条件下保存运输。
5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。
6. 实验材料6.1 试剂：奥林巴斯尿素测定试剂盒试剂1：＋试剂2：6.1.1 试剂准备：试剂为即用式。
6.1.2 试剂稳定性与贮存试剂保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
6.1.3 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
6.1.4 注意事项：此试剂为体外诊断用。
不要入口，吞下有害。
保护剂为叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜，与下水管中的铅反应形成爆炸性化合物，即使只含有少量的叠氮钠，如果排向下水道请用大量的水冲洗。
应采取必要的预防措施使用试剂。
6.2 校准品：使用奥林巴斯公司提供的校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。
6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2 仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I 与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
检验医学SOP文件生化室作业指导书
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离心机操作维护规程
ABCD-3-SF-60
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血清总胆红素(T-BIL)测定
1.实验原理
血清中的胆红素分为直接（结合）胆红素和间接（未结合）胆红素。大多数方法是在1883年Ehrlich提出的重氮法胆红素测量法1，一些改良的方法已被用来增进反应。这些改良的方法是使直接胆红素直接和重氮化合物进行反应，生成一种有颜色的化合物，而间接胆红素需要一种溶剂，如表面活性剂后才能进行反应。
142
38
血、尿液尿素氮（BUN）测定
ABCD-3-SF-38
147
39
血、尿液肌酐（Cr）测定
ABCD-3-SF-39
152
40
血清天门冬氨酸测定
ABCD-3-SF-40
157
41
动脉血气电极法测定
ABCD-3-SF-41
163
42
血清乳酸脱氢酶速率法测定
ABCD-3-SF-42
168
43
血、尿液淀粉酶两点法测定
ABCD-3-SF-21
80
22
血清肌酸激酶(CK) 法测定
ABCD-3-SF-22
84
23
血清肌酸激酶MB同工酶测定
ABCD-3-SF-23
88
24
血清尿素尿素氮(UreaBUN)测定标准操作程序SOP文件
CALIBRATION METHOD [ LINEAR ]
POINT(3) [ 0 ]
CALIBRATION POINT [ 2 ]
POINT(4) [ 0 ]
SPAN POINT [ 2 ]
WAVELENGTH(PRIMARY) [ 340 ]
DUPLICATE LIMIT(%) [ 6 ]
SENSITIVITY LIMIT(HIGH) [ -22 ]
R.VOLUME(R1) [ 180 ]
SE(R2) [ 0 ]
S1 ABS(HIGH) [ 20000 ]
R.VOLUME(R3) [ 110 ]
来源：Precinorm (罗氏正常值质控)
Precipath (罗氏病理值质控)
ABCD医院
生化实验室
文件编号：
ABCD-SOP-04-19
血清尿素/尿素氮（Urea/BUN）测定
版序：ABCD
页码：第2页，共4页
其它适合的质控品
贮存条件：置2-8℃冰箱至有效期。
准备：直接使用。
质控间隔时间及限制：应视不同地区及各自实验室情况而定。质控结果应在限定的范围之内，如果超出范围，实验室应根据情况采取措施。
9.2在测定过程中，各种器材和蒸馏水应无氨离子污染，否则结果偏高。GLDH的测定会在反应杯中残留氨，会干扰到UREA/BUN的检测。因此不能将此两个项目安装在一起。
9.3血氨升高可使尿素结果升高。尿液中，内生得氨也会干扰UREA/BUN的检测。在酸性条件下，检测结果也会偏高。
9.4仅应用于体外诊断。
ABCD医院
生化实验室
文件编号：
ABCD-SOP-04-19
血清尿素/尿素氮（Urea/BUN）测定
生化实验室尿素BUN紫外谷氨酸脱氢酶法作业指导书
生化实验室尿素BUN紫外谷氨酸脱氢酶法作业指导书1、前言试验名称：尿素测定，英文名称：BUN，方法：紫外-谷氨酸脱氢酶法。
本文件适用于安阳鼎城糖尿病医院检验科生化实验室，目的是指导工作人员正确的在科华KHB-450全自动生化分析仪上测定血清、血浆、尿液样本中的尿素浓度，以保证测定结果的准确可靠。
尿素是人体内蛋白氮代谢的主要终产物，它构成了血液中绝大部分的非蛋白氮，尿素产生于肝脏，经过肾脏排泄至尿中，因此尿素的含量取决于蛋白的摄入量、蛋白质分解代谢和肾功能。
尿素水平增加可发生于饮食改变、肾功能损伤的疾病、肝脏疾病、充血性心力衰竭、糖尿病和感染。
另外肠道氨的产生增加也可引起血清尿素氮增高。
2、测定原理本试验采用由Talke和Schubert首先提出的酶学方法，为缩短和简化分析，计算基于Tiffany等的发现，即尿素浓度与固定时间间隔内的吸光度变化成正比。
其原理为：尿素和水在脲酶的催化下分解为氨和二氧化碳，氨、α-氧代戊二酸和NADH在谷氨酸脱氢酶的催化下生成谷氨酸和NAD+，酶反应的速率与样本中尿素（尿素氮）的含量成正比。
在340nm波长下测定固定时间间隔内NADH吸光度下降的速率，即可没得样本中尿素（尿素氮）的浓度，3、试剂试剂生产商：长海科华生物工程股份有限公司。
剂型：液体双试剂。
包装量：R1：4*45ml R2：2*30ml注册号：沪食药监械（准）字2010第2400021号。
生产许可证号：沪药管械生产许20030916号。
基本成份：试剂1：α-氧代戊二酸7.5mmol/l谷氨酸脱氢酶＞800u/lNADH0.35mmol/l二磷酸腺苷 1.5mmol/lTris缓冲液115mmol/l试剂2：Tris缓冲液115mmol/l尿素酶＞40000u/lα-氧代戊二酸7.5mmol/l储存条件和有效期：试剂避光储存于2―8℃可稳定12个月。
启用后2―10℃可稳定14天，若试剂混浊，或空白在340nm 下吸光度值低于1.0A时，则不能使用。
血清尿素氮BUN谷氨酸脱氢酶测定法作业指导书
血清尿素氮BUN谷氨酸脱氢酶测定法作业指导书1.实验原理脲酶-谷氨酸脱氢酶（Urease-GLDH）连续监测法。
尿素被脲酶水解产氨。
在NADH的存在下，氨和α-酮戊二酸反应生成谷氨酸，NADH同时被氧化成NAD＋。
NADH的减少和样品中尿素浓度成正比。
本法是连续监测法。
脲酶尿素+ 2H2O 2 NH4＋+ 2 HCO3－谷氨酸脱氢酶NH4＋+α-酮戊二酸+NADH L-谷氨酸+NAD＋+H2O2 标本：2.1 病人准备：血清无特殊要求。
要留取24小时尿样。
2.2 类型：血清、血浆（不可使用肝素铵）、新鲜尿液。
无溶血和凝块的血清，如果必须使用血浆，建议使用无铵离子的抗凝血剂，如EDTA和肝素钠。
用新鲜尿液作样品时，用蒸馏水作1:100稀释。
3. 标本存放：血清或血浆稳定性：4～25℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1年。
尿液稳定性：20～25℃保存可稳定2天；4～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1个月。
4. 标本运输：常温条件下保存运输。
5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。
6. 实验材料6.1 试剂：奥林巴斯尿素测定试剂盒试剂1：＋试剂2：6.1.1 试剂准备：试剂为即用式。
6.1.2 试剂稳定性与贮存试剂保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
6.1.3 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
6.1.4 注意事项：此试剂为体外诊断用。
不要入口，吞下有害。
保护剂为叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜，与下水管中的铅反应形成爆炸性化合物，即使只含有少量的叠氮钠，如果排向下水道请用大量的水冲洗。
应采取必要的预防措施使用试剂。
6.2 校准品：使用奥林巴斯公司提供的校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。
7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2 仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
BUN检测标准操作规程
BUN检测标准操作规程1 目的建立BUN检测标准操作规程，确保其操作规范化。
2 适用范围适用于迈瑞BS200生化仪BUN检测的操作。
3 引用文件卫生部<<全国临床检验操作规程>>第三版第四篇临床化学检验第六章第一节463页。
浙江省<<临床检验管理与技术规程>>第四篇第七章第一节515页4 原理及试剂1）试剂厂家:深圳迈瑞脲酶2）原理:尿素+2H2O + --------→2NH4+CO2谷氨酸脱氢酶α-酮戊二酸+NH4+NADH ------------→L-谷氨酸+NAD+ + H2O 通过上述二步反应，使NADH氧化成NAD+，从而引起在波长340nm处吸光度下降，在固定间隔时间内吸光度下降值正比于样本中尿素氮含量。
3）试剂组成:尿酸试剂成分成份成份实验浓度R1 Tris缓冲液120mmol/LADP 750mmol/L脲酶≥40KU谷氨酸脱氢酶≥0.4KUR2 NADH 1.2mmol/Lα-酮戊二酸25mmol/L5 标本采集与处理：血清于2℃-8℃避光保存可稳定5天，或冰冻保存，但不能反复冻融。
6 测定程序6.1 测定器材：全自动生化分析仪（迈瑞BS200）。
6.3.1开机前检查6.3.1.1检查电源，确认电源有电并且能够提供正确的电压。
6.3.1.2检查分析部、操作部和输出部的通讯线和电源线，确认已连接且没有松动。
6.3.1.3检查打印纸是否足够。
6.3.1..4确认试剂盘的39号位置已放置足够的强化清洗液，40号位置已放置足够的蒸馏水。
6.3.1.5检查去离子水的连接、废液的连接、注射器的连接是否漏液。
6.3.1.6检查加样针是否弯曲、有污物、挂液。
6.3.1.7检查搅拌针是否弯曲、有污物。
6.3.1.8检查去离子水桶内是否有足够的去离子水。
6.3.1.9检查废液桶是否清空。
6.4开机系统通上电后，按下列顺序依次打开电源：分析部主电源、分析部电源、操作部显示器电源、操作部主机电源、打印机电源。
尿素氮测定SOP_BUN临床意义_检验科生化项目SOP
10参考文献
[1]西门子医学诊断产品（上海）有限公司尿素氮（BUN）测定试剂说明书。
[2]叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程.第3版.南京：东南大学出版社，2006：463~464。
编写： 审核： 批准：
7性能参数
本法线性范围为0~53.5mmol/L,对于超过测定线性范围的结果，用净化水对标本进行稀释，输入稀释因子后再重新检测。
8生物参考区间
血清：2.5~6.4mmol/L
尿液：249~714mmol/24小时。
9临床意义
血清尿素氮增高:见于①肾前性氮质血症,由于肾血流量灌注减少或者尿素生成过多引起。后者见于高蛋白饮食、饥饿、发热、脓毒血症所致的蛋白质分解代谢增加以及胃肠道出血后血液蛋白吸收等。脱水、休克、心衰引起的肾供血不足，亦可使血液尿素氮升高。肾前性氮质血症，肌酐浓度往往不伴随升高。②肾性氮质血症，由于急性与慢性肾功能衰竭、肾小肾炎、肾盂肾炎和肾病等引起。肾结核、肾积水的血液尿素氮增高，与肾组织破坏程度相关。③肾后性氮质血症，经输尿管、膀胱、尿道的尿流受阻而引起的血液尿素氮升高。例如膀胱结石、泌尿生殖肿瘤、前列腺肥大、阻塞造成的肾小管内压烽升高，使管内尿素倒扩散入血液。
试剂2~8℃保存，有效期内稳定。
3.2质控品
美国BIORAD液体多项质控品。
3.3校准品
西门子校准品。
3.4仪器
尿素氮测定
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SIEMENS DIMENSIONXpand Plus/RxL Max全自动生化分析系统。
4操作程序
4.1检测过程流程
签收样品 → 离心 → 上机检测 → 审核报告 → 签发报告 → 标本保存。
检验医学SOP文件5-生化室作业指导书
WORD格式整理版生化室作业指导书文件编号：ABCD-3-SF-01~61第A版编制：审核：批准：生效日期：2015年4月8日ABCD人民医院检验科目录修订页血清总胆红素(T-BIL)测定1. 实验原理血清中的胆红素分为直接（结合）胆红素和间接（未结合）胆红素。
大多数方法是在1883年Ehrlich提出的重氮法胆红素测量法1，一些改良的方法已被用来增进反应。
这些改良的方法是使直接胆红素直接和重氮化合物进行反应，生成一种有颜色的化合物，而间接胆红素需要一种溶剂，如表面活性剂后才能进行反应。
申能总胆红素试剂是改良的重氮法。
使用一种稳定的重氮盐，2,4-二氯苯胺重氮盐（DCA），与胆红素反应，形成红色偶氮化合物，它在540nm吸光度最大。
在540/600nm时的吸光度与标本中总胆红素的浓度成正比。
胆红素+DCA 红色偶氮化合物表面活性剂2. 标本：2.1 病人准备：无特殊要求。
最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。
2.2 类型：血清、肝素或EDTA血浆，应避光保存。
3. 标本存放：15～25℃保存可稳定2天；2～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定3个月，如冰冻保存，不可反复冻融！。
4. 标本运输：常温条件下避光保存运输。
5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染、脂血、非避光保存运输的标本。
6. 实验材料6.1 试剂：申能总胆红素试剂盒（141 0817170 1 试剂1＋试剂2）6.1.1 试剂组成试剂1：6×64 ml磷酸缓冲液40mmol/L氯化钠9g/L表面活性剂,稳定剂适量试剂2：6×16 ml2,4-二氯苯胺重氮盐1mmol/L盐酸30mmol/L表面活性剂适量6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂有效期为18个月。
试剂2必需避光保存。
试剂不可冰冻。
6.1.4 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。
血清尿素氮BUN谷氨酸脱氢酶测定法-检验科生化室作业书
血清尿素氮BUN谷氨酸脱氢酶测定法实验原理脲酶-谷氨酸脱氢酶（Urease-GLDH）连续监测法。
尿素被脲酶水解产氨。
在NADH的存在下，氨和α-酮戊二酸反应生成谷氨酸，NADH 同时被氧化成NAD＋。
NADH的减少和样品中尿素浓度成正比。
本法是连续监测法。
脲酶尿素+2H2O2NH4＋+2HCO3－谷氨酸脱氢酶NH4＋+α-酮戊二酸+NADHL-谷氨酸+NAD＋+H2O2标本：2.1病人准备：血清无特殊要求。
要留取24小时尿样。
2.2类型：血清、血浆（不可使用肝素铵）、新鲜尿液。
无溶血和凝块的血清，如果必须使用血浆，建议使用无铵离子的抗凝血剂，如EDTA和肝素钠。
用新鲜尿液作样品时，用蒸馏水作1:100稀释。
3.标本存放：血清或血浆稳定性：4～25℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1年。
尿液稳定性：20～25℃保存可稳定2天；4～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1个月。
4.标本运输：常温条件下保存运输。
5.标本拒收标准：细菌污染的标本。
6.实验材料6.1试剂：申能尿素测定试剂盒（14231071701试剂1：6×64ml＋试剂2：6×16ml）6.1.1试剂组成试剂1：Tris缓冲液pH7.8120mmol/Lα-酮戊二酸7mmol/LADP0.6mmol/L谷氨酸脱氢酶≥1000U/L脲酶≥6000U/L试剂2：NADH0.25mmol/L6.1.2试剂准备：试剂为即用式。
6.1.3试剂稳定性与贮存试剂保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
6.1.4变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
6.1.5注意事项：此试剂为体外诊断用。
不要入口，吞下有害。
保护剂为叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜，与下水管中的铅反应形成爆炸性化合物，即使只含有少量的叠氮钠，如果排向下水道请用大量的水冲洗。
应采取必要的预防措施使用试剂。
尿素氮
3、登录
4、清洗
1）编号
6、生化项目检测
（2）测定
7、样本结果登记
8、样本查询
9、系统注销 10、工作结束 清洗仪器，退出系 统、关闭仪器，关闭计算机，切 断电源，处理试剂。
二、实验原理
尿素+H2O
尿酶
2NH3+CO2
谷氨酸脱氢酶
NH3+α-酮戊二酸+NADH+H+
谷氨酸+NAD+
酶反应速率与尿素氮的浓度成正比，测定340nm吸光度 下降速率，即可计算出样本中尿素氮含量（两点法）。
三、实验器材与试剂
（一）实验器材
（1）试管 （2）水浴箱 （3）试管架 （4）洗耳球 3支 1台 1个 1个
（5）微量五档可调移液器 2支
（6）刻度吸量管（5ml） 1支
（7）半自动生化分析仪 1台
四、实验内容
1、加样
加入物 标准液 血清 工作液 测定管 （T） — 10 μL 1.0 mL 标准管 （S） 10 μL — 1.0 mL
2、振荡混匀，使用URIT-800半自动
生化分析仪测定血清中尿素氮的含量。
非肾脏方面：最重要原因是失水，引起血液浓缩，使肾血
流量减少，肾小球滤过率降低而使血液中尿 素潴留。常见于大量呕吐、腹泻、高热、严 重大面积烧伤、大量出血。
2、尿素含量降低偶见于：
偶见于严重的肝病，如急性黄色肝萎缩、肝硬化等。
一、实验目的
1．掌握血清尿素氮测定的方法、临 床意义。 2．掌握URIT-800半自动生化分析仪 的使用。
3、记录 （参考值：2.14～7.85mmol/L）
五、结果分析
【参考值】： 2.14～7.85mmol/L
谷氨酸脱氢酶(Glutamate dehydrogenase,GDH)试剂盒说明书
货号：QS1803 规格：50管/48样谷氨酸脱氢酶（Glutamate dehydrogenase，GDH）试剂盒说明书紫外分光光度法正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：GDH（EC 1.4.1.2）广泛分布于植物中，和谷氨酸合成酶（GOGAT）共同参与谷氨酸的合成，在氨同化和转化成有机氮化合物的代谢中起重要作用。
测定原理：+、α-酮戊二酸和NADH，生成谷氨酸和NAD+，引起340nm吸光度下降。
通过GDH催化NH4测定340nm吸光度的下降速率，计算GDH活性。
自备实验用品及仪器：紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体60mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1支，4℃保存；试剂三：粉剂×1支，4℃保存；试剂四：粉剂×1支，-20℃保存。
粗酶液提取：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。
8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、样本测定（1）工作液的配制：临用前将试剂二、三、四转移到试剂一中混合溶解，置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴5min；现配现用；（2）取0.05mL样本和1mL工作液于1mL比色皿中，混匀，加工作液的同时开始计时，在340 nm波长下记录20秒时的初始吸光度A1和5分20秒时的吸光度A2，计算ΔA=A1-A2。
血清尿素氮谷氨酸脱氢酶测定法
血清尿素氮（BUN）谷氨酸脱氢酶测定法1.实验原理脲酶-谷氨酸脱氢酶（Urease-GLDH）连续监测法。
尿素被脲酶水解产氨。
在NADH的存在下，氨和α-酮戊二酸反应生成谷氨酸，NADH同时被氧化成NAD ＋。
NADH的减少和样品中尿素浓度成正比。
本法是连续监测法。
脲酶尿素+ 2H2O 2 NH4＋+ 2 HCO3－谷氨酸脱氢酶NH4＋+α-酮戊二酸+NADH L-谷氨酸+NAD＋+H2O2 标本：2.1 病人准备：血清无特殊要求。
要留取24小时尿样。
2.2 类型：血清、血浆（不可使用肝素铵）、新鲜尿液。
无溶血和凝块的血清，如果必须使用血浆，建议使用无铵离子的抗凝血剂，如EDTA和肝素钠。
用新鲜尿液作样品时，用蒸馏水作1:100稀释。
3. 标本存放：血清或血浆稳定性：4～25℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1年。
尿液稳定性：20～25℃保存可稳定2天；4～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1个月。
4. 标本运输：常温条件下保存运输。
5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。
6. 实验材料6.1 试剂：申能尿素测定试剂盒（142 3107170 1 试剂1：6×64ml＋试剂2：6×16ml）6.1.1 试剂组成试剂1：Tris缓冲液pH7.8 120mmol/Lα-酮戊二酸7mmol/LADP 0.6mmol/L谷氨酸脱氢酶≥1000U/L脲酶≥6000U/L试剂2：NADH 0.25mmol/L6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存试剂保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
6.1.5 注意事项：此试剂为体外诊断用。
不要入口，吞下有害。
保护剂为叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜，与下水管中的铅反应形成爆炸性化合物，即使只含有少量的叠氮钠，如果排向下水道请用大量的水冲洗。
BUN检测标准操作规程
BUN检测标准操作规程1 目的建立BUN检测标准操作规程，确保其操作规范化。
2 适用范围适用于迈瑞BS200生化仪BUN检测的操作。
3 引用文件卫生部<<全国临床检验操作规程>>第三版第四篇临床化学检验第六章第一节463页。
浙江省<<临床检验管理与技术规程>>第四篇第七章第一节515页4 原理及试剂1）试剂厂家:深圳迈瑞脲酶2）原理:尿素+2H2O + --------→2NH4+CO2谷氨酸脱氢酶α-酮戊二酸+NH4+NADH ------------→L-谷氨酸+NAD+ + H2O 通过上述二步反应，使NADH氧化成NAD+，从而引起在波长340nm处吸光度下降，在固定间隔时间内吸光度下降值正比于样本中尿素氮含量。
3）试剂组成:尿酸试剂成分成份成份实验浓度R1 Tris缓冲液120mmol/LADP 750mmol/L脲酶≥40KU谷氨酸脱氢酶≥0.4KUR2 NADH 1.2mmol/Lα-酮戊二酸25mmol/L5 标本采集与处理：血清于2℃-8℃避光保存可稳定5天，或冰冻保存，但不能反复冻融。
6 测定程序6.1 测定器材：全自动生化分析仪（迈瑞BS200）。
6.3.1开机前检查6.3.1.1检查电源，确认电源有电并且能够提供正确的电压。
6.3.1.2检查分析部、操作部和输出部的通讯线和电源线，确认已连接且没有松动。
6.3.1.3检查打印纸是否足够。
6.3.1..4确认试剂盘的39号位置已放置足够的强化清洗液，40号位置已放置足够的蒸馏水。
6.3.1.5检查去离子水的连接、废液的连接、注射器的连接是否漏液。
6.3.1.6检查加样针是否弯曲、有污物、挂液。
6.3.1.7检查搅拌针是否弯曲、有污物。
6.3.1.8检查去离子水桶内是否有足够的去离子水。
6.3.1.9检查废液桶是否清空。
6.4开机系统通上电后，按下列顺序依次打开电源：分析部主电源、分析部电源、操作部显示器电源、操作部主机电源、打印机电源。
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血清尿素氮BUN谷氨酸脱氢酶测定法作业指导书
1.实验原理
脲酶-谷氨酸脱氢酶（Urease-GLDH）连续监测法。
尿素被脲酶水解产氨。
在NADH的存在下，氨和α-酮戊二酸反应生成谷氨酸，NADH同时被氧化成NAD＋。
NADH的减少和样品中尿素浓度成正比。
本法是连续监测法。
脲酶
尿素+ 2H2O 2 NH4＋+ 2 HCO3－
谷氨酸脱氢酶
NH4＋+α-酮戊二酸+NADH L-谷氨酸+NAD＋+H2O
2 标本：
2.1 病人准备：血清无特殊要求。
要留取24小时尿样。
2.2 类型：血清、血浆（不可使用肝素铵）、新鲜尿液。
无溶血和凝块的血清，如果必须使用血浆，建议使用
无铵离子的抗凝血剂，如EDTA和肝素钠。
用新鲜尿液作样品时，用蒸馏水作1:100稀释。
3. 标本存放：血清或血浆稳定性：4～25℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1年。
尿液稳定性：20～25℃保存可稳定2天；4～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1个月。
4. 标本运输：常温条件下保存运输。
5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。
6. 实验材料
6.1 试剂：申能尿素测定试剂盒（142 3107170 1 试剂1：6×64ml＋试剂2：6×16ml）
6.1.1 试剂组成
试剂1：
Tris缓冲液pH7.8 120mmol/L
α-酮戊二酸7mmol/L
ADP 0.6mmol/L
谷氨酸脱氢酶≥1000U/L
脲酶≥6000U/L
试剂2：
NADH 0.25mmol/L
6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存
试剂保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
6.1.5 注意事项：此试剂为体外诊断用。
不要入口，吞下有害。
保护剂为叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜，与下水管中的铅反应形成爆炸性化合物，即使只含有少量的叠氮钠，如果排向下水道请用大量的水冲洗。
应采取必要的预防措施使用试剂。
6.2 校准品：使用DiaSys公司提供的TruCal U校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品
和质控品.SOP文件。
6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。
7. 仪器：奥林巴斯AU1000生化分析仪
8. 操作步骤
8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU1000生化分析仪项目测定参数.SOP文件
8.2 仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU1000生化分析仪操作规程.SOP文件
9. 检验结果的判断与分析
10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。
11. 计算方法：以TruCal U复合校准品尿素氮校准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以mmol/L报告。
将尿素量乘以
系数2.8可以换算成尿素氮量；将尿素氮量乘以系数0.357可以换算成尿素量。
手工测定计算方法为：
Au
尿素氮浓度（mmol/L）＝×校准液浓度
As
12. 参考值范围
血清/血浆[1]
成人（mmol/L）
全球 2.8～7.2
女性<50岁 2.6～6.7
女性>50岁 3.5～7.5
男性<50岁 3.2～7.3
男性>50岁 3.0～9.2
儿童
1～3岁 1.8～6.0
4～13岁 2.5～6.0
14～19岁 2.9～7.5
尿素/肌酐比率[1]25～40[(mmol/L)/(mmol/L)]
尿液[2]0.43～0.72mol/d
（注：各实验室应有自己的参考范围。
）参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。
根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。
13. 临床意义：尿素是蛋白质分解代谢的含氮终产物。
高尿素血症或氮血症表现为血液中尿素水平升高。
鉴别肾前和肾后氮血症时可以同时检测尿素和肌酐。
因脱水、蛋白质代谢增加、皮质醇治疗或肾脏灌注减少等引起的肾前氮血症，表现为尿素水平升高而肌酐水平正常。
由泌尿管道阻塞引起的肾后氮血症，表现为尿素和肌酐水平都升高，但肌酐升高程度较小。
发生肾病时，肾小球滤过作用明显下降或蛋白质摄入量大于200 g/天都会导致尿素浓度升高。
尿素氮的检测用于诊断和治疗某些肾脏疾病和代谢紊乱。