黑河市周边地区奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定与药敏试验
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凯 琼 脂 平板 上 不 生 长 ； 肉 中浑浊 、 淀 并在 管 壁 在 汤 沉 形 成 菌 环 ； 兰 氏染 色 为葡 革 萄串状 、 双或单 个 排 列 成
酾
１ 试 验 方 法 ． ２
样 本 采集 选取 隐性 乳房 炎 阳性 （ Ｂ 经 ＭＴ对 所 选
奶牛进行隐性乳房炎检测 ）乳区或 临床型乳房炎乳
１ 材 料 与 方 法 １１材 料 ．
待检材料选择瑷珲 区四嘉子乡 ２ 、河南 屯 １ 个 个 以及 幸 福 乡 １ 奶 牛养 殖 小 区作 为 实 验 基 地 ， 个 选 取隐性乳房炎患牛 （ Ｍ Ｂ Ｔ阳性 ） 临床型发 病乳区 或 １０个 ， ０ 于采取治疗措施之前 ， 对患乳 区乳头严格消
醇、 山梨醇 和七 叶苷 发 酵试验 等 。
微生物可引起奶牛乳房炎 ， 但国内外公认的最常见 、 最主要 的病原为金黄色葡萄球菌 、 无乳链球菌 、 乳房 链 球菌 、停乳链球菌和大肠杆菌等肠杆菌。长期 以 来 ，牛场兽 医对 奶 牛乳 房 炎 的 治疗 以抗 生 素 治疗 为 主， 但常规抗生素治疗 的结果并不理想。为进一步了 解奶牛乳房炎病原菌的发展变化趋势 以及相应 针对 性的治疗方案 ，通过试验对黑河市 ４ 个规模化 牛场 进行微生物学调查和药敏试验 ，以期为乳房炎 的防 治提供可用的信息。
自兰州 中兽 医研 究 所 。
米 卡星 、 卡那霉素 、 四环素 、 环丙沙星 、 阿奇霉素 、 氨 苄青霉素 、 链霉素 。
２ 结 果
２１ 细 菌观 察 ．
在 营养 琼 脂平 板 、 平 板 、 血 高盐 甘露 醇 平 板 上 生 长 良好 ， 落 形 态 为 圆形 、 润 、 起 、 滑 、 缘 规 菌 湿 突 光 边 则 的淡 黄色 小 菌 落 ； 血平 上 见 明 显 浴 血 ；王爱 屎 在 顿 ｊ
毒， 采取 奶样 （ 每个 乳 区 ２毫 升 ） 至无 菌 管 内 。
药 敏 实验 采 用 纸 片扩 散 法 ，将 经 过 鉴定 的菌 株
各随机选择 ４ ，接种于营养 肉汤纯培养液 ，７ 株 ３℃ １～４ 时，滴加 ｌ ２ 小 ８ 毫升培养液于血琼脂平板表面 ， 用 “” Ｌ 形涂布棒均匀涂布 ， 待平板表面稍干燥后 ， 用 无菌镊子夹取抗菌药物纸片 ， 按一定距离分别贴于 平板 上 ， ３ ℃恒 温 培 养 ２ 置 ７ ４小 时 后 取 出 ， 游 标 卡 用 尺测量各种药物的抑菌环直径。计算 同类菌不 同菌
试 药 物 为青 霉 素 Ｇ 、 孢 噻肟 、 头 先锋 ｖ 、 锋 Ｖ 、 先 Ｉ 阿
药敏 纸 片有 青 霉 素 Ｇ 、 孢 噻肟 、 锋 ｖ 、 锋 头 先 先
Ｖ、 Ｉ 阿米卡星 、 卡那霉素 、 四环 素 、 环丙沙星 、 阿奇霉 素、 氨苄青霉素、 链霉素 ， 自哈尔滨生物制药一厂 。 购 诊断试剂是隐性乳房炎诊 断液 （ 简称 Ｌ Ｔ ， Ｍ ） 购
量 发酵 管 ， 均购 自杭 州天 和微 生 物试 剂 有限公 司。 标 准 菌株 为 金 黄 色 葡 萄 球 菌 Ａ Ｃ ２９ ３（ 溶 Ｔ Ｃ ５２ Ｂ 血 ） 大肠 杆菌 Ａ Ｃ ２９ ２， 自杭 州 天 和微 生 物试 、 Ｔ Ｃ ５６ ２ 毫米为中度敏感 ， 大于 ２ 毫米为高度敏感 。 ０ 供
兽 医 临 床
黑 河 市 周 边 地 区 奶 牛 乳 房 炎 病 原 茵 的 分 离 鉴 定 与 药 敏 试 验
朱少奇 乔 洁 （ 黑龙江省黑河市畜牧兽医 １４０ ） 局 ６ ０ ３
奶牛乳房炎是乳腺受到物理 、 化学 、 微生物等因 素的刺激所发生的炎症变化 ， 是多因素疾病综合征 。 奶牛乳房炎是 目前危害奶牛养 殖业 的主要疾病
之 一 ， 年 可造 成 巨大 的经济 损 失 。虽 然有 多种 病 原 每
３５ ～ 毫升 。采样过程严格无菌操作。 微生物分离培养应分别将无菌采集 的隐性乳房 炎或 临床型乳房炎乳样摇匀 ， １ 吸 毫升加人到 ｌ ０毫 升含 ５ ％犊牛血清 的营养 肉汤中 ， 同时用接种环无菌 取样 涂 布 于羊 血琼 脂平 板 ，７（ ４ ４ 小 时 。将 平 板 ３ ￣２ — ８ ２ 上 的单个典型菌落 （ 如未见菌落生长则用肉汤培养 物接种到羊血琼脂平板 ３ ℃ｌ ４ ７ ８ ２ 小时 ）分别接种 到鉴别培养基 中，７Ｃ ８ ２ 小时。 ３ ￣ １—４ 观察菌落形态、 生 长 特 征 ， 过 革 兰 氏染 色镜 检 及触 酶 、 通 氧化 酶试 验 进 行纯检 ， 初步判定细菌类属 。 细菌生化鉴定可根据初步鉴定结果 ，对分离 到 的菌株有选择地进行生化试验 。中等大小革兰氏阴 性杆菌 ， 接种于三糖铁培养基 ， 再用肠杆菌科 细菌生
化 编码 鉴 定管 Ｇ ｚ １ｅ 行生 化鉴 定 。 兰 氏 阳性 Ｙ 一 ５进 革 葡 萄 球 菌 按 葡 萄球 菌 属 细 菌 生 化 编 码 鉴 定 管 Ｔ 一 Ｈ １ｓ 行 生化 鉴定 。 ６进 革兰 氏 阳性 链球 菌 进行 Ｃ ＭＰ试 Ａ 验 及链 球 菌生 化 鉴定 ， 括 马 尿 酸钠 水解 试 验 ， 露 包 甘
株 的 平 均 抑 菌 直 径 ，直 径 小 于 １ 米 为 不 敏 感 ， ６毫
培养基为犊牛血 清 、 营养肉汤 、 营养琼 脂 、 高盐 甘露醉琼脂 、％羊血琼脂 、 ７ 麦康凯琼脂 、 Ｈ琼脂 、 Ｍ 氧 化 酶 、 尿 酸钠 、 马 山梨 醇 、 叶苷 、 化 管 （ 七 生 成套 ） 微 、
区 １０个 。用 ７％酒 精溶 液 消毒 乳头 孔 处后 ， ０ ５ 倾斜 带 无 菌 棉拭 子 的试 管 ，将 管 口对 准 乳 头 孔 ，采 集 乳 汁
养殖技术顾 问 ２ １． ０ １８
口 兽 医 临 床
的革 兰 氏 阳性 球 菌 ， 步判 断 为金 黄色葡 萄球 菌 。 初
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１ 试 验 方 法 ． ２
样 本 采集 选取 隐性 乳房 炎 阳性 （ Ｂ 经 ＭＴ对 所 选
奶牛进行隐性乳房炎检测 ）乳区或 临床型乳房炎乳
１ 材 料 与 方 法 １１材 料 ．
待检材料选择瑷珲 区四嘉子乡 ２ 、河南 屯 １ 个 个 以及 幸 福 乡 １ 奶 牛养 殖 小 区作 为 实 验 基 地 ， 个 选 取隐性乳房炎患牛 （ Ｍ Ｂ Ｔ阳性 ） 临床型发 病乳区 或 １０个 ， ０ 于采取治疗措施之前 ， 对患乳 区乳头严格消
醇、 山梨醇 和七 叶苷 发 酵试验 等 。
微生物可引起奶牛乳房炎 ， 但国内外公认的最常见 、 最主要 的病原为金黄色葡萄球菌 、 无乳链球菌 、 乳房 链 球菌 、停乳链球菌和大肠杆菌等肠杆菌。长期 以 来 ，牛场兽 医对 奶 牛乳 房 炎 的 治疗 以抗 生 素 治疗 为 主， 但常规抗生素治疗 的结果并不理想。为进一步了 解奶牛乳房炎病原菌的发展变化趋势 以及相应 针对 性的治疗方案 ，通过试验对黑河市 ４ 个规模化 牛场 进行微生物学调查和药敏试验 ，以期为乳房炎 的防 治提供可用的信息。
自兰州 中兽 医研 究 所 。
米 卡星 、 卡那霉素 、 四环素 、 环丙沙星 、 阿奇霉素 、 氨 苄青霉素 、 链霉素 。
２ 结 果
２１ 细 菌观 察 ．
在 营养 琼 脂平 板 、 平 板 、 血 高盐 甘露 醇 平 板 上 生 长 良好 ， 落 形 态 为 圆形 、 润 、 起 、 滑 、 缘 规 菌 湿 突 光 边 则 的淡 黄色 小 菌 落 ； 血平 上 见 明 显 浴 血 ；王爱 屎 在 顿 ｊ
毒， 采取 奶样 （ 每个 乳 区 ２毫 升 ） 至无 菌 管 内 。
药 敏 实验 采 用 纸 片扩 散 法 ，将 经 过 鉴定 的菌 株
各随机选择 ４ ，接种于营养 肉汤纯培养液 ，７ 株 ３℃ １～４ 时，滴加 ｌ ２ 小 ８ 毫升培养液于血琼脂平板表面 ， 用 “” Ｌ 形涂布棒均匀涂布 ， 待平板表面稍干燥后 ， 用 无菌镊子夹取抗菌药物纸片 ， 按一定距离分别贴于 平板 上 ， ３ ℃恒 温 培 养 ２ 置 ７ ４小 时 后 取 出 ， 游 标 卡 用 尺测量各种药物的抑菌环直径。计算 同类菌不 同菌
试 药 物 为青 霉 素 Ｇ 、 孢 噻肟 、 头 先锋 ｖ 、 锋 Ｖ 、 先 Ｉ 阿
药敏 纸 片有 青 霉 素 Ｇ 、 孢 噻肟 、 锋 ｖ 、 锋 头 先 先
Ｖ、 Ｉ 阿米卡星 、 卡那霉素 、 四环 素 、 环丙沙星 、 阿奇霉 素、 氨苄青霉素、 链霉素 ， 自哈尔滨生物制药一厂 。 购 诊断试剂是隐性乳房炎诊 断液 （ 简称 Ｌ Ｔ ， Ｍ ） 购
量 发酵 管 ， 均购 自杭 州天 和微 生 物试 剂 有限公 司。 标 准 菌株 为 金 黄 色 葡 萄 球 菌 Ａ Ｃ ２９ ３（ 溶 Ｔ Ｃ ５２ Ｂ 血 ） 大肠 杆菌 Ａ Ｃ ２９ ２， 自杭 州 天 和微 生 物试 、 Ｔ Ｃ ５６ ２ 毫米为中度敏感 ， 大于 ２ 毫米为高度敏感 。 ０ 供
兽 医 临 床
黑 河 市 周 边 地 区 奶 牛 乳 房 炎 病 原 茵 的 分 离 鉴 定 与 药 敏 试 验
朱少奇 乔 洁 （ 黑龙江省黑河市畜牧兽医 １４０ ） 局 ６ ０ ３
奶牛乳房炎是乳腺受到物理 、 化学 、 微生物等因 素的刺激所发生的炎症变化 ， 是多因素疾病综合征 。 奶牛乳房炎是 目前危害奶牛养 殖业 的主要疾病
之 一 ， 年 可造 成 巨大 的经济 损 失 。虽 然有 多种 病 原 每
３５ ～ 毫升 。采样过程严格无菌操作。 微生物分离培养应分别将无菌采集 的隐性乳房 炎或 临床型乳房炎乳样摇匀 ， １ 吸 毫升加人到 ｌ ０毫 升含 ５ ％犊牛血清 的营养 肉汤中 ， 同时用接种环无菌 取样 涂 布 于羊 血琼 脂平 板 ，７（ ４ ４ 小 时 。将 平 板 ３ ￣２ — ８ ２ 上 的单个典型菌落 （ 如未见菌落生长则用肉汤培养 物接种到羊血琼脂平板 ３ ℃ｌ ４ ７ ８ ２ 小时 ）分别接种 到鉴别培养基 中，７Ｃ ８ ２ 小时。 ３ ￣ １—４ 观察菌落形态、 生 长 特 征 ， 过 革 兰 氏染 色镜 检 及触 酶 、 通 氧化 酶试 验 进 行纯检 ， 初步判定细菌类属 。 细菌生化鉴定可根据初步鉴定结果 ，对分离 到 的菌株有选择地进行生化试验 。中等大小革兰氏阴 性杆菌 ， 接种于三糖铁培养基 ， 再用肠杆菌科 细菌生
化 编码 鉴 定管 Ｇ ｚ １ｅ 行生 化鉴 定 。 兰 氏 阳性 Ｙ 一 ５进 革 葡 萄 球 菌 按 葡 萄球 菌 属 细 菌 生 化 编 码 鉴 定 管 Ｔ 一 Ｈ １ｓ 行 生化 鉴定 。 ６进 革兰 氏 阳性 链球 菌 进行 Ｃ ＭＰ试 Ａ 验 及链 球 菌生 化 鉴定 ， 括 马 尿 酸钠 水解 试 验 ， 露 包 甘
株 的 平 均 抑 菌 直 径 ，直 径 小 于 １ 米 为 不 敏 感 ， ６毫
培养基为犊牛血 清 、 营养肉汤 、 营养琼 脂 、 高盐 甘露醉琼脂 、％羊血琼脂 、 ７ 麦康凯琼脂 、 Ｈ琼脂 、 Ｍ 氧 化 酶 、 尿 酸钠 、 马 山梨 醇 、 叶苷 、 化 管 （ 七 生 成套 ） 微 、
区 １０个 。用 ７％酒 精溶 液 消毒 乳头 孔 处后 ， ０ ５ 倾斜 带 无 菌 棉拭 子 的试 管 ，将 管 口对 准 乳 头 孔 ，采 集 乳 汁
养殖技术顾 问 ２ １． ０ １８
口 兽 医 临 床
的革 兰 氏 阳性 球 菌 ， 步判 断 为金 黄色葡 萄球 菌 。 初