菌种传代操作规程

菌种的复苏、传代管理规程

目的：建立菌种的复苏、传代管理规程，保证检验人员操作规范化、标准化。范围：菌种的复苏、传代。

责任人：QC科化验员。

内容：

1 菌种的复苏

1.1 准备好冷冻菌种安瓿、灭菌的毛细滴管、培养皿、镊子、注射器、普通肉汤培养基、灭菌水及普通琼脂斜面，移入接种室（或超净工作台）。

1.2 在接种室（或超净台）按无菌操作要求操作。

1.3 用75%酒精棉擦净菌种安瓿外壁放在无菌培养皿内稍干。

1.4 点燃煤气灯或酒精灯，将安瓿的封口一端在火焰上烧灼红热，用毛细管吸取灭菌水少许在灼热处，使其骤冷而炸裂。

1.5 在不离开火焰圈内，迅速用注射器抽取0.3ml肉汤培养基加入安瓿内，并摇动使冷冻块溶解，摇匀，用注射器吸取安瓿内容物分别接种至1支肉汤培养基、2支普通琼脂斜面培养基。

1.6 将接种后肉汤培养基及普通琼脂斜面培养基于35～37℃恒温培养12～24h。

1.7 取出培养物，仔细观察菌苔形态，有无杂菌，并转接3支普通琼脂斜面，于35～37℃恒温培养12～24h，供菌种保存与传代用，同时作平板分离单个菌落及涂片镜检，应为典型的菌型。

2 工作用菌种保存与传代

2.1 将上述斜面培养物作为日常工作中使用的菌种，置于冰箱保存。每月用普通琼脂斜面传代1次，将新传代的培养物代替原有的菌种，作为工作用菌种。

2.2 工作用菌种，每半年在琼脂平板上分离单个菌落1次，选典型的菌落接种于普通琼脂斜面上，可以代替原有的工作用菌种。

2.3 培养好的斜面，应仔细观察有无杂菌，可涂片镜检，或再移植斜面于35～37℃培养48h检查有无杂菌，有可疑即应废弃，重新取原始冷冻安瓿接种。

菌种传代的操作方法

菌种传代，是指将已有的菌株进行繁殖，并保持其遗传特性的操作。

以下是菌种传代的一般操作方法：

1. 选择合适的培养基：根据菌株的需求选择合适的培养基，如琼脂或液体培养基。

2. 培养菌株：将初始的菌株接种到培养基上，培养在适当的条件下，如温度、光照和湿度等。

3. 观察生长情况：观察菌株在培养基上的生长情况，如菌落形态、颜色和密度等。

4. 选取单一菌落：根据需要，从培养基上选择单一的菌落，避免杂交或干扰。

5. 转移到新的培养基上：将选取的单一菌落转移到新的培养基上。可以使用传递环法，即在新的琼脂平板上划出线形、网状或圆形区域，将菌落转移到该区域；或使用菌液接种法，将菌悬液接种到新的培养基中。

6. 维持传代：继续重复步骤3-5，将菌株传代到新的培养基上，以保持其遗传特性。

需要注意的是，在菌种传代的过程中，应避免污染和混杂，保持无菌操作。另外，菌种传代的频率也应根据需要和菌株的生长特性进行调整，以保证菌株的质量和稳定性。

菌种传代.doc

菌种传代

第一、实验室菌种的传代和复壮方法

1、简述

菌种的传代系装菌种在使用一段时间后，菌种数量减少，将菌种进行传代培养，增加数量经多次传代后，菌种有衰退、变异现象，对菌种进行复壮，得到纯化菌种。 2、菌种传代

2.1 仪器及培养基

酒精灯、接种环、营养琼脂培养基。

2.2 操作步骤

2.2.1 将新鲜的无菌斜面琼脂养基、酒精灯、接种环和将要传代的菌种管均放置于洁净工作台上，备用。

2.2.2 点燃酒精灯，以左手持菌种管，右手持接种环，将接种环通过火焰消毒俟冷后，从菌种管中挑取菌落。

2.2.3 左手立即换取斜面培养基管，以右手无名指和小指拔取棉塞(先转动棉塞后拔去)，夹持于手指间。

2.2.4 立即将管口通过火焰灭菌后将接种环伸入斜面管内，先从斜面底部到顶端拖一条接种线，再自下而上蜿蜒涂布。

2.2.5 轻轻取出接种环，用棉塞塞住管口，立即将接种环通过火焰消毒。

2.2.6 将接种好的管口用牛皮纸包位，置于35?2?恒温箱中培养18-24小时，取出置4-6?冰箱中保存。

3、菌种复壮

3.1 仪器及培养基

酒精灯、接种环、曙红亚甲蓝琼脂培养。

3.2.1 菌种在经过几次传代之后，对其进行革兰氏染色、镜检。

3.2.2 染色、镜检后若发现菌种有退化、变异现象，则将其划线接种在相应的培养基平板上，于35?2?培养18-24小时后，观察生长菌的形态特征。

3.2.3 挑取具有典型特征的菌落再次进行划线接种培养后进行革兰氏染色、镜检。 3.2.4 选择特征明显，生长良好的菌种，将其接种于营养琼脂培养基斜面，培养后置冰箱中保存。

菌种传代操作规程 Company number【1089WT-1898YT-1W8CB-9UUT-92108】

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一、目的：为使菌种传代操作规范化、制度化，故建立此规程

二、适用范围：菌种传代须按本规程执行。

三、责任者：微生物限度检查化验员，质量检测中心主任。

四、正文：

1、培养基的制备

按微生物限度检查用稀释剂、培养基配制操作规程及斜面配制操作规程配制好相应培养基。大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、沙门菌、用胰酪大豆胨琼脂斜面培养基，白色念珠球菌、黑曲霉用沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基，制备好的培养基预培养48小时后，确认无菌落生长方可使用。

2.菌种传代

菌种传代前应准备好适于该菌种生长的培养基和培养设备，所有操作均应在符合生物安全保护的生物安全柜内进行。

点燃酒精灯，在火焰上部操作，将原有的菌种斜面（简称菌种管）与待接种的新鲜斜面培养基（简称接种管）持在左手拇指、食指及中指之间，菌种管在前，接种管在后，使试管内斜面向上，两支试管口平齐，应斜持试管呈45°角，以免管底凝集水浸湿培养基表面。用右手在火焰旁转动两支试管胶塞，以便接种时易于拨取。再用右手持接种环的柄端，垂直或稍斜地把接种环在火焰上灼烧。将接种环烧红约30s，随后将接种棒金属部分在火焰上烧灼，以彻底灭菌。用右手的小指和手掌之间以及无名指与小指之间，在火焰旁分别拔除两支试管的胶塞，持住。在将试管口在火焰上通过以杀灭管口的细菌，但勿烧的过热，将烧灼的接种

基上，如有溶印则表明接种环未冷却，待冷后，再从斜面上挑取少许菌苔。取出时接种环不能通过火焰，应在火焰旁迅速插入接种管，在斜面上由下而上划“Z”字型曲线，当接种完毕，立即将管口通过火焰灭菌，右手到火焰旁塞上胶塞，不要将管口离开火焰旁去迎接右手的胶塞。最后将接种环烧灼灭菌放置备用。

细菌传代操作规程

引言：

细菌传代是一种实验室技术，用于研究细菌在连续传代中的生物学特性和遗传变异。正确的传代操作是维持细菌群体稳定且准确反映遗传特性的关键。为了保证传代操作的成功和规范性，制定相关的操作规程是必要的。

一、实验前准备：

1. 确定传代实验的目标和方案。

2. 准备所需的培养基、试剂和实验器材。

3. 检查实验器材的清洁和消毒情况，保证无污染。

二、细菌传代操作步骤：

1. 第一代接种：

a. 从冷冻细菌库中取出所需的细菌母种，转接到含有适当培养基的培养皿中。

b. 用接种环或接种针沾取适量的细菌悬液，均匀涂布在培养皿的表面。

c. 恒温培养箱中培养，温度和时间根据不同的菌株而定。

2. 后续代接种：

a. 从前一代的培养皿中取适量的细菌悬液，转接到新的培养皿中。注意保持接种量的一致性。

b. 重复上述步骤，逐代传代。

三、传代操作注意事项：

1. 操作均需在无菌工作台或无菌条件下进行，以避免外源性污染。

2. 接种时避免直接接触培养基和装置内壁，以减少细菌的外源污染。

3. 接种环或接种针在使用前需经过高温炉高温灼烧，以杀灭潜在的细菌。

4. 尽量避免细菌的暴露在空气中的时间过长，以保证其活力。

5. 传代时应注意接种量的一致性，以减少菌群的变异。

四、细菌传代操作记录：

1. 每次操作均需详细记录传代实验的日期、细菌菌株、传代代数等信息。

2. 记录每次传代的细菌生长情况，如菌落形态、数量等。

3. 定期保存样品用于后续的分析和验证。

五、实验后处理：

1. 做好实验区域的清理和消毒，防止细菌污染蔓延。

菌种传代操作规程

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菌种传代操作规程
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1 目的
为了提高对实验用菌种的使用、管理，通过对菌种的传代、保存，从而确保其在实验中的有效性和准确性。 2 范围：
从5℃的冰箱内取出第三代工作菌种，用冷却的灭菌接种环挑取1个菌落接种于相应的琼脂斜面培养基中，置于30～35℃的培养箱内培养18～24小时后，确认符合后置于5℃的冰箱内作为第四代工作菌种保存，备用。 3.5 接种操作规范 3.5.1点燃酒精灯，左手握住菌种斜面，将管口靠近火焰旁，右手拿接种棒后端，将接种环烧红30秒钟，随后将全部接种棒金属部分在火焰上烧灼，往返通过3次。右手用无名指、小指及掌部夹住硅胶塞，左手将管口在火焰上旋转烧灼，右手再轻轻拨开硅胶塞，将接种环伸入管内先在近壁的琼脂斜面上靠一下，稍冷却再移至菌苔上，刮取少量菌苔，随即取出接种棒，并将菌种管口移至火焰旁。塞上硅胶塞，左手将菌种管放下，取营养琼脂小斜面一支，右手用无名指、小指及掌部夹住硅胶塞，左手将管口在火焰上旋转烧灼，右手再轻轻拨开硅胶塞，将接种环伸入管内至琼脂斜面的底部，由低向上，将接种环轻贴斜面的表面曲折移动，使菌划在斜面的表面上。 3.5.2 取出接种环，在火焰旁将培养基管硅胶塞堵上，然后将接种过菌的接种棒在火焰上烧灼灭菌。 3.5.3 将已接种好的细菌管置30—35℃细菌培养箱培养18—24小时，霉菌管置23—28℃霉菌培养箱培养5-7日。取出后放入冰箱保存并上锁。 3.6 菌种的传代次数不得超过5代，每一菌株每次传代不超过15 支；1支作为下次传代用，其余作为检验用，每月传代一次。 3.7 传代完毕后，在每支试管上标明菌株名称、代数、序号、传代日期、有效期。 3.8 实验用菌株均来自于上海市食品药品检验所。

菌种的传代接种操作规程

陕西汉王药业有限公司GMP管理文件

1 目的：建立菌种的传代、贮存、接种操作规程。

2 适用范围：适用于检定菌的传代、贮存、接种。

3 责任者：微生物检验员、化验室主任。

4 内容：

4.1来源：检定菌种由药检部门提供已接种好的菌种斜面。

4.2 贮存：

4.2.1 将购来的试管斜面菌种放入冰箱中冷藏（4-6℃）保存。

4.2.2 将传代并经过培养后的菌种放入冰箱中保存。

4.2.3每支保存菌种需标明菌名、统一编号、接种日期。

4.3 传代和接种：

4.3.1 试验用菌种一般每两月传代一次，在阳性菌检室内进行传代和接种。

4.3.2 先点燃酒精灯，在火焰旁的上部空间操作，烧灼接种环。

4.3.3 再将原有的菌种斜面培养基(简称菌种管)与待种的新鲜斜面培养基(简称接种

管)，持在左手拇指、食指及中指之间，要注意能清楚地观察到斜面，菌种管在前，接种管在后。应斜持试管呈450角，使试管内斜面向上，两试管口平齐，注意不要持成水平，以免管底凝集水浸湿培养基表面。

4.3.4 首先，以右手在火焰旁转动两管的棉塞，以便接种时易于拔取。再以右手持接种

环的柄端，垂直或稍斜地把接种环在火焰上烧灼。顶端的环必须烧红，以彻底灭菌。

环以上凡接种时可进入试管的部分，也应通过火焰烧灼。烧灼时，应把环置于酒精灯的外焰上，因外焰的温度比内焰高，容易烧红。

4.3.5 使用右手的小指和手掌之间以及无名指与小指之间，在火焰旁分别拔出两支试管

的棉塞，持住。再将试管口在火焰上通过，以杀灭管口可能沽污的细菌，但勿烧烫。

4.3.6 先将烧灼过的接种环插入菌种管内，先接触无菌苔生长的培养基上，如印则表明

菌种复苏传代保存操作规程

菌种复苏传代保存是微生物实验室中常见的操作之一，其目的是将冷冻保存的菌种从冷冻状态中恢复出来，并按照一定的方法传代保存。以下是菌种复苏传代保存操作规程，共1200字。

一、实验准备

1.1 准备所需物资：包括菌种冻存试管、培养基、称量仪器、吸管、移液器、贴标纸等。

1.2 检查完整的实验设备：包括洁净台、离心机、培养箱、移液枪等，确保设备无损坏。

1.3 检查所需培养基的质量：检查培养基的配制日期、有效期等，确保培养基适用于所需菌种。

二、复苏菌种

2.1 取出含菌种的冻存试管：从冷冻保存箱中取出所需菌种的冻存试管，并将试管放置于洁净台上。

2.2 快速复苏：将冻存试管置于培养基底部，用力旋转数次，使菌种快速复苏。

2.3 开孔放气：用火焰消毒后的吸管尖端取出菌种后将其放入含菌种的冻存试管中，并迅速封闭试管口，以防菌种污染。

2.4 培养基选择：根据菌种类型的不同，选择相应的培养基进行培养。如需选择无菌培养基时，需要在使用前先进行灭菌处理。

2.5 培养条件：将含菌种的试管放入预先灭菌处理过的培养基中，确保培养基将菌种完全覆盖，并在适当的培养条件下培养，包括温度、湿度、光照等。

三、传代保存

3.1 菌种鉴定与纯化：复苏后的菌种应进行鉴定与纯化，以确保菌种的纯度和正确性。

3.2 菌种传代：将复苏后的菌种接种到新的培养基中，进行传代培养。传代时应注意传代次数，一般不超过10次。

3.3 传代培养条件：传代时应保持相同的培养条件，以保证菌种的生长状态和性状的稳定。

3.4 保存方式选择：根据菌种的特性和实验需求，选择适当的保存方式，包括持续传代培养、冷冻保存、冷冻干燥等。

菌种传代操作规程

G M P管理文件

一、目的：为使菌种传代操作规范化、制度化，故建立此规程

二、适用范围：菌种传代须按本规程执行。

三、责任者：微生物限度检查化验员，质量检测中心主任。

四、正文：

1、培养基的制备

按微生物限度检查用稀释剂、培养基配制操作规程及斜面配制操作规程配制好相应培养基。大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、沙门菌、用胰酪大豆胨琼脂斜面培养基，白色念珠球菌、黑曲霉用沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基，制备好的培养基预培养48小时后，确认无菌落生长方可使用。

2.菌种传代

2.1菌种传代前应准备好适于该菌种生长的培养基和培养设备，所有操作均应在符合生物安全保护的生物安全柜内进行。

2.2点燃酒精灯，在火焰上部操作，将原有的菌种斜面（简称菌种管）与待接种的新鲜斜面培养基（简称接种管）持在左手拇指、食指及中指之间，菌种管在前，接种管在后，使试管内斜面向上，两支试管口平齐，应斜持试管呈45°角，以免管底凝集水浸湿培养基表面。用右手在火焰旁转动两支试管胶塞，以便接种时易于拨取。再用右手持接种环的柄端，垂直或稍斜地把接种环在火焰上灼烧。将接种环烧红约30s，随后将接种棒金属部分在火焰上烧灼，以彻底灭菌。用右手的小指和手掌之间以及无名指与小指之间，在火焰旁分别拔除两支试管的胶塞，持住。在将试管口在火焰上通过以杀灭管口的细菌，但勿烧的过热，将烧灼的接种环插入菌种管内，先接触无菌苔生长

基上，如有溶印则表明接种环未冷却，待冷后，再从斜面上挑取少许菌苔。取出时接种环不能通过火焰，应在火焰旁迅速插入接种管，在斜面上由下而上划“Z”字型曲线，当接种完毕，立即将管口通过火焰灭菌，右手到火焰旁塞上胶塞，不要将管口离开火焰旁去迎接右手的胶塞。最后将接种环烧灼灭菌放置备用。

检定菌保存传代使用销毁标准操作规程

一、引言

检定菌是指用于验证实验室检测方法准确性和可靠性的微生物菌种。为确保检

定菌的质量和有效性，需要制定一套标准操作规程，明确保存、传代使用和销毁的要求和流程。本文将详细介绍检定菌保存传代使用销毁的标准操作规程。

二、保存要求

1. 菌种的保存容器应为无菌、密封、耐高温高压的玻璃瓶或者塑料瓶，并在保

存容器上标明菌种名称、保存日期和保存人员的姓名。

2. 菌种保存容器应储存在恒温冰箱或者液氮罐中，温度应控制在-70℃至-80℃

之间。

3. 菌种保存容器应存放在避光和湿度适宜的环境中，避免受到阳光直射和湿气

侵入。

三、传代使用要求

1. 传代前应进行菌种活性检测，确保菌种仍然具有活性和稳定性。

2. 传代使用菌种的工作台、培养皿、试管等实验器材应经过高温高压灭菌处理，确保无菌状态。

3. 传代使用菌种时，应使用无菌技术操作，避免交叉污染。

4. 传代使用菌种的培养基应符合菌种的生长要求，避免影响菌种的生长和繁殖。

5. 传代使用菌种的培养条件应符合菌种的生长要求，包括温度、湿度、氧气浓

度等。

四、销毁要求

1. 菌种销毁应在生物安全柜中进行，避免菌种的扩散和污染。

2. 销毁菌种的容器应经过高温高压灭菌处理，确保菌种彻底死亡。

3. 销毁后的菌种容器应进行特殊处理，如破碎、焚烧或者化学处理，以防止菌种的再生和传播。

五、安全注意事项

1. 在保存、传代使用和销毁菌种的过程中，操作人员应佩戴实验室必需的个人防护装备，如实验手套、实验眼镜等。

2. 操作人员应具备相关的微生物实验室操作技能和安全意识，遵守实验室安全规范和操作流程。

菌种复苏传代操作规程

一、背景介绍

菌种复苏传代操作是微生物实验室中常见的实验操作之一。通过复苏并传代菌种，能够恢复其活性并扩大其数量，为后续的实验研究提供足够的菌种量。本文将对菌种复苏传代操作进行详细的介绍和规程。

二、菌种复苏

1.准备工作

–检查实验室条件：确保工作台面、培养箱和工具的清洁程度，防止交叉污染。

–准备所需培养基：根据菌种类型选择合适的培养基，如琼脂培养基、液体培养基等，并按照要求配制。

–检查试剂：检查培养基和其他试剂的质量和保存情况，确保使用的试剂没有变质。

–备注标签：为每个培养皿或试管添加标签，标明菌种名称、菌株编号和日期等信息。

2.菌种复苏步骤

–从冷冻细胞库中选择合适的冻存物：确保选择与实验目的一致的菌种冻存物进行复苏。

–快速复苏：将冻存物迅速取出，放在含有适量温和培养基的试管中，轻轻摇匀。

–孵育：将试管置于适当的温度和湿度条件下，进行孵育。通常温度为30°C，孵育时间根据菌种不同而异，一般为24-48小时。

–观察生长情况：观察菌种的生长情况，包括菌落数量和形态特征等。

确认菌种是否成功复苏。

三、菌种传代

1.准备工作

–准备培养基和试剂：根据菌种特性选择合适的培养基，并按照要求配制好。

–准备培养皿或试管：确保培养皿或试管干净，不含任何污染。

–注射器和接种环的消毒：使用75%乙醇对注射器和接种环进行消毒处理，避免交叉感染。

2.菌种传代步骤

–挑取菌落：使用消毒过的注射器，挑取菌落，并迅速划线于新的培养皿或试管中。

–均匀接种：使用消毒过的接种环，将菌落均匀划线于培养皿或试管表面。

菌种传代操作规程2024版药典菌种传代

菌种传代操作规程2024版药典菌种传代将依照以下步骤进行：

1. 准备工作：确保操作台面和工具已经经过清洁和消毒处理，确保操作室内环境的无

菌状况。准备所需的培养基、试管、移液器、平板等。

2. 菌种接种：将初代培养物中适量的菌液采用无菌的移液器转接到新的无菌培养基中，或将菌液均匀地刷在无菌平板上。注意避免交叉污染。

3. 培养：将接种好的培养基或平板放置于恒温箱中，在适当的温度和湿度条件下培养

一定时间，以确保菌种生长繁殖。

4. 传代：在培养基的不同时间点上，将菌种取出进行传代。传代时，选择菌落或液体

中适量的菌液接种到新的无菌培养基中，或刷在无菌平板上。

5. 观察和记录：观察传代后菌种的生长情况，如菌落形态、色素等，进行记录。注意

观察菌种的纯度和无菌状态。

6. 储存：将传代后的菌种保存在适当的条件下，如冷冻保存或冷藏保存，以备后续使用。

7. 清理：完成菌种传代后，及时清理操作区域和工具，进行消毒处理，确保无菌状态。

以上操作规程为菌种传代的基本步骤，根据具体的实验目的和条件，还可以根据需要

进行相应的修改和调整。

菌种复苏传代操作规程

一、引言

菌种复苏传代操作规程是生物实验室中非常重要的一项工作，它关系到实验的可靠性和成功率。本文将详细介绍菌种复苏传代操作规程，包括前期准备、菌液制备、培养基制备、菌种接种、传代等步骤。

二、前期准备

1.准备好所需设备：无菌培养箱、移液器、显微镜等；

2.准备好所需试剂：琼脂、葡萄糖等；

3.清洗设备并消毒。

三、菌液制备

1.从冰箱中取出需要复苏的菌株，将其在无菌条件下解冻；

2.取出一定量的琼脂加入到试管中，并加入适量的葡萄糖和其他所需成分；

3.将琼脂溶液加热至沸腾，然后冷却至50℃左右；

4.将解冻后的菌株用移液器吸取适量细胞悬浮液，并滴入琼脂溶液中；

5.轻轻摇晃试管使得细胞均匀分布在琼脂中；

6.将试管放置于无菌培养箱中，在适当的温度下进行培养。

四、培养基制备

1.准备好所需试剂：琼脂、葡萄糖等；

2.将琼脂加入到试管中，并加入适量的葡萄糖和其他所需成分；

3.将琼脂溶液加热至沸腾，然后冷却至50℃左右；

4.将制备好的菌液接种到琼脂溶液中，并轻轻摇晃使得细胞均匀分布在琼脂中；

5.将试管放置于无菌培养箱中，在适当的温度下进行培养。

五、菌种接种

1.准备好所需设备：无菌移液器、显微镜等；

2.从前一代培养基中取出需要传代的菌株；

3.用移液器吸取一定量的细胞悬浮液，并滴入新的培养基中；

4.轻轻摇晃试管使得细胞均匀分布在琼脂中；

5.将试管放置于无菌培养箱中，在适当的温度下进行培养。

六、传代

1.在前一代培养基中进行培养，当菌落数量达到一定程度时，即可进行传代；

2.从前一代培养基中取出需要传代的菌株；

菌株传代操作规程

菌株传代操作是微生物学实验中常见的操作，通过实

施一系列的技术步骤，旨在保持和保存某一特定菌株的遗

传特性和纯度。以下是一份关于菌株传代操作的操作规程，共1200字：

一、实验前的准备工作

1. 准备所需的培养基和培养物：根据菌株的培养条件

选择合适的培养基，如琼脂培养基、液体培养基等，并配

制好培养物。

2. 细菌菌株信息的记录：记录菌株的基本信息，如种属、菌名、传代次数等，以便对菌株进行管理和追踪。

3. 消毒操作台和实验器材：保持实验环境的清洁和无

菌状态，确保实验的准确性和可靠性。

二、菌株传代操作步骤

1. 预培养：从冷冻保存的菌株中，取一支接种环或接

种针，接种到含有合适培养基的试管或皿中，进行预培养。培养条件根据菌株的要求进行设置，其中包括温度、光照、pH值等。

2. 确定菌株纯度：观察菌落形态、细胞形态和生长特

性等指标，判断菌株的纯度。如果菌落形态或生长特性有

异常，应及时停止传代操作，重新进行纯化。

3. 传代操作：将纯化的菌株接种到新的培养基中，一

般选择用接种环进行划线接种或用接种针进行穿刺接种。

接种后，放置在适当的培养条件下进行培养，直至菌落生

长出来。

4. 菌落挑选：从传代培养物中挑选形态和生长特性与

目标菌株相符的菌落。挑选菌落时应注意使用消过毒的工具，以避免菌株间的污染。

5. 单菌株扩大培养：将挑选出来的菌株转移到大规模

的培养容器中，进行扩大培养。培养条件需要根据菌株的

要求进行调整，使菌株能够正常生长繁殖。

6. 菌株保存：取出一部分扩大培养物，进行冷冻保存

或制备备份培养物。同时，记录保存的菌株的基本信息，

菌种传代标准操作规程

文件制修订记录

1.1原则

1.1.1检定用标准菌种，按照规定选购辽宁省药品检验所提供的菌种。

1.1.2应按照现行版中国药典附录传代和制备。

1.2标准菌种的制备

1.2.1菌种的复苏

1.2.1.1准备适宜各种菌种生长的液体培养基和培养设备及操作器具。

1.2.1.2把购入的冻干粉菌种管，灭菌后的器具、1ml吸管、双碟、营养肉汤，改良马丁培养基等移入阳性对照室中的生物安全柜中。

1.2.1.3先用砂轮将冻干粉菌种安瓶颈部上三分之一处挫出刻痕，再将冻干粉菌种管外壁用75%酒精棉擦洗消毒、稍干，放在灭菌双碟内，点燃酒精灯，用干燥的无菌纱布包裹安瓶，在火焰旁将其掰开。放入灭菌双碟内，取一支1ml吸管，在火焰旁吸取营养肉汤（或改良马丁培养基）0.5-0.8ml，加至菌种管底部并吹打，将冻干粉菌搅动，促使溶解，制成菌悬液，随即吸出管内菌液，接种至营养肉汤（或改良马丁培养基）试管内。并将吸管及菌种瓶，投入消毒液内。将已接种的营养肉汤（或改良马丁培养基）试管置于30-35℃或23-28℃培养22-24h。（为第一代）

1.2.2菌种的纯度和特性确认

1.2.2.1取出培养物，肉眼观察试管变浑浊。确认有菌种生长繁殖。

1.2.2.2将上述增菌液，再进行第二次移种。接种至3支营养琼脂（或改良马丁琼脂）斜面上，置30-35℃（或23-28℃）培养22-24h。（为第二代）

1.2.2.3取出斜面培养物，每个品种各用一支进行纯度和特性确认，仔细观察菌落形态，有无杂菌，涂片，革兰氏染色镜检，呈典型菌落后，可制成甘油冷冻管（第二代）或移种（第三代）即可应用。如发现菌型不典型，可进行平板分离单菌落。

菌种传代操作规程

Coca-cola standardization office【ZZ5AB-ZZSYT-ZZ2C-ZZ682T-ZZT18】

G M P管理文件

一、目的：为使菌种传代操作规范化、制度化，故建立此规程

二、适用范围：菌种传代须按本规程执行。

三、责任者：微生物限度检查化验员，质量检测中心主任。

四、正文：

1、培养基的制备

按微生物限度检查用稀释剂、培养基配制操作规程及斜面配制操作规程配制好相应培养基。大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、沙门菌、用胰酪大豆胨琼脂斜面培养基，白色念珠球菌、黑曲霉用沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基，制备好的培养基预培养48小时后，确认无菌落生长方可使用。

2.菌种传代

菌种传代前应准备好适于该菌种生长的培养基和培养设备，所有操作均应在符合生物安全保护的生物安全柜内进行。

点燃酒精灯，在火焰上部操作，将原有的菌种斜面（简称菌种管）与待接种的新鲜斜面培养基（简称接种管）持在左手拇指、食指及中指之间，菌种管在前，接种管在后，使试管内斜面向上，两支试管口平齐，应斜持试管呈45°角，以免管底凝集水浸湿培养基表面。用右手在火焰旁转动两支试管胶塞，以便接种时易于拨取。再用右手持接种环的柄端，垂直或稍斜地把接种环在火焰上灼烧。将接种环烧红约30s，随后将接种棒金属部分在火焰上烧灼，以彻底灭菌。用右手的小指和手掌之间以及无名指与小指之间，在火焰旁分别拔除两支试管的胶塞，持住。在将试管口在火焰上通过以杀灭管口的细菌，但勿烧的过热，将烧灼的接种环插入菌种管内，先接触无菌苔生长的培养