UPLC-TQD 操作手册SCN 805

2. 准备 UPLC 系统 2.1. 准备流动相：用 0.22um 的膜过滤缓冲液，所有的缓冲液和超纯水都要新配制，超纯
水和缓冲液必须每天更换。 2.2. 所有样品都要用流动相初始梯度比例的溶剂来溶解，并用 0.22um 的膜过滤。
2.3. 在 Masslynx 主页面上选择
打开 UPLC 编辑窗口。
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2.4. 单击
进入 UPLC 控制台
2.5. 选中 ACQUITY UPLC System，选择 control > start up system
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初始化泵和自动进样器，
选择所需要灌注的泵，例 A2,B1，如果只是每天早上例行灌注，一般 2 分钟就可以了 灌注自动进样器洗针液：如果每天例行灌注，一般 3 个循环就可以了 2.6. 如果更换流动相，需要单独灌注泵，可选 Control/ Prime A/B solvents，湿灌注
如果样品表的表头没有显示要使用的内容，用鼠标右键点击样品表的第一行第一列，然
后选中
，会出现下面列表，在里面将将所需要用的内容选中。
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6.4. 选择 Sample > Add，设定要添加的样品数量。
6.5. 选择 ，或者在主菜单选择 File > Save As，输入这个样品表的名称 (后缀 为.SPL)。样品表就已经编好等待运行。 样品表的实例
工具栏按钮解释 Abort
停止 UPLC 正在运行的方法。
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Start/Stop Pump 泵流速的开关控制。
Lamp on / off 控制 UPLC 检测器的灯的开/关（。除质谱以外的检测器）
Load Method
将编辑好的液相方法传输给液相,以平衡系统。
5.1. 编辑泵方法 单击 度方法、运行时间等。
Desolvation Gas Flow 300 - 1000
(L/hr)
Cone Gas Flow (L/hr) 50
HPLC (100 to 300uL/min)
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调谐时质量分析器的设置： 在 Analyser 页面可以调节高、低质量端的分辨率。
注：降低分辨率可以增加信号强度。 调节离子能量 Ion Energy 使信号强度增加并得到一个好的峰型。 记录 M/Z 峰的峰顶值，此例中为苏丹红 I 的 M+H 值 248.7。 注：峰顶的 M/Z 值从调谐页面中得到，而不要从 MS Scan 中得到。这种方式得到的
Entrance Collision Exit LM/HM Resolution 2 Ion Energy 2 Multiplier Gas Cell Pirani
MS Scan 50 3 50
13 - 15 ~0.5 Daughter Scan ~-1 0 - 70 ~2
11 - 15 ~1 1 ~3．2e-3
打开高压，质谱进入 Operate 状态。
3.1.6. 打开 Fluidics 页面，在 A 或 B 瓶中放入调谐标准溶液(0.2--1ppm 不少于 1ml)
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3.1.7. 在 Reservoir 中选择 A，单击
冲洗和置换 A 流路和 syringe。
3.1.8. 设置 UPLC 的流速（通常为 0.2ml/min）和流动相的比例（通常有机相：水相=50： 50）。
进入泵方法编辑页面。选择溶剂、比例、流速、梯 压力范围
流动相
梯度/等度方法
清洗柱塞 杆频率
Run time － 运行时间
5.2. 编辑自动进样器的方法
单击Байду номын сангаас
现下面页面后，选择或输入相关的参数。
进入自动进样器方法编辑页面，出
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满环 50%以下准确 满环进样
满环 75%以下准确 柱温，通常 30－40℃
进入 Masslynx 工作站。
1.2. 选择 Instrument >
进入调谐页面。
1.3. 从调谐页面选择 Vacuum > pump，打开真空泵，开始抽真空。机械泵和涡轮分子泵开 始工作。
1.4. 在调谐页面单击 需要 2 小时
观察真空度，当真空达到 1.0e-4 左右就表示真空抽好了，大约
1.5. 气源压力设置 氮气：90 – 120 psi （0.5-0.7MPa） 氩气：7 psi（0.1 MPa）
样品室的温度
Wash solvent： Weak - 弱洗针液，一般为 10%甲醇水溶液，通常弱洗针液是强洗针液的三倍 Strong - 强洗针液，90%的甲醇水溶液
点击 File>Save as，保存 UPLC 方法。
6. 设置样品表
6.1. 在 Masslynx 主页面下选择 File > New 打开一个新的样品表。 6.2. 按下列方法调入一个新的样品表格式，
UPLC 泵
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2.7. 选择 A1/A2 和 B1/B2 输入时间 3min，如果更换了流动相则输入 3min,按 star. 2.8. 若更换洗针液，需要重新灌注，选择 Control >> Prime syringes
2.9. 灌注进样器和洗针系统。选择 Sample syringe and wash syringes
Capillary (kV) Capillary (kV)
0.50 – 3.75 ES + 0.50 – 3.0 ES -
Cone (V)
10 – 100
Extractor (V)
~3
RF Lens (V)
0 – 0.5
Source (°C)
Temperature 120
Desolvation Temp (°C) ~400
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新建序列
6.3. 输入样品表中的信息：
File Name File Text MS File Inlet File MS Tune File Bottle Sample Type Conc A
原始数据的文件名，建议用化合物名＋日期＋序号 样品或标样的备注 质谱方法的文件名 UPLC 方法的文件名 运行时的调谐方法 样品瓶位置 从下拉菜单中选择样品的类型，可在运行完样品需要定量时再填入 标准品的浓度，可在需要定量时再填入
UPLC-TQD 操作手册 SCN 805
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日常操作步骤：
准备 UPLC
设置样品表
运行样品
定量
注：如果一个星期内不运行样品请不要关质谱仪，使其保持真空。
打印报告
1. 开机
1.1. 打开电脑，打开质谱仪电源和 UPLC 各电源，等待质谱仪和计算机的通讯（大约需 3
分钟），听到连通的声音后，双击
Add New Compound
8.7. 输入化合物的名称。
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8.8. 在出现的各通道的质谱色谱图上，按住右键拉过目标峰，定量离子的参数（定量离子、 保留时间、及保留时间窗口）自动添加到方法编辑器内。
‘右键拖拉’
5pg/ml std
ASSAY07 Sm (Mn, 2x2) MRM of 3 Channels AP+
，打开调谐页面。查看离子化模式，需要时单击
3.1.2. 单击 按扭，打开氮气，并查看反馈值是否正确。将源温设定为合适的值 3.1.3. 查看其他源参数，等去溶剂气和源温度稳定。在 source 页面输入参数。
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3.1.4. 单击
打开质量分析器页面，如下图：并按图中输入其它的参数。
3.1.5. 单击
3.2.4. 在菜单中选择 File > Save as 保存调谐文件。
4. 编辑质谱方法 利用调谐的结果建立质谱方法
4.1. 在 masslynx 主画面中单击
，打开 MS 方法编辑器。
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4.2. 选择 File > New 出现下面的窗口，建立一个 MS 方法，
4.3. 单击 Energy。单击
2.65;1302
3.00
3.50
MRM of 3 Channels AP+
274.1 > 182.1
6.72e3
Area
%
0
Time
2.50
3.00
3.50
8.9. 在 Compound Properties 表中按下面的要求输入相关的信息： Acquisition Function Number 此选项可以从MS方法中得到，一定要和MS的方法对应 Concentration of Standards 内标法：对于内标物选择Fixed，并输入1.0的浓度。对于标准品，选择Conc A，并保证样品表中浓度是正确的。 外标法：对于标准品，选择Conc A，并保证样品表中浓度是正确的。 Time Window 最大的保留时间窗口，一般输入0.2 Peak Selection 通常设置Nearest. Response Type 在使用内标法定量时，内标物应选择 External (absolute)，标准品应选择 Internal (relative) ；在使用外标法定量时，标准品应选择 External (absolute)
编辑 MRM 方法，依次 Parent、Daughter、Dwell、Cone 和 Coll ，继续输入其他的质量数
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离子模式
化合物名称
子离子质量
锥孔电压
母离子质量数
离子驻留时间
碰撞能量
MRM的运行时间
如果离子数太多 可选择分几个 function 4.4. 在 Ionization Mode 下拉菜单中选择合适的离子化模式，在 Retention Windows（mins）
中输入质谱数据采集时间。 4.5. 从主菜单中选择 File> Save As，并输入质谱方法的名称，退出质谱方法编辑界面。