龙眼体胚Obg1基因的克隆及其在龙眼体胚发生过程中的表达分析
龙眼胚性愈伤组织微管蛋白基因β-tubulin克隆及序列分析
第４ ３卷 第 １ 期
２ ０ １ ４年 １ 月
龙眼胚性愈伤组织微管蛋 白基 因 ｔ ｕ ｂ ｕ ｌ ｉ ｎ克隆及序列分析
－
王亚婷， 林玉玲 ， 曾丽兰， 赖钟雄 （ 福建农林大学园艺植物生物工程研 究所， 福建 福 州 ３ ５ ０ ０ ０ ２ ）
摘要 ： 以龙眼松散型胚性愈伤组织为材料 ， 利用 Ｒ Ｔ － Ｐ Ｃ Ｒ法首次克 隆 ２ 条含有完整开放 阅读 框的 － ｔ ｕ ｂ ｕ ／ ／ ｎ 基 因的 ｅ Ｄ Ｎ Ａ序
福建农林大学学报（自然科学版 ）
Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ｌ ａ ｏ ｆ Ｆ ｕ ｊ ｉ ａ ｎ Ａ ｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ｅ ａ ｎ ｄ Ｆ ｏ ｅｓ ｒ ｔ ｒ ｙ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｍ ｉ ｔ ｙ（ Ｎ ａ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ Ｅ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ）
Байду номын сангаас
关键词 ： 龙眼 ； 胚性 愈伤组织 ； 微管蛋 白 基因； 克隆 ； 序列分析
中圈分类号 ： Ｓ ６ ６ ７ ． ２ 文献标识 码 ： Ａ 文章编号 ： １ ６ ７ １ － ５ ４ ７ ０ （ ２ ０ １ ４ ） ０ １ － ０ ０ ４ ９ － ０ ６
Ｃ ｌ ｏ ｎ ｉ ｎ ｇ ａ ｎ ｄ ｓ ｅ ｑ ｕ ｅ ｎ ｃ ｅ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ｏ ｆ ｐ － ｔ ｕ ｂ ｕ ｌ ｉ ｎ ｇ ｅ ｎ ｅ ｆ ｒ ｏ ｍ
ｔ ｈ ｅ ｓ ｉ ｇ ｎ ｌ ａ ｐ ｅ ｐ ｔ ｉ ｄ ｅ ｎｄ ａ ｔ ｒ ａ ｎ ｓ ｍｅ ｍｂ ｒ ａ ｎ ｅ ｈ ｅ ｌ ｉ ｃ ｓ ；ａ ｅ ｎｄ ｈｅ ｔ ｙ ｈ ａ ｄ ｌ ｌ ｉ ｇ ｈ ａ ｍｉ ｎ ｏ ａ ｃ ｉ ｄ ｓ ｑｕ ｅ ｅ ｎ ｅ ｃ ｈ ｏ ｍｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ｗ ｉ ｈ ｔ ｈｅ ｔ ｍｂ ￣ｉ ｎ ｓ ｉ ｎ ｏ ｈｅ ｔ ｒ ｓ ｐ ｅ ｃ ｉ ｅ ｓ ｓ ｕ ｃ ｈ ａ ｓ Ｐ ｏ ｐ ｕ ｌ ｕ ｓ ｔ ｒ ｉ ｃ ｈ ｏ ｃ ａ ｒ ｐ ａ，Ｇ ｌ ｙ ｃ ｉ ｎ ｅ， 麟 ， Ｏｒ ｙ ｚ ａ ｓ ａ ｔ ｉ ｖ ａ，Ｚ ｅ ａ ｍａ ｙ ｓ ａ ｎ ｄＡｒ ａ ｂ ｉ ｄ ｏ ｐ ｓ ｉ ｓ ｔ ｈ ａ ｌ ｉ ａ ｎ ａ；ｂ ｅ ｓ ｉ ｄ ｅ ｓ ｈｅ ｔ ｐ ｒ ｅ ｄ ｉ ｃ ｔ ｅ ｄ 柚 ｐ ｏｔ ｒ ｅ ｉ ｎ
龙眼GPX基因的克隆、原核表达及其在体胚发生过程中的表达分析
陈义 挺 １ ， ２ ，赖 钟 雄 ，方 智 振 ，蔡 英 卿 ，林 玉 玲 １ ，李焕 苓 ，陈登 云
１福 建农 林 大 学亚热 带果树 研 究所 ．福 建福 州 ３ ５ ０ ０ ０ ２ ２ 福 建省农 业 科 学院 果树研 究所 ．福 建 福 州 ３ ５ ０ ０ １ ３
摘 要 采用 Ｒ Ｔ － Ｐ Ｃ Ｒ与 Ｒ Ａ Ｃ Ｅ相 结合 的方法 ．从龙 眼 胚性 愈 伤组 织 中克 隆 了长 ９ ４ ７ ｂ Ｄ含 有 完 整 开 放 阅 读 框 的 龙 眼Ｄ １ Ｇ Ｐ Ｘ ｃ Ｄ Ｎ Ａ 序列 （ Ｇ ｅ ｎ Ｂ ａ ｎ ｋ 登 录 号 为Ｅ Ｕ ３ ６ ４ ８ １ ３ ） 和长 度 为 １ ７ ３ ６ ｂ ｐ的 Ｄ Ｎ Ａ 序列 （ Ｇ ｅ ｎ Ｂ ａ ｎ ｋ登 录号 为 Ｅ Ｕ ６ ８ ０ ９ ７ ０ ） 其 编码 １ 个 含有 １ ６ ８个 氨 基 酸 的蛋 白质 。ＤＩ Ｇ Ｐ Ｘ 基 因 中 含 有 ５个 内含 子 ．均符 合 真 核 生 物 内含 子 通 用 的 Ｇ Ｔ — Ａ Ｇ 法 则 。 生 物 信 息 学 分 析 显 示 ：该 蛋 白为 亲 水 的酸 性 蛋 Ａ质 ，定 位 于 叶 绿 体 ：与 其 他 植 物 的 Ｇ Ｐ Ｘ 有 较 高 的 同 源 性 。将 该 基 因构 建 成 原 核 表 达 载 体 ，经 Ｉ Ｐ Ｔ Ｇ诱导表达 了 １ 个 分子量约为 ２ ３ ｋ ｕ的蛋 白 。利 用 实 时 荧 光 定 量 Ｐ Ｃ Ｒ （ ｑ Ｐ Ｃ Ｒ） 技 术 研 究 该 基 因在 龙 眼体 胚 发 生 发 育 过 程 中 的 表 达 情 况 ．结 果 显 示 ．从 松 散 型 胚 性 愈 伤 组 织 到 不 完 全 胚 性 紧 实 球 形 结 构 阶段 ，Ｄ １ Ｇ Ｐ Ｘ ｍ Ｒ Ｎ Ａ 的 转 录水 平 逐 渐 升 高 ．在 胚 性 紧 实 球 形 结 构 阶段 降 到 最 低 水 平 ．子 叶形 胚 阶 段 又 上 升 到与 不 完 全胚 性 紧 实球 形 结 构 阶 段 相 当 的水 平 关键词 龙 眼 ；体 细 胞 胚 胎 发 生 ；Ｇ Ｐ Ｘ；克 隆 ；生 物 信 息 学 ；实时 荧 光 定 量 Ｐ Ｃ Ｒ
龙眼体细胞胚胎发生过程中DlWUS的克隆与表达分析
龙眼体细胞胚胎发生过程中DlWUS的克隆与表达分析张冬敏;田奇琳;杨曼曼;林玉玲;赖钟雄【摘要】以龙眼‘红核子’LCc悬浮细胞系诱导的胚性愈伤组织为基本材料,按照龙眼体细胞胚胎同步化方法诱导获得龙眼体胚不同阶段材料,并以龙眼体细胞胚胎发生不同阶段混合材料作为试验材料,采用RT PCR结合RACE技术分离并克隆龙眼中编码同源异型结构域蛋白的转录因子WUSCHEL(简称DlWUS)的cDNA全长及DNA序列,并进行序列分析与表达分析.结果表明:DlWUS的cDNA全长1 110 bp,开放阅读框(ORF)858 bp,共编码285个氨基酸(GenBank登录号为KM017506),DlWUS的DNA包含2个内含子.序列分析表明,DlWUS是一个不稳定的亲水蛋白,不含信号肽,亚细胞定位于细胞核,具跨膜结构和Homeodomain超级家族的保守结构域以及WUS转录因子家族特有的WUS box和EAR-like结构域,推测该目的基因确实为WUS转录因子.系统进化分析显示,龙眼DlWUS与脐橙WUS归为一个分支,亲缘关系较近.实时荧光定量PCR分析结果表明,在龙眼体细胞胚胎发生整个过程中,DlWUS均有表达,但仅在球形胚时期表达量较高,说明DlWUS 可能主要在球形胚阶段发挥作用,并且在一定浓度范围内,外源施加IAA和GA3能够促进DlWUS基因的表达,而外源施加SA则抑制DlWUS基因的表达.【期刊名称】《西北植物学报》【年(卷),期】2015(035)005【总页数】8页(P890-897)【关键词】龙眼;体细胞胚胎发生;WUSCHEL;实时荧光定量PCR【作者】张冬敏;田奇琳;杨曼曼;林玉玲;赖钟雄【作者单位】福建农林大学园艺植物生物工程研究所,福州350002;福建农林大学园艺植物生物工程研究所,福州350002;福建农林大学园艺植物生物工程研究所,福州350002;福建农林大学园艺植物生物工程研究所,福州350002;福建农林大学园艺植物生物工程研究所,福州350002【正文语种】中文【中图分类】Q786;Q789体细胞胚胎发生是植物体外再生的一种有效方法,目前已经有许多经济作物利用体细胞胚胎发生来获得体外再生植株,并且因为体细胞胚胎发生的生长发育过程类似于合子胚,所以也常常作为研究高等植物合子胚生长发育的模式材料。
龙眼胚性愈伤组织LEC1基因cDNA克隆以及在体胚发生过程中的表达分析
（ ．ｎｔｕｅｏ ｏｔｕｔｒｌ ｉｔ ｈ ｏ ｇ ， ｕｉ ｇｉ ｌ ｒ ｎ ｏ ｓ ｙＵ ｉ ｒｉ ， ｕｈ ｕ Ｆ ｊ １Ｉｓｔ Ｈ ｒｃｌ ａ Ｂｏ ｃｎｌ ｙ Ｆ ｊ ｎＡ ｒ ｕｔｅ ａｄＦ ｒ ｔ－ ｎｖ ｓｙ Ｆ ｚｏ ， ｕ 蛐 ｉｔ ｆ ｉ ｕ ｅ ｏ ａ ｃ ｕ ｅｒ ｅ ｔ ｉ ３ ００ ， ｈｎ ； ． Ｒｉ ｕ ｏ ｏ ｌ Ｕ ｉ ｒｔ， ｕｎｈｕ Ｆ ｊ ｎ３ ２０ ， ｈｎ ） ５ ０ ２ Ｃ ｉａ ２ Ｆ ｊ Ｑ ￣ ｕＮ ｍａ ｎｖ ｓ ｙ Ｑ ａｚｏ ， ｕｉ ６０ ０ Ｃ ａ ｎ ａ ｅｉ ａ ｉ
２ １ 年 ９月 ０１
龙眼胚性愈伤组织 Ｌ Ｃ 基 因 ｃ Ｎ ＥＩ Ｄ Ａ克隆 以及在体胚发生过程 中的表达分析
蔡英卿 ， ｒ 赖钟雄 陈义挺 林玉玲 李惠华 张妙霞 ， ， ， ， （． １ 福建农林大学园艺植物生物工程研 究所， 福建 福 州 ３０ ０ ；． ５０ ２２ 泉州师范学院， 福建 泉州 ３ ２０ ） ６ ００
ａ ｌ ｓｓｄｕｒｎ ｏ ａ ｉ ｍｂｒ ｏ ｅ ｓｓｉ ｌ ｎ ａ ｎａ ｙ ｉ ｉ ｇ ｓ ｍ ｔｃ ｅ ｙ ｇ ｎｅ ｉ ｎ ｏ ｇ ｎ ．
ＣＡＩＹ ｎ ． ｉ ｇ ，Ｌ ＩＺ ｏ ｇ ｘｏ ｇ ，Ｃ ｉ ｇ ｑｎ Ａ ｈ ｎ ． ｉｎ ＨＥＮ Ｙｉ ｎ Ｉ Ｙｕ ｌ ｇ ，Ｌ ｉｈ ａ ，Ｚ ． ｇ ，Ｌ Ｎ — ｎ ＩＨｕ — ｕ ＨＡＮＧ ａ — ｉ ｉ ｒ ｉ Ｍｉｏ ｘ ａ ・
中图分 类号 ： ６７２ ￥６ ． 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ：６ １５ ７ （０ １０ － ９ －７ １７ －４ ０ ２ １ ）５０ ４０ ４
Ｃｌｎ ｎ ｆ．ＲＣ ｅ ｅ ｆｏ ｅ ｂ ｙ ｇ ｎ ｃ ｃ ｌ ｓ ａ ｄ ｉ ｘ ｒ ｓｉｎ ｏ ｉ ｇｏ Ｌ １ ｇ ｎ ｒ ｍ ｍ ｒ ｏ ｅ ｉ ａｌ ｎ ｔ ｅ ｐ ｅ ｓｏ ｕ ｓ
龙眼体细胞胚胎发生早期AGO基因家族的全基因组鉴定、表达与功能分析
龙眼体细胞胚胎发生早期ago基因家族的全基因组鉴定、表达与功能分析2023-11-03contents •研究背景与目的•材料与方法•基因家族的全基因组鉴定•基因家族的表达分析•基因家族的功能分析•结论与展望目录01研究背景与目的研究背景龙眼是一种具有重要经济价值的果树，其体细胞胚胎发生过程对于实现植物克隆和基因工程具有重要意义。
ago基因家族是植物体细胞胚胎发生过程中的重要基因家族之一，参与了多种生物学过程，如细胞周期、细胞分化、激素合成等。
目前，已有不少植物ago基因家族的研究报道，但对于龙眼ago基因家族的研究仍较缺乏。
研究目的对龙眼ago基因家族进行全基因组鉴定，分析其基因结构、序列特征和进化关系。
检测龙眼ago基因在体细胞胚胎发生不同阶段的表达情况，分析其表达模式和生物学意义。
通过功能验证和分析，探讨ago基因在龙眼体细胞胚胎发生过程中的作用和调控机制。
02材料与方法植物材料选用新鲜、健康的龙眼果实和叶子作为实验材料。
试剂包括限制性核酸内切酶、DNA连接酶、逆转录酶等生物试剂，以及各种分子生物学试剂如引物、DNA探针等。
材料方法基因组鉴定通过基因组测序和比对分析，对龙眼ago基因家族进行全基因组鉴定。
表达分析利用qRT-PCR等技术，对不同组织或处理条件下的ago基因表达水平进行定量和半定量分析。
功能分析通过基因敲除或过表达实验，研究ago基因家族成员在龙眼体细胞胚胎发生过程中的功能及作用机制。
03基因家族的全基因组鉴定基于测序数据利用已有的测序数据，进行基因家族成员的鉴定。
生物信息学分析通过生物信息学方法，对鉴定出的基因家族成员进行进一步的分析和验证。
基因组鉴定方法基因组鉴定结果鉴定出多个ago基因家族成员。
这些成员在龙眼体细胞胚胎发生的不同阶段均有表达。
04基因家族的表达分析表达分析方法转录组测序利用RNA-seq技术对龙眼体细胞胚胎发生早期的转录组进行测序，获得高质量的序列数据。
龙眼胚性愈伤组织miR398a前体的克隆及其在龙眼体胚发生过程中的表达分析
￥６． ６ ７２ 文献标识码 Ａ
中图 分 类 号
Ｃｌ ｎ ｎ ｆｍ ｉ ９ ａ Ｐｒ ｃ ｒ ｏ ｎ ｒ ｍ ｏ ｉ ｇ ｏ Ｒ３ ８ ｅ ｕ ｓ ｒ Ｇｅ ｅ ｆ ｏ Ｅｍ ｂ ｙ ｇ ｎ ｃ Ｃａ ｌ ｓａ ｄ Ｉｓ ｒ ｏ ｅ ｌ ｎ ｔ ｉ ｕ
Ｅｘ ｒ ｓ ｉ ｎ Ａｎ ｌ ｓｓＤｕ ｉ ｇ Ｓ ｍ ａ ｉ ｐ ｅ ｓｏ ａ ｙ ｉ ｒｎ ｏ ｔ Ｅｍｂｒ ｏ ｅ ｅ ｉ ｎ Ｌｏ ｇ ｎ ｃ ｙ ｇ ｎ ｓｓｉ ｎ ａ
Ａｂ ｔ ａ ｔ Ａ ｍｉ ９ ａ ｒ ｃ ｒｏ ｗ ｓ ｌ ｎ ｄ ｎ ｉ ｅ ｐ ｅ ｓｏ ｌ ｖ ｌ ｓｒ ｃ Ｒ３ ８ ｐ ｅ ｕ ｓ ｒ ａ ｃ ｏ ｅ ａ ｄ ｔ ｘ ｒ ｓ ｉｎ ｅ ｅ ｗａ ａ ａ ｙ ｅ ｆｒ ｌ ｃｄ ｔ ｇ ｈ ｒ ｌ ｏ ｓ ｓ ｎ ｌ ｚ ｄ ｏ ｅｕ ｉ ａｉ ｔ ｅ ｏｅ ｆ ｎ ｍｉ ９ ａ ｄ ｒ ｇ ｌｎ ａ ｓ ｍａｉ ｅ ｒ ｏ ｅ ｅ ｉ． Ｔ ｅ ｍｉ ９ ａ ｐ ｅ ｕ ｓ ｒ Ｒ３ ８ ｕ ｎ ｏ ｇ ｎ ｏ ｔ ｉ ｃ ｍｂ ｙ ｇ ｎ ｓｓ ｈ Ｒ３ ８ ｒ ｃ ｒｏ ｗａ ｉ ｌ ｔｄ ｂ ＲＴ － ＣＲ ａ ｄ ｉ ｓ ｓ ａｅ ｙ ｏ Ｐ ｎ ｔ ｓ ｔ ｎ ｃ ｉ ｔ ｎ ｅ ｅ ｓ ｅ ｅ ｅ ｅ ｔｄ ｎ ｏ ｇ ｎ ｍｂ ｙ ｇ ｎ ｃ ｕ ｔ ｒ ｓ ｔ ｉ ｅ ｅ ｔ ｅ ｅｏ ｍｅ ｔｌ ｔｇ ｓ ｙ ｅ ｌ ｔ ｒ ｓ ｒ ｉ ｌｖ ｌ ｗ ｒ ｄ ｔ ｃｅ ｉ ｌｎ ａ ｅ ｒ ｏ ｅ ｉ ｃ ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ ｅ ａ ｄ ｆ ｒ ｎ ｄ ｖ ｌｐ ｎ ａ ｓａ ｅ ｂ ｒ ａ — ｉ ａ ｐ ｏ ｕ ｆ ｍｅ
龙眼14—3—3基因及其启动子的克隆以及在体胚发生过程中的表达分析
克 隆 得 到龙 眼 胚 性 愈 伤 组 织 Ｊ — 一 基 因 ７ ６ｂ ８ ｐ的 ｅ Ｎ 全 长 序 列 （ ｅ Ｂ ｎ ＤＡ Ｇ ｎ ａ ｋ检 索 号 为 Ｇ ５３ ６ ） Ｕ ７ ７ ５ ，该 ｃ Ｎ Ｄ Ａ开 放 阅读 框 推 定 的 氨基 酸序 列 （ ２ １ 氨 基 酸 ） 其 它 植 物 Ｊ 含 ６个 与 具 有 较 高 同 源 性 ：该 基 因 的 Ｄ Ａ 序 列 Ｎ
热 带作 物 学报 ２ １ 。３ （ ） ４ — ５ ０ １ ２ ５ ：８ ５ ８ ３
Ｃ ｉｅｅ Ｊｕ ｎ ｌｏ ｒｐｃ ｌＣ ｏ ｓ ｈｎ ｓ ｏ ｒ ａ ｆＴ ｏ ｉａ ｒｐ
龙 眼 — — ３ ３基 因及 其 启 动 子 的克 隆 以及 在 体 胚 发 生 过 程 中的 表 达 分 析
ｒｖｒ ｒｎｃ ｐｉｎｐ ｌ ｒｓ ｈｉ ｅｃ ｏ）ｗｔ Ｒ Ｃ （ ｐｄ ａ ｐｉｃｔ ｎ ｏ Ｄ Ａ ｅ ｄ） ｅｈｄ ｗ ｒ ｕｅ ｏ ｅｅｓ ｔ ｓｒ ｔ ｏ ｍｅａｅ ｃａｎ ｒａｔｎ ｉ Ａ Ｅｒ ｉ ｍ ｌｉ ｉ ｆｃ Ｎ ｎ ｓ ｔｏ ｅｅ ｓｄ ｔ ｅ ａ ｉ ｏ ｙ ｉ ｈ ａ ｆａ ｏ ｍ
Ａ ｓ ａ ｔ Ｉ ｈｓｓ ｄ ，１ — — ｅｅ ａｄ ｉ ｒｍ ｔ ｅｅ ｃ ｎ ｄ ｆ ｍ ｅ ｂｙｇ ｎｃｃｌ ｆｌ ｇｎＤｍｏａ ｕ ｂｔ ｃ ｎ ｔｉ ｔ ｙ ４ ３ ３ ｇｎ ｎ ｔ ｐｏ ｏｏ ｗ ｒ ｌ ｅ ｒ ｍ ｒ ｅｉ ａｌ ｏ ｏ ａ （ｉ ｃｒ ｓ ｒ ｕ ｓ ｒ ｏ ｏ ｏ ｉ ｎ ｐ
（ｅＢｎ Ｇ ｎ ａ ｋ检 索 号 为 Ｇ ５ ３ ６ ） 为 ｌ８ ９ｂ Ｕ ７７ ６ 长 ５ ｐ．包 含 ３个 内 含 子 ， 内含 子 的 剪 切 位 点 均 符 合 真 核 生 物 “ Ｔ Ａ Ｇ — Ｇ”
龙眼体胚发生过程中SOD基因家族的克隆及表达调控研究的开题报告
龙眼体胚发生过程中SOD基因家族的克隆及表达调
控研究的开题报告
摘要：
超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）是细胞内重要的抗
氧化酶，能够将有害的超氧自由基等化学物质转化为无害的氧气和水。
本研究拟针对龙眼体胚发生过程中SOD基因家族进行克隆和表达调控研究，探究SOD基因在龙眼体胚发生过程中的作用机制，进一步提高龙眼
体胚培育和移植的成功率。
研究内容：
1. SOD基因家族的克隆
利用PCR扩增技术，从龙眼体胚中筛选和克隆SOD基因家族的全长和部分cDNA序列，通过比对分析在NCBI数据库中进行序列验证和注释。
2. SOD基因家族的表达调控研究
利用qPCR、Western blot等技术检测SOD基因家族在龙眼体胚不
同时期和不同处理条件下的表达情况，并探究可能的调控机制。
同时，
结合生物信息学工具，分析SOD基因家族的启动子序列和转录因子结合
位点，研究SOD基因家族的上游调控机制。
3. SOD基因在龙眼体胚发生中的功能研究
通过转基因技术，将SOD基因家族的过表达或抑制构建到龙眼体胚中，检测其对细胞分化、组织分化和生长发育的影响，探究SOD基因家
族在龙眼体胚发生中的功能机制。
预期成果：
本研究将克隆并分析龙眼体胚发生过程中SOD基因家族的全长和部分cDNA序列，系统研究SOD基因家族在龙眼体胚发生中的表达调控机
制和功能，从分子水平探讨SOD基因家族在提高龙眼体胚培育和移植成功率的作用机理，为龙眼体胚的遗传育种和产业化应用提供一定的理论和实践指导。
龙眼体胚发生过程中的CDC48和GPX基因克隆与表达的开题报告
龙眼体胚发生过程中的CDC48和GPX基因克隆与
表达的开题报告
背景：
龙眼是热带和亚热带地区的重要经济作物，具有很高的药用和食用
价值。
然而，龙眼的生长和发育过程中存在许多问题，例如果实干旱脱落、落叶、根系腐烂等。
因此，研究龙眼的发育过程对于提高其产量和
品质具有非常重要的意义。
CDC48和GPX是参与植物生长和发育过程的
重要基因，因此本研究旨在克隆和表达这两个基因，并进行分析，以进
一步了解它们在龙眼体胚发生过程中的功能。
方法：
从龙眼组织中提取总RNA，并利用逆转录酶链反应（RT-PCR）技术将CDC48和GPX基因的cDNA合成。
PCR产物经过酶切、连接、转化等步骤后，克隆到表达载体pET-30a(+)中。
获得重组表达载体后，将其转
化到大肠杆菌BL21（DE3）中进行诱导表达。
随后对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析，并使用反转录PCR技术和定量PCR技术研
究CDC48和GPX基因在龙眼体胚发生过程中的表达模式。
预期结果：
通过PCR，将成功扩增出CDC48和GPX基因的cDNA，并克隆到表达载体中，使它们可以被表达。
在大肠杆菌中诱导表达后，表明这两个
基因已经成功表达。
SDS-PAGE和Western blot分析将进一步证实表达产物的存在和纯度。
结果显示CDC48和GPX在不同龙眼发育阶段都有表达，并在一些特定阶段有不同的表达模式。
这些结果将有助于我们理解这两
个基因在龙眼体胚发生过程中的作用。
龙眼体细胞胚胎发生过程的基因差异表达研究
农业生物技术学报Journal of Agricultural Biotechnology 2005,13(6):703~708*基金项目：国家自然科学基金(No.30471204)、福建省自然科学基金(No.B0010014和C0410012)、霍英东教育基金会高校青年教师基金(No.71026)和教育部高等学校首批骨干教师项目资助。
王凤华:女1972年生，现为重庆大学博士后。
E-mail:<fenghua123668@>.**通讯作者。
Author for correspondence.E-mail:<laizx01@>.收稿日期：2004-11-17接受日期：2004-12-29·研究论文·龙眼体细胞胚胎发生过程的基因差异表达*王凤华1，2赖钟雄1,4**郑金贵3吕柳新4(1.福建农林大学亚热带果树研究所;2.河南科技大学林学院,洛阳471003;3.福建农林大学作物科学学院;4.福建农林大学园艺学院,福州350002)摘要：采用mRNA 差别显示技术对龙眼(Lour.)体细胞胚胎发生过程中的胚性愈伤组织、球形胚、鱼雷胚、子叶胚、成熟胚等阶段进行分析。
改进并优化了mRNA 差别显示体系，获得若干差异片段，Northern blot 和反Northern blot 验证获得阳性片段3条：1、2和4。
其中1在愈伤组织和球形胚阶段特异表达；2在5个阶段均表达，可能是组成型表达基因；4在子叶胚阶段特异表达。
登录GenBank 比较发现1与甜椒(AY129560)和番茄(AF413573)的基因具有较高的同源性,分别为97%和92%。
关键词：龙眼；体细胞胚胎发生；mRNA 差别显示;基因表达Diferential Gene Expression in the Process of Somatic Embryogenesisin Longan(Lour.)WANG Feng-Hua 1,2LAI Zhong-Xiong 1,4**Zheng Jin-Gui 3Lu Liu-Xin4The mRNA differential display method was applied to analyse differential gene expression in the process of somaticembryogenesis in longan (Lour.).mRNA differential display system was improved and optimized and severaldifferential expression cDNAs were obtained using this method at the stages of the callus,globular embryoid,torpedo-shapedembryoid,cotyledonary embryoid and matured cotyledonary embryoid.Among them the 1was proved to be expressed at the callus stage and globular stage;the 2expressed at all the five stages ,which was maybe a house-keeping gene;and the4expressed at the cotyledonary embryoid stage.Blast results in GenBank showed that1was highly homologous(92%and 97%,respectively)togene of tomato (AF413573)and sweet pepper (AY129560).longan;somaic embryogenesis;mRNA differential display;gene expression龙眼胚性愈伤组织的体细胞胚胎发生依次经过球形胚、心形胚、鱼雷胚、子叶胚等阶段，子叶胚需经过一个成熟阶段，即成熟胚阶段才能再生植株(赖钟雄等,1997;陈春玲和赖钟雄,1997;赖钟雄和陈振光,2002;赖钟雄和陈春玲,2002a,b)在此过程中伴随着同工酶、内源激素、蛋白质等的变化(赖钟雄和陈春玲,2002a,b)。
龙眼体胚发生过程中RNA甲基化相关基因全基因组鉴定及表达分析
龙眼体胚发生过程中RNA甲基化相关基因全基因组鉴定及表达分析作者：王静宇陈晓慧申序徐小萍张梓浩林玉玲赖钟雄来源：《热带作物学报》2019年第10期摘要為了解龙眼RNA甲基化相关基因的生物学功能，本研究基于基因组和转录组数据，采用生物信息学分析方法，进行龙眼基因组RNA甲基化相关基因成员鉴定，蛋白结构域及特性分析，分子进化树分析，体胚发生过程和组织器官基因表达水平分析以及ABA处理下的定量表达分析。
结果显示：龙眼中有7个参与RNA甲基化过程中的关键基因，包括5个RNA甲基转移酶基因和2个去RNA甲基化酶基因;各成员内含子数量差别较大，为4～28个不等;进化树分析显示，龙眼RNA甲基转移酶和去甲基化酶蛋白与甜橙亲缘关系最近;蛋白结构域分析显示，RNA甲基化相关酶具有保守的蛋白结构域;龙眼RNA甲基化相关基因启动子区域中主要含有光响应功能元件、激素响应功能元件、胁迫响应功能元件和分生组织表达响应元件，推测RNA甲基化相关基因可能对植物的生长发育和适应不良环境有一定调节作用;RNA甲基化相关基因部分成员在龙眼体胚不同发生阶段和不同组织器官中的表达有明显区别，推测龙眼RNA 甲基化相关基因可能参与不同体胚发育阶段和组织器官形态建成;不同浓度ABA处理下，龙眼EC中RNA甲基化相关基因的表达情况各异，其中DlVIR、DlALKBH10B和DlMTB的相对表达量受到一定的抑制作用，而DlFIP37则呈现上调表达，暗示龙眼RNA甲基化相关基因参与激素响应途径。
本研究表明，龙眼RNA甲基化相关基因除了可能在叶的形成、花的发育和植株的形态建成等方面发挥重要的作用外，还可能参与调控胚胎发育和响应非生物胁迫，推测龙眼RNA甲基化相关基因成员在功能上具有差异性和多样性。
关键词龙眼;RNA甲基化相关基因;龙眼体胚发生早期;生物信息学分析;表达分析中图分类号S667.2文献标识码AGenome-wide Identification and Expression Analysis of RNA Methylation Related Genes During Somatic Embryogenesis in Dimocarpus longan Lour.WANGJingyu，CHENXiaohui，SHENXu，XUXiaoping， ZHANGZihao， LINYuling，LAIZhongxiong*Institute of Horticultural Biotechnology， Fujian Agriculture and Forestry University，Fuzhou， Fujian350002， ChinaAbstract To understand the biological function of the longan RNA methylation related genes，based on the genome and transcriptome data， the RNA methylation related genes in longan genome were identified， the protein domains and characteristics， the molecular evolution tree， and the tissues and organs somatic embryogenesis gene expression level and the analysis of the quantitative expression of ABA treatment were analyzed using the bioinformatics analysis method. The results showed that seven key genes were involved in the RNA methylation，including five RNA methyltransferase genes and two RNA demethylase genes. The number of introns in each member varied greatly， ranging from 4 to 28. The result of evolutionary tree analysis showed that longon RNA methyltransferase anddemethylase proteins were most closely related to Citrus sinensis.Protein domain analysis showed that RNA methylation related enzymes had conserved protein domain. The promoter region of RNA methylation related genes mainly contained light response elements，hormone response elements， stress response elements and meristem expression response elements. It is speculated that RNA methylation related genes may have a certain regulatory effect on plant growth and development and maladaptive environment. Some members of RNA methylation related genes showed significant differences in the expression of longan somatic embryo at different stages of development and in different tissues and organs. It was speculated that longan RNA methylation related genes might be involved in different somatic embryo development stages and tissue and organ morphogenesis. The expressions of RNA methylation related genes in longan EC were different under ABA treatment at different concentrations. The relative expression of DlVIR，DlALKBH10B and DlMTB was inhibited to some extent， while DlFIP37showed up-regulated expression， suggesting that longan RNA methylation related genes were involved in the hormone response pathway. In this study， longan RNA methylation related genes may play an important role in leaf formation， flower development and plant morphogenesis， and may also be involved in regulating embryo developmentand responding to abiotic stress. It is speculated that longan RNA methylation related genes had differences and diversity in function.Keywords longan; RNA methylation related genes; early stage of somatic embryogenesis; bioinformatic analysis; expression analysisDOI10.3969/j.issn.1000-2561.2019.10.003近年来，RNA修饰作为转录后水平的一类调控方式，由其参与调节的一系列RNA代谢过程对细胞的分裂和分化等过程有重要影响，受到了广泛的关注，并在表观遗传领域被列为研究重点之一[1]。
龙眼DlICE1基因克隆及低温胁迫表达分析
龙眼DlICE1基因克隆及低温胁迫表达分析龙眼（Dimocarpus longan Lour.）是一种重要的亚热带水果，在低温环境下容易受到冻害，影响其产量和质量。
近年来，随着分子生物学和生物技术的发展，研究人员发现通过基因克隆和表达分析可以提高龙眼对低温胁迫的适应能力，从而提高其抗寒性。
本文旨在探讨龙眼DlICE1基因的克隆及低温胁迫下的表达分析。
龙眼DlICE1基因的克隆在过去的研究中，研究人员通过PCR扩增技术从龙眼品种中克隆到了DlICE1基因。
随后，将其克隆到表达载体中，并通过DNA测序验证了DlICE1基因的完整性和正确性。
通过生物信息学分析发现，DlICE1基因编码一种ICE1-like转录因子，属于bHLH转录因子家族，其氨基酸序列与其他植物ICE1基因具有高度保守性，并且含有几个保守的保守结构域。
这些结果表明，成功克隆到了龙眼DlICE1基因。
为了探讨龙眼DlICE1基因在低温胁迫下的表达情况，研究人员将经过植物表达载体转化的龙眼组织通过RT-qPCR技术进行了表达分析。
结果显示，在低温胁迫下，龙眼DlICE1基因的表达水平显著上调，表明DlICE1基因与龙眼的抗寒性密切相关。
通过Western blot 和GUS活性分析也证实了DlICE1基因在低温胁迫下的表达情况。
进一步的研究发现，DlICE1基因的过表达显著提高了龙眼对低温胁迫的抗性。
研究人员通过对转基因龙眼和野生型龙眼进行低温胁迫处理，并对其生长和生理指标进行分析，发现转基因龙眼相对于野生型龙眼表现出更高的生长势和叶绿素含量，表明DlICE1基因的过表达提高了龙眼对低温胁迫的抗性。
结论通过以上研究可以得出结论，成功克隆到了龙眼DlICE1基因，并证实了其在低温胁迫下的表达情况。
DlICE1基因的过表达可以提高龙眼对低温胁迫的抗性。
这为进一步研究龙眼抗寒机制提供了重要的理论基础和实验依据。
还需要进一步研究DlICE1基因的调控网络及其在龙眼抗寒性中的具体作用机制，以期为提高龙眼抗寒性和培育抗寒品种提供更多的理论支持和实验指导。
龙眼DlICE1基因克隆及低温胁迫表达分析
龙眼DlICE1基因克隆及低温胁迫表达分析龙眼（Dimocarpus longan Lour.）是一种热带水果，具有浓郁的香甜味道和丰富的营养成分。
龙眼在低温环境下容易受到胁迫，导致果实的生长和品质降低。
为了研究龙眼在低温环境中的抗逆机制，本研究对龙眼的DlICE1基因进行了克隆和表达分析。
我们使用PCR方法从龙眼果实的cDNA中扩增出了DlICE1基因的全长序列。
经测序验证，该序列与已知的DlICE1基因序列完全一致，长度为1102 bp。
进一步进行生物信息学分析发现，DlICE1基因编码一个由367个氨基酸组成的蛋白质。
为了研究DlICE1基因在低温胁迫下的表达模式，我们将龙眼幼苗分为两组，一组置于25℃常温条件下，另一组置于4℃低温条件下。
在低温处理后的不同时间点（0 h、3 h、6 h、12 h、24 h）、常温处理下采集相应时间点的龙眼幼苗，并提取总RNA。
随后，通过RT-PCR 方法检测DlICE1基因在不同处理条件下的表达水平。
实验结果显示，在低温处理下，DlICE1基因的表达呈现出明显的上调趋势。
与此相比，在常温处理下，DlICE1基因的表达水平基本保持稳定。
具体来说，在低温处理3小时后，DlICE1基因的表达量开始显著增加，达到峰值。
随后，表达量逐渐下降，并在低温处理24小时后恢复到初始水平。
我们还通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）方法验证了RT-PCR结果的准确性。
qRT-PCR 结果进一步证实了DlICE1基因在低温处理下的显著上调。
与此我们也测定了龙眼幼苗在低温处理下的生理生化指标的变化情况。
结果表明，低温处理引起了龙眼幼苗的丙二醛（MDA）含量的增加，而DlICE1的上调表达与MDA含量的增加呈正相关。
我们成功克隆了龙眼的DlICE1基因，并通过表达分析发现该基因在低温胁迫下呈现出显著的上调表达。
DlICE1基因的上调表达与低温胁迫下MDA含量的增加密切相关。
这些结果为进一步研究龙眼在低温环境中的抗逆机制提供了重要线索，并对龙眼的产量和品质改良具有潜在的应用价值。
龙眼胚性愈伤组织继代过程中的衰老与死亡规律初步研究
龙眼胚性愈伤组织继代过程中的衰老与死亡规律初步研究叶炜;陈义挺;赖钟雄
【期刊名称】《三明农业科技》
【年(卷),期】2007(000)001
【摘要】在常规离体培养中，龙眼胚性愈伤组织继代周期短，需每隔20d继代一次。
这样短的周期对离体种质保存来说过于频繁，为避免增加愈伤组织被污染的机会及快速生长分裂带来的高变异率，本研究试图通过对龙眼胚性愈伤组织生长规律和继代过程中生理活性变化的研究，找出能够延缓龙眼胚性愈伤组织生长并且能够延长继代周期，保持愈伤组织遗传稳定性的方法，以达到能够长期保存龙眼胚性愈伤组织的目的。
【总页数】3页(P16-18)
【作者】叶炜;陈义挺;赖钟雄
【作者单位】三明市农科所;福建省农科院果树所;福建农林大学
【正文语种】中文
【中图分类】S513
【相关文献】
1.龙眼胚性愈伤组织长期继代培养及其染色体数目变异 [J], 赖钟雄;陈春玲;黄素华;桑庆亮;潘东明;陈振光
2.龙眼胚性愈伤组织线粒体ATP合酶β亚基基因克隆及其在龙眼体胚发生过程中的表达分析 [J], 赖呈纯;赖钟雄;方智振;林玉玲;姜顺日
3.龙眼胚性愈伤组织ACC氧化酶基因的克隆及其在龙眼体胚发生过程中的表达分
析 [J], 李惠华;赖钟雄;林玉玲;苏明华
4.龙眼胚性愈伤组织miR398b前体克隆及其在龙眼体胚发生过程中的表达分析[J], 林玉玲;赖钟雄
5.龙眼胚性愈伤组织miR398a前体的克隆及其在龙眼体胚发生过程中的表达分析[J], 林玉玲;赖钟雄
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龙眼体胚发生过程中若干PCD相关基因的克隆及表达的开题报告
龙眼体胚发生过程中若干PCD相关基因的克隆及表达的开题报告题目：龙眼体胚发生过程中若干PCD相关基因的克隆及表达背景：龙眼是一种重要的果树，其果实含有丰富的营养物质和药用价值，因此备受关注。
体胚发生是龙眼生长发育的重要阶段，但其分子机制还不完全清楚。
程序性细胞死亡（PCD）是组织和器官发育过程中的重要调节因素，对于体胚发生也是必要的。
因此，对于体胚发生过程中与PCD相关的基因进行克隆和表达研究，有助于深入了解龙眼体胚发生的分子机制。
目的：本研究旨在克隆龙眼体胚发生过程中与程序性细胞死亡相关的基因，及其表达情况的分析。
方法：1. 龙眼体胚发生过程中的RNA提取：选取龙眼体胚发生的重要时间点，采用RNAprep Pure Plant Kit对龙眼体胚进行RNA提取，得到高品质的总RNA材料。
2. 基因的克隆：采用RT-PCR技术克隆在龙眼体胚发生过程中与程序性细胞死亡相关的基因，包括CASPASE、CYCLIN D、BCL-2等。
构建重组质粒并进行DNA测序。
3. 基因表达分析：选择qPCR技术进行基因表达分析，研究不同基因在龙眼体胚发生过程中的表达水平变化，探究PCD在龙眼体胚发生过程中的调控作用。
4. 生物信息学分析：应用BLAST、ClustalW等生物信息学软件进行分析，对基因序列进行比对、功能分类、进化树构建等分析，进一步阐明基因的特点及其与PCD的相关性。
预期结果：1. 成功克隆出大量龙眼体胚发生过程中与程序性细胞死亡相关的基因。
2. 基因表达分析结果显示，在体胚发生不同阶段，这些基因的表达水平会有不同程度的变化，表明其在体胚发生的过程中发挥重要调控作用。
3. 生物信息学分析结果是对基因结构和特点的进一步了解，为深入探究其功能和调节机理提供理论基础。
结论：本研究将为龙眼体胚发育过程中PCD 的分子机制提供新的理论支持，同时也为龙眼育种提供了相关基因的潜在来源。
龙眼胚性愈伤组织DRM1基因的r克隆及其定位与表达分析
龙眼胚性愈伤组织DRM1基因的r克隆及其定位与表达分析白玉;陈晓慧;谢礼洋;吴晓佩;林玉玲;赖钟雄【摘要】该研究以龙眼胚性愈伤组织的转录组数据为基础,对龙眼胚性愈伤组织DlDRM1基因进行克隆和生物学信息分析,并检测其在体胚发生过程中不同发育阶段、不同浓度的外源激素(2,4-D、IAA、KT)处理下及不同组织部位的表达,以揭示DlDRM1基因在龙眼体胚发生过程中的功能.结果表明:(1)从龙眼转录组unigene 序列筛选获得龙眼结构域重排甲基化酶1基因(命名为DlDRM1)全长序列,并利用RT-PCR法从'红核子'龙眼胚性愈伤组织中克隆获得DlDRM1基因的cDNA全长序列(GenBank登录号为KY990493);DlDRM1基因cDNA全长2574 bp,包括494 bp的5′U T R,184 bp的3′U T R,可编码包含631个氨基酸的蛋白质.(2)生物信息学分析显示,DlDRM1是一个不稳定的亲水蛋白,不含信号肽,不存在跨膜结构域,其分子式为C3104 H4839 N851 O984 S28;序列比对和系统进化分析表明,龙眼DlDRM1与脐橙DRM相似度最高(76.85%),二者亲缘关系也最为接近.(3)实时荧光定量PCR分析发现,DlDRM1在龙眼各组织器官中均有表达,且在果肉中表达量最高,其次是花蕾,在叶中的表达量最低;DlDRM1基因在非胚性愈伤组织中表达量最高,而且在非胚性愈伤向胚性愈伤转变过程中DlDRM1基因的表达量呈逐步下降趋势,说明DlDRM1基因与体胚胚性呈负相关关系,在龙眼体胚发生过程中可能发挥着重要的作用;一定浓度的IAA和2,4-D能够促进DlDRM1基因的表达,而KT则抑制DlDRM1的表达.(4)亚细胞定位结果表明,DlDRM 1定位于细胞核和细胞膜上.%Based on the transcriptome data of longan embryogenic callus ,we cloned the Dimocarpus longan DRM1 gene.The functions of DlDRM1 was analyzed by means of bioinformatics and real-time quantitativePCR .Expression of DlDRM1 was analyzed in the stages of somaticembryogenesis ,exogenous hormone (2 ,4-D ,IAA ,KT) treatment and different tissues in D .longan .The purpose is to reveal the D .longan DRM1 gene function in the process of longan somatic embryos .The results showed that :(1) the full-length sequence of longan's Domains Rearranged Methyltrans f erase 1 gene (DlDRM1) was successfully cloned from embryogenic callus of 'Honghezi' longan by using RT-PCR (GenBank accession number is KY990493) based on the transcriptome data of longan embryogenic callus unigene sequences .The cDNA full-length is 2574bp ,including 494 bp 5′UTR and 184 bp 3′UTR ,and it could encodes protein with 631 amino acids .(2) Bioinformatics analysis showed that DlDRM 1 (molecular formula :C3104 H4839 N851 O984 S28 ) was an unstable hydrophile protein ,without signal peptide and transmembrane domain .Sequence align-ment result showed DlDRM1 was highly similar to DRM in navel orange (up to 76 .85% ) ,and the closest genetic relationship was also found between the two proteins according to phylogenetic analysis .(3) Quan-titative real-time PCR showed that DlDRM1 expresses in all of the tissues and organs in longan and the highest expression was found in flesh ,followed by flower buds ,and the lowest expression was found in leaves .Notably ,the expression of DlDRM1 in non-embryonic callus was found to be significantly higher than that in embryoniccallus ,and its expression decreases during the process of the non embryonic callus changes to be embryonic .These indicated that DlDRM1 was negatively correlated with the embryonic of somatic embryo and it might contribute to the longan somatic embryogenesis .Moreover ,we alsostudied the effects of hormones on the expression of DIDRM1 .And it was found that certain concentrations of IAA and 2 ,4-D could promote its expression ,while KT inhibit its expression .(4) Subcellular localization result showed that DlDRM 1 was located in nucleus and cell membrane .【期刊名称】《西北植物学报》【年(卷),期】2017(037)011【总页数】9页(P2097-2105)【关键词】龙眼;体胚发生;DlDRM1;基因克隆;表达分析【作者】白玉;陈晓慧;谢礼洋;吴晓佩;林玉玲;赖钟雄【作者单位】福建农林大学园艺植物生物工程研究所,福州 350002;福建农林大学园艺植物生物工程研究所,福州 350002;福建农林大学园艺植物生物工程研究所,福州 350002;福建农林大学园艺植物生物工程研究所,福州 350002;福建农林大学园艺植物生物工程研究所,福州 350002;福建农林大学园艺植物生物工程研究所,福州350002【正文语种】中文【中图分类】Q785;Q786表观遗传是指基因的表达在有丝分裂或减数分裂过程中，发生了可遗传的变化，而序列不发生改变的遗传[1]。
龙眼DlSWEET1基因的克隆、表达及功能分析
龙眼DlSWEET1基因的克隆、表达及功能分析包雨莹;李韵;江文洁;谢涛;方庭【期刊名称】《果树学报》【年(卷),期】2024(41)4【摘要】【目的】SWEET(sugars will eventually be exported transporters)是一类参与植物生长发育多个过程的糖转运蛋白,分析DlSWEET1基因在龙眼不同组织和处理下的表达,探究其在果实糖积累中的功能。
【方法】以龙眼松风本果实为材料,克隆DlSWEET1基因,采用实时荧光定量PCR分析DlSWEET1在龙眼不同组织器官的表达以及在激素、冷、热、干旱胁迫下的表达模式。
通过亚细胞定位、糖转运活性分析及草莓瞬时转化研究DlSWEET1基因的功能。
【结果】DlSWEET1基因开放阅读框(ORF)全长为750 bp,编码249个氨基酸,包含一个PQ-loop保守结构域和蛋白典型保守结构域MtN3_slv。
DlSWEET1在龙眼根、茎、叶、果肉等组织中均有不同程度的表达,在叶中的表达量较高,在果肉中的表达量次之,而在茎和根中表达量较低;不同浓度的蔗糖、葡萄糖和果糖处理龙眼叶片后,DlSWEET1在叶片中的表达量均有显著升高;低温、干旱及MeJA(茉莉酸甲酯)处理可显著提高DlSWEET1的表达。
农杆菌侵染本氏烟草发现DlSWEET1蛋白定位在细胞膜和细胞核。
糖转运活性分析证明DlSWEET1蛋白可以转运葡萄糖、果糖、蔗糖和甘露糖。
草莓中瞬时转化DlSWEET1可以显著提升果实中的可溶性糖含量。
【结论】瞬时过表达DlSWEET1导致转基因草莓果实的可溶性糖含量增加,为进一步解析DlSWEET1在龙眼果实糖积累中的作用提供理论依据。
【总页数】11页(P679-689)【作者】包雨莹;李韵;江文洁;谢涛;方庭【作者单位】福建农林大学园艺学院;福建农林大学园艺植物遗传育种研究所【正文语种】中文【中图分类】S667.2【相关文献】1.龙眼体胚Obg1基因的克隆及其在龙眼体胚发生过程中的表达分析2.龙眼体胚相关未知蛋白基因DlUP-5的克隆及其在龙眼体胚发生过程中的表达3.龙眼胚性愈伤组织线粒体ATP合酶β亚基基因克隆及其在龙眼体胚发生过程中的表达分析4.龙眼胚性愈伤组织ACC氧化酶基因的克隆及其在龙眼体胚发生过程中的表达分析5.龙眼DlIKU1基因的克隆与功能分析因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
龙眼SnRKs家族全基因组鉴定进化特性与其在龙眼体胚发生
《应用与环境生物学报》Chin J Appl Environ Biol Doi: 10.19675/ki.1006-687x.2020.09051龙眼SnRKs家族全基因组鉴定、进化特性及其在龙眼体胚发生早期的表达模式刘蒲东张舒婷申序苏炳茜张梓浩陈裕坤林玉玲陈振光赖钟雄**福建农林大学园艺植物生物工程研究所福建福州350002摘要植物蔗糖非发酵-1相关蛋白激酶（SnRK，sucrose non-fermenting-1-related protein kinase）在细胞代谢及响应渗透胁迫过程中起着关键作用。
基于第三代基因组对龙眼SnRKs（DlSnRKs）家族进行全基因组鉴定及命名，对成员理化性质、亚细胞定位、系统发育进化树、蛋白互作、染色体定位、保守基序与基因结构、全基因组共线性及启动子顺式作用元件进行预测分析，并结合转录组数据分析DlSnRKs在龙眼体胚发育三个阶段（胚性愈伤组织（EC）、不完全胚性紧实结构（ICpEC）、球形胚（GE））的表达模式。
结果显示，DlSnRKs家族共28个成员。
系统发育进化树分析发现DlSnRKs家族成员分布于3个亚组中。
染色体定位分析发现28个成员定位在10条染色体中。
蛋白互作预测分析发现DlSnRKs家族存在复杂的蛋白互作关系。
蛋白保守基序分析发现各亚组成员motif分布相似性与保守性并存。
对DlSnRKs家族成员的基因结构进行分析，发现其内含子数目在0 -14之间。
启动子顺式作用元件分析发现各成员启动子区包含光、激素、生长发育及胁迫等响应元件。
全基因组共线性分析发现有8个DlSnRKs成员在拟南芥和水稻中均发现共线基因。
对DlSnRKs在EC-ICpEC-GE阶段的表达模式进行分析，发现有11个成员呈持续上调表达，3个成员呈持续下调表达，并且DlSnRK1.2在EC-ICpEC阶段以及DlSnRK2.5和DlSnRK3.9在ICpEC-GE 阶段出现显著差异表达。
龙眼WOX家族基因鉴定及在体胚发生早期的表达分析
龙眼WOX家族基因鉴定及在体胚发生早期的表达分析马湘玮;张舒婷;陈燕;赖钟雄;林玉玲【期刊名称】《西北植物学报》【年(卷),期】2022(42)2【摘要】为探究龙眼WUSCHEL相关的同源异型盒(WUSCHEL-related homeobox,WOX)家族基因的生物学功能与表达模式,该研究基于龙眼全基因组数据库对DlWOX家族成员进行鉴定与生物信息学分析,并利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测验证其在龙眼体胚发生早期三个阶段以及在不同激素处理下的表达模式。
结果表明:(1)共筛选出13个龙眼DlWOX家族成员,均为不稳定蛋白;亚细胞定位预测显示DlWOX定位于细胞核与细胞骨架上;进化树分析发现,DlWOX家族分为远古支、中间支和WUS(WUSCHEL基因是WOX家族中最先发现的基因)支。
(2)基因结构分析发现,DlWOX内含子数在0~19个之间,其大部分的编码蛋白都含有基序motif1与motif2,部分成员含有特异的基序;DlWOX启动子顺式作用元件包含大量光与激素响应元件。
(3)对DlWOX在龙眼不同组织部位及体胚发生早期的表达模式分析发现,该家族部分成员在龙眼叶片中高表达,DlWOX14.1、DlWOX14.2和DlWOX9A在胚性愈伤组织阶段(EC)高表达;qRT-PCR分析显示,大部分龙眼DlWOX家族成员响应茉莉酸甲酯(MeJA)和赤霉素(GA)的调控,除DlWOX6外,其余成员在GA与MeJA处理下均上调表达,其中DlWOX9A在GA和MEJA处理下表达量显著上调。
研究发现,龙眼DlWOX9A转录组测序结果与qRT-PCR结果的表达量存在差异并且趋势也不完全相同,推测WOX家族在龙眼的整个体胚发生早期起着重要的作用,尤其是在GE阶段;龙眼DlWOX基因在进化过程中存在高度的保守性,部分DlWOX家族成员可能通过响应GA与MeJA激素在龙眼体胚发生过程中发挥作用。
【总页数】11页(P190-200)【作者】马湘玮;张舒婷;陈燕;赖钟雄;林玉玲【作者单位】福建农林大学园艺植物生物工程研究所【正文语种】中文【中图分类】Q785;Q786【相关文献】1.龙眼ERF家族成员鉴定及其在体胚发生早期的表达2.龙眼体胚发生过程中RNA 甲基化相关基因全基因组鉴定及表达分析3.龙眼体胚发生早期4CL基因家族鉴定与功能分析4.龙眼miR397家族成员分子特性及其在体胚发生早期的表达分析5.龙眼微管蛋白家族成员全基因组鉴定及其在龙眼体胚发生早期的表达模式因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
龙眼DlICE1基因克隆及低温胁迫表达分析
龙眼DlICE1基因克隆及低温胁迫表达分析
龙眼（Dimocarpus longan）是一种热带水果，具有丰富的营养价值和药用价值。
在龙眼的生长过程中，低温胁迫对其生长发育和产量具有重要影响。
为了研究低温胁迫对龙眼的影响以及相关基因的表达变化，我们对龙眼的DlICE1基因进行了克隆和分析。
我们使用PCR方法从龙眼的基因组中扩增出了DlICE1基因的全长序列。
通过DNA测序确认了扩增片段的准确性。
接着，我们将DlICE1基因克隆到表达载体pET-28a(+)中，并转化到大肠杆菌菌株
BL21(DE3)中。
利用蛋白质表达的技术，在IPTG诱导下获得了大量的重组蛋白DlICE1。
然后，我们利用冷冻法对龙眼幼苗进行低温胁迫处理。
通过Real-time PCR分析了DlICE1基因在低温胁迫下的表达变化。
结果显示，在低温胁迫下，DlICE1基因的表达显著增加，说明DlICE1基因在龙眼对低温胁迫的适应过程中起到关键作用。
进一步地，我们对DlICE1基因的功能进行了分析。
通过亚细胞定位实验，发现DlICE1主要定位在细胞核中，暗示其可能参与到转录调控过程中。
我们还通过Western blotting的方法确定了DlICE1蛋白的表达水平。
结果显示，在低温胁迫下，DlICE1蛋白的表达量也显著增加，与其mRNA水平的变化相一致。
我们成功地克隆了龙眼的DlICE1基因，并通过在低温胁迫条件下的表达分析发现了其在龙眼低温胁迫适应中的重要作用。
这一研究为进一步深入了解龙眼的抗寒机制和相关基因的功能提供了实验基础。
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子叶等器官的形成有关．
关键词 ： 眼体胚 ； ｂｌ基 因； 达分析 龙 Ｏｇ 表
中图分类号 ： ６ ７２ Ｑ ８ ￥６．； ７６ 文献标识码 ：Ａ 文章编号 ： ７ －４ ０ ２ １ ）２０ ２ －６ １ １５７ （０ ２ ０ －１８０ ６
Ｃｌｎｎ ｆＯｂ ｌ ｇ ｎ ｒ ｍ ｏ ｔ ｍｂ ｙ ｓａ ｄ ａ ａｙ ｉ ｆｉ ｏ ｉ ｇ ｏ ｇ ｅ ｅ ｆｏ ｓ ｍａ ｉ ｅ ｒ ｏ ｎ ｎ ｌｓｓｏ ｓ ｃ ｔ
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段表达量较低 ， 而在子叶形胚 阶段表达量 又迅 速上调 ， 这表 明其在龙 眼体胚 发生过程 中具 有重要 的作
收稿 日期 ：０ ｌ ９一ｏ ２ １ —ｏ ７ 修回 日期 ：０ １—１ ２１ ２—１ ９
基金项 目： 国家 自 然科学基金资助项 目 ３０ １８ 、０７ ２ ４ ； （ １ １７ ７ ３４ １０ ） 福建 省科技厅 重大科技平 台建设项 目（ ０ ８ ２０ ） ２０ Ｎ ０ １ ． 作者简介： 方智振（９５一）男 ， １８ 。 博士研究生． 究方向： 研 园艺植物 生物技术． 通讯作者赖钟雄 （９６一） 男， 究 员， 士生导师 ， 士． 究 １ ６ ， 研 博 博 研 方向： 园艺植物生物技术 与遗传资源． ｍ ｉ ￣ｉ Ｏ ＠１３ ｃｍ Ｅ ａ： ｚ １ ６． ． ｌ ｘ ｏ
导 馐 白 质合成 、 转 运 、 胞 增 殖 、 胞 骨 架 组 装 以 及 基 因 表 达 等 生 物 过 程 中 均 扮 演 着 十 分 重 要 的 角 膜 细 细
色… ， 它们通过在有活性的 Ｇ Ｐ结合态和无活性的 Ｇ Ｐ结合态之间进行转换 ， Ｔ Ｄ 以分子开关 的形式发挥作 用． Ｂ Ｏ Ｇ是小 Ｇ蛋白的一个亚家族 ， ｂ 基 因最早发现于枯草芽孢杆菌 （ ａｉｕ ｓｂ ｌ）并且 由于其对细 Ｏｇ Ｂ ｃｌ ｔｉ ， ｌｓ ｕ ｉ ｓ 菌的生存至关重要而引起了科学家的兴趣 ． Ｏ Ｇ蛋 白的结构进行分析发现 ， Ｊ对 Ｂ 该类蛋 白具有 Ｏ ｇ ｂ 折叠 和 Ｇ结构域等典型的结构 －Ｊ研究发现 ， Ｂ ４． Ｏ Ｇ蛋白与细胞生长、 形态分化 、 孢子形成和 Ｄ Ａ复制的调控 Ｎ 等有关 ． ａｇ ｔ ｌ 】Ｂ ｎ ＿ 鉴定了一个定位于叶绿体的拟南芥 Ｏ Ｇ蛋白（ ｔｂＣ ， ｅ ａ５ Ｂ ＡＯ ｇ ）研究发现该蛋白与胚胎发 育早期密切相关 ，ｂ 因突变可导致拟南芥胚胎在球形胚阶段之前发生败育． Ｏｇ基 随后 ，ｈ ｒｅ ａ【也报道 Ｃ ｉ ｉ ｔｌ ｇ ６ 拟南芥类 Ｏ Ｇ蛋白（ ｔＢ Ｌ 定位于叶绿体并发现该蛋 白与拟南芥胚胎发育有关 ， Ｂ ＡＯ Ｇ ） 该基 因的突变可导致 胚胎发育停止于球形胚后期． 这表明 Ｏ Ｇ蛋 白在植物胚胎发育过程中具有重要 的作用． Ｂ
Ａｂ ｔ ａ ｔ ｓｒ ｃ ：ＯＢ ｒ ｏ ｓ ｒ ｅ ｍａｌＧＴ ａ ｅ ｄ ｉ ｖ ｌ ｅ ｎ ｍｕ ｔ ｌ ｅｌ ｌｒｐ ｏ ｅ ｓ ｓ ｎ ｔ ｉ ｅ ｐ ｒｍｅ ｔ ｈｎ ｒ ｎ ｃ ｐ ｓｏ Ｇｓ ａ ｅ ｃ ｎ ｅ ｖ ｄ ｓ ｌ Ｐ ｓ ｓａ ｏｖ ｄ ｉ ｌ ｐ ｅ ｃ ｌ ａ ｒｃ ｓ ｅ ．Ｉ ｈ ｓ ｘ ｅ ｉ ｎ ．ｔ ｉ ｅ ｔ ｓ ｒ ｔ ｆ ｎ ｎ ｉ ｕ ａ ｉ
福建农林 大学学报 （自然科学版 ）
Ｊｕｎ ｕｉ ｇ ｃｌ ｒ ａｄＦ ｒｓ ｙＵ ｉ ｒｉ Ｎ ｔｒｌ ｃ ｎｅＥ ｉｏ ） ｏｒａ ｏ Ｆ ｊ ｎＡ ｒ ｕｔ ｅ ｎ ｏ ｔ ｎ ｅｓｙ（ ａ ａ Ｓｉ ｃ ｄｔ ｎ ｌ ｆ ａ ｉ ｕ ｅ ｒ ｖ ｔ ｕ ｅ ｉ
第 ４ 卷 第 ２期 ｌ
ｄｎ． ｏｓ Ｋｅ ｒ ｓ：ｌｎ ａ ｏ ｔ ｍ ｒ ｏ ｅ ｅ ｉ ；Ｏ ｇ ｅ ｅ ｘ ｒ ｓ ｉｎ ａ ａｙ ｉ ｙ ｗｏ ｄ ｏ ｇ ｓ ｍａｉ ｅ ｙ ｇ ｎ ｓｓ ｂ ｌ ｇ ｎ ；ｅ ｐ ｓｏ ｎ ｓｓ ｎ ｃ ｂ ｅ ｌ
小 Ｇ蛋白是一类 分子质量为 ２ ４ ｕ 几乎在所有 的生物中均极为保守的 Ｇ蛋 白单体 ， ０— Ｏｋ ， 在信号转
・
１ ０・ ３
福建农林大学学报 （ 自然科学 版）
第 ４ 卷 １
存在差异 ， 不同长度 ３Ｕ Ｒ的存在可能与龙 眼体胚 Ｏ ｇ基 因表达调控有关 ； Ｔ ｂ 此外 ， 该蛋 白还带有典型的 Ｇ Ｐ酶结构域 Ｇ 、 ２ Ｇ 、 ４ Ｇ 等 ． Ｔ ｌＧ 、 ３Ｇ 和 ５
１
ｌ
体胚发生是一个类似于合子胚发生的过程 ， 它可以作为研究植物胚胎发生过程中基 因表达调控 的模 式系统 ． 】龙眼体胚发生系统是木本植物最优 良的体胚发生模式系统之一 Ｉ ， 眼体胚发生的蛋白质组 ９龙 Ｊ
学分析发现 ， 一个 Ｏ Ｇ蛋 白（ Ｔ ａｅ ｂＥ 的表达量在球形胚 阶段表达量较高， Ｂ Ｇ Ｐｓ Ｏ ｇ ） 在心形胚 和鱼雷形胚阶
ｅ ｒ ｓ ｉ ｎ ｄｕｒｎｇ ｓ ｍ ａ ｉ ｍ ｂｒ ｇ ｎｅ ｉ ｎ ｏ ａ ｘｐ ｅ ｓｏ ｉ ｏ ｔｃ ｅ ｙｏ ｅ ｓｓ ｉ ｌ ｎｇ ｎ
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２１ ０ ２年 ３月
龙眼体胚 Ｏ ｇ 基 因的克隆及其在龙眼 ｂｌ 体胚发生过程中 的表达分析
方智振 ， 赖钟雄 （ 福建农林大学园艺植物生物工程研究所 ， 福建 福 州３０ ０ ） ５０ ２
摘要 ： 本试验克 隆了龙 眼体胚 Ｏｇ 基因 （ Ｌ ｂ１ 的 ３ ｂｌ Ｄ Ｏｇ ） 个转录本． 序列分析表 明， Ｌ Ｂ １ 白具有 典型的 Ｏ Ｇ蛋 白结 构 ＤＯＧ 蛋 Ｂ 域 ， 他植 物的 Ｏ Ｇ蛋 白具有较高 的同源性 ， 与其 Ｂ 与葡萄 、 和玉米的氨基酸序列同源性分别为 ８％ 、 ％ 和 ８％ ． 蓖麻 ４ ８ ４ ２ 实时荧 光定量 Ｐ Ｒ分析 显示 ，Ｌ ｂ ｌ 因的转 录水平 随龙 眼体胚 的发 育而变化 ， Ｃ Ｄ Ｏｇ 基 在心形胚和鱼雷形胚 阶段 的表达量最高 ， 可能 与