乳糖微生物限度检查方法验证
微生物限度检查方法适用性验证方案
微生物限度检查方法适用性试验方案验证方案组织与实施微生物限度检查方法适用性试验工作应由质量管理部门负责组织，质量管理部门有关人员组成验证小组，参与实施。
方案起草方案审核方案批准目录一、概述二、验证目的和风险评估三、验证内容四、方法判定五、再验证周期六、参考文献七、结果评价及结论1、概述：微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。
检查项目包括需氧菌数、霉菌数和酵母菌数及控制菌检查。
当建立产品的微生物限度检查法时，应进行需氧菌、霉菌和酵母菌计数方法的适用性试验和控制菌检查方法的适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的需氧菌、霉菌和酵母菌数的测定和控制菌检查。
依照中国药典2015版，需氧菌、霉菌和酵母菌及控制菌均采用平皿法进行方法适用性试验。
2、试验目的和风险评估：验证目的：确认所采用的需氧菌、霉菌和酵母菌计数方法及控制菌检查方法适合我公司所生产产品的微生物限度检查。
风险评估：3、验证内容：3.1、培养基来源：确认人：确认日期：3.2、检查用培养基配制方法：确认人：确认日期：3.3、使用仪器确认人: 确认日期：3.4、验证试验用菌种：确认人：确认日期：3.5试验方法：取供试品10 ml加PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml→1:10供试液。
需氧菌、霉菌和酵母菌、控制菌采用常规法。
3.6菌液的制备：3.6.1取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的胰酪大豆胨琼脂斜面培物一铂金饵，加入胰酪大豆胨液体培养基中置30～35℃培养箱中培养18～24h，取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的胰酪大豆胨液体培养物1ml加入9ml0.9％无菌氯化钠溶液中，制成10-1 的菌液，依法10倍稀释至10～7，分取各菌悬液1ml注入平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基20ml，各菌悬液平行制备两个平皿，平皿法培养计数，取小于100CFU/ml和1000CFU/ml的菌液备用。
2020微生物限度检查方法验证方案
2020微生物限度检查方法验证方案
2020微生物限度检查方法验证方案的具体步骤如下：
1. 确定验证样品：选择与待验证方法相似的样品，确保样品中含有合适的微生物，并且样品中不含任何可能影响验证结果的其他因素。
2. 准备验证样品：收集足够数量的样品，并且确保样品没有受到外界污染。
然后将样品分为若干等份，每份使用不同的验证方法进行检测。
3. 进行验证测试：按照待验证方法和验证方法的流程进行操作，进行微生物限度检查。
确保每一步操作准确无误，并且严格控制所有可能的干扰因素。
4. 检测结果分析：根据检测结果，对比待验证方法和验证方法的结果，评估两种方法的准确性、可靠性和适用性。
5. 数据统计和处理：对验证结果进行统计分析，包括计算平均值、标准差等。
如果有需要，可以使用统计学方法进行数据处理。
6. 结果评估：根据统计分析的结果，评估待验证方法和验证方法之间的差异。
如果验证方法的结果与待验证方法一致并且符合要求，则认为验证成功。
7. 编写验证报告：根据验证结果，编写验证报告。
报告应包含验证方法的详细
描述、样品信息、检测结果和分析、结论等内容。
以上是2020微生物限度检查方法验证方案的一般步骤，具体步骤可能会因实验目的、样品特性和验证要求等而有所不同。
在进行验证前，应仔细阅读国家相关规定和标准文件，确保验证过程符合法规要求。
同时，为了确保验证结果的准确性和可靠性，建议在验证过程中进行合适的实验室质量控制，例如采用质控菌株、系统重复性分析等。
进口乳糖检验操作规程
进口乳糖检验操作规程1 目的：建立进口乳糖检验操作规程。
2 适用范围：适用于乳糖（进口）的检验。
3 职责：检验人员对本规程的实施负责。
4 规程：4.1 编制依据：《进口药品注册标准JX20040023》。
4.2 质量指标：见《乳糖（进口）质量标准》。
4.3 仪器与用具：旋光度、红外光谱仪、电阻炉、干燥箱。
4.4 试药与试液：氨试液、甲醇、二氯乙烷、冰醋酸、酚酞指示液。
4.5 操作方法：4.5.1 性状：本品为白色或类白色结晶性粉末；无臭，味微甜。
本品在水中易溶，在乙醇中几乎不溶。
比旋度：取本品约10g，精密称定，置100ml量瓶中，加水约80ml，加热至50℃使溶解，放冷，加氨试液0.2ml，摇匀，放置30分钟，加水稀释至刻度，摇匀，依《旋光度检验操作规程》检验，应为+54.40至+55.90。
4.5.2 鉴别4.5.2.1 红外光谱：本品的红外光吸收图谱应与对照品的图谱一致。
4.5.2.2 薄层色谱：取本品25mg，置5ml量瓶中，加甲醇-水（3：2）混合液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
取乳糖对照品适量，加甲醇-水（3：2）混合液制成每1ml中含5mg的溶液，作为对照品溶液（1）；另取葡萄糖、乳糖、果糖和蔗糖对照品各适量，加甲醇-水（3：2）混合液制成每1ml中各含5mg的溶液，作为对照品溶液（2）。
照《薄层色谱法检验操作规程》试验，取上述三种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯乙烷-冰醋酸-甲醇-水（50：25：15：10）为展开剂，展开，取出，晾干，换新的展开剂，再次展开，晾干，喷以麝香草酚溶液（取麝香草酚0.5g，加乙醇95ml 与硫酸5ml的混合液，使溶解），于130℃烘10分钟，对照品溶液（2）除原点外，应显4个斑点；供试品溶液所显主斑点的颜色和位置应与对照品主斑点一致。
4.5.2.3 化学反应：取本品250mg，加水5ml使溶解，加浓氨溶液3ml，于80℃水浴加热10分钟，溶液应显红色。
最新微生物限度检查方法验证方案
微生物限度检查方法验证方案六、验证内容1.供试液的制备1.1.取供试品10g，加pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液至100ml，充分振摇使混匀，作为1:10的供试液。
1.2.取1:10供试品10ml，加pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液至100ml，充分振摇使混匀，作为1:100的供试液。
1.3.取1:100供试品10ml，加pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液至100ml，充分振摇使混匀，作为1:1000的供试液。
备注：供试液制备若需加温时，应均匀加热，且温度不超过45℃。
供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。
2.菌液制备2.1.接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中，30〜35℃培养18～24小时；分别取上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，依次稀释至、、、制成每1ml含菌数为小于100cfu的菌悬液。
2.2.接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中，20〜25℃培养2～3 天；取此培养物用0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，依次稀释至，制成每1ml含菌数为小于100cfu的菌悬液。
2.3.将黑曲霉菌斜面的新鲜培养物接种至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上，20〜25℃培养5〜7天，使大量的孢子成熟。
加入3-5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，将孢子洗脱。
然后，采用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液依次稀释至，制成每 1ml 含孢子数小于100cfu 的孢子悬液。
2.4.上述菌悬液制备后若在室温下放置，应在2小时之内使用；若保存在2~8℃，可在24小时内使用。
黑曲霉孢子悬液可保存在2~8℃，在验证过的贮存有效期内使用。
微生物限度检查方法(薄膜过滤法)验证方案
微生物限度检查方法(薄膜过滤法)验证方案微生物限度检查方法(薄膜过滤法) 验证方案编码：表一、验证方案的起草与批准1.验证方案起草起草人：起草时期：年月日2.验证小组成员：3.验证方案审核4.验证方案批准批准人：批准日期：二、验证方案1.验证目的和原理验证目的为确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌、酵母菌数的测定，特制定本方案。
验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需要变更时，应报验证委员会批准。
原理通过比较试验4组中试验菌的恢复生长结果来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性。
2.验证方法步骤验证前的准备：进行微生物限度检查方法（薄膜过滤法）验证前，所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。
试验菌应包括G—、G+、酵母菌和霉菌类微生物以基本覆盖样品中可能存在的微生物。
验证试验的操作计划：用3个不同批号产品微生物限度检测方法进行平行试验，通过计算回收率来判断限度检查方法是否对产品有影响。
试验结果可接受标准：用标准菌株评价方法“”的微生物限度检查对检品中微生物的抑制性，试验结果应显示3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率应不小于70%，试验组回收率也不低于70%。
3.试验实施试验前的准备3.1.1主要仪器设备：恒温培养箱、生化培养箱、电子天平、高压蒸汽灭菌器、净化工作台。
3.1.2操作环境：操作间应该安装空气除菌过滤层装置。
环境洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级（或放置同等级净化工作台）。
操作间或净化工作台的洁净空气应该保持对环境形成正压，不低于。
3.1.3试验样品：批号：批号：批号：3.1.4培养基：3.1.5稀释液：无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液以上经115℃高压蒸汽灭菌30min。
3.1.6验证用微生物名称及其编号实验菌株的来源：编号由菌名首字母—传代代数—制备日期组成。
3.1.7器具：无菌薄膜过滤器：（孔径直径50mm）、无菌移液管（5ml）4.验证方法菌液的制备将大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌接种至10ml的无菌营养肉汤中在30～35℃下培养18～24小时，将白色念珠菌接种至改良马丁液体培养基中，在23～28℃下培养24～48小时。
微生物限度检查方法(薄膜过滤法)验证方案
微生物限度检查方法(薄膜过滤法)验证方案微生物限度检查方法(薄膜过滤法) 验证方案编码：表一、验证方案的起草与批准1.验证方案起草起草人：起草时期：年月日2.验证小组成员：3.验证方案审核4.验证方案批准批准人：批准日期：二、验证方案1.验证目的和原理1.1验证目的为确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌、酵母菌数的测定，特制定本方案。
验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需要变更时，应报验证委员会批准。
1.2原理通过比较试验4组中试验菌的恢复生长结果来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性。
2.验证方法步骤2.1验证前的准备：进行微生物限度检查方法（薄膜过滤法）验证前，所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。
试验菌应包括G—、G+、酵母菌和霉菌类微生物以基本覆盖样品中可能存在的微生物。
2.2验证试验的操作计划：用3个不同批号产品微生物限度检测方法进行平行试验，通过计算回收率来判断限度检查方法是否对产品有影响。
2.3试验结果可接受标准：用标准菌株评价方法“”的微生物限度检查对检品中微生物的抑制性，试验结果应显示3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率应不小于70%，试验组回收率也不低于70%。
3.试验实施3.1试验前的准备3.1.1主要仪器设备：恒温培养箱、生化培养箱、电子天平、高压蒸汽灭菌器、净化工作台。
3.1.2操作环境：操作间应该安装空气除菌过滤层装置。
环境洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级（或放置同等级净化工作台）。
操作间或净化工作台的洁净空气应该保持对环境形成正压，不低于4.9pa。
3.1.3试验样品：批号：批号：批号：3.1.4培养基：3.1.5稀释液：PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液以上经115℃高压蒸汽灭菌30min。
3.1.6验证用微生物名称及其编号实验菌株的来源：编号由菌名首字母—传代代数—制备日期组成。
乳糖质量标准(2015中国药典)
乳糖RutangLactoseC12H22O11·H2O[ 5989-81-1] 本品为4-O-β-D-吡喃半乳糖基-D-葡萄糖一水合物。
按无水物计算，含C12H22O11应为98.0%～102.0%。
【性状】本品为白色的结晶性颗粒或粉末；无臭，味微甜。
本品在水中易溶，在乙醇、三氯甲烷或乙醚中不溶。
比旋度取本品，在80℃干燥2小时后，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含本品0.1g与氨试液0.02ml的溶液，依法测定（通则0621），比旋度为﹢52.0°至52.6°。
【鉴别】（1）取本品0.2g，加氢氧化钠试液5ml，微温，溶液初显黄色，后变为棕红色，再加硫酸铜试液数滴，即析出氧化亚铜的红色沉淀。
（2）在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
（3）本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集256 图）一致（通则0402）。
【检查】酸度取本品1.0g，加水20ml溶解后，依法测定（通则0631），pH值应为4.0～7.0。
溶液澄清度与颜色取本品1.0g，加沸水10ml溶解后，依法检查（通则0901与通则0902），溶液应澄清无色；如显色，与黄色2号标准比色液（通则0901第一法）比较，不得更深。
有关物质取本品适量，加水溶解并稀释制成每1ml含100mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取1ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
照含量测定项下的方法试验，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。
供试品溶液的色谱图中除溶剂峰以外，如显杂质峰，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液峰面积的0.5倍（0.5%）。
杂质吸光度取本品，精密称定，加温水溶解并定量稀释成每1ml中含100mg的溶液，照紫外-可见风光光度法（通则0401），在400nm的波长处测定吸光度，不得过0.04。
再精密量取上述溶液1ml，置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，照紫外-可见分光光度法（通则0401），在210nm～220nm的波长范围内测定吸光度，不得过0.25；在270～300nm的波长范围内测定吸光度，不得过0.07。
微生物限度检查方法的验证
ygfyzy 整理
微生物限度检查方法的验证
包括: 1.细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证——准确性（回收率） 2.控制菌检查法的验证——专属性 3.实例
一、细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证
1.验证的目的： 确认所采用的方法适合该药品的细菌、霉菌、酵母菌数的测定。照
此检查法和检验条件进行供试品细菌、霉菌、酵母菌数检查能保证检验 结果的准确、可靠。 2.验证的步骤： •根据样品特性，制定检验方法和检验条件。 •保证验证试验所用的仪器、培养基和试剂等均符合试验要求。 •按制定的方法进行试验。 •根据验证结果，判断是否符合验证的标准。若符合,按验证的方法和条 件进行药品的微生物限度检查；若不符合，应重新设立验证方案，再进 行验证，直至验证结果符合设立的验证标准。
验证时，按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法 及要求进行。对各试验菌的回收率应逐一进行验证。验证试验至少应进 行 3 次独立的平行试验，并分别计算各试验菌每次试验的回收率。 3. 验证用菌株： 细菌计数验证用菌株：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌。 霉菌、酵母菌计数验证用菌株：白色念珠菌、黑曲霉。
回收率均能达到 70%以上的检测方法为准。 霉菌和酵母菌以各试验菌（白色念珠菌、黑曲霉）的回收率均能达
到 70%以上的检测方法为准。 11.4 计数方法的验证——结果判断
在 3 次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率应均不低于 70%。
若试验组的菌回收率均不低于 70%，则按此供试液制备方法和计数 法测定供试品的细菌、霉菌及酵母菌数能保证检验结果的准确、可靠。
(1)接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养 物至 10ml营养肉汤中，35～37℃培养 18～24 小时，取此培养液 1ml加 0.9％无菌氯化钠溶液 9ml，采用 10 倍递增稀释法，稀释至 10-5～10-7， 使菌数约为 50～100cfu/ml。
中国药典微生物限度检查方法验证方案
中国药典微生物限度检查方法验证方案一、引言药品的质量与安全性是保障患者用药安全的重要方面。
微生物限度检查是药品质量控制的重要环节，用于评价药品中微生物的污染情况。
为确保检测结果的准确性和可靠性，本文旨在制定中国药典微生物限度检查方法验证方案。
二、背景微生物限度检查方法验证是指确定某一方法在特定条件下的适用性，方法验证的结果直接影响到药品生产和品质控制。
为了保证方法验证的可靠性，必须按照一定的规范和要求进行操作。
三、验证目的验证中国药典中所规定的微生物限度检查方法在实际应用中的准确性和可靠性，以确保药品的微生物限度符合国家及相关法规的要求。
四、验证程序1. 确定验证方法：根据中国药典中规定的微生物限度检查方法，选择合适的验证样品和验证条件。
2. 准备验证样品：从实际生产过程中随机选取药品样品，确保样品的代表性。
3. 执行验证实验：按照中国药典中的方法操作，对验证样品进行微生物限度检查。
4. 数据分析和评估：根据验证实验的结果，进行数据分析和评估，评估方法的准确性和可靠性。
5. 结果判定：根据数据评估结果，对微生物限度检查方法进行判定，判断方法是否适用于实际生产中的微生物限度检查。
6. 验证报告编制：根据验证实验的结果和结论，编制验证报告。
五、验证内容本次验证主要包括如下内容：1. 对选择的验证样品进行微生物限度检查。
2. 对验证样品进行菌落计数。
3. 对验证样品进行培养方法的验证。
4. 对不同微生物种类的检查方法进行验证。
5. 对不同微生物菌株的适应性进行验证。
六、风险评估在验证过程中，存在一定的风险因素，需进行风险评估，确保验证结果的可靠性和准确性。
风险评估主要包括验证样品来源的可靠性、实验操作的准确性、验证条件的合理性等。
七、验证结果与讨论根据验证实验的结果和数据分析，可以得出下列结论：1. 所验证的微生物限度检查方法在实际应用中的准确性和可靠性较高。
2. 所验证的微生物限度检查方法适用于不同药品制剂类型的微生物限度检查。
微生物限度检查办法验证方法
微生物限度检查方法验证方案1.目的：为确认所采用的方法适合于该药品的微生物限度检查，包括细菌、霉菌及酵母菌计数和控制菌检查，特制定本验证方案，通过比较试验菌的恢复生长结果，来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性，以确认供试品在该实验条件下无抑菌活性或其抑菌活性可忽略不计，所采用的方法适用于该品种的微生物限度检查。
?验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需变更时，应填写验证方案修改申请并报验证领导小组批准2.范围：本验证方案适用于微生物限度检查方法的验证。
3.规范性引用文件：?根据《中国药典》2010年版二部附录Ⅺ?J?微生物限度检查法的要求，由于某些供试品具有抗菌活性，在建立微生物检查方法或产品的组分发生改变或原检查法的检验条件发生改变时，可能影响检验结果的准确性，必须对供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性进行验证。
4.验证实施：4.4.1?试验前的准备:?4.4.1.1?试验用具的准备：将试验需用的试管、刻度吸管、薄膜过滤器、滤膜（孔径0.22um、直径50mm）、平皿、空三角瓶、称量纸等，用牛皮纸包扎好后，放于湿热灭菌器中，在121℃，灭菌30?min，在3天内使用。
?4.4.1.2试验用培养基的制备：取适用性检查合格的营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、营养肉汤培养基、胆盐乳糖培养基（BL）、改良马丁琼脂培养基、4-甲基伞形酮葡糖苷酸培养基（MUG）等脱水培养基，按照相应的配制说明，用纯化水配制、分装后，在2小时内，放于湿热灭菌器中，在121℃，灭菌15?min，在3周内使用。
?4.4.1.3试验用稀释剂/缓冲液、冲洗液的制备：取在有效期内的试剂，按照相应的配制方法，配制pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.9%无菌氯化钠溶液、0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液等，用纯化水配制，加热使溶，过滤，分装，在121℃，灭菌15?min，在3周内使用。
微生物限度检查方法和验证
• 非细胞型：病毒
噬菌体。
Global Manufacturing and Supply
Reported by Wang Yanzhong 2011.08
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芽孢杆菌 （细菌 原核细胞型）：
Global Manufacturing and Supply
Reported by Wang Yanzhong 2011.08
Global Manufacturing and Supply
Reported by Wang Yanzhong 2011.08
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中国药典10版同05版的主要差别：
4）计数实验的培养基适用性： 该部分内容均为新增； 规定了该内容的应用范围：
细菌、霉菌和酵母菌计数用的培养基应进行培养 基的适用性检查，成品培养基、由脱水培养基或 按处方配置的培养基均应检查。
7）控制菌检查的培养基适用性：
所谓抑制能力指试验菌于被检培养基，在相应控 制菌检查规定的培养温度及最长时间下培养，试 验菌应不得生长。 所谓指示能力指试验菌于被检培养基，在相应控 制菌检查规定的培养温度及时间下培养，被检培 养基上试验菌生长的菌落大小、形态特征、指示 剂反应等应同对照培养基一致。
Global Manufacturing and Supply
Global Manufacturing and Supply
Reported by Wang Yanzhong 2011.08
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中国药典10版同05版的主要差别：
7）控制菌检查的培养基适用性：
该部分内容均为新增； 规定了该部分内容的应用范围以及检查的项目；
控制菌检查用的培养基应进行培养基的适用性检 查，成品培养基、由脱水培养基或按处方配置的 培养基均应检查。
乳糖微生物限度检查法分析方法验证
乳糖微生物限度检查分析方法验证方案2006年XX月验证方案起草审批表验证方案目录1、目的2、适用范围3、接受标准4、所需仪器校验情况5、验证方法6、人员和职责乳糖微生物限度检查分析方法验证方案1 目的：建立乳糖微生物限度分析方法，包括细菌数、霉菌数及酵母菌数的检查以及控制菌的检查，并对分析方法进行验证，以证明所采用的方法适合于乳糖微生物限度的检查，为日常的检测工作提供依据。
2 适用范围：适用于进厂的辅料乳糖微生物限度检查。
3 可接受的标准：3.1细菌、霉菌数及酵母菌计数方法的验证可接受的标准3.1.1在3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率（稀释剂对照组的平均菌落数占菌液组的平均菌落数的百分率）应均不低于70%。
3.1.2在3次独立的平行试验中，试验组的菌回收率（试验组的平均菌落数减去供试品对照组的平均菌落数的值占菌液组的平均菌落数的百分率）应均不低于70%。
3.2控制菌检查验证可接受的标准3.2.1阴性菌对照组不得检出阴性对照菌，试验组检出试验菌。
3.2.2阴性对照应无菌生产，供试品应无菌生长。
4 所需仪器校验情况：应有所需仪器检定时间、检定部门及有效期。
5 验证方法：5.1 细菌、霉菌数及酵母菌计数方法的验证（直接接种法）5.1.1试验用的菌种：（1）金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus ）[CMCC(B)26003]（2）大肠埃希菌(Escherichia coli) [CMCC(B) 44 102]（3）枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）[CMCC(B)63 501]（4）白色念珠菌（Candida albicans）[CMCC(F)98 001]（5）黑曲霉（Aspergillus niger）[CMCC(F)98 003]5.1.2培养基及稀释液培养基：改良马丁琼脂培养基、营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基。
稀释液：0.9%氯化钠溶液、PH7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液5.1.3 试验步骤5.1.3.1 培养基的配制和灭菌将改良马丁琼脂培养基、营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基按照购买厂家的使用说明书进行配制，在121℃的温度条件下灭菌20min冷却后备用。
乳糖微生物限度验证方案
目录1.目的 (3)2.范围 (3)3.职责 (3)4.参考文件 (3)5.系统概述 (4)6.验证用仪器、菌种和培养基 (4)6.1验证用仪器 4 6.2验证用菌种 46.3验证用培养基 47.验证实施 (4)7.1验证文件确认 5 7.2需养菌总数、霉菌及酵母菌计数培养基的适用性检查 6 7.3需养菌总数、霉菌及酵母菌计数方法验证6 7.4控制菌检查用培养基的适用性检查 67.5控制菌检查方法验证88.偏差清单及报告99.验证周期910.验证结果分析与评价报告911.验证附表10 表1验证方案培训记录表11 表2文件的确认12 表3菌液计数结果13 表4需养菌总数、霉菌及酵母菌培养基的适用性检查记录14 表5需养菌总数、霉菌及酵母菌计数方法验证记录15 表6控制菌检查用培养基的适用性检查记录16 表7控制菌检查方法验证17 表8偏差清单18 表9偏差报告19表10验证结果分析与评价报告201.目的依据《中国药典》（2015年版四部）,对乳糖新建立的微生物限度检查方法进行验证，以确认在目前的检验环境下该方法适合于供试品的需养菌总数、霉菌、酵母菌测定及控制菌的检查。
2.范围本验证方案适用于乳糖的微生物限度检查法的验证。
3.职责3.1验证小组成员及职责3.2验证方案培训：本验证方案批准后，根据《人员培训标准操作规程》对确认小组成员和相关人员进行培训，使其了解方案的实施程序，明白其职责并能在验证工作中得到很好的执行。
见表1. 4.参考文件本验证方案参考了以下标准和指南：《药品生产质量管理规范》（2010年版） 《药品微生物学检验技术》 《药品生产验证指南》（2003年版） 《中国药典》（2015年版四部） 5.系统概述参照《中国药典》（2015年版二部及四部）采用的检测方法对葡萄糖原料新建立的微生物限度检查法进行验证，以确认所采用的方法适合于供试品的需养菌总数、霉菌、酵母菌的测定和控制菌的检查。
可以照此检查法和此检查条件进行供试品的微生物限度检查。
乳糖微生物限度检查方法验证
乳糖微生物限度检查方法验证方案########有限公司验证目录1 引言1. 1 概述1. 2 验证小组成员2 药品名称3 试验用菌种要求与类别4 培养基5 试液6 验证方法依据7 操作方法8 结论1 引言：1. 1 概述：按照国家食品药品监督管理局规定，要求产品的微生物限度检查方法必须依照产品进行方法学验证。
在辽宁省药品检验所抗生素室专家的指导下制定了乳糖微生物限度检查方法验证方案。
开始日期：年月日结束日期：年月日验证部门：化验室2 药品名称：乳糖产品批号：生产企业：沈阳利得尔化工制剂技术有限公司曲阜市天力药用辅料有限公司3 试验用的菌种要求与类别：要求：验证试验所用的菌株传代次数不得超过五代。
类别：①大肠埃希菌[CMCC（B）44 102]②金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26 003]③枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63 501]④白色念珠菌[CMCC（B）98 001]⑤黑曲霉[CMCC（B）98 003]4 培养基：①胆盐乳糖培养基②改良马丁培养基③改良马丁琼脂培养基④营养肉汤培养基⑤营养琼脂培养基⑥玫瑰红钠琼脂培养基⑦伊红美兰琼脂培养基5 试液：PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液配制方法：取磷酸二氢钠3.56g、磷酸氢二钠7.02g、氯化钠4.4g、蛋白胨1g、加纯化水1000微热熔解，分装，121℃高压灭菌20分钟。
6 验证方法依据：《中国药典》2010年版二部，有关微生物限度检查方法验证试验7 操作方法：7. 1 菌液制备（1）取经37℃培养18-24℃，金黄色葡萄菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的肉汤培养物1ml+9ml 0.9﹪无菌氯化钠溶液，10倍稀释至10-5-10-7，细菌数约为50-100cfu/ml，做活性菌计数备用。
（2）取经25℃培养18-24小时的白色念珠菌改良马丁培养物1ml+9ml 0.9﹪无菌氯化钠溶液，10倍稀释至10-5-10-7，细菌数约为50-100cfu/ml，做活性菌计数备用。
微生物限度检验方法验证方案
微生物限度检验方法验证方案1.适用范围本方案适用于本公司各品种微生物限度检验方法的验证。
2.目的通过验证确认所采用的方法适合于该药品的微生物限度的测定。
3.职责项目责任人：负责验证方案的起草及具体实施。
验证管理员：负责验证工作的组织、协调及管理。
QA现场监控员：负责验证实施过程中的监督检查，取样，确保结果的可靠性。
QC负责人：负责验证方案中检验方法的审核及按照规定的取样计划对标准检验操作程序的准确执行，负责组织实施。
QC检验员：负责验证方案的起草与参与实施，并对所测数据准确性负责。
质量部经理：负责验证方案及报告的审核和批准。
4.内容4.1.概述通过验证以确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌及酵母菌的测定；确认所采用的方法适合于该药品的控制菌的检查。
根据样品特性制订检验方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。
若符合，按验证的方法和条件进行药品的微生物限度检查；若不符合，重新建立制订检验方法和检验条件，再进行验证，直至验证结果符合设立的验证标准。
4.2细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证当建立药品的微生物限度检查时，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证，以确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌及酵母菌的测定。
.验证试验可与供试品的细菌、霉菌及酵母菌计数同时进行。
4.2.1.验证用菌株及菌种要求大肠埃希菌【CMCC（B）44102】、金黄色葡萄球菌【CMCC（B）26003】、枯草芽孢杆菌【CMCC（B）63501】、黑曲霉【CMCC（F）98003】、白色念珠菌【CMCC（F）98001】。
大肠埃希菌为革兰氏阴性菌，金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性菌，枯草芽孢杆菌为产芽孢杆菌，前述菌株作为细菌计数验证用菌株；黑曲霉为霉菌，白色念珠菌为酵母菌，作为霉菌及酵母菌计数验证用菌株。
验证实验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为0 代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。
微生物限度检测方法验证操作规程(2015年版)
微生物限度检测方法验证操作规程1 目的确认所采用的方法适合于该产品的微生物限度检测。
2 依据《中国药典》2015版。
3 范围所有需进行微生物限度检测的产品。
4 责任4.1验证小组负责检验方法验证/确认方案的起草、验证/确认方案的实施。
4.2验证委员会负责验证/确认方案的审批，验证/确认结论的审核。
5 程序5.1 由验证小组提出验证申请，验证方案编制完成后，填写《确认和验证方案审批表》，经验证小组会签，报验证委员会审核，由生产负责人和质量负责人批准后，验证方案编制人对验证小组其余人员进行培训后，方可按验证方案试验。
5.2 试验完成后及时编制验证报告，并填写《验证报告审批表》，经验证小组会签，报验证委员会审核，由生产负责人和质量负责人批准后，验证报告结论才可实施。
6 内容6.1 概述通过验证以确认所采用的方法适合于该产品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的测定及控制菌的检查。
根据样品特性制订检验方法和检验条件，按制定的方案进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。
若符合，按验证的方法和条件进行产品的微生物限度检查；若不符合，重新建立制订检验方法和检验条件，再进行验证，直至验证结果符合设立的验证标准。
6.2 需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数方法的验证6.2.1 验证用菌株铜绿假单胞菌[CMCC（B）10 104]金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26 003]枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63 501]黑曲霉[CMCC（F）98 003]白色念珠菌[CMCC（F）98 001]6.2.2 验证用菌液制备6.2.2.1接种铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌至胰酪大豆胨液体培养基中，于30～35℃培养18～24小时。
取上述培养物各1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液制成适宜浓度的菌悬液，备用。
6.2.2.2 接种白色念珠菌至沙氏葡萄糖液体培养基中，于20～25℃培养2～3天。
微生物检验方法验证方案
微生物限度检查方法验证XX公司微生物限度检查方法验证方案目录1. 验证目的2.验证小组及职责分工2.1验证小组2.2职责分工3.验证程序4.验证结论及综合评价1. 验证目的确认所采用的细菌、霉菌及酵母菌计数方法和控制菌检查方法适合该药品的微生物限度检查。
2.验证小组及职责分工2.1验证小组组长：小组成员：2.2职责分工组长：负责验证期间各部门的协调及整个验证过程的具体实施。
分析中心（微生物室）：负责验证方案的起草及具体实施，确保验证过程能按方案规定的程序进行，对各种验证资料（验证结果）应及时交与GMP组相关人员整理。
GMP办：负责验证方案的编写规范；负责各种验证资料（检查结果）的收集整理及结果的审核；审查验证报告及发放验证报告。
质量管理部：参与验证方案的编制；负责验证方案的审核及批准；负责出具检验报告；并对微生物限度检查环境进行检测；负责验证文件的管理。
3．验证内容3.1品种：XXXX；批号：。
3.2培养基：无菌检查用硫乙醇酸盐液体培养基，批号；霉菌液体培养基，批号；营养肉汤培养基，批号；营养琼脂培养基，批号；0.1%蛋白胨溶液，批号；虎红钠琼脂培养基，批号；由中检所培养基室提供。
（根据检验要求选择适宜的培养基）3.3方法：微生物限度检查方法验证（《中国药典》2005年版）。
3.5计数方法的验证3.5.1 验证试验用菌种：验证试验用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。
a.大肠埃希菌(Escherichia coli)〔CMCC(B) 44102〕b.金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) 〔CMCC(B) 26 003〕c.枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) 〔CMCC(B) 63 501〕d.白色念珠菌(Candida albicans)〔CMCC(F) 98 001〕e.黑曲霉(Aspergillus niger) 〔CMCC(F)98 003.5.2菌液制备：接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，培养18～24h；黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基，培养5～7天。
微生物限度检测方法验证
微生物限度验证1.概述1.1试验背景为保证微生物限度检验结果的准确可靠，当建立产品的微生物限度检查法时，应进行方法的试验，以确认供试品在该实验条件下无抑菌活性或其抑菌活性可以忽略不计，所采用的方法适合于该产品的微生物限度检查。
按照《中国药典》2015年版要求，检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，检查方法应进行重新试验。
根据15年版药典及药品微生物实验室质量管理指导原则要求，检测环境由原来的为C 级背景下局部A级空气单向流，变更为在C级背景下，生物安全柜中进行微生物限度检测, 试验用菌株有原来的大肠埃希菌变更为铜绿假单胞菌、接种用培养基随之发生变化；实验组及对照组制备发生变更。
现针对纯化水微生物限度试验方法确认，以证明所采用的方法适合该药品的微生物限度检查。
1.2方案说明验证过程中严格按照经批准的方案规定的内容进行，若因特殊原因需要变更时，应填写方案变更申请及批准书（附件1），报验证领导小组批准。
2.试验目的及要求按照《中国药典》2015年版规定对纯化水微生物限度检查方法进行试验，在现有检验程序、检测条件及培养条件下，通过试验以确认所采用的方法适合于纯化水需氧菌的测定；根据样品特性制订检验方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据试验结果判断是否符合试验标准。
3.试验小组4.风险分析:4.1风险等级标准A、严重程度（S）：测定风险的潜在后果，主要针对可能危害产品质量、患者健康及数据完整性的影响，分为以下四级：评分严重程度描述4 关键直接影响产品质量要素或工艺与质量数据的可靠性、完整性或可追踪性，可能导致产品不能使用直接影响GMP原则，危害生产区活动3 高直接影响产品质量要素或工艺与质量数据的可靠性、完整性或可追踪性，可能导致产品召回或退回未能符合一些GMP原则，可能引起检查或审计中产生偏差2 中（不重要的）对产品或数据无相关影响，但间接影响产品质量要素或工艺与质量数据的可靠性、完整性或可追踪性可能造成资源的严重浪费或对企业形象产生较坏影响1 低（可以忽略）对产品或数据无相关影响，但对产品质量要素或工艺与质量数据的可靠性、完整性或可追踪性仍产生较小影响B、可能性程度(P)：测定风险产生的可能性，为建立统一基线，建立以下四个等级：评分可能性描述4 极高极易发生，约一星期一次或者更频繁3 高偶尔发生，约一个月一次2 中很少发生，约一年一次1 低发生可能性极低，三年甚至更长时间都不大可能发生C、检测能力（D）:在潜在风险造成危害前，检测发现的可能性，设为以下四个等级：评分检测能力描述4 极低失败很可能被忽视，因此没有检测到（无检测机制，无人工或视觉校验）3 低不检测，但可能被发现，如：作为现场检查的审计2 中定期检测，如：常规的手动控制或分析可检测到错误1 高始终检测到，如：自动控制装置到位，故障报警或错误后无法下一流程操作4.2风险评估：根据确定的风险标准对已经识别并分析的风险进行评价，即通过评价风险的严重性和可能性从而确认风险的等级。
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乳糖微生物限度检查方法验证方案
########有限公司
验证目录
1 引言
1. 1 概述
1. 2 验证小组成员
2 药品名称
3 试验用菌种要求与类别
4 培养基
5 试液
6 验证方法依据
7 操作方法
8 结论
1 引言：
1. 1 概述：按照国家食品药品监督管理局规定，要求产品的微生物限度检查方法必须依照产品进行方法学验证。
在辽宁省药品检验所抗生素室专家的指导下制定了乳糖微生物限度检查方法验证方案。
开始日期：年月日
结束日期：年月日
验证部门：化验室
2 药品名称：乳糖
产品批号：
生产企业：沈阳利得尔化工制剂技术有限公司曲阜市天力药用辅料有限公司
3 试验用的菌种要求与类别：
要求：验证试验所用的菌株传代次数不得超过五代。
类别：①大肠埃希菌[CMCC（B）44 102]
②金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26 003]
③枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63 501]
④白色念珠菌[CMCC（B）98 001]
⑤黑曲霉[CMCC（B）98 003]
4 培养基：
①胆盐乳糖培养基
②改良马丁培养基
③改良马丁琼脂培养基
④营养肉汤培养基
⑤营养琼脂培养基
⑥玫瑰红钠琼脂培养基
⑦伊红美兰琼脂培养基
5 试液：
PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液
配制方法：取磷酸二氢钠3.56g、磷酸氢二钠7.02g、氯化钠4.4g、蛋白胨1g、加纯化水1000微热熔解，分装，121℃高压灭菌20分钟。
6 验证方法依据：
《中国药典》2010年版二部，有关微生物限度检查方法验证试验
7 操作方法：
7. 1 菌液制备
（1）取经37℃培养18-24℃，金黄色葡萄菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的肉汤培养物1ml+9ml 0.9﹪无菌氯化钠溶液，10倍稀释至10-5-10-7，细菌数约为50-100cfu/ml，做活性菌计数备用。
（2）取经25℃培养18-24小时的白色念珠菌改良马丁培养物1ml+9ml 0.9﹪无菌氯化钠溶液，10倍稀释至10-5-10-7，细菌数约为50-100cfu/ml，做活性菌计数备用。
（3）取经25℃培养1周的黑曲霉斜面培养物，加3-5ml0.9﹪无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，然后，吸储孢子悬液（用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细管）至无菌管内，吸取1ml+9ml 0.9﹪无菌氯化钠溶液，10倍稀释至10-5-10-7，细菌数约为50-100cfu/ml，做活性菌计数备用。
7. 2 供试液储备称取样品10g，加0.1﹪蛋白胨氯化钠稀释液（PH70）90ml浓度均为1:10 供试液，分别人工污染上述5种代表试验菌株。
7. 3 回收率测定
（1）试验组取1:10供试液1ml和50-100个/ml试验菌株同时加入平皿中，立即倾注琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，待凝固后，置规定温度培养24-72小时观察结果。
（2）菌液组测定所加的试验菌数。
（3）供试品对照组测试供试品本底菌数。
（4）稀释剂对照组稀释液1 ml和50-100个/ml试验菌。
7. 4 控制菌检查方法的验证
（1）试验组取供试品液10ml及10-100cfu/ml大肠埃希菌加入增菌培养基中，依相应控制菌检查法进行测定。
（2）取供试品液10ml及10-100cfu/ml金黄色葡萄球菌加入增菌培养基中，依相应控制菌检查法进行测定。
7. 5 结果
（1）结果、按上述做四组试验，在规定的条件下培养后计数，计算回收率，回收率不得低于70%。
稀释剂对照组的回收率=稀释剂对照组平均菌落数/菌液组平均菌落数
试验组的回收率=（试验组平均菌落数-供试品对照组）/菌液组平均菌落数
（2）常规法结果，在乳糖微生物限度检查法的验证结果见表1、2、 3
表2
表3
从表1、2、3结果可以看出，采用常规法检验乳糖供试品，人工污染代表菌株，该供试品对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、回收率试验均高于70%，可以采用常规方法检验。
（2）控制菌检结果
试验组检出试验菌，阴性对照组未检出阴性对照组菌。
按此控制菌检查法进行的该控制菌检查法方法可行。
8 结论：
负责人：检验人：复核人：。