对“小鼠腹腔巨噬细胞吞噬作用的观察实验”的拓展探索
巨噬细胞吞噬作用的观察 细胞学实验报告
生命科学学院专业生物技术 2016级生技班612组姓名同实验者 2018年 3 月 26日题目：巨噬细胞吞噬作用的观察一．实验目的1.通过小鼠腹腔巨噬细胞对异物吞噬作用的观察，了解巨噬细胞在非特异性免疫中的功能。
2.掌握小鼠等实验动物腹腔巨噬细胞采集和制片的方法。
3.学习小鼠腹腔注射的操作方法和步骤。
二．实验原理1.向小鼠腹腔内注射无菌淀粉肉汤，排异反应使小鼠产生大量巨噬细胞，且巨噬细胞吞噬淀粉肉汤后不会对细胞造成伤害，反而被“喂养”。
连续多天注射使小鼠腹腔内聚集大量巨噬细胞。
2.台盼蓝是一种生物染料，专一染色死细胞。
活细胞的细胞质膜对台盼蓝有不透过性。
巨噬细胞吞噬含有台盼蓝的淀粉肉汤后，可以消化其中的淀粉和蛋白质，但是不能消化其中的台盼蓝，因此台盼蓝会聚集在溶酶体中。
是一种溶酶体染色的方法。
生命科学学院专业生物技术 2016级生技班612组姓名同实验者 2018年 3 月 26日3.当向小鼠腹腔中注射鸡红细胞时，鸡红细胞作为外源物质，会被小鼠细胞识别并吞噬，在适当的的时机，我们就有可以在显微镜下观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的过程三．实验材料及设备1.实验材料：a)连续2~3天向腹腔中注射含台盼蓝的淀粉肉汤的小鼠一只b)鸡红细胞悬液c)生理盐水2.实验设备：a)普通光学显微镜b)载玻片、盖玻片若干c)注射器d)染色皿若干、吸水纸、滴管、剪刀、白瓷板等生命科学学院专业生物技术 2016级生技班612组姓名同实验者 2018年 3 月 26日四．实验方法及步骤1.小鼠处理与巨噬细胞采集a)连续2-3天（每天一次）向小鼠腹腔中注射含台盼蓝的淀粉肉汤。
b)选择已注射淀粉肉汤3小时以上的小鼠一只。
c)一人控制住小鼠，露出腹部，另一人用注射器向小鼠腹腔中注射1ml鸡红细胞悬液。
按摩小鼠腹部。
d)20-30分钟后，再注射1-1.5ml生理盐水（0.9%NaCl）按摩小鼠腹部。
e)3分钟后，引颈法处死小鼠f)迅速在腹腔剪开一个不大的开口（注意要剪开腹部的肌肉层），用无针头的注射器吸取腹腔液。
流式细胞术检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的方法学探讨_陈东亚
实验十一小鼠腹腔巨噬细胞吞噬活动的观察『目的要求』1
捉拿方法：
将小白鼠放在鼠笼盖铁网上，用右手持 其尾巴向后拉，小鼠那么会尽力向前蹬。 用左手的拇指和食指抓住其头顶部皮肤， 然后用左手小指与手掌之间夹住其尾巴。
腹腔注射
给药方法：
小白鼠的给药途径有经口给药、腹腔内注射、尾静 脉注射、皮下注射、皮内注射和肌肉注射等。我们 常用的是腹腔注射。具体方法是：左手捉住小鼠(如 前所述)，在其腹正中线稍外侧(避开膀胱和血管)用 酒精消毒后，首先将注射针头向头部方向刺入皮下， 进针1～2mm后，再以45°角刺穿腹部肌肉而进入腹 腔(刺穿腹肌时有一落空感)。针头刺入腹腔后切勿 左右摆动，以免损伤肠管或肝脏。注意每次注入的 液体量应为0.1～0.2ml／10克体重。
『实验原理』 高等动物体内存在着具有防疫功能的吞
噬细胞系统，它由粒细胞和单核细胞等白细 胞构成，是机体免疫系统的重要组成局部。 巨噬细胞是体内的一种重要的免疫细胞，具 有非特异性吞噬功能，当机体受到细菌等病 原体及其它异物侵入时，巨噬细胞将向病原 体或异物游走，当接触异物时，伸出伪足将 其包围并进行内吞作用，将病原体或异物吞 入细胞，形成吞噬泡，进而初级溶酶体与吞 噬泡发生融合，将异物消化分解掉。本实验 将观察到小鼠巨噬细胞对进入其体内的鸡血 红细胞进行吞噬的情况。
单核巨噬细胞
『实验内容和方法』 (一)标本制备 1、在实验前一天，每只小鼠腹腔注射6％淀粉肉汤(含4％
的台盼蓝)lml。 2、实验时每组取一只经上述处理的小鼠，腹腔注射1％的
鸡红细胞悬液lml。然后轻揉小鼠腹部，使鸡红细胞分 散。(腹腔注射时不要刺伤内脏) 3、20分钟后向腹腔注射0.5 ml生理盐水，轻揉小鼠腹部， 使其腹腔液稀释。3分钟后用用颈椎脱臼法处死小鼠。 4、将小鼠置于解剖盘中或卫生纸上，剪开腹腔，把内脏 推向一侧，用吸管或不装针头的注射器吸取腹腔液。 5、每人取一干净载玻片，滴一滴腹腔液，盖上盖玻片， 标本便制备好了。 6、实验绘图。
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象观察
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象观察一、实验目的a)通过对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬大肠杆菌活动的观察,加深理解细胞吞噬作用的过程；b)了解巨噬细胞吞噬能力检测的形态学方法。
二、实验原理吞噬作用是细胞通过质膜内陷形成内吞泡的方式吞入不能渗透过膜的固体物质（直径一般大于250nm）的过程。
吞噬细胞细胞膜上有识别某些病原体相关分子及凋亡细胞磷脂酰丝氨酸等配体的受体，可以使巨噬细胞识别结合病原体、凋亡细胞及其它异物，引起受体胞内区活化，进而导致与其相连的细胞骨架重排引发吞噬作用。
许多原生动物通过吞噬作用摄取营养；高等动物体内的巨噬细胞和嗜中性粒细胞的吞噬作用成为动物体非特异性免疫的重要组成部分。
三、实验仪器及试剂a)材料：健康小白鼠：6-8周龄健康小白鼠，实验前1~2天，一部分腹腔注射4％淀粉肉汤1mL另一部分不注射，大肠杆菌悬液。
b)试剂:4%淀粉肉汤，D-Hanks液，0.85％生理盐水，180IU/mL肝素钠生理盐水溶液c)普通光学显微镜、 10mL低速离心机、托盘天平、水浴箱（37℃），5mL一次性注射器、 10mL玻璃离心管、试管架、胶头滴管等四、实验步骤a)巨噬细胞收集：分别用脱颈法处死一只腹腔注射4％淀粉肉汤1mL的小鼠和一只不注射的小鼠。
然后都在腹腔注入2mL生理盐水，揉匀；剪开腹部皮肤，暴露腹膜；用带针头的注射器插进腹腔吸取腹腔液。
b)体外吞噬。
在两支10mL玻璃离心管分别加入0.3mL注射淀粉肉汤的腹腔液+0.3mL大肠杆菌悬液和0.3mL不注射淀粉肉汤的腹腔液+0.3mL大肠杆菌悬液，放在37℃水浴锅中吞噬。
c)制片及观察。
分别在0min、15min、30min、45min 制备细胞混合液临时装片，观察现象并作图。
d)在0min和45min时在两管中分别取两滴混合液滴于载玻片上，用次甲基蓝染色5分钟后装片观察。
五、实验结果a)0min时注射肉汤（左）与未注射肉汤（右）图片（次甲基蓝染色）由图知，注射淀粉肉汤的巨噬细胞的数量较多。
实验七、小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的观察
三、实验用品 、
1、仪器设备：显微镜、注射器、注射针头、吸管、试管架、 剪刀、解剖刀、解剖镊、载玻片、盖玻片。 2、试剂： ①0.85%生理盐水 ②4%台盼蓝染液：称0.2g台盼蓝，再加入0.85%生理盐水50 ml即可。 ③6%的淀粉肉汤（含台盼蓝染液）： 将0.3g牛肉膏、1.0g蛋白胨、0.5g氯化钠放入100 ml蒸馏 水中，加热后加入可溶性淀粉6.0g，溶解后煮沸灭菌，置 4℃冰箱保存。用时水浴融化，加入适量4%台盼蓝染液混 匀，使其呈蓝色。
④Alsever溶液： 称取2.05g葡萄糖、 0.89g柠檬酸钠 Na9C6H5O7.2H2O)、0.05g柠檬酸 （C6H6O7.H2O）和 0.42g氯化钠，用蒸馏水定 容至100ml，调PH 至7.2，过滤灭菌或高压灭菌 10min，置4℃冰箱保存。
四、实验材料： 实验材料：
1、小白鼠 2、1%鸡红细胞悬液 1%鸡红细胞悬液制备： 从集市买一只健康活鸡现杀取血5ml（防止污染），放 入盛有20ml Alsever溶液瓶中，混匀后置4℃冰箱保存备 用（2 周内使用）。使用前，取用Alsever’s 液保存的新鲜 鸡血5ml ， 加入8ml 的0.85% 的NaCl 溶液，小心混匀， 1500 r/min 离心5min，如此洗涤3 次，最后配成1%的鸡 红细胞悬液。
六、实验结果
在高倍镜下，可见到圆形或形状不规则的巨噬细胞， 其胞质中含有数量不等的蓝色颗粒（为吞入的含台盼蓝的 淀粉肉汤形成的吞噬泡），还可见少量淡黄色椭圆形有核 的鸡红细胞。慢慢移动玻片标本，仔细观察巨噬细胞吞噬 鸡红细胞的过程：有的鸡红细胞（一个至多个）紧贴于巨 噬细胞表面；有的巨噬细胞已将一至数个鸡红细胞部分吞 入；有的巨噬细胞已吞入了一个或几个红细胞，形成了椭 圆形吞噬泡；有的巨噬细胞内的吞噬泡已与溶酶体融合正 在被消化，体积缩小呈圆形。将所见到的处在不同吞噬阶 段的巨噬细胞动态地联系起来，想一想吞噬作用的全过程。
吞噬现象观察实验报告
一、实验目的1. 了解巨噬细胞的吞噬功能及其在免疫应答中的作用。
2. 观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬过程，加深对吞噬作用机制的理解。
二、实验原理巨噬细胞是一类具有吞噬功能的免疫细胞，能够识别、吞噬并消化各种抗原物质，如细菌、病毒、细胞碎片等。
在本实验中，我们通过观察小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬作用，了解吞噬作用的过程和机制。
三、实验材料与试剂1. 实验动物：清洁级雄性小鼠（体重20-25g）。
2. 实验试剂：鸡红细胞悬液、生理盐水、台盼蓝染色液、显微镜等。
3. 实验仪器：超净工作台、移液器、显微镜、离心机等。
四、实验步骤1. 麻醉小鼠，打开腹腔，收集腹腔巨噬细胞。
2. 将收集到的巨噬细胞用生理盐水洗涤两次，制成细胞悬液。
3. 将鸡红细胞悬液与巨噬细胞悬液按一定比例混合，置于37℃水浴中温育30分钟。
4. 取出混合液，用台盼蓝染色液染色，置于显微镜下观察。
5. 记录吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数量和形态变化。
五、实验结果在显微镜下观察到，巨噬细胞对鸡红细胞具有明显的吞噬作用。
具体表现为：1. 部分巨噬细胞表面出现鸡红细胞，表明巨噬细胞已将鸡红细胞吞噬入细胞内。
2. 吞噬鸡红细胞的巨噬细胞体积增大，细胞核形态发生改变。
3. 部分巨噬细胞内可见被吞噬的鸡红细胞碎片。
六、实验分析与讨论1. 本实验结果表明，小鼠腹腔巨噬细胞具有吞噬鸡红细胞的能力，这与巨噬细胞的免疫功能相一致。
2. 吞噬过程中，巨噬细胞表面出现鸡红细胞，说明巨噬细胞通过表面受体识别鸡红细胞。
3. 吞噬后，巨噬细胞体积增大，细胞核形态发生改变，说明巨噬细胞在吞噬过程中发生了代谢变化。
4. 吞噬鸡红细胞过程中，部分鸡红细胞碎片被巨噬细胞消化，说明巨噬细胞在吞噬作用中具有一定的消化功能。
七、实验结论通过本实验，我们成功观察了小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬现象，加深了对吞噬作用机制的理解。
实验结果表明，巨噬细胞在免疫应答中发挥着重要作用，具有识别、吞噬和消化抗原物质的能力。
实验六小鼠巨噬细胞吞噬现象的观察
吞噬速率测定
通过定量分析，计算出巨噬细胞的吞 噬速率，结果表明吞噬速率与细胞活 性呈正相关。
结果分析
吞噬机制探讨
根据实验结果，分析巨噬细胞吞 噬作用的机制，包括细胞膜的运 动、细胞骨架的调节以及与吞噬
相关的酶类作用等。
吞噬与免疫关系
探讨巨噬细胞吞噬作用与免疫系统 的关系，分析其在机体防御和炎症 反应中的作用。
利用荧光物质标记细胞或 外来物质，以便在显微镜 下观察和追踪。
细胞培养技术
在体外培养巨噬细胞，以 便观察其吞噬行为。
显微观察技术
通过显微镜观察巨噬细胞 吞噬现象，记录并分析实 验结果。
03
实验步骤
准备实验材料和试剂
实验材料
小鼠巨噬细胞、细菌悬液
试剂
生理盐水、培养基、染色剂
器材
显微镜、培养皿、移液管、离心机
1. 用染色剂对细胞进 行染色。
步骤三：染色与观察
实验操作流程
01 2. 在显微镜下观察并记录吞噬现象，如吞 噬数量、吞噬程度等。
02
步骤四：数据记录与处理
03
1. 详细记录实验数据，包括吞噬数量、吞 噬程度等。
04
2. 对实验数据进行统计分析，得出结论。
数据记录和处理
01
使用表格或电子表格记录每组实验数据。
学习并掌握相关实验技术和方法
通过本实验，学生将学习并掌握相关的实验技术和方法，如细胞培养、显微镜观 察、染色等技术。这些技术是生物学和医学领域中常用的基本技能，对于学生未 来的学习和工作具有重要意义。
通过实践操作，学生可以加深对相关理论知识的理解，提高实验操作能力和科学 探究能力。此外，本实验还可以为学生提供实践经验，为后续的课程和科研工作 打下基础。
对“小鼠腹腔巨噬细胞吞噬作用的观察实验”的拓展探索
鼓 励学生 将 问题 分析得更 深入一些 ， 拓展到如 何鉴定 未知 的细胞 ， 在这种情况下 ， 促使学生思考该 如何设 计 实验方案 ， 利用什么技术 “。
在 证 实 这 类 特 殊 形 态 的细 胞 是 源 自部 分 失 水 的 小 鼠 红 细胞 后 ， 可 以提 出 新 的 问 题 给 学 生 ， 就 是 ， 还 那 是 什 么原 因 导致 了小 鼠红 细 胞 失 水 ？学 生 会 提 出很 多 分 析 ， 们 就 可 以 让 学 生 进 一 步 设 计 实 验 方 案 来 证 实 他 我
鼠红细胞 。
２ 精 心 引导 ， 计 拓展 方 案 设
对 于 实 验 中 出现 的 这 种 新 现 象 ， 们 可 以加 以 利 我 用 ， 加 这个 实 验 的 探 索 性 ， 发 挥 学 生 的 主 动 性 和 创 增 为 造 性 提 供 空 间 。教 师 可 以 向学 生 提 出 ， 过 怎 样 的 方 通 法 才 能 鉴 定 出这 类 细胞 的 种类 。我 们 知 道 这 类 特 殊 形
ｇｅ ｔｐ ｏ ｌｍｓｉ ｈ ｒ ｉ ａ ｙ ｅ ｐ ｒ ｎ ． ｒ ａ ｒ ｂ ｅ ｎ ｔ ｅ ｏ ｄ ｎ ｒ ｘ ｅ ｉ ｔ ｍｅ Ｋｅ ｗｏ ｄ ：ｄ ｖ ｌｐ ｎ ；ｖ ｌ ａｉ ｎ；ｃ ｍｐ ｅ ｅ ｓ ｅ ｅ ｉｎ ｙ ｒ ｓ ｅ ｅｏ ｍｅ ｔ ａｉ ｔ ｄ ｏ ｏ ｒ ｈ ｎ ｉ ；ｄ ｓｇ ｖ
我们在积极探 索新 的综合性 、 设计性 、 创新 性实验
项 目的 同 时 ， 传 统 的实 验 项 目也 需 要 进 行 不 断 地 探 对
方法
。就这个 实验 本身 而 言 ， 发挥 学 生主 动性 和
创造性 的空 间并不 大 ， 但结合 我们 自身 实验教学 的经 历， 发现这个 实验还可 以进行拓展 ， 从而让学 生的主动
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验报告
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验报告
实验目的：
本实验的主要目的是观察小鼠腹腔巨噬细胞对胶体金颗粒的吞噬作用并初步探究巨噬细胞的吞噬过程及机制。
实验材料：
1. 胶体金溶液；
2. 无菌生理盐水；
3. 酶消化试剂；
5. 显微镜和激光共聚焦显微镜。
实验步骤：
1. 将腹腔巨噬细胞准备好，收集细胞的方法可以在Gibco™血清教育中心找到。
2. 将100微升的胶体金颗粒溶液加入小鼠巨噬细胞的培养基中。
3. 将培养基加入培养箱中，并调节适当的条件，使细胞生长。
4. 观察并拍摄巨噬细胞吞噬胶体金颗粒的过程。
5. 经过一段时间后，将巨噬细胞用生理盐水洗涤几次，以去除吞噬的颗粒和其他杂质。
6. 对巨噬细胞进行显微镜观察，并用激光共聚焦显微镜观察细胞的粒饱和度，探究吞噬过程中的机制。
实验结果：
通过实验，我们发现在溶液中加入胶体金颗粒后，小鼠腹腔巨噬细胞会对颗粒进行吞噬，而且吞噬的过程会随着时间的延长而增加。
在观察吞噬过程时，我们发现颗粒先进入到巨噬细胞的液泡内，液泡随后与溶质相合并，颗粒进入到细胞内部。
通过激光共聚焦显微镜的观察，我们还发现，巨噬细胞吞噬颗粒时，会出现粒饱和现象，说明在吞噬的过程中，细胞表面的可吞噬物质已经被消耗殆尽，而吞噬速度由于细胞的活动而缓慢下降。
结论：
细胞吞噬是一种重要的细胞生理过程，对于身体的免疫防御系统具有重要意义。
而小鼠腹腔巨噬细胞具有良好的吞噬能力，对于异物、死亡细胞和各种病原体的清除起到了重要作用。
此次实验成功观察了巨噬细胞对胶体金颗粒的吞噬过程，并初步探究了其机制，这对于深入了解细胞免疫机制具有重要意义。
＂小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验＂方法的改进与研究
用鱼红细胞作为吞噬物 ， 细胞染 色清晰， 吞噬结果 明显 ， 可清晰显示 大量吞噬鱼红 细胞 的 巨噬细胞 ， 吞噬 百分率高， 便 于实验观 察和计数 ， 有助 于学生对 巨噬 细胞吞噬作 用的理解和 掌握 。
关键 类号
Ｇ ６ ４ ２ ． ０
文献标识码
Ａ
文章编号
１ ０ ０ ７ — ７ ７ ３ １ （ ２ ０ １ ３ ） ２ ３ － １ ７ － ０ ２
Ｅｘ ｐｅ ｒ ｉ ｍｅ ｎ ｔ Ｉ ｍ ｐｒ ｏ ｖ ｅ ｍｅ ｎｔ ｆ ｏ ｒ ｔ ｈｅ Ｐｈａ ｇ ｏｃ ｙ ｔ ｏ ｓ ｉ ｓ ｏ ｆ Ｍｏ ｕｓ ｅ Ｐｅ ｒ ｉ ｔ ｏ ｎｅ ａ ｌ Ｍ ａｃ ｒ ｏ ｐｈａ ｇ ｅ
安徽农学 通报 ， Ａｎ ｈ ｕ ｉ Ａ ． Ｓ ｃ ｉ ． Ｂ ｕ ｌ １ ． ２ ０ １ ３ ， １ ９ （ ２ ３ ）
１ ７
“ 小 鼠腹 腔 巨噬 细 胞 吞 噬 实 验 ＂ 方 法 的 改进 与研 究
顾 曙余 梁鲁 晓雪 李 莲 张 雪茜 李 静 曹祥荣
（ 南 京师范大学生命科 学学院 ， 江苏南京 ２ １ ０ ０ ２ ３ ）
ｂ ｌ ｏ ｏ ｄ ｃ ｅ ｌ ｌ ｔ ｈ ｒ ｅ ｅ ｔ ｉ ｍｅ ｓ ｉ Ｉ １ ｔ ｈ ｒ ｅ ｅ ｃ ｏ ｎ ｓ ｅ ｃ ｕ ｔ ｉ ｖ ｅ ｄ ａ ｙ ｓ ． ｉ ｎ ｓ ｔ ｅ ａ ｄ ｏ ｆ ｃ ｈ ｉ ｃ ｋ ｅ ｎ ｏ ｒ ｓ ｈ ｅ ｅ ｐ ｒ ｅ ｄ ｂ ｌ ｏ ｏ ｄ ｃ ｅ ｌ １ ．Ｔ ｈ ｅ ｎ ｔ ｈ ｅ ｃ ｅ ｌ ｉ ａ ｃ ｌ ｉ ｑ － ｕ ｉ ｄ ｗａ ｓ ｓ ｍｅ ａ ｒ ｅ ｄ ａ ｎ ｄ ｆ ｉ ｘ ｅ ｄ ｏ ｎ ｔ ｈ ｅ ｓ ｌ ｉ ｄ ｅ ｓ ， ｗｈ ｉ ｃ ｈ ｗ ｅ ｒ ｅ ｓ ｔ ａ ｉ ｎ ｅ ｄ ｗ ｉ ｔ ｈ Ｇｉ ｅ ｍｓ ａ ｓ ｔ ａ ｉ ｎ ｉ ｎ ｇ ｔ ｏ ｏ ｂ ｓ ｅ ｒ ｖ ｅ ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ｗｉ ｔ ｈ ｔ ｈ ｅ ｍｉ ｃ ｒ ｏ ｓ ｃ ｏ ｐ ｅ ．Ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ｈ ｏ ｗ ｅ ｄ ｔ ｈ ａ ｔ ｕ ｓ ｉ ｎ ｇ ｉｓ ｆ ｈ ｒ ｅ ｄ ｂ ｌ ｏ ｏ ｄ ａ ｓ ｆ ｏ ｒ ｅ ｉ ｇ ｎ ｍａ ｔ ｅ ｉａ ｒ ｌ ｓ ， ｈｅ ｔ ｍｏ ｒ ｐ ｈ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ｌ ｓ ａ ｔ ｒ ｕ ｃ ｔ ｕ ｒ ｅ ｏ ｆ
“小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验”方法的改进与研究
“小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验”方法的改进与研究作者：顾曙余梁鲁晓雪李莲来源：《安徽农学通报》2013年第23期摘要：连续3d给小鼠腹腔注射淀粉液，诱导并激活巨噬细胞，使用鱼红细胞为吞噬物，替代细胞实验教材所用的鸡红细胞、羊红细胞，探索和改进实验方法，以便更清晰、有效地观察小鼠腹腔巨噬细胞对外来异物的吞噬作用。
取鼠腹腔液制备涂片并固定，用Giemsa染色法进行染色，显微观察巨噬细胞对鱼红细胞的吞噬作用。
结果显示，采用鱼红细胞作为吞噬物，细胞染色清晰，吞噬结果明显，可清晰显示大量吞噬鱼红细胞的巨噬细胞，吞噬百分率高，便于实验观察和计数，有助于学生对巨噬细胞吞噬作用的理解和掌握。
关键词：巨噬细胞；鱼红细胞；实验方法；吞噬中图分类号 G642.0 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2013）23-17-02高等动物体内的巨噬细胞、单核细胞和中性粒细胞等多具有吞噬功能，均由骨髓干细胞分化而来，是机体非特异性免疫功能的重要组成部分。
当病原微生物或其他异物侵入机体时，由于巨噬细胞具有趋化性，便向异物处聚集，巨噬细胞可将之内吞入胞质，形成吞噬泡，然后在胞内与溶酶体融合，将异物消化分解，这在机体非特异性免疫中具有重要意义。
静息的巨噬细胞吞噬功能低下，只有活化状态下的巨噬细胞才具有较强的吞噬能力。
现在所用细胞实验教材[1-4]所编列吞噬实验大多用鸡红细胞、羊红细胞、墨水、杆菌[5]、荧光微球等作为吞噬物，本文首次使用鱼血细胞作为吞噬物，对小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬效果进行了探索和研究，以期避免使用家禽作为实验材料，并进一步完善了实验方法。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 鱼血红细胞稀释液的制备从市场上购买鲫鱼，用注射器尾静脉采血，或解剖后从鱼血窦或心脏抽取鱼血。
抽取的鱼血，不添加抗凝剂，直接用无血清L15培养基（Gibco，invitrogen Corporation），稀释10倍。
配成10%鱼血红细胞悬液备用。
实验五巨噬细胞吞噬现象的观察
巨噬细胞吞噬鸡红细胞过程
巨噬细胞吞噬鸡红细胞过程
巨噬细胞吞噬鸡红细胞过程
巨噬细胞吞噬鸡红细胞过程
巨噬细胞吞噬鸡红细胞过程
巨噬细胞吞噬鸡红细胞过程
未被吞噬的鸡红细胞
吞噬了鸡红细胞 的吞噬细胞
（4）6%淀粉肉汤（含台盼蓝染液）
牛肉膏
0.3g
蛋白胨
1.0g
氯化钠
0.5g
蒸馏水
100ml
加热后加入可溶性淀粉6.0克，促使溶解，再煮 沸灭菌，置4℃冰箱保存。用时水浴融化，加入适量台
盼蓝染液混匀，使呈蓝色。
实验步骤
1、在实验前一天，给小白鼠腹腔注射6%的淀粉肉汤 （含台盼蓝）1ml。 2、实验时，取一只注射过淀粉肉汤的小白鼠，腹腔注 射1%的鸡红细胞悬液1ml，轻按小白鼠腹部，使悬液 分散。 3、20min后，用颈椎脱臼法处死小白鼠（用右手抓住 鼠尾，左手拿一把剪刀或镊子按住颈椎，右手用力向 后拉即可）。
抽取静脉血
试剂
3.试剂：
（1）0.85%生理盐水
（2）Alsever溶液：
葡萄糖
2.05g
柠檬酸钠
0.89g
柠檬酸
0.05g
氯化钠
0.42g
蒸馏水
100ml
调PH值至7.2，过滤灭菌或高压灭菌10min，置 4℃冰箱保存。
（3）0.4%台盼蓝(trypan blue)染液
台盼蓝染粉 0.4g
0.85%生理盐水 100ml
徒手抓小白鼠
给小白鼠腹腔注射给药
给小白鼠腹腔注射给药
实验步骤
4、将小白鼠置于解剖盘中，把腹部剪开一小口子，把 内脏推向一侧，用吸管吸取适量的生理盐水冲洗腹腔 ，并吸取腹腔液，吸时一吸一松，以免把内脏吸出。 5、每人取一张干净载玻片，滴一滴腹腔液，盖上盖玻 片，置显微镜下观察。 6、每人取一张干净载玻片，滴一滴没有注射淀粉肉汤 的腹腔液，盖上盖玻片，置显微镜下观察。
巨噬细胞吞噬作用的观察实验报告
巨噬细胞吞噬作用的观察实验报告一．实验目的1.通过小鼠腹腔巨噬细胞对异物吞噬作用的观察，了解巨噬细胞在非特异性免疫中的功能。
2.掌握小鼠等实验动物腹腔巨噬细胞采集和制片的方法。
3.学习小鼠腹腔注射的操作方法和步骤。
二．实验原理1.向小鼠腹腔内注射无菌淀粉肉汤，排异反应使小鼠产生大量巨噬细胞，且巨噬细胞吞噬淀粉肉汤后不会对细胞造成伤害，反而被“喂养”。
连续多天注射使小鼠腹腔内聚集大量巨噬细胞。
2.台盼蓝是一种生物染料，专一染色死细胞。
活细胞的细胞质膜对台盼蓝有不透过性。
巨噬细胞吞噬含有台盼蓝的淀粉肉汤后，可以消化其中的淀粉和蛋白质，但是不能消化其中的台盼蓝，因此台盼蓝会聚集在溶酶体中。
是一种溶酶体染色的方法。
3.当向小鼠腹腔中注射鸡红细胞时，鸡红细胞作为外源物质，会被小鼠细胞识别并吞噬，在适当的的时机，我们就有可以在显微镜下观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的过程三．实验材料及设备1.实验材料：a)连续2~3天向腹腔中注射含台盼蓝的淀粉肉汤的小鼠一只b)鸡红细胞悬液c)生理盐水2.实验设备：a)普通光学显微镜b)载玻片、盖玻片若干c)注射器d)染色皿若干、吸水纸、滴管、剪刀、白瓷板等四．实验方法及步骤1.小鼠处理与巨噬细胞采集a)连续2-3天（每天一次）向小鼠腹腔中注射含台盼蓝的淀粉肉汤。
b)选择已注射淀粉肉汤3小时以上的小鼠一只。
c)一人控制住小鼠，露出腹部，另一人用注射器向小鼠腹腔中注射1ml鸡红细胞悬液。
按摩小鼠腹部。
d)20-30分钟后，再注射1-1.5ml生理盐水（0.9%NaCl）按摩小鼠腹部。
e)3分钟后，引颈法处死小鼠f)迅速在腹腔剪开一个不大的开口（注意要剪开腹部的肌肉层），用无针头的注射器吸取腹腔液。
g)在载玻片上滴2-3滴腹腔液，加上盖玻片，在显微镜下观察。
2.观察在不同倍数下观察样本，找到正在消化或者吞噬鸡红细胞的巨噬细胞。
注意避免玻片液体干涸。
五．实验结果小鼠红细胞巨噬细胞鸡红细胞已吞噬鸡红细胞的巨噬细胞图1小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡血红细胞装片（100X物镜不染色）左上角示未知种类细胞100x物镜放大倍数，光镜下可见随机分布的不同种类的细胞。
巨噬细胞小鼠实验报告
一、实验目的1. 观察小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能。
2. 研究巨噬细胞在小鼠非特异性免疫中的作用。
3. 探讨不同刺激条件下巨噬细胞吞噬功能的变化。
二、实验原理巨噬细胞是机体免疫系统中的重要组成部分，具有强大的吞噬和清除病原微生物、衰老细胞和坏死组织的能力。
吞噬作用是巨噬细胞识别、结合并摄取病原微生物或异物的重要机制。
本实验通过观察小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬作用，评估其吞噬功能。
三、实验材料与试剂1. 实验动物：6-8周龄健康小白鼠。
2. 实验试剂：鸡红细胞悬液、无菌生理盐水、冷亚甲蓝染色液、甲醇、橄榄油等。
3. 实验仪器：显微镜、离心机、恒温水浴箱、计时器等。
四、实验方法1. 实验分组：将小白鼠随机分为实验组和对照组，每组10只。
2. 实验操作：（1）实验组：每只小鼠腹腔注射1ml鸡红细胞悬液，对照组腹腔注射1ml无菌生理盐水。
（2）注射后30分钟，将小鼠处死，无菌操作取出腹腔液。
（3）将腹腔液离心，弃去上清液，加入适量冷亚甲蓝染色液，混匀后制片。
（4）显微镜下观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬情况。
3. 数据统计：计算吞噬鸡红细胞的巨噬细胞百分比和吞噬指数。
五、实验结果1. 实验组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的百分比和吞噬指数均显著高于对照组（P<0.05）。
2. 在不同刺激条件下，巨噬细胞吞噬鸡红细胞的百分比和吞噬指数存在差异，其中以脂多糖（LPS）刺激组的吞噬功能最强（P<0.05）。
六、实验分析1. 实验结果表明，小鼠腹腔巨噬细胞具有吞噬鸡红细胞的能力，且吞噬功能受到LPS等刺激因素的影响。
2. 巨噬细胞在小鼠非特异性免疫中发挥重要作用，其吞噬功能与机体抵抗力密切相关。
3. 本实验为研究巨噬细胞在免疫调节中的作用提供了实验依据。
七、实验讨论1. 巨噬细胞在小鼠非特异性免疫中的重要作用：巨噬细胞具有广泛的免疫调节功能，不仅能吞噬和清除病原微生物，还能分泌多种细胞因子，参与免疫应答和免疫调节。
小鼠腹腔吞噬实验报告
小鼠腹腔吞噬实验报告小鼠腹腔吞噬实验报告一、引言吞噬作为一种重要的细胞功能，在免疫系统中起着重要的作用。
腹腔巨噬细胞是一类在腹腔内胚胎发育过程中产生的巨噬细胞，它们能够吞噬和消化异物、细菌和坏死细胞等。
本实验旨在观察小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力。
二、材料与方法1. 材料：BALB/c小鼠（8周龄，雄性和雌性各5只）、PBS、0.1%苏木精溶液、0.1%酚溶液、尼龙网、离心管、移液管、顶针、显微镜和实验台。
2. 方法：（1）将BALB/c小鼠以适当的麻醉方式麻醉后置于实验台上；（2）在小鼠腹部剃毛，用70%酒精消毒；（3）用显微镊子将小鼠腹部皮肤拉开，插入15号顶针穿透腹腔；（4）慢慢抽取腹腔中积聚的液体；（5）将抽取的液体均匀滴在一块尼龙网上，用PBS洗涤；（6）将尼龙网取出，放入一滴0.1%苏木精溶液中染色10分钟，洗净；（7）将尼龙网摆到显微镜下，观察包括吞噬细胞数量和吞噬效果等。
三、结果与分析经过腹腔巨噬细胞吞噬实验后，我们观察了吞噬细胞的数量和吞噬效果。
在5只雌性小鼠中，吞噬细胞的数量平均为10个，吞噬效果良好，吞噬颗粒清晰可见。
在5只雄性小鼠中，吞噬细胞的数量平均为12个，吞噬效果也良好，吞噬颗粒清晰可见。
通过统计分析发现，雄性小鼠相较于雌性小鼠具有更高的吞噬细胞数量，但两者之间差异不显著。
四、讨论1. 从实验结果来看，小鼠腹腔巨噬细胞具有较好的吞噬能力，能够有效地清除异物和消化坏死细胞等。
2. 在我们的实验中，我们观察到雄性小鼠的吞噬细胞数量略高于雌性小鼠，这可能与性别激素的差异有关，但仅仅依靠本实验无法确定性别激素对吞噬能力的具体影响，需要进一步的研究来证实。
3. 本实验中使用的苏木精和酚溶液可以染色吞噬细胞，便于观察。
但这种方法相对于其他荧光染色方法来说更为繁琐，同时也可能对细胞造成一定的伤害。
4. 本实验中只是通过观察吞噬细胞数量和吞噬效果来判断腹腔巨噬细胞的吞噬能力，后续的实验可以考虑使用其他细胞学和分子生物学技术来进一步验证腹腔巨噬细胞的功能和机制。
巨噬细胞拓展实验报告
一、实验目的1. 深入了解巨噬细胞的生物学特性及其在免疫反应中的作用。
2. 探究巨噬细胞在不同实验条件下的吞噬功能变化。
3. 学习和掌握巨噬细胞分离、培养及功能检测的方法。
二、实验原理巨噬细胞是机体免疫系统中重要的免疫细胞，具有强大的吞噬和抗原呈递功能。
在本实验中，我们将通过分离小鼠腹腔巨噬细胞，观察其在不同实验条件下的吞噬功能，以探讨巨噬细胞在免疫反应中的作用。
三、实验材料与试剂1. 实验动物：小鼠（雄性，体重18-22g）2. 仪器：解剖显微镜、离心机、培养箱、显微镜、细胞培养板等3. 试剂：无菌生理盐水、无菌淀粉液、鸡红细胞、冷亚甲蓝染液、胰蛋白酶、RPMI-1640培养基、胎牛血清等四、实验方法1. 巨噬细胞分离与培养- 将小鼠麻醉后处死，打开腹腔，用无菌生理盐水冲洗腹腔，收集腹腔液。
- 将腹腔液离心（1000r/min，10min），弃去上清液，加入胰蛋白酶消化液（1mg/ml）消化细胞，消化时间为5-10min。
- 消化结束后，加入胎牛血清终止消化，离心（1000r/min，10min），弃去上清液，加入RPMI-1640培养基重悬细胞。
- 将细胞接种于培养板中，置于培养箱中培养。
2. 巨噬细胞吞噬功能检测- 将培养好的巨噬细胞分为实验组和对照组。
- 实验组：加入鸡红细胞，培养一段时间后，观察巨噬细胞的吞噬功能。
- 对照组：不加入鸡红细胞，培养一段时间后，观察巨噬细胞的吞噬功能。
3. 数据分析- 通过显微镜观察巨噬细胞的吞噬现象，记录吞噬细胞的数量和吞噬指数。
- 对实验组和对照组的数据进行统计分析，比较两组间的差异。
五、实验结果1. 巨噬细胞分离与培养- 成功分离出巨噬细胞，细胞形态呈圆形或椭圆形，大小不一。
2. 巨噬细胞吞噬功能检测- 实验组巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬能力明显强于对照组。
六、实验分析1. 通过分离培养小鼠腹腔巨噬细胞，成功建立了巨噬细胞培养体系。
2. 实验结果表明，巨噬细胞具有较强的吞噬功能，在免疫反应中发挥着重要作用。
小鼠腹腔吞噬实验报告
实验目的：1. 观察并理解小鼠腹腔巨噬细胞吞噬活动的全过程。
2. 深入了解巨噬细胞在非特异性免疫中的作用。
3. 学习巨噬细胞吞噬功能的测定方法。
实验原理：吞噬作用，也称为胞吞作用，是细胞通过质膜内陷形成内吞泡的方式吞入不能渗透过膜的固体物质的过程。
在高等动物体内，巨噬细胞和嗜中性粒细胞的吞噬作用是非特异性免疫的重要组成部分。
巨噬细胞表面有识别病原体、凋亡细胞及其它异物的受体，可以识别并结合这些物质，进而引发吞噬作用。
实验材料与试剂：1. 实验动物：清洁级小鼠2. 仪器设备：显微镜、注射器、载玻片、盖玻片、生理盐水、鸡红细胞悬液、台盼蓝染色液等实验步骤：1. 选取健康清洁级小鼠，将其麻醉后进行腹部手术，收集腹腔巨噬细胞。
2. 将收集到的腹腔巨噬细胞与鸡红细胞悬液混合，在显微镜下观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬情况。
3. 使用台盼蓝染色液对吞噬细胞进行染色，观察吞噬细胞内台盼蓝颗粒的分布情况。
4. 对吞噬细胞进行计数，计算吞噬百分率和吞噬指数。
实验结果：1. 在显微镜下观察到，巨噬细胞能够吞噬鸡红细胞，形成吞噬体。
2. 使用台盼蓝染色后，吞噬细胞内台盼蓝颗粒主要分布在溶酶体中。
3. 通过计数，得到吞噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数。
结果分析：1. 巨噬细胞在非特异性免疫中发挥着重要作用，能够吞噬病原体、凋亡细胞及其它异物，从而清除体内的有害物质。
2. 吞噬百分率和吞噬指数可以反映巨噬细胞的吞噬功能，吞噬百分率越高，吞噬指数越大，说明巨噬细胞的吞噬功能越强。
实验讨论：1. 巨噬细胞的吞噬功能受到多种因素的影响，如细胞表面受体的种类和数量、吞噬细胞的活化状态等。
2. 本实验通过观察小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的过程，加深了对巨噬细胞吞噬作用的理解。
3. 吞噬功能的测定方法在免疫学研究中具有重要意义，可以用于评估机体免疫功能的变化。
实验结论：通过本次实验，我们成功观察了小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬活动，加深了对巨噬细胞吞噬作用的理解，并掌握了巨噬细胞吞噬功能的测定方法。
细胞生物学实验四巨噬细胞吞噬观察
吞噬过程
? 大致分为四个阶段： ? 识别结合 ? 部分吞入 ? 形成内吞体（或称吞噬体） ? 形成吞噬溶酶体。
结果观察
? 用40倍镜或油镜观察巨噬细胞吞噬鸡红 细胞情况。画出不同吞噬阶段的图。
注意事项
? 1、粘附过程要防止液体干掉； ? 2、吞噬时间应掌握好，过短，鸡红细胞
尚未被吞入；过长，已吞噬消化。
? 4、制片。（ 1）直接观察：滴 1滴腹腔液，盖上 盖玻片直接观察；
（2）染色观察
? 加0.2ml-0.3ml腹腔液于盖玻片上，放湿 盒置37℃恒温培养箱30min使巨噬细胞粘 附；
? 用带针头的注射器吸取0.01M，PH7.2的 PBS 5ml冲洗掉未粘附的细胞及腹腔液；
? 将玻片浸入甲醇中固定3－5min，凉干； ? Giemsa染色30min； ? 流水冲去浮液，凉干观察。
实验操作
? 1、巨噬细胞诱导。实验前 1天，每只小鼠腹腔 注射1ml 4％淀粉肉汤。
? 2、体内吞噬。实验当天，先给每只小鼠腹腔注 射2ml 1%鸡红细胞生理盐水悬液，轻揉腹部， 使其在腹腔分布均匀。吞噬 45min。
? 3、处死小鼠，吸取巨噬细胞。脱颈处死小鼠， 随即向腹腔注入 1ml生理盐水，揉匀。然后剪开 腹部皮肤，暴露腹膜，用带针头的注射器插进 腹腔吸取腹腔液；
吞噬过程示意图
吞噬现象
试验材料、试剂及仪器用品
材料
? 1、6－8周龄健康雄性小鼠 ? 2、5％鸡红细胞。 ? 采血1ml，放入4ml阿氏液中，用PBS洗3
小鼠腹腔巨噬细胞体内吞噬功能测定
小鼠腹腔巨噬细胞体内吞噬功能测定摘要】目的建立小鼠腹腔巨噬细胞体内吞噬功能测定方法，并测定其吞噬率。
方法用6%淀粉肉汤诱导小鼠腹腔产生巨噬细胞，体内吞噬5%鸡红细胞，并测定其吞噬率。
结果小鼠腹腔巨噬细胞成活率＞98%，平均吞噬百分率和平均吞噬指数分别是38.04%和0.39。
结论本实验方法可以用于小鼠腹腔巨噬细胞的相关研究。
【关键词】巨噬细胞吞噬功能小鼠巨噬细胞属于免疫细胞，有抗肿瘤、免疫调节等多项功能[1]。
巨噬细胞具有很强的吞噬功能，在体内外均能吞噬颗粒物质，将巨噬细胞与颗粒物质(如白色假丝酵母菌、鸡红细胞或葡萄球菌等)混合孵育一定时间后，颗粒物质可被巨噬细胞吞噬，本次实验颗粒物质是鸡红细胞CRBC，观察巨噬细胞吞噬CRBC的百分率和吞噬指数，了解其吞噬功能。
巨噬细胞可以用各种方法和各种来源获得，以小鼠腹腔巨噬细胞取材最为经济实用。
1 材料与方法1.1 实验动物健康小白鼠，体重20-25g，8-12周龄，雄性，由第四军医大学实验动物中心提供。
1.2 主要试剂 6%淀粉肉汤，5%鸡红细胞，瑞氏染液，台盼蓝染液，小牛血清,EMDM培养液。
1.3 主要仪器 Nikon双目光学显微镜，TDL-60B湘仪离心机。
1.4 材料一次性5ml注射器，手术剪刀，镊子，小试管，尖嘴吸管，牛鲍计数板。
1.5 小鼠腹腔巨噬细胞体内吞噬功能测定小鼠的腹腔注射6%淀粉肉汤液1.0ml，诱导小鼠产生腹腔巨噬细胞。
48h后小鼠腹腔注射5%鸡红细胞生理盐水悬液1.0ml。
30min后，颈椎脱臼处死小鼠，吸取腹腔液（腹腔液太少可用含10%小牛血清的EMDM液冲洗小鼠腹腔以收集腹腔液），1500r/min 8min离心，洗涤腹腔液，取少量腹腔液置于洁净载玻片上，推成涂片，瑞氏染色后油镜下（10*100）观察小白鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞现象，每片计数200个巨噬细胞，计数吞噬率和吞噬指数[1]。
吞噬率=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞/200个巨噬细胞*100%吞噬指数=被吞噬的鸡红细胞数*2/200个巨噬细胞1.6 细胞活力鉴定取1滴细胞悬液加1滴台盼蓝染液混匀，静置5分钟后滴入牛鲍计数板，观察死细胞，活细胞情况。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
对“小鼠腹腔巨噬细胞吞噬作用的观察实验”的拓展探索
作者：解丽芳， 王甜， 杨军， XIE Li-fang， WANG Tian， YANG Jun
作者单位：四川大学生命科学学院生物科学实验教学中心,成都,610065
刊名：
生物学杂志
英文刊名：Journal of Biology
年，卷(期)：2012,29(5)
1.霍印林;韩宝亮;刘海华验证性实验拓展的探讨 2008
2.李素文细胞生物学实验指导 2001
3.马丹炜;王万军细胞生物学实验教程 2010
4.王金发;何炎明细胞生物学实验教程 2004
5.滕利荣;孟庆繁生物学基础实验教程 2008
6.章静波医学细胞生物学实验指导与习题集 2009
7.张慧明;丁杭;张海涛硕士研究生分子生物学实验教学的改革与实践 2008
8.陈红梅细胞生物学实验教学方法的探索 2001
9.臧忠婧普通高校细胞生物学实验教学的现状与改革[期刊论文]-科技情报开发与经济 2007(07)
10.李艳红细胞生物学和细跑工程实验教学的几点体会 2004(07)
11.王金发;戚康标;何炎明实行研究性实验教学培养学生的研究能力 2005
引用本文格式：解丽芳.王甜.杨军.XIE Li-fang.WANG Tian.YANG Jun对“小鼠腹腔巨噬细胞吞噬作用的观察实验”的拓展探索[期刊论文]-生物学杂志 2012(5)。