酶抑制法检测蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留
蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测
实验十三、蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测（GB/T 5009.199-2003 蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测）方法一快速卡法一、目的要求：学习快速卡法测定有机磷农残快速检验法及熟悉检验结果评定。
二、实验原理：胆碱脂酶可催化靛酚乙酸脂（红色）水解为乙酸与靛酚（蓝色），有机磷或氨基甲酸脂类农药对胆碱脂酶有抑制作用，使催化、水解、变色的过程发生改变，由此可判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸脂类农药的存在。
三、实验试剂：1、固化有胆碱脂酶和靛酚乙酸脂试纸卡片；2、pH 7.5 磷酸盐缓冲液：分别称取15.0g磷酸氢二钠[Na2HPO4•12H2O]与1.59g无水磷酸二氢钾[KH2PO4]，用500 mL蒸馏水溶解。
四、实验步骤：1、整体测定法（1）选取具有代表性的蔬菜样品，擦去表面泥土，剪成1cm左右方形碎片,取5g防入带盖瓶中，加入10 mL缓冲溶液，振摇50次，静置2min以上.(2) 取一片快速卡，用白色药片沾取提取液，放置10min以上进行预反应，有条件时在37 ℃恒温装置中放置10min。
预反应后的药片表面必须保持湿润。
（3）将快速卡对折，用手捏3min或用恒温装置恒温3min，使红色药片与白色药片叠合发生反应。
注意：每批测定应设一个缓冲液的空白对照。
2、表面测定法（粗筛法）（1）擦去蔬菜表面泥土，滴2~3滴缓冲液在蔬菜表面，用另一片蔬菜在滴液处轻轻摩擦。
（2）取一速片测卡，将蔬菜上的液滴滴在白色药片上。
（3）放置10 min以上进行预反应，有条件时在37 ℃恒温装置中放置10 min。
预反应10 min，预反应后的药片表面必须保持湿润。
（4）将快速卡对折，用手捏3min或用恒温装置恒温3min，使红色药片与白色药片叠合发生反应。
注意：每批测定应设一个缓冲液的空白对照。
五、检测结果判断：1、结果判断结果以酶被有机磷或氨基甲酸脂类农药抑制（为阳性）、未抑制（阴性）表示。
酶抑制率法快速检测蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药的残留量
·50·试 验 研 究农业开发与装备 2013年第4期于人类健康。
因此，该“液肥”系列产品对环境、土壤和人类健康的影响，是无法用增产增收效果来衡量的。
3.3 操作简单、容易掌握该“液肥”系列产品应用操作简单，使用方便、针对性强，见效快，通过四年来的推广应用，深受广大农民群众欢迎，成为在发展绿色生态农业中起着不可忽视的作用。
3.4 增强植株抗性，达到健身栽培效果明显该“液肥”系列产品应用后，作物生长健壮，减轻了自然灾害，减少农药和化肥用量，保证农产品的无公害、绿色、安全生产，促进了干旱地区的农业生产向着高产、高效、优质、绿色农产品方向发展的转变，促进了社会健康和文明发展，实现了农业的可持续发展。
摘要：介绍了采用酶抑制率法快速测定有机磷及氨基甲酸酯类农药残留量的技术，酶抑制率法即分光光度法，是根据在一定条件下，有机磷及氨基甲酸酯类农药对乙酰胆碱酯酶的正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正相关，进而通过抑制率来判断蔬菜中是否含有有机磷及氨基甲酸酯类农药的存在。
因其快速、简便、经济等特点，应用范围涵盖较广，保证有问题的蔬菜及时的排除。
关键词：酶抑制率法；快速检测；蔬菜；有机磷及氨基甲酸酯类；农药残留量；乙酰胆碱酯酶；分光光度法食品安全是民生工程，关系国计民生的头等大事。
农产品安全是食品安全工作中的重中之重，也是未来社会的发展趋势。
农产品质量安全是人民群众生存的基本要求，因此，农产品质量安全有保障，人民群众的身体健康和生命安全才有保障。
目前，各级政府和各级农业行政主管部门对蔬菜生产与流通环节中的监管措施和频次在不断强化。
这就需要我们开发出用时少、成本低，易操作的快速检测方法应用于蔬菜生产基地、蔬菜批发市场等地。
而传统的检测技术使用大型仪器设备，由于其检测时间长、成本高、对检测人员专业性要求高等不利因素而无法马上对有问题的农产品进行应急处理。
1 实验原理酶抑制率法是在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制昆虫中枢和周围神经系统中乙酰胆碱酶的活性，造成神经传导介质乙酰胆碱的积累，影响正常传导，使昆虫中毒致死，根据这一昆虫毒理学原理，用在对农药残留的快速检测中。
植物酶抑制技术用于检测蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留
植物酶抑制技术用于检测蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留摘要：随着环境污染和食品安全问题日益严重，检测蔬菜中农药残留成为了一项重要的工作。
本文将介绍植物酶抑制技术在检测蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留方面的应用，探讨这一技术在食品安全领域的潜在用途。
1.引言近年来，全球各地频发的食品安全事故引起了人们对食品安全问题的关注。
蔬菜是人们日常生活中不可或缺的食物之一，但是由于农药的滥用和不当使用，导致蔬菜中残留农药成为了一个不容忽视的问题。
特别是有机磷及氨基甲酸酯类农药，其毒性较大，残留于蔬菜中会对人体健康造成潜在威胁。
开发一种快速、准确、灵敏的方法来检测蔬菜中的有机磷及氨基甲酸酯类农药残留成为了一项迫切的任务。
植物酶抑制技术是一种新型的检测方法，其原理是通过酶抑制剂抑制特定酶的活性，从而间接检测农药残留。
这种方法具有操作简单、成本低廉和高灵敏度等优点，因此在食品安全领域具有广阔的应用前景。
本文将对植物酶抑制技术在检测蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留方面的应用进行介绍，并探讨这一技术的优势和局限性，以期为蔬菜农药残留的检测提供新的思路和方法。
2.植物酶抑制技术在农药残留检测中的应用植物酶抑制技术是一种基于酶活性的快速检测方法，其原理是针对特定酶设计合适的酶抑制剂，通过检测抑制剂对酶活性的影响来检测样品中的物质含量。
对于有机磷及氨基甲酸酯类农药，其作用机制通常是抑制乙酰胆碱酯酶的活性，导致神经冲动传导障碍和肌肉痉挛，因此可以采用植物酶抑制技术来检测其残留量。
3.植物酶抑制技术的局限性及挑战尽管植物酶抑制技术在农药残留检测中具有诸多优点，但其也存在一些局限性和挑战。
植物酶抑制技术对样品中其他物质的干扰较为敏感，可能会导致误判。
当前关于有机磷及氨基甲酸酯类农药的酶抑制剂种类有限，需要进一步开发新型的酶抑制剂以提高检测的灵敏度和准确度。
植物酶抑制技术的快速性和灵敏度也需要进一步优化，以满足不同场景下的检测需求。
酶抑制法快速检测蔬菜中农药残留灵敏度与准确性的研究
酶抑制法快速检测蔬菜中农药残留灵敏度与准确性的研究姚晓寰（深圳市计量质量检测研究院，广东深圳 518000）摘 要：本文对酶抑制法快速检测蔬菜中农药残留的灵敏度与准确性进行验证，分别使用酶抑制快速检测方法与气相色谱方法对10类50份蔬菜样品进行敌敌畏等10种有机磷农药残留量的检测。
结果表明，蔬菜中农药残留的酶抑制快速检测方法灵敏度与准确性可以满足快检需求，其对50批次实际样品的检测结果与气相色谱方法检测结果基本相符，能够满足基层市场监管部门和果蔬市场监控蔬菜质量的需求。
关键词：蔬菜；农药残留量；快速检测Sensitivity and Accuracy of Enzyme Inhibition Method for Rapid Detection of Pesticide Residues in VegetablesYAO Xiaohuan(Shenzhen Institute of Metrology and Quality Testing, Shenzhen 518000, China) Abstract: This article verifies the sensitivity and accuracy of enzyme inhibition method for rapid detection of pesticide residues in vegetables. The enzyme inhibition rapid detection method and gas chromatography method were used to detect 10 types of organic phosphorus pesticide residues such as dichlorvos in 50 vegetable samples from 10 categories. The results show that the sensitivity and accuracy of the enzyme inhibition rapid detection method for pesticide residues in vegetables can meet the needs of rapid detection. The detection results of 50 batches of actual samples are basically consistent with the results of gas chromatography, which can meet the needs of grassroots market regulatory departments and fruit and vegetable markets to monitor vegetable quality.Keywords: vegetables; pesticide residues; quick detection有机磷农药以其高效广谱、残留期短等优点，在蔬菜种植中应用十分广泛。
酶抑制率法测定果蔬农药残留量
纳米处 吸光 度 随时 间的变 化值 ， 计算 出抑 制率 。 通 过
抑 制 率可 以判 断 出样 品 中是否 有高 剂 量有 机磷 或 氨
基 甲酸酯类 农药 的存 在 。
一
毫升 ） ； 不锈钢取样器（ 内径 ２厘米 ） ； 配 套 玻 璃 仪 器 及其 他配 件等 。
二、 检 测 方 法
１ ． 取样 及样 品制备
、
药 剂仪 器
１ ． 试 剂
选 取有 代表 性 的果蔬 样 品 ， 擦 去表 面 泥土 ， 对 于
叶 菜类 （ 如 菠菜 、 油菜 、 白菜 等 ） 样 品， 将 叶 片部 分 切
农残试剂（ 一） ： ｐ Ｈ值 ８ ． ０缓 冲 溶液 ，分别 称 取 １ １ ． ９克 无 水 磷 酸 氢 二 钾 与 ３ ． ２克 磷 酸 二 氢 钾 ． 用 １ ０ ０ ０毫升 蒸馏水 溶解 。
３ ． 农残 试剂 （ 二） 用量 和 吸光度 值 的确认
①农残试剂 （ 二） 用量的确认
在空 白测量结束
２ ． 样 品 中农 药 的提 取
况， 用 缓 冲溶液 溶解 ， ３分钟 吸光 度变化 应控 制在 ０ ＿ ３ 以上 ， 摇匀 后置 ４ ℃冰箱保 存 备用 。
农 残 试剂 （ 三） ： 显色 剂 ， 分别称 取 １ ６ ０毫 克二 硫
用感 量 为 ０ ． ０ １ 克 电子 台秤称 取 样 品 ２ ． ｏ ０克 ． 置 于 样 品提取 瓶 中 ，将 样 品 提取 瓶分 别 置 于样 品提 取
备用。 可选 用 由以上试 剂制 备 的试剂 盒 。 乙酰胆碱 酯
酶 的 △Ａ ０ 值 应 控制在 ０ ． ３以上 。
２ ． 仪 器
Ｇ Ｄ Ｙ Ｎ 一 ３ ０ ３ Ｓ农 残 速测 仪 ： 波长 ４ １ ０ ＿ ＋ ２纳 米 、 吸
农药残留快速检测方法操作规程
农药残留快速检测方法操作规程1目的能快速检测有机磷和氨基甲酸脂类农药在蔬菜中的残留，检验室操作人员按本规程操作，保证公司到货蔬菜的质量。
2范围本标准适用于蔬菜中有机磷和氨基甲酸脂类农药残留量的快速筛选测定，规定了由酶抑制法测定蔬菜中有机磷和氨基甲酸脂类农药残留量的快速检验方法。
有两种检验方法：速测卡片（纸片法）、酶抑制率法（分光光度法）3依据GB/T 5009.199-2003,蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测。
一、速测卡片（纸片法）4原理胆碱酯酶可催化靛酚乙酸酯（红色）水解为乙酸与靛酚（蓝色），有机磷或氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶有抑制作用，使催化、水解、变色的过程发生改变，由此可判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酯酸类农药的存在，农药速测卡片是用对农药高度敏感的胆碱酯酶和显色剂做成的酶试纸。
5试剂速测卡片：胆碱酯酶和靛酚乙酸试剂做成的纸片6仪器常量天平37°C±2°C恒温装置4.分析步骤4.1整体测定法①样品处理：选取有代表性的蔬菜样品，擦去表面泥土，剪成1cm左右见方碎片，取5&放入带盖瓶中，加入10mL缓冲液或纯净水中，振摇50次，静置2min以上。
②取一片速测卡片，撕去上盖膜，用白色药片沾取提取液，放置10min以上进行预反应，有条件的在37C 恒温装置中，放置10min。
预反应后的药片表面必须保持湿润。
③将速测卡片对折，用手捏3min或用恒温装置恒温3min，使红色药片与白色药片叠合发生反应，根据白色药片的颜色判断结果。
每批测定应设一个空白对照卡。
4.2表面测定法（粗筛法）①擦去蔬菜表面泥土，滴2滴〜3滴缓冲液在蔬菜表面，用另一片蔬菜在滴液处轻轻摩擦。
②取一片速测卡片，撕去上盖膜，将蔬菜上的液滴滴到白色药片上。
放置10min以上进行预反应，有条件的在37°C恒温装置中，放置10min。
预反应后的药片表面必须保持湿润。
③将速测卡片对折，用手捏3min或用恒温装置恒温3min，使红色药片与白色药片叠合发生反应，根据白色药片的颜色判断结果。
植物酶抑制技术用于检测蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留
５ ％ 甲 胺 磷 乳 油 （ 建 省 三 农 公 司 １ ０ 辛 硫 磷 乳 油 （ 苏 省 城 市 利 民化 工 厂 ） ０ 福 ．５ ％ 江 ，
增 效 甲基 异 柳 磷 乳 油 （ 岛 双 收 农 药 公 司 ） ０ 青 ，８ ％敌 敌 畏 乳 油 （ 苏 梅 兰 公 司 ） 江 ，氧 化 乐
的 变 化 ，用 眼 睛 或 仪 器 辨 别 农 药 对 酶 的 抑 制 程 度 ．在 有 机 磷 或 氨 基 甲 酸 酯 类 农 药 存 在 时 ，植 物 水 解 酶 的 活 性 受 到 抑 制 ，靛 酚 的 蓝 色 变 浅 ． 率 研 究 采 用 小 柱 净 化 ，能 有效 去 除萃 取 液 中 的 叶 绿 素 ；应 用植 物 酶 抑 制 技 术 检 测 蔬 菜 中 的有 机 磷 及氯 基 甲酸 酯 类 农 药 ；并根 据 有 关 标 准 提 出 了抑 制 率 阊 值 ．
及 氨基 甲 酸 酯 类 农 药 残 留
钟 树 明 袁 东星 金晓英 许 鹏 翔
厦 Ｊ 学 环 境 科 学 研 究 中 ０， 海 洋 环 境 科 学 教 育 部 重 点 验 室 ．厦 门 ，３ １１ 大 ６ １６ ３ ３
摘
要
提 出 了 抑 铜 率 闻 值 （５ ） １％ ．
应 坩 植 物 酶 抑 制 挂 ｌ 检 测 蔬 菜 中 的 有 机 磷 烛 氰 基 甲 酸 酯 类 农 药 ． 用 小 柱 对 样 品 术 进 行 预 处 理 呵 去 陈 叶 绿 索 的 下 扰 提 高 检 测 灵 敏 度
维普资讯
第２ Ｉ眷 第 ２期
２ｘ２ 年 ｛） ３Ｉ Ｅ ｊ
环
境
化
学
Ｖｏｌ ２１． Ｎｏ． ２
Ｅ Ｉ ＲＯＮＭ ＥＮｒ ＡＬ ＣＨＥＭ Ｉ １ Ｙ ｓ
蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量快速检测—酶抑制率法(分光光度法)
结果计算
抑制率(%)=[(ΔA0-ΔAt)/ ΔA0]×100 式中： ΔA0对照溶液反应3min吸光度的变化值； ΔAt样品溶液反应3min吸光度的变化值；
结果判定
结果以酶被抑制的程度（抑制率）表示。 当蔬菜样品提取液对酶的抑制率≥50%时,表 示蔬菜中有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农 药存在，样品为阳性结果。 阳性结果的样品需要重复检验2次以上。
It
原理
在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱 酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度 呈正比。正常情况下，酶催化神经传导代谢产物 （乙酰胆碱）水解，其水解产物与显色剂反应，产 生黄色物质，用分光光度计在412nm处测定吸光度 随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率可以 判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类 农药的存在。
原理
试剂 pH8.0缓冲溶液 分别取 11.9g无水磷酸氢二钾与３. ２g磷酸二氢钾，用1000mL 蒸馏水溶解。
显色剂 分别取160mg二 硫代二硝基苯甲酸（DTNB） 和15.6mg碳酸氢钠，用20mL 缓冲溶液溶解，4℃冰箱中 保存。
试剂 底物：取25.0mg硫代乙酰 胆碱，加3.0mL蒸馏水溶解， 摇匀后置4℃冰箱中保存备 用。
乙酰胆碱酯酶 根据酶的 活性情况，用缓冲溶液溶 解，3min的吸光度变化ΔA0 值应控制在0.3以上。摇匀 后置4℃冰箱中保存备用。
分析步骤
样品处理：选取有代表性的蔬菜样品，冲洗掉表面泥土，剪 成1cm左右见方碎片，取样品1g，放入烧杯或提取瓶中，加 入5mL缓冲溶液，振荡1~2min，倒出提取液,静置3~5min,待 用。 对照溶液测试： 先于试管中加入2.5mL缓冲溶液，再加入 0.lmL酶液、0.1mL显色剂，摇匀后于37℃放置15min以上 （每批样品的控制时间应一致）。加入0.lmL底物摇匀，此 时检液开始显色反应，应立即放入仪器比色池中，记录反应 3 min的吸光度变化值Δ A0 样品溶液测试：先于试管中加入2.5mL样品提取液，其它操 作与对照溶液测试相同，记录反应3min的吸光度变化值Δ At
蔬菜上有机磷和氨基甲酸酯类农药残毒快速检测方法
蔬菜上有机磷和氨基甲酸酯类农药残毒快速检测方法（除韭菜外）果菜类豆菜类瓜菜类根菜；1范围：本标准规定了甲胺磷等有机磷和克百威等氨基甲酸酯类农药在蔬菜中的残毒快速检测方法。
本标准适用于叶菜类叶菜类（除韭菜外）果菜类豆菜类瓜菜类根菜类（除胡萝卜茭白）中甲胺磷氧化乐果对硫磷甲拌磷久效磷倍硫磷杀扑磷敌敌畏克百威涕灭威灭多威抗蚜威丁硫克百威甲萘威丙硫克百威速灭威残杀威异丙威等的农药残毒的快速检测。
2原理：有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制昆虫中枢和周围神经系统中乙酰胆碱酯酶的活性，造成神经传导介质乙酰胆碱的积累，影响正常传导，使昆虫中毒死亡，根据这一昆虫毒理学原理，用在对农药残留的检测中。
加入反应试剂后，用分光光度计测定吸光值随时间的变化值，计算出抑制率，判断蔬菜中含有有机磷或氨基甲酸酯类农药的残毒情况。
即：乙酰胆碱酯酶+有机磷或氨基甲酸酯类农药→酶活性被抑制→活性被抑制→样本中含有有机磷或氨基甲酸酯类农药乙酰胆碱酯酶+样本提取液︱→→活性正常→样本中不含有有机磷或氨基甲酸酯类农如以乙酰硫代胆碱（AChE）为底物，在乙酰胆碱酯酶（AChE）的作用下乙酰硫代胆碱（AsCh）水解成硫代胆碱和乙酸，硫代胆碱和二硫双对硝基苯甲酸（DTNB）产生显色反应，使反应液呈黄色，在分光光度计410纳处有最大吸收峰，用分光光度计可测的酶活性被抑制程度（用抑制率表示）。
3试剂：3.1磷酸缓冲液。
3.2丁酰胆碱酯酶：根据酶活性情况按要求用缓冲液溶解，⊿A值控制在0.4～0.8之间。
3.3底物典化硫代丁酰胆碱，用缓冲液溶解。
3.4显色济：二硫代二硝基甲酸，用缓冲液溶解。
4仪器:4.1波长为410纳米±3纳米专用测速仪,或用可见光分光度计.4.2电子天平（准确度0.1克）.4.3微型样品混合器.4.4台式培养箱4.5可调移液枪: （10～100微升,1～5毫升）.4.6不锈钢取样器（内径2厘米）.4.7 配套玻璃仪器及其他配件等.5 检测5.1 取样用不锈钢管取样器取来自不同植株叶片(至少八～十片叶子)的样本;果皮从表皮到果肉1-1.5厘米处取样.5.2检测过程取两克切碎的样本(非叶菜类取4克),放入提取瓶内,加入20毫升缓冲液震荡一到两分钟,倒出提取液,静止3-5分钟;于小试管内分别加入五十微升酶,3毫升样本提取液,50微升显色剂,于37～38℃下放置30分钟后再分别加入50微升底物,倒入比色杯中,用仪器进行测定.5.3 检测结果计算检测结果按式(1)计算抑制率(%)=﹝△ΑC-△Αs﹞/△Α c ×100 (1)式中△ΑC——对照组三分钟后与三分钟前吸光值之差;△Αs——样本三分钟后与三分钟前吸光值之差.抑制率≥70%时,蔬菜中含有某种有机磷或氨基甲酸酯类农药残毒.此时样本要有2次以上重复检测,几次重复检测的重现性应在80%以上.6最低检出浓度本方法的最低检出浓度见表1。
蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留快速检测技术
- 61 -Vegetables 2019.8检验检测收稿日期：2019-03-19蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留快速检测技术许爱霞1，2（1.甘肃省干旱生境作物学重点实验室/甘肃农业大学农学院，甘肃 兰州 730070；2.定西市农产品质量安全监督管理站，甘肃 定西 743000）摘要：为了为农产品质量安全检测及监管工作提供理论保障，就近年来农药残留快速检测技术的发展，分析了蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留快速检测技术的原理、方法、结果判定等。
对农药残留检测与农产品质量安全的重要性进行了讨论，并提出建议，如加强农业投入品监管、强化农产品例行监测、加强品牌认证、推进质量安全追溯工作、开展风险预测评估等。
关键词：有机磷；氨基甲酸酯；农药；快速检测；技术Rapid Detection Technology of Organophosphorus andCarbamate Pesticide Residues in VegetablesXU Aixia 1,2(1. Gansu Provincial Key Laboratory of Aridland Crop Science/Agricultural College of Gansu Agricultural Uni-versity, Lanzhou 730070, China; 2. Dingxi Agricultural Product Quality and Safety Supervision and Administra-tion Station, Dingxi 743000, China)Abstract: In order to provide theoretical guarantee for the inspection and supervision of agricultural product quality and safety, the principle, method and result determination of the rapid detection technology of organophosphorus and carbamate pesticide residues in vegetables were analyzed based on the development of the rapid detection technology of pesticide residues in recent years. The importance of pesticide residue detection and quality safety of agricultural products were discussed. Suggestions were put forward, such as strengthening the supervision of agricultural inputs, enhancing routine monitoring of agricultural products, strengthening brand certification, promoting quality and safety traceability, carrying out risk prediction and evaluation and so on.Keywords: organophosphorus; carbamate; pesticide; rapid detection; technology目前，在影响我国农产品质量安全的因素中，较为突出的是有机磷和氨基甲酸酯类农药残留问题[1]。
植物酶抑制技术用于检测蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留
植物酶抑制技术用于检测蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留【摘要】本文主要介绍了植物酶抑制技术在检测蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留方面的应用。
首先探讨了有机磷及氨基甲酸酯类农药残留对人体健康的危害，引出了植物酶抑制技术的重要性。
然后解释了植物酶抑制技术的原理，以及在农药残留检测中的具体应用。
接着分析了植物酶抑制技术相比传统方法的优势，包括检测效率高、灵敏度高等特点。
最后展望了植物酶抑制技术的发展前景，强调了其在农产品质量安全领域的重要意义。
本文旨在提高人们对蔬菜农药残留问题的关注，推动植物酶抑制技术在食品安全领域的应用，从而保障人们的健康权益。
【关键词】关键词: 植物酶抑制技术, 有机磷, 氨基甲酸酯类农药残留, 农产品质量安全, 应用前景, 发展前景1. 引言1.1 背景介绍随着农业生产的不断发展和农药使用的普及，有机磷及氨基甲酸酯类农药的广泛应用已成为农业生产中普遍存在的问题。
这些农药在控制病虫害、提高产量的也带来了严重的环境污染和食品安全隐患。
有机磷及氨基甲酸酯类农药残留在农产品中的严重程度已引起人们的广泛关注。
目前，传统的农药残留检测方法往往需要复杂的仪器设备和技术人员进行操作，检测时间长、成本高，且有一定的误差率。
为了提高农产品的安全质量和检测效率，急需一种简便、快速、准确的检测方法。
1.2 研究意义植物酶抑制技术用于检测蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留具有重要的意义。
随着农药的广泛使用，有机磷及氨基甲酸酯类农药残留在蔬菜中已成为一个普遍存在的问题，严重威胁着公众健康。
研究如何快速、准确地检测蔬菜中的农药残留，对保障食品安全至关重要。
研究植物酶抑制技术用于检测蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留具有重要的现实意义和深远的社会意义。
通过本次研究，有望为提高我国蔬菜质量安全水平、保障公众健康、促进食品安全领域的创新发展做出贡献。
2. 正文2.1 有机磷及氨基甲酸酯类农药残留问题有机磷及氨基甲酸酯类农药是目前农业生产中广泛使用的农药类型，它们具有高效、广谱的特点，常用于防治各种病虫害。
植物酶抑制技术用于检测蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留
植物酶抑制技术用于检测蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留作者：李海英袁柱良来源：《农家致富顾问·下半月》2019年第06期摘要对于蔬菜中有机磷与氨基甲酸酯类农药的检测可采用植物酶抑制技术，在预处理样品时可使用小柱，以此可将叶绿素的干扰有效去除，致力于检测灵敏度的显著提高。
关键词植物酶抑制技术；蔬菜；有机磷；氨基甲酸酯类农药当下，关于检测痕量、微量有机磷与氨基甲酸酯类农药残留多采用酶化学比色分析法，但是乙酰胆碱酶来源于动物体，材料比较昂贵且很难保存，由此植物水解酶代替乙酰胆碱酯酶的分析方法应运而生，使用植物水解酶可对2，6-二氯乙酰靛酚进行有效水解，按照反应溶液在水解前后的颜色变化，关于农药对于酶的抑制程度，在辨别时刻使用眼睛或仪器，有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在会抑制植物水解酶的活性，因此靛酚的颜色会逐渐变浅[1]。
1 仪器与试剂LD4-2离心机、XK95-I型多用振荡器、带恒温装置等。
2，6-二氯乙酰靛酚；磷酸盐缓冲液；面粉酶溶液等。
2 样品预处理预处理柱：取一10ml塑料离心试管，直径为1cm，在其底部钻一小孔（直径为2mm），然后加入1g硅藻土545、少量玻璃纤维。
取10g蔬菜菜叶，适当的剪碎后放置在25ml离心管中，加入磷酸盐缓冲液10ml，进行1min振荡，然后在预处理柱中倒入液体，接收引流液，即为样品溶液[2]。
3 定性与定量分析定性分析：取试管两支，分别加入2.7ml样品溶液、2.7ml磷酸盐缓冲液，然后各加入植物酶溶液0.2ml，放置在40℃下恒温10分钟，然后分别加入2，6-二氯乙酰靛酚0.1ml，40℃下再恒温10分钟，对两试管中溶液颜色进行比较与分析。
如果样品溶液蓝色较浅或呈橙色，则说明有效抑制了酶活性，含有有机磷或氨基甲酸酯类农药出现在样品中。
绘制标准工作曲线：将磷酸盐缓冲液2.4ml、农药水溶液0.3ml、植物酶溶液0.2ml依次加入到1cm的比色皿中，在40℃下恒温10分钟，关于吸光值得读取在605nm处，然后加入2，6-二氯乙酰靛酚0.1ml，40℃下再恒温10分钟并读取吸光值[3]。
酶抑制法检测蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留
酶抑制法检测蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留以及对该检测方法的评价王志波（如皋市农产品质量检验测试中心 226500）摘要：在人们广泛关注食品质量安全的今天，作为监控农产品质量安全的最直接的有效手段，蔬菜农药残留速测技术得到迅速发展。
蔬菜农药残留速测法主要有酶抑制法和化学试剂速测法两种。
它们都具有快速、简便、灵敏、成本低等特点。
在基层监督部门、蔬菜生产基地及市场得到广泛应用。
本文根据行业标准《NY／T448-2001》，利用酶抑制法和相关农残速测仪及配套试剂盒对我市主要批发市场、农贸市场、超市的蔬菜样品进行了检测。
关键词：质量安全；农药残留；速测；酶抑制Abstract：The increasing concern on the food security has stimulated the development of methods for rapid detection of pesticide residues which is the most direct and most effective means of quality-safety monitoring of agricultural products. The methods of rapid detection of pesticide residues on vegetables, including enzyme inhibition method and chemical method, have been widely used in primary regulation departments、vegetable production bases and markets due to their simple, rapid, sensitive and low costing characters. Vegetable samples collected from wholesale markets、farmer markets、supermarkets were detected by enzyme inhibition method using pesticide residues detector coupled with reagent set according to standard (NY／T448-2001) in this paper.Key words: agricultural products security;Pesticide residues; rapid test;enzyme inhibition1仪器与试剂1.1检测仪器RP－410速测仪，T－200型电子天平，电热恒温培养箱，可调移液枪（10～100微升；1-5毫升），配套玻璃仪器及其它配件。
蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量快速检测—酶抑制率法(分光光度法)
酶抑制率法对部分农药的检出限
农药名称 敌敌畏 对硫磷 辛硫磷 甲胺磷 马拉硫磷 乐果
检出限 mg/kg
0.1 1 0.3 2 4 3
农药名称 氧化乐果 甲基异柳磷 灭多威 丁硫克百威 敌百虫 呋南丹
检出限 mg/kg
0.8 5 0.1 0.05 0.2 0.05
说明
葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液 中，含有对酶有影响的植物次生物质，容易产生假阳性。处 理这类样品时，可采取整株（体）蔬菜浸提。对一些含叶绿 素较高的蔬菜，也可采取整株（体）蔬菜浸提的方法，减少 色素的干扰。 当温度条件低于37° C，酶反应的速度随之放慢，加入酶液 和显色剂后放置反应的时间应相对延长，延长时间的确定， 应以胆碱酯酶空白对照测试3min的吸光度变化D A0值在0.3 以上，即可往下操作。注意样品放置时间应与空白对照溶液 放置时间一致才有可比性。胆碱酯酶空白对照溶液3min的吸 光度变化D A0值＜0.3 的原因：一是酶的活性不够，二是温 度太低。
乙酰胆碱酯酶 根据酶的 活性情况，用缓冲溶液溶 解，3min的吸光度变化ΔA0 值应控制在0.3以上。摇匀 后置4℃冰箱中保存备用。
分析步骤
样品处理：选取有代表性的蔬菜样品，冲洗掉表面泥土，剪 成1cm左右见方碎片，取样品1g，放入烧杯或提取瓶中，加 入5mL缓冲溶液，振荡1~2min，倒出提取液,静置3~5min,待 用。 对照溶液测试： 先于试管中加入2.5mL缓冲溶液，再加入 0.lmL酶液、0.1mL显色剂，摇匀后于37℃放置15min以上 （每批样品的控制时间应一致）。加入0.lmL底物摇匀，此 时检液开始显色反应，应立即放入仪器比色池中，记录反应 3 min的吸光度变化值Δ A0 样品溶液测试：先于试管中加入2.5mL样品提取液，其它操 作与对照溶液测试相同，记录反应3min的吸光度变化值Δ At
植物酶抑制技术用于检测蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留
植物酶抑制技术用于检测蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留随着人们生活水平的提高，蔬菜的消费量也日益增加。
为了保证蔬菜的生长和质量，农民在生产过程中往往会使用农药。
尽管农药能够有效地防治害虫和病害，但是其残留却对人体健康带来了潜在的风险。
特别是有机磷和氨基甲酸酯类农药在蔬菜中的残留，更是成为了一个严重的问题。
为了及时发现和防止蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药的残留，科研人员采用了植物酶抑制技术进行检测，以保障蔬菜的食用安全。
植物酶抑制技术是一种新型的检测方法，其原理是利用植物细胞内的酶系统对有机磷及氨基甲酸酯类农药进行高效的识别和检测。
有机磷类农药是一类广泛使用的农药，在农业生产中起着重要的作用，然而由于其毒性大、残留时间长等特点，对人体健康造成了潜在的危害。
氨基甲酸酯类农药也是一种广泛使用的农药，常用于农田病虫害的预防和治疗，但其毒性也不容忽视。
如何及时准确地检测出蔬菜中的有机磷及氨基甲酸酯类农药残留成为了迫切的问题。
植物酶抑制技术的检测原理主要基于两个方面：一是利用植物细胞内特定的酶系统，对农药进行高效的选择性识别；二是通过酶抑制的反应机理，测定蔬菜中农药残留的浓度。
具体来说，科研人员通过对蔬菜样品进行提取，得到其中的酶系统，然后与添加特定底物和抑制剂的溶液进行反应，最终根据反应的光学信号或色谱图谱来判断样品中有机磷及氨基甲酸酯类农药的残留程度。
相比传统的检测方法，植物酶抑制技术具有诸多优点。
其检测速度快、敏感度高，可以在较短的时间内准确地测定出农药残留的浓度，为蔬菜的质量评估提供了一种快速的手段。
植物酶抑制技术的操作简单、成本较低，不仅适用于实验室中的科研工作，也适用于生产一线进行现场检测。
而且，该技术具有良好的稳定性和重复性，能够为蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留的检测提供可靠的保障。
植物酶抑制技术在蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留的检测中具有广阔的应用前景。
随着人们对食品安全的关注度不断提高，越来越多的国家和地区开始加强对蔬菜质量的监管和检测，植物酶抑制技术将得到更加广泛的应用。
植物酶抑制技术用于检测蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留
植物酶抑制技术用于检测蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留随着现代农业的发展，农药在农作物的种植和保护中发挥着非常重要的作用。
农药残留问题也备受关注。
蔬菜作为人们日常饮食中不可或缺的一部分，其安全性更是备受关注。
有机磷及氨基甲酸酯类农药作为常用的农药之一，在蔬菜的生产过程中广泛使用，其残留量是否符合国家安全标准成为了备受关注的问题。
为了能够准确快速地进行蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留的检测，研究人员提出利用植物酶抑制技术进行检测的方法。
下面将详细介绍植物酶抑制技术在检测蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留中的应用。
一、植物酶抑制技术的基本原理植物酶抑制技术是一种利用植物酶特异性反应来进行检测的方法。
在植物细胞中存在着多种酶，这些酶对不同的底物具有特异的反应活性。
有机磷及氨基甲酸酯类农药可以抑制某些植物酶的活性，因此可以利用这些受到抑制的植物酶来进行农药残留的检测。
基于植物酶抑制技术的检测方法具有快速、简单、灵敏等优点，因此在农药残留的检测中得到了广泛的应用。
1. 样品的处理在进行有机磷及氨基甲酸酯类农药残留的检测之前，需要对蔬菜样品进行处理。
首先是提取样品中的目标化合物，通常采用的方法是将样品经过适当的分散和提取过程，将目标化合物从样品中提取出来，以保证后续的检测过程可以得到准确的结果。
2. 检测方法的建立植物酶抑制技术在检测蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留时，需要建立相应的检测方法。
这包括选择适当的植物酶作为检测底物、确定反应条件和标准曲线等。
通过不断的试验和优化，建立一套适合于蔬菜中农药残留的检测方法是非常重要的。
1. 快速性基于植物酶抑制技术的检测方法具有很高的快速性，可以在短时间内完成对蔬菜样品的检测。
这对于农产品质量监测中的紧急情况有很大的帮助。
2. 灵敏性植物酶抑制技术可以对目标化合物进行高灵敏度的检测。
这对于蔬菜中微量有机磷及氨基甲酸酯类农药残留的检测非常有帮助。
3. 简便性相比于传统的检测方法，基于植物酶抑制技术的检测方法更为简便，不需要复杂的仪器和操作步骤。
蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测探讨
蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测探讨陈翠珊【摘要】现阶段对蔬菜中农药残留量最主要的检测方法包括速测卡法和酶抑制率法。
这两种方法的检验检出限主要是根据农药种类的不同而不同。
对于速测卡法来讲，其检出限一般为0.3～3.5 mg/kg，检出时间约在15 min左右；酶抑制剂的检出限一般在0.05～5.0 mg/kg，检出时间需要30 min。
两种检测方法可用于现场检测，并且具有操作简单、测试成本较快的特点。
这两种检测方法对超过国家相关安全标准的残留限量和未按规定使用的有机磷等农药残留的检出率能够达到80%。
或者更高，对于我国蔬菜农药残留检测来讲，这两种方法相比较而言是比较适合的。
【期刊名称】《农业科技与信息》【年(卷),期】2016(000)018【总页数】2页(P29-29,31)【关键词】有机磷;氨基甲酸酯;农药残留;快速检测【作者】陈翠珊【作者单位】广东省普宁市农产品质量安全监督检测站，广东普宁 515300【正文语种】中文【中图分类】R155.5食品安全管理中一个重要的方面就是蔬菜中的农药残留，对于蔬菜中农药残留量的检验主要是指对有机磷与氨基甲酸乙酯类农药残留量的检测。
对于这两类农药的检测行业标准方法为气相色谱法。
尽管该方法具有比较高的灵敏度，但是由于该操作耗费时间比较长，在实际检验工作中的应用价值不高［1］。
为了有效地解决此类问题，相关研究人员对蔬菜中有机磷、甲酸酯类农药的快速检测方法展开研究，找出了两种具有规范意义的快速检测方法，这两种检测方法不仅检测速度比较快，同时所受外部环境影响比较小，可以同时完成多个样品的检测。
1.1 速测卡法纸片法。
1.1.1 材料本实验所需要的材料：固化有靛酚乙酸酯以及胆碱酯酶试剂的试纸、缓冲溶液、并且将其用500 mL蒸馏水溶解），天平，如果条件允许则配备（37±2）℃恒温装置。
1.1.2 整体测定法选取具有一定代表性的蔬菜5 g，将其放入带盖瓶中，并且加入一定量的缓冲溶液。
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酶抑制法检测蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留
以及对该检测方法的评价
王志波（如皋市农产品质量检验测试中心 226500）
摘要：在人们广泛关注食品质量安全的今天，作为监控农产品质量安全的最直接的有效手段，蔬菜农药残留速测技术得到迅速发展。
蔬菜农药残留速测法主要有酶抑制法和化学试剂速测法两种。
它们都具有快速、简便、灵敏、成本低等特点。
在基层监督部门、蔬菜生产基地及市场得到广泛应用。
本文根据行业标准《NY／T448-2001》，利用酶抑制法和相关农残速测仪及配套试剂盒对我市主要批发市场、农贸市场、超市的蔬菜样品进行了检测。
关键词：质量安全；农药残留；速测；酶抑制
Abstract：The increasing concern on the food security has stimulated the development of methods for rapid detection of pesticide residues which is the most direct and most effective means of quality-safety monitoring of agricultural products. The methods of rapid detection of pesticide residues on vegetables, including enzyme inhibition method and chemical method, have been widely used in primary regulation departments、vegetable production bases and markets due to their simple, rapid, sensitive and low costing characters. Vegetable samples collected from wholesale markets、farmer markets、supermarkets were detected by enzyme inhibition method using pesticide residues detector coupled with reagent set according to standard (NY／T448-2001) in this paper.
Key words: agricultural products security;Pesticide residues; rapid test;enzyme inhibition
1仪器与试剂
1.1检测仪器
RP－410速测仪，T－200型电子天平，电热恒温培养箱，可调移液枪（10～100微升；1-5毫升），配套玻璃仪器及其它配件。
1.2试剂配置
PH=8的缓冲液，乙酰胆碱酯酶、底物、显色剂粉末分别加10毫升缓冲液配置成溶液，待用。
2检测方法
2.1检测原理
根据有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制昆虫中枢和周围神经系统中乙酰胆碱酶的
活性，造成神经传导乙酰胆碱的积累，影响正常传导，使昆虫中毒致死，根据这一昆虫毒理学原理，而用在对农药残留的检测中。
如蔬菜的提取液中不含有机磷或氨基甲酸酯类的农药残留或残留量较低，酶的活性就不会被抑制，试验中加入的基质就被酶水解或少部分水解，水解产物与加入的显色剂反应产生颜色。
反之，如果蔬菜的提取液中含有一定量的有机磷和氨基甲酸酯类农药，酶的活性就被抑制，试验中加入的基质就不能被酶水解，从而不显色或颜色变化很小，用分光光度计来测定反应前后吸光度的变化，计算出抑制率，就可以判断蔬菜中含有机磷和氨基甲酸酯类农药的残毒情况。
2.2检测步骤
取2g样品（非叶菜类取4g）切碎，放入提取瓶中，加入20毫升缓冲液，振荡2－3分钟，倒出提取液，静止5分钟，用移液枪移取3毫升提取液上清液于小试管中，加入50微升酶，50微升显色剂，混匀后于37－41℃下培养30min，再分别加入50微升底物，混合后倒入比色皿中，于412nm波长下比色。
对照测试：取3毫升缓冲液，其他步骤同样品测定，得出空白试验。
2.3结果计算
抑制率（％）＝ (△Ac-△As)/△AsxlO0%
式中△Ac：对照组3min后与3min前吸光度之差；△As：样本3min后与3min前吸光度之差。
3结果与分析
3.1检测结果判定
抑制率＜70%，基本上不存在农药残留；抑制率≥70%，肯定存在有机磷或氨基甲酸酯类农药。
抑制率一般在－10％～110%之间，一旦检测结果超出此范围，即说明操作过程中有失误的地方，需要重新检测。
3.2检测结果
分别对抽取生产基地和市场的青菜、大白菜、生菜、菠菜、花菜、包菜、刀豆、豇豆、紫茄进行检测。
检测结果见下表。
3.2检测结果分析
从检测结果来看，大白菜的抑制率为97.7％，大于70％，所以判定大白菜中肯定存在有机磷或氨基甲酸酯类农药。
其余样品均为合格样品。
本次检测的总体合格率为88.9％，总体情况较好。
4评价
酶抑制检测法操作简便、快速、灵敏、经济。
该方法的研究和应用，对市场上含有机磷、氨基甲酸酯类农药的蔬菜进行初筛选，防止中毒事故发生，净化蔬菜市场，加强批发市场上上市蔬菜的管理，威慑不法商贩和菜农滥用农药，对大量抽检样本快速进行初筛，减少实验室仪器分析的工作量起到了较大作用，同时该方法一定程度上可让老百姓吃上相对安全的蔬菜。
为此农业部还专门对蔬菜上农药残留快速检测法制定了行标，代号为NY／T448－2001，适用于叶菜类（除韭菜）、果菜类、豆菜类、瓜菜类、根菜类（除胡萝卜、茭白等）中甲胺磷、氧化乐果、对硫磷、甲拌磷、久效磷、杀扑磷、敌敌畏、克白威等近20种高、中毒有机磷、氨基甲酸酯类农残速测。
但酶抑制检测法也有它的局限性，此方法只能检测有机磷和氨基甲酸酯类农药，不适合其他农药残毒检测，且不能定量检测，所以，当用此方法检测出有残毒问题的蔬菜时，如果要作为仲裁处理，
应送到有关部门进一步用气相色谱等仪器进行定量和定性分析，其结果方可作为最终结论性数据。
参考文献
[1] 李顺，纪淑娟，孙焕.酶抑制法快速检测蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的
研究现状及展望[J].食品与药品，2006，8（07）：29-30.
[2] NY／T448.2001无公害蔬菜、水果农药残留检测标准.
[3] 裘正军，陆江峰，何勇．基于酶抑法的农产品农药残留快速检测系统及影响因素
分析[J]．农业工程学报，2007，23(9)：229—233
[4]沈体忠，孙光忠．天门市蔬菜农药残留例行监测结果与对策思考[J1．湖北植保，2006，
(5)：18—19．
[5]蓝妮春．蔬菜农药残留原因及其控制[J]．广西植保，2006,19(2)：34．。