蔬菜农药残留的快速检测方法原理及检验标准
蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测
实验十三、蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测（GB/T 5009.199-2003 蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测）方法一快速卡法一、目的要求：学习快速卡法测定有机磷农残快速检验法及熟悉检验结果评定。
二、实验原理：胆碱脂酶可催化靛酚乙酸脂（红色）水解为乙酸与靛酚（蓝色），有机磷或氨基甲酸脂类农药对胆碱脂酶有抑制作用，使催化、水解、变色的过程发生改变，由此可判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸脂类农药的存在。
三、实验试剂：1、固化有胆碱脂酶和靛酚乙酸脂试纸卡片；2、pH 7.5 磷酸盐缓冲液：分别称取15.0g磷酸氢二钠[Na2HPO4•12H2O]与1.59g无水磷酸二氢钾[KH2PO4]，用500 mL蒸馏水溶解。
四、实验步骤：1、整体测定法（1）选取具有代表性的蔬菜样品，擦去表面泥土，剪成1cm左右方形碎片,取5g防入带盖瓶中，加入10 mL缓冲溶液，振摇50次，静置2min以上.(2) 取一片快速卡，用白色药片沾取提取液，放置10min以上进行预反应，有条件时在37 ℃恒温装置中放置10min。
预反应后的药片表面必须保持湿润。
（3）将快速卡对折，用手捏3min或用恒温装置恒温3min，使红色药片与白色药片叠合发生反应。
注意：每批测定应设一个缓冲液的空白对照。
2、表面测定法（粗筛法）（1）擦去蔬菜表面泥土，滴2~3滴缓冲液在蔬菜表面，用另一片蔬菜在滴液处轻轻摩擦。
（2）取一速片测卡，将蔬菜上的液滴滴在白色药片上。
（3）放置10 min以上进行预反应，有条件时在37 ℃恒温装置中放置10 min。
预反应10 min，预反应后的药片表面必须保持湿润。
（4）将快速卡对折，用手捏3min或用恒温装置恒温3min，使红色药片与白色药片叠合发生反应。
注意：每批测定应设一个缓冲液的空白对照。
五、检测结果判断：1、结果判断结果以酶被有机磷或氨基甲酸脂类农药抑制（为阳性）、未抑制（阴性）表示。
蔬菜农药残留的快速检测方法原理及检验标准
蔬菜农药残留的快速检测方法原理及检验标
准
蔬菜农药残留的快速检测方法原理及检验标准主要有以下几种：
1. 高效液相色谱法（HPLC）：该方法利用高效液相色谱仪对蔬菜样品中的农
药进行分离和定量分析。
原理是将样品中的农药化合物通过柱子分离，并通过检测器进行检测，最后根据峰面积或峰高来定量分析。
检验标准通常是根据国家相关法规或标准设定的农药残留限量。
2. 气相色谱法（GC）：该方法利用气相色谱仪对蔬菜样品中的农药进行分离
和定量分析。
原理是将样品中的农药化合物通过柱子分离，并通过检测器进行检测，最后根据峰面积或峰高来定量分析。
检验标准通常是根据国家相关法规或标准设定的农药残留限量。
3. 免疫分析法：该方法利用特定的抗体与农药残留结合，通过免疫反应来检测
和定量分析蔬菜样品中的农药残留。
原理是将样品中的农药残留与特定抗体结合，形成抗原-抗体复合物，然后通过染色或荧光等标记物来检测和定量分析。
检验标
准通常是根据国家相关法规或标准设定的农药残留限量。
4. 质谱法：该方法利用质谱仪对蔬菜样品中的农药进行分析和定量。
原理是将
样品中的农药化合物通过质谱仪进行分析，根据质谱图谱来鉴定和定量分析。
检验标准通常是根据国家相关法规或标准设定的农药残留限量。
蔬菜农药残留的检验标准通常根据国家相关法规或标准来设定。
不同国家和地
区的标准可能有所不同，但一般都会设定农药残留的最大限量，以确保蔬菜的安全性。
这些标准通常会根据农药的毒性、使用频率、蔬菜种类等因素来设定。
农药速测卡检测蔬菜水果的农残方法
农药速测卡检测蔬菜水果的农残方法1适用范围：本方法适用于蔬菜、水果、相应食物、水及中毒残留物中有机磷类和氨基甲酸酯类农药及鼠药的快速检测。
本方法引自国家标准快速检测方法GB/。
2检测原理：胆碱酯酶可催化靛酚乙酸酯水解为乙酸与靛酚，有机磷或氨基甲酸脂类农药对胆碱酯酶有抑制作用，使催化、水解、变色的过程发生改变，由此判断样品中是否含有过量有机磷或氨基甲酸酯类农药的残留。
3检测试材固化有胆碱酯酶和靛酚乙酸酯试剂的农药速测卡。
乙酸乙酯磷酸盐浸提溶液：分别取磷酸氢二钠[Na2HPO4·12H2O]与磷酸二氢钾[KH2PO4]，用500mL蒸馏水溶解。
称量天平有条件时配备专为农药速测卡而设计的“农药残留速测仪”和超声波提取器。
4蔬菜、水果中农药残留量的检测、结果判断与注意事项表面测定法：擦去蔬菜表面泥土，滴2～3滴浸提液在蔬菜表面，用另一片蔬菜在滴液处轻轻摩擦。
取一片速测卡，将蔬菜上的液滴滴在白色药片上。
放置10min进行预反应，将速测卡对折后，用手捏3min时，打开与空白对照实验卡比较，白色药片不变色或略有浅蓝色均为阳性结果。
白色药片变为天蓝色或与空白对照卡相同为阴性结果。
有条件时，将纸片插入“农药残留速测仪”自动恒温、定时检测。
整体测定法：选取有代表性的蔬菜样品，擦去表面泥土，剪成1cm左右见方碎片，取5g放入带盖瓶中，加入10mL 浸提液，震摇50次，静置2min以上。
取一片速测卡，在白色药片上滴上2～3滴提取液，放置10min进行预反应，将速测卡对折后，用手捏3min时，打开与空白对照实验卡比较，白色药片不变色或略有浅蓝色均为阳性结果。
白色药片变为天蓝色或与空白对照卡相同为阴性结果。
有条件时，将纸片插入“农药残留速测仪”自动恒温、定时观察。
注意事项：目前国内外所使用的农药残留测定方法的检验原理基本相同，测定中的干扰物质也基本相同。
葱、蒜、萝卜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中含有对酶有影响的植物次生物质，容易产生假阳性。
蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量快速检测—酶抑制率法(分光光度法)资料
➢ 样品溶液测试：先于试管中加入2.5mL样品提取液，其它操 作与对照溶液测试相同，记录反应3min的吸光度变化值ΔAt
透射光 It
原理
在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱 酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度 呈正比。正常情况下，酶催化神经传导代谢产物 （乙酰胆碱）水解，其水解产物与显色剂反应，产 生黄色物质，用分光光度计在412nm处测定吸光度 随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率可以 判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类 农药的存在。
酶抑制率法对部分农药的检出限
农药名称
敌敌畏 对硫磷 辛硫磷 甲胺磷 马拉硫磷
乐果
检出限 mg/kg
0.1 1
0.3
2
4 3
农药名称
氧化乐果 甲基异柳磷 灭多威 丁硫克百威 敌百虫 呋南丹
检出限 mg/kg
0.8 5
0.1Байду номын сангаас
0.05
0.2 0.05
说明
葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液 中，含有对酶有影响的植物次生物质，容易产生假阳性。处 理这类样品时，可采取整株（体）蔬菜浸提。对一些含叶绿 素较高的蔬菜，也可采取整株（体）蔬菜浸提的方法，减少 色素的干扰。
当温度条件低于37° C，酶反应的速度随之放慢，加入酶液 和显色剂后放置反应的时间应相对延长，延长时间的确定， 应以胆碱酯酶空白对照测试3min的吸光度变化D A0值在0.3 以上，即可往下操作。注意样品放置时间应与空白对照溶液 放置时间一致才有可比性。胆碱酯酶空白对照溶液3min的吸 光度变化D A0值＜0.3 的原因：一是酶的活性不够，二是温 度太低。
浅析蔬菜农药残留原因及检测方法
浅析蔬菜农药残留原因及检测方法蔬菜农药残留是指在种植蔬菜过程中，使用的农药留下的残留物。
蔬菜农药残留的存在是由于农药在蔬菜生长过程中被施用，并且难以完全被分解和去除。
以下是浅析蔬菜农药残留的原因及检测方法。
蔬菜农药残留的原因主要有以下几点：1. 农药的使用不规范：农民在种植蔬菜时可能使用了过量的农药，或者使用了禁用的农药。
这会导致农药在蔬菜中的残留量超过标准。
2. 农药的残留期限未到：农药通常具有一定的持效期限，即便遵守了使用标准，也可能在蔬菜收获前仍有残留量。
3. 土壤和水源的污染：由于农业生产过程中农药的应用，可能导致土壤和水源的污染。
这些污染物可能会通过植物的根系吸收到蔬菜中，造成农药残留。
蔬菜农药残留的检测方法包括化学分析和生物学分析两种主要方法。
化学分析是指通过化学手段来分离、提取和检测农药残留。
常用的方法包括高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱法（GC）等。
这些方法能够对蔬菜中的农药进行定量和定性分析，快速准确地检测出残留物的种类和含量。
生物学分析是指利用生物学方法来检测蔬菜中的农药残留。
常用的方法包括酶活性检测法、细胞毒性检测法等。
这些方法通过检测生物体对农药的反应和损伤程度，判断蔬菜中是否存在农药残留。
目前还有一些新兴的农药残留检测技术，如基于光学传感器、电化学传感器、生物传感器等的检测方法。
这些新技术具有灵敏度高、快速、简便等优点，未来有望在蔬菜农药残留检测中得到更广泛的应用。
蔬菜农药残留的原因主要包括农药使用不规范、农药残留期限和土壤水源污染。
检测方法包括化学分析和生物学分析两种主要方法，其中化学分析是目前主流的检测方法，而生物学分析和新兴的检测技术则为蔬菜农药残留的检测提供了更多的选择。
蔬菜农药残留快速检测标准
蔬菜农药残留快速检测标准
蔬菜是人们日常生活中必不可少的食物，然而，由于农药的使用，蔬菜上可能存在农药残留的问题，这对人体健康构成潜在威胁。
因此，建立蔬菜农药残留快速检测标准显得尤为重要。
首先，蔬菜农药残留快速检测标准应包括对常见农药的检测范围和标准限量。
常见农药包括杀虫剂、杀菌剂和除草剂等，针对不同种类的蔬菜，其农药残留的标准限量也各不相同。
因此，制定不同种类蔬菜的农药残留标准至关重要，以确保蔬菜在上市销售前能够通过严格的检测标准，保障消费者的健康。
其次，蔬菜农药残留快速检测标准需要考虑到检测方法的准确性和快速性。
目前，常见的蔬菜农药残留检测方法包括高效液相色谱法、气相色谱法和质谱联用法等。
这些方法在检测蔬菜农药残留时，需要具备高度的准确性和快速性，以便能够在蔬菜上市前及时检测出农药残留情况，保障蔬菜的质量和安全。
此外，蔬菜农药残留快速检测标准还需要考虑到检测设备的先进性和普适性。
随着科技的发展，各种先进的检测设备不断涌现，这些设备在提高检测效率和准确性方面发挥着重要作用。
然而，这些设备的普及和应用也是至关重要的，只有在各地的蔬菜生产基地和市场上普及使用这些先进设备，才能真正保障蔬菜农药残留的快速检测工作。
综上所述，建立蔬菜农药残留快速检测标准对保障蔬菜质量和人们健康至关重要。
通过制定针对不同蔬菜的农药残留标准、采用准确快速的检测方法以及推广先进的检测设备，可以有效地保障蔬菜的质量和安全，为人们的健康提供保障。
希望相关部门和科研人员能够加强合作，共同致力于蔬菜农药残留快速检测标准的制定和推广，为人们的饮食安全保驾护航。
蔬菜农药残留的快速检测方法原理及检验标准
蔬菜农药残留的快速检测方法原理及检验标准1、目前农药在蔬菜中残留的问题1.1、农药是把“双刃剑”，对促进农业增产有极其重要的作用。
但由于农药本身固有的化学属性和对其使用不当，导致农产品农药残留严重超标，严重危害到广大人民群众的健康。
1.2、在我国农药中，70%为有机磷农药，而在我国生产使用的有机磷农药中，70%为剧毒、高毒类，而且较多是禁止在蔬菜作物上使用的。
2、农药中毒事件常有报道，究其原因2.1、农产品不按规定的用药量、次数、方法或安全间隔期施药，或施用不允许在蔬菜上使用剧毒、高毒类农药；2.2、现在标准施行的农药残留测定需要通过有机溶剂提取、净化和用大型分析仪器进行，无法对廉价的蔬菜进行随时随地或快速检测而形成的监管不到位。
3、农药分类：3.1、矿物源农药3.1.1、有效成分起源于矿产无机物和石油的农药。
3.1.2、代表有硫酸铜、硫磺、石硫合剂、磷化铝、磷化锌和石油乳剂等。
3.2、生物源农药3.2.1、包括植物源农药和动物源农药及微生物源农药。
3.2.2、植物类别有植物毒素、植物内源激素、植物源昆虫激素、拒食剂、引诱剂、驱避剂、绝育剂、增效剂、植物防卫素、易株克生物质等。
3.2.3、动物资源开发的农药包括动物毒素、昆虫激素、昆虫信息素和天敌等。
3.3、按作用方式分类3.3.1、胃毒素农药（敌百虫、敌敌畏、甲胺磷、马拉硫磷）3.3.2、触杀性农药（对硫磷、敌敌畏、甲胺磷、马拉硫磷）3.3.3、内吸性农药（乐果、甲胺磷、氧乐果、久效磷）3.3.4、熏蒸性农药（溴甲烷、磷化铝、敌敌畏）3.3.5、特异性农药（乙烯利、毒霉素、灭幼脲）4、目前所使用的农药按其化学结构大致可以分为以下几类：有机氯类、有机磷类、氨基甲酸酯类、拟除虫菊酯类、杂环类化合物、其他（苯氧羧酸类、脲类化合物）等。
A、有机磷类敌敌畏、甲拌磷、乐果、对氧磷、对硫磷、喹硫磷、优杀硫磷、敌百虫、氧化乐果、磷胺、甲基嘧啶磷、马拉硫磷、辛硫磷、亚胺硫磷、甲胺磷、地亚农、甲基毒死蜱、毒死蜱、倍硫酸、杀扑磷、乙酰甲胺磷、巴胺磷、甲基对硫磷、杀螟硫磷、异柳磷、异柳磷等。
蔬菜农药残留速测方法及注意事项
蔬菜农药残留速测方法及注意事项摘要介绍了蔬菜农药残留速测原理、方法及注意事项,以期为蔬菜农药残留的检测提供参考。
关键词蔬菜;农药残留;速测原理;方法;注意事项根据有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制酰胆碱酯酶的活性原理,如果蔬菜提取液中不含有机磷或氨基甲酸酯类农药残留或残留量低,酶的活性就不被抑制,试验中加入的底物就能被酶水解,水解产物与加入的显色剂反应产生颜色或水解产物本身有颜色。
如果蔬菜提取液含有农药残留量较高时,酶的活性被抑制,基质就不被水解,当加入显色剂时就不显色或颜色变化很小。
用分光光度计测定吸光值随时间的变化,计算出抑制率,即可判断蔬菜中含有机磷或氨基甲酸酯类农药残留量的情况。
目前,沈阳市农业检测中心已在该市各大蔬菜批发市场建立检测站,对蔬菜中的农药残留进行快速检测[1-2]。
现将其方法及注意事面总结如下。
1蔬菜农药残留速测方法1.1试剂的配置及保存一是提取试剂,即缓冲溶液,每小袋用1 000 mL蒸馏水溶解。
二是胆碱酯酶,用10 mL缓冲溶液溶解,贮存在0~5 ℃冰箱内。
三是底物(碘化乙酰硫代胆碱),用10 mL蒸馏水溶解,贮存在0~5 ℃冰箱内。
四是显色剂(二硫二硝基苯甲酸),用10 mL缓冲溶液溶解,贮存在0~5 ℃冰箱内。
1.2空白样处理于平底小试管中加入50 μL酶、3 mL提取液即缓冲溶液、50 μL显色剂。
常温下放置15 min,加入50 μL底物,立即倒入比色皿中,再放入仪器比色池中,按“空白”键,3 min后得空白吸光度值。
1.3样品处理从田间采摘2.0~2.5 kg可食用菜样,分成3份,1份备案,1份用于复检,1份用于检测。
取表面干净的蔬菜,用天平准确称取,叶菜类取2 g,非叶菜类取4 g,叶菜取叶片部分,果菜如番茄、黄瓜等横截削下1片。
将叶片、瓜肉等切成1 cm见方,置于小玻璃瓶内,加入20 mL提取试剂,振荡1～2 min,倒出上清液于大试管中,静置3～5 min。
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蔬菜农药残留的快速检测方法原理及检验标准1、目前农药在蔬菜中残留的问题1.1、农药是把“双刃剑”，对促进农业增产有极其重要的作用。
但由于农药本身固有的化学属性和对其使用不当，导致农产品农药残留严重超标，严重危害到广大人民群众的健康。
1.2、在我国农药中，70%为有机磷农药，而在我国生产使用的有机磷农药中，70%为剧毒、高毒类，而且较多是禁止在蔬菜作物上使用的。
2、农药中毒事件常有报道，究其原因2.1、农产品不按规定的用药量、次数、方法或安全间隔期施药，或施用不允许在蔬菜上使用剧毒、高毒类农药；2.2、现在标准施行的农药残留测定需要通过有机溶剂提取、净化和用大型分析仪器进行，无法对廉价的蔬菜进行随时随地或快速检测而形成的监管不到位。
3、农药分类：3.1、矿物源农药3.2、生物源农药3.3、按作用方式分类4、目前所使用的农药按其化学结构大致可以分为以下几类：有机氯类、有机磷类、氨基甲酸酯类、拟除虫菊酯类、杂环类化合物、其他（苯氧羧酸类、脲类化合物）等。
A、有机磷类敌敌畏、甲拌磷、乐果、对氧磷、对硫磷、喹硫磷、优杀硫磷、敌百虫、氧化乐果、磷胺、甲基嘧啶磷、马拉硫磷、辛硫磷、亚胺硫磷、甲胺磷、地亚农、甲基毒死蜱、毒死蜱、倍硫酸、杀扑磷、乙酰甲胺磷、巴胺磷、甲基对硫磷、杀螟硫磷、异柳磷、异柳磷等。
B、有机氯类α -666、β -666、γ-666、δ-666、op -DDE、pp’-DDE、op’-DDD、pp’-DDT、op’-DDT、异菌脲、五氯硝基苯、林丹、乙烯菌核利、三氯杀螨醇、功夫、氯硝胺、百菌清、粉锈宁、甲氯菊酯、氯菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯等。
C、氨基甲酸酯类涕灭威砜、涕灭威亚砜、灭多威、3-羟基呋喃丹、涕灭威、呋喃丹、甲萘威、叶蝉散、仲丁威、速灭威等。
d、拟除虫菌酯类联苯菊酯、二氧苯醚菊酯、功夫菊酯、溴氰菊酯、氰戊菊酯、氟氰菊酯、氟氯氰菊酯，戊菊酯、甲氰菊酯、氯氟氰菊酯、呋喃菊酯、苄呋菊酯、右旋丙烯菊等。
5、最大残留限量标准最大残留限量（Maximum Residue Limit，MRL）在农畜产品中农药残留的法定最高允许浓度，又称最高残留限量，以每千克农畜产品中农药残留的毫克数（毫克/千克）表示。
目的：控制食品中过量农药残留以保障食用者安全，对超标的产品采取措施，即禁止食用。
执行和指导合理用药，农产品监测超标时，表明未按规定用药。
减少国际贸易纠纷，各国均制订本国的MRL。
《食品中农药最大残留限量》标准A、GB2763-2014，规定了387种农药最高残留限量。
国家标准作为一项加强农药管理的措施。
B、其中，针对蔬菜、水果、茶叶等鲜食农产品农药残留超标多发、易发问题，新标准重点增了蔬菜、水果等鲜食农产品的限量标准。
水果农药残留限量增加473项，蔬菜（包括食用菌）农药最大残留限量增加431项。
6、高毒农药禁限用管理措施6.1、农业部、工业和信息化部、环境保护部、国家工商行政管理总局和国家质量监督检验检疫总局与2011年6月15日发布第1586号公告，决定对高毒农药采取进一步禁限用管理措施。
6.2、停止受理苯线磷、地虫硫磷、甲基硫环磷、磷化钙、磷化镁、磷化锌、硫线磷、蝇毒磷、治螟磷、特丁硫磷、杀扑磷、甲拌磷、甲基异柳磷、克百威、灭多威、灭线磷、涕灭威、磷化铝、氧乐果、水胺硫磷、溴甲烷、硫丹等22种农药新增田间试验申请、登记申请及生产许可证申请；停止批准含有上述农药的新增登记证和农药生产许可证（生产批准文件）。
6.3、撤销氧乐果、水胺硫磷早柑橘树，灭多威在柑橘树、苹果树、茶树、十字花科蔬菜，硫线磷在柑橘树、黄瓜，硫丹在苹果树、茶树，溴甲烷在草莓、黄瓜上的登记。
6.4、本公告发布前已生产产品的标签可以不再更改，但不得继续在已撤销登记的作物上使用。
6.5、自2011年10月31日起，撤销（撤回）苯线磷、地虫硫磷、甲基硫环磷、磷化钙、磷化镁、磷化锌、硫线磷、蝇毒磷、治螟磷、特丁硫磷等10种农药的登记证、生产许可证（生产批准文件），停止生产。
6.6、自2013年10月31日起，停止销售和使用。
根据以上情况，制定出有机磷和氨基甲酸酯类农药的快速检测方法，加强对农药残留的快速检测一成为十分必要的监管措施。
7、农药残留主要检测方法有两种：7.1、色谱检测法：色谱检测法用作农残定量分析，可为农药残留执法提供依据。
色谱法（包括气相色谱、液相色谱、气质联用等）。
优点：灵敏度高、准确、定性定量；缺点：成本高、操作复杂、时间较长。
7.2、速测仪法：速测仪法只能作为农残定性分析，易于在基层推广等特点，是目前我国控制高毒农药残留的一种有效方法，也是目前国内和我省应用最广泛的农药残留快速检测方法。
A、速测仪法的主要优点：1、该方法具有快速方便、前处理简便、成本较低等优点，适用于现场定性测定，特别适合在蔬菜生产基地、批发市场及农产品检测部门开展快速检测工作。
2、该方法可对有农药残留的蔬菜进行粗筛，将一部分农药残留含量较高的蔬菜控制在市场之外，避免因农药残留发生中毒事件。
B、速测仪法的主要缺点：1、酶试剂易失活，导致反应不稳定，检测结果误差较大，重复性不好，实际应用中的确认率大约为60%~70%左右；2、存在检测盲区，只能检测有机磷和氨基甲酸酯两类农药，不能检测有机氯类、菊酯和其它类别的剧毒农药；3、不适合检测葱蒜类、香菜、韭菜、番茄、胡萝卜、茭白、蘑菇、花椒等14种容易出现假阳性的农产品。
8、速测仪的检测方法有两种：1、速测卡法（纸片法）2、酶抑制率法（分光光度法）9、两种快速检测方法的技术原理9.1、根据有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制昆虫中枢和周围神经系统中乙酰胆碱酶的活性造成神经传导介质乙酰胆碱的积累，影响正常传导，导致昆虫中毒致死的原理而设计。
9.2、如果蔬菜中不含有机磷和氨基甲酸酯类农药，乙酰胆碱酶水解后，水解产物可与显色剂反应产生颜色。
9.3、如果蔬菜中含有可以抑制乙酰胆碱的活性的有机磷和氨基甲酸酯类农药，这种酶就不能被水解，从而无显色反应。
9.4、在溶液中加入乙酰胆碱酶和显色剂，用此判断有机磷和氨基甲酸酯类农药残留是否存在。
10、速测卡法（纸片法）1.1、固有胆碱酯酶和靛酚乙酸酯试剂的纸片（速测卡）。
1.2、pH7.5缓冲液溶液：分别取15.0g磷酸氢二钠与1.59g无水磷酸二氢钾用500mL蒸馏水溶解。
2、仪器2.1、常量天平有条件配备37℃±2℃恒温装置。
3、分析步骤3.1、整体测定法3.2、表面测定法（粗筛法）结果判定：1、结果以酶被有机磷或氨基甲酸酯类农药抑制（为阳性）、未抑制（为阴性）表示。
2、与空白对照卡比较，白色药片不变色或略浅蓝色均为阳性结果。
白色药片变为天蓝色或与空白对照卡相同，为阴性结果。
3、对阳性结果的样品，可用其他分析方法进一步确定具体农药品种和含量。
速测卡法（纸片法）注意事项1、有些蔬菜如生姜、葱、蒜、辣椒和番茄等汁液中含有破坏酶活性或者使蓝色产物褪色的物质，处理这类蔬菜时，不要让其汁液太多释放出来，不要剪得太碎，浸提时间不易过长，必要时可采用整枝蔬菜浸提或采用表面测定法进行测定。
对一些含叶绿素较高的蔬菜，也可以采取整株（体）蔬菜浸提的方法，减少色素的干扰。
2、试纸上的提取液不可太多而溢出试纸，亦不可太少而使反应不完全。
3、最好将每一批样品处理好后一起加样，一面时间过长蒸干。
4、当温度条件低于37℃，酶反应的速度随之放慢，药片加液后放置反应的时间相对延长，延长时间的确定，应以空白对照卡用（体温）手指捏3分钟时可以变蓝，即可往下操作。
注意样品放置的时间应与空白对照卡放置的时间一致才有可比性。
5、空白对照卡不变色的原因：一是药片表面缓冲溶液加的少，预反应后的药片表面不够湿润，二是温度太低。
6、如有条件，将农药速测卡放在10℃以下保存效果会更好，每小包产品开封后最好在三天内用完，如用不完，可放入将有变色硅胶吸潮剂的瓶中密封保存，如发现农药测速卡的红色药片由鲜红橙色变为暗淡的褐红色，说明纸片已吸潮失效。
PR-3便携式农药残毒快速检测仪操作步骤：1、接通电源，右侧开关拨至“开”，打开上盖按“START”键预热；2、当预热达到设置反应温度TEMP时，听到“哗”一声，屏幕显示“TEMP1”，预热结束，等待倒计时；3、去试纸外模，插入试纸（白片在下端），在白片上分别加1-2滴提取液；4、再次按’“START”键，单片电脑开始“TEMP1”倒计时；5、当听到连续“哗、哗、哗”声，屏幕显示“CLOS”，提示合上前盖，进入“TEMP2”倒计时；6、当听到六声“哗。
哗、哗”音，本次操作结束，打开上盖观察试纸颜色变化；7、试纸显示蓝色为阴性，浅蓝色为弱阳性，白色为阳性；8、测试完毕，向上取下试纸进行下一次的检测。
酶抑制率法（分光光度法）1、试剂1.1、pH8.0缓冲溶液：分别取11.9g无水磷酸氢二钾与3.2g磷酸二氢钾，用1000mL蒸馏水溶解。
1.2、显色剂：分别取160mg二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）和15.6mg碳酸氢钠，用20m了缓冲溶液溶解，4℃冰箱中保存。
1.3、底物：取25.0mg硫代乙酰胆碱，加3.0mL蒸馏水溶解，摇匀后置4℃冰箱中保存备用。
保存期不超过两周。
1.4乙酰胆碱酯酶：根据酶的活性情况，用缓冲溶液溶解，3min的吸光度变化ΔAo值应控制在0.3以上。
摇匀后置4℃冰箱中保存备用，保存期不超过四天。
1.5、可选用由以上试剂制备的试剂盒。
乙酰胆碱酯酶的ΔAo值应控制在0.3以上。
2.1、分光光度计或相应测定仪及常量天平。
3、分析步骤3.1、样品处理：选取有代表性的蔬菜样品，冲洗掉表面泥土，剪成1cm左右见方碎片，取样品1g，放入烧杯或提取液瓶中，加入5mL缓冲溶液，振荡1-2min，倒出提取液，静置3~5min，待用。
3.2、对照溶液测试：先于试管中加入2。
5mL缓冲溶液，再加入0.1mL酶液、0.1mL显色剂，摇匀后于37℃放置15min以上（每批样品的控制时间应一致）。
加入0.1mL底物摇匀，此时检液开始显色反应，应立即放入仪器比色池中，记录反应3min的吸光度变化值ΔAo。
3.3、样品溶液测试：先于试管中加入2.5mL样品提取液，其他操作与对照溶液测试相同，记录反应3min的吸光度变化值ΔAt。
结果的表述计算1、检测结果按公式计算：2、抑制率（%）=[（ΔAo-ΔAt）/ΔAo]×1003、式中：ΔAo…对照溶液反应3min吸光度的变化值：4、ΔAt…样品溶液反应3min吸光度的变化值：结果判定1、结果以酶被抑制的程度（抑制率）表示。
当蔬菜样品提取液对酶的抑制率≥50%时，表示蔬菜中有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药存在，样品为阳性结果。
阴性结果的样品需要重复检验2次以上。
对阳性结果的样品，可用其他方法进一步确定具体农药品种和含量。