细菌自动鉴定及药敏系统的研究进展
全自动微生物鉴定药敏分析仪对临床相关细菌的鉴定能力及应用价值探究
临床医学工程Clinical Medical Engineering病原微生物是目前引起人类疾病的主要因素，其治疗主要依靠抗菌药物。
但是，在治疗前需要对细菌的类型进行测定，以便有针对性的制定治疗方案和给予治疗药物[1]。
全自动微生物鉴定药敏分析仪的出现为医生做出正确的治疗方案提供了有效的指导。
在本项研究中，随机选取2014年5月~2016年5月聊城市人民医院各科室收集的患者血液、痰液、脓液、尿液以及便物，从中分离出非重复的革兰阳性菌60株，革兰阴性菌64株，以及本院的实验室保存的样本革兰阳性菌32例，革兰阴性菌32例作为研究对象，采用全自动微生物鉴定药敏分析仪对这些菌株进行鉴定，并对鉴定结果进行分析。
现报道如下。
1.资料与方法1.1一般资料随机选取2014年5月~2016年5月聊城市人民医院呼吸科、肿瘤科、耳鼻喉科、心脏外科以及肛肠科收集的患者血液、痰液、脓液、尿液以及便物，从中分离出革兰阳性菌60株，革兰阴性菌64株，以及本院的实验室保存的样本革兰阳性菌32例，革兰阴性菌32例。
所有的菌株均是非重复的。
筛选实验菌株时，以全自动微生物鉴定药敏分析仪的鉴定范围为标准，排除超出鉴定范围的菌株。
质控菌株选取ATCC 25922大肠埃希菌、ATCC 27853大肠埃希菌、ATCC25923金黄色葡萄球菌、ATCC 29212粪肠球菌[2]。
1.2仪器与方法选取Vitek 2 Compact型全自动微生物鉴定药敏分析仪（法国生物梅里埃公司生产）及GP鉴定卡、GN鉴定卡及药敏卡。
Vitek 2 Compact型全自动微生物鉴定药敏分析仪的测定方法采用比色比浊法。
GP药敏卡用于鉴定革兰阳性菌所需时间大概为3~10小时，GN药敏卡用于鉴定革兰阴性菌，鉴定所需时间大概为3~8小时。
鉴定时将需要鉴定的菌株接种于培养基上进行培养，培养环境保持温度稳定，大约35˚C。
选择分离的单个菌落进行一次传代培养，培养18~24小时，使用氯化钠溶液制备成一定浓度的菌悬液，全自动微生物鉴定药敏分析仪对临床相关细菌的鉴定能力及应用价值探究周书霞山东聊城职业技术学院（山东聊城 252000）文章编号：1006-6586(2016)07-0047-02 中图分类号：R446.5 文献标识码：A内容提要：目的：探讨分析全自动微生物鉴定药敏分析仪对临床相关细菌的鉴定能力及应用价值。
全自动细菌鉴定范文
全自动细菌鉴定技术是一项新兴的医学检测技术，在实验室里广泛应用。
它结合了现代医学和计算机科学的优势，利用高精度仪器和智能算法，可在短时间内准确鉴定出细菌的种类，为疾病的诊断和治疗提供了重要的参考数据。
本文将从细菌鉴定技术的发展历程、影响因素以及应用前景等方面探讨全自动细菌鉴定技术的意义和未来发展方向。
一、发展历程传统的细菌检测流程需要多次取样、分离和培养，而且需要人工进行显微镜观察和分类，周期长、费时费力。
因此，人们开始利用计算机技术开发自动化细菌鉴定技术，以取代手工鉴定所带来的不便。
自20世纪80年代起，随着计算机技术和仪器水平的提高，全自动细菌鉴定技术快速发展，迅速取代了传统的手工检测方法，大大提高了细菌鉴定的精度和效率。
二、影响因素全自动细菌鉴定技术的应用和发展，主要受以下因素的影响：1.仪器的精度和敏感度：全自动细菌鉴定技术的核心是高精度仪器，它能够对微量材料进行类似的检测，精度和敏感度决定着鉴定结果的准确性。
2.数据库的完整性和通用性：数据库是全自动细菌鉴定技术的灵魂，它包含了所有已知的细菌信息和识别特征。
完整性和通用性决定了鉴定结果的可靠性。
3.算法的复杂性和智能化：算法的复杂性和智能化是全自动细菌鉴定技术能否进行快速、准确、可靠鉴定的重要因素。
复杂的算法和智能的决策能力，有助于精准识别不同种类的细菌。
三、应用前景全自动细菌鉴定技术在实际应用中，将会带来重要的医疗和制药领域的发展机会，具有广阔的应用前景。
下面列举几个重要的应用方面：1.疾病诊断和治疗：全自动细菌鉴定技术可在短时间内准确鉴定出疾病的病原体，并分析其药物敏感性，为制定针对性治疗方案提供了重要的参考。
2.新药研发和制造：全自动细菌鉴定技术能够通过快速、准确鉴别药物对现有细菌是否有效，大大降低了新药研发和制造的时间和成本。
3.食品卫生检测：全自动细菌鉴定技术可以用来对食品和水源进行快速鉴定和检测，大大降低了食品安全问题引发的社会负面影响和食品安全管理的成本。
细菌自动鉴定及药敏系统的研究进展
细菌自动鉴定及药敏系统的研究进展（2）录入时间：2011-2-23 9:13:34 来源：中华检验医学网（四）Vitek n：在第一代Vitek的基础上发展而成。
有 4个架子，每个架子能容纳 15片试验卡。
司同时容纳 60片试验卡，每片试验卡包含 64个反应孔，采用快速荧光法测定细菌，2小时提供鉴定报告，鉴定敏感度高，分辨能力强。
可在鉴定的同时进行药敏试验，结果可分级报告（先完成的药敏结果先报告）。
该仪器具有高级专家系统，可根据药敏试验的表则结果提示有何种耐药机制的存在，对耐药机制推断准确性大于90%，MIC 平均药敏检测所需时间 9.74小时，比传统方法缩短1天检测时间，能对药敏试验的结果进行“解释性”判读。
该专家系统还能自动复核检验结果，如发现鉴定与药敏不符合的现象，即发岀提示，要求进行复查。
（五）SENSITITRE MICROBIOLOGY SYSTEMS AR® 先德荧光快速微生物鉴定 /药敏系统工作原理1.概述：SENSITITRE MICROBIOLOGYYSTEM$RIS由英国Accu Med公司于20世纪70年代开始研制生产。
1996 年12月美国惠好公司正式成为 SENSITITRE在中国的总代理。
分为全自动SENSITITRE Aris和半自动Auto-Reader两种组合。
可鉴定细菌180种。
数据库含500种细菌资料。
可对200种抗生素进行分析，在全世界有800家用户。
1996年12月进入中国。
国内 5家用户。
2.原理：（1）鉴定原理：通过检测荧光的增加间接地测定MIC值。
SENSITITRE系统采用传统生化反应，8进位数码鉴定及荧光分析项结合。
荧光分析是用荧光标记细菌表面特异酶的底物，经细菌水解底物产生荧光来判断结果。
不同的细菌作用于不同的底物，激发出不同强度的荧光，即可鉴定不同的细菌。
Sensititre 的 96 孔鉴定板中共有 32个生化反应，每 4项生化反应为一组，第1项生化反应阳性值为“ 8”，第二项反应阳性值为“ 4”，第三项反应阳性值为“ 2”，第四项反应阳性值为“ 1”，各项反应阴性记为“ 0”。
2023年超全的细菌药敏总结范本
2023年超全的细菌药敏总结范本细菌是导致许多感染性疾病的主要病原体。
随着细菌的不断进化和抗药性的出现，寻找有效的细菌药敏已成为医学界和科研人员的重要任务。
2023年，科学家们在细菌药敏研究领域取得了许多重要进展。
以下是2023年超全的细菌药敏总结：一、新药开发进展在2023年，研究人员开发了许多新型的抗菌药物来应对细菌的抗药性。
其中一项重要的突破是开发了具有广谱抗菌活性的新药。
这些药物能够同时针对多种不同的细菌菌株，包括那些已经对现有药物产生抗药性的细菌。
这一突破为临床治疗提供了更多的选择。
二、个体化治疗的新方法根据个体的遗传信息和药敏测试结果，科学家们开发了个体化治疗的新方法。
通过分析患者的基因组，研究人员可以预测患者对不同抗菌药物的敏感性，并选择最合适的药物进行治疗。
这种个体化的治疗方法可以提高治疗效果，减少药物的副作用，并减少抗菌药物的滥用。
三、快速药敏测试的发展2023年，科学家们研发出了一种新型的快速药敏测试方法。
传统的药敏测试方法需要数天的时间来确定细菌对不同药物的敏感性，这导致了治疗方案的延迟。
新的快速药敏测试方法可以在几小时内得出结果，使医生能够更快地选择最佳的治疗方案。
四、细菌抗药性机制的研究为了有效应对细菌的抗药性，研究人员对细菌抗药性机制进行了深入研究。
他们发现，细菌的抗药性主要来自于基因的突变或转移，以及细菌对抗菌物质的排泄能力。
这些研究为开发新的抗菌药物和治疗策略提供了重要的理论基础。
五、多学科合作的发展在2023年，细菌药敏研究呈现出多学科合作的趋势。
医生、药学家、分子生物学家和计算机科学家等不同背景的科研人员共同合作，以提高细菌药敏研究的效率和水平。
这种多学科合作的模式为寻找抗菌药物和治疗方案提供了更广阔的视野和更多的资源。
总结起来，2023年是细菌药敏研究的重要里程碑。
新药的开发、个体化治疗方法的应用、快速药敏测试的进步、细菌抗药性机制的研究以及多学科合作的发展等方面取得了重要的进展。
血培养阳性标本细菌鉴定和药敏试验的临床研究
血培养阳性标本细菌鉴定和药敏试验的临床研究目的：探讨血培养阳性标本细菌鉴定和药敏试验在临床应用中的可行性。
方法：选取2012年3月～2015年2月来我院接受菌血症治疗患者的血培养阳性标本培养液80例，均匀混于接种水中，并接种于鉴定板上依次进行生化微管法细菌鉴定和药敏试验，比较检测结果的符合率。
结果：80例样品中，生物微管法细菌鉴定结果准确率均高于84.61%，x2检验结果为P＜0.05，无统计学意义；药敏试验结果的符合率均高于95.45%，x2检验结果为P＜O.05，无统计学意义。
结论：血培养阳性标本细菌鉴定和药敏试验可为菌血症患者进行准确的早期诊断，适于在基层医院进行推广使用。
随着现代医疗技术的进步，越来越多自动化、智能化的医疗仪器已经应用于临床治疗的各个环节中，为多种疾病的临床治疗提供了极大的帮助[1]。
为了进一步验证生化微管法细菌鉴定和药敏试验法在临床诊断中的可行性及适用性，本人进行了血培养阳性标本细菌鉴定和药敏试验的相关临床研究，现将研究结果汇报如下。
1、资料与方法1.1 臨床资料选取2012年3月～2015年2月来我院接受菌血症治疗的患者80例，所有患者均伴有高热及全身感染等症状，取每一位患者的血培养液阳性标本，并使用革兰染色剂进行染色。
1.2 方法每一位患者的血培养阳性标本依次进行涂片、染色、镜检，根据每一个标本的镜检结果对细菌液的浓度进行调整。
阳性标本培养液先均匀的混于专用的接种水中，然后再接种于专用的鉴定板上进行相应的生化微管法细菌鉴定及药敏试验[2]。
1.3 统计学方法将所有患者的血培养阳性标本的检测结果进行汇总统计，并将统计结果使用SPSS13.0统计学软件进行x2检验，以P＜0.05作为具有统计学意义的基本检测标准。
2、结果2.1 生化微管法细菌鉴定比较结果80例标本中，其中葡萄球菌属18例，准确检查17例，错误检查1例；链球菌属13例，准确检查12例，错误检查1例；肠杆菌属36例，准确检查36例，错误检查O例；非发酵菌属13例，准确检查11例，错误检查2例。
拉曼光谱用于细菌快速药敏检测的研究进展
㊃综述㊃D O I:10.3969/j.i s s n.1672-9455.2024.04.025拉曼光谱用于细菌快速药敏检测的研究进展*杨文旭,张心宇,刘旭综述,刘禹ә审校哈尔滨医科大学附属第四医院检验科,黑龙江哈尔滨150000摘要:致病菌对人类健康构成重大威胁,抗菌药物的滥用导致了细菌耐药性的发展和传播㊂目前,临床微生物室常用的药敏试验,如纸片扩散法㊁浓度梯度纸条扩散法㊁肉汤稀释法和全自动药敏分析等都是基于细菌生长的方法,且操作流程繁琐,需要8~16h才能出结果㊂该文从快速药敏检测(R A S T)的研究出发,重点叙述了拉曼光谱在R A S T领域的研究进展㊂利用拉曼光谱对细菌进行基于代谢表型的药敏检测,检测时间明显缩短,优于常规基于细菌生长的药敏方法㊂但该方法缺少大规模的临床分离株验证,而且难以实现临床标本中细菌的免分离检测㊂该文对R A S T技术的临床验证㊁可重复性评估㊁临床适用性评估㊁准确性评估㊁拉曼光谱与电阻抗及微流控技术的创新结合及其在复杂临床标本中直接药敏检测等方面进行展望㊂关键词:拉曼光谱;快速药敏检测;细菌;光学;微流控中图法分类号:R446.5文献标志码:A文章编号:1672-9455(2024)04-0542-06A d v a n c e s i n R a m a n s p e c t r o s c o p y f o r r a p i d d r u g s u s c e p t i b i l i t y t e s t i n g*Y A N G W e n x u,Z HA N G X i n y u,L I U X u,L I U Y uәD e p a r t m e n t o f C l i n i c a l L a b o r a t o r y,t h e F o u r t h A f f i l i a t e d H o s p i t a l o f H a r b i nM e d i c a l U n i v e r s i t y,H a r b i n,H e i l o n g j i a n g150000,C h i n aA b s t r a c t:P a t h o g e n i c b a c t e r i a p o s e a m a j o r t h r e a t t o h u m a n h e a l t h,a n d t h e a b u s e o f a n t i b i o t i c s h a s l e d t o t h e d e v e l o p m e n t a n d s p r e a d o f b a c t e r i a l r e s i s t a n c e.A t p r e s e n t,t h e c o mm o n l y u s e d a n t i m i c r o b i a l s u s c e p t i b i l i t y t e s t i n g i n c l i n i c a l m i c r o b i o l o g y l a b o r a t o r y,s u c h a s d i s k d i f f u s i o n m e t h o d,c o n c e n t r a t i o n g r a d i e n t s t r i p d i f f u s i o n m e t h o d,b r o t h d i l u t i o n m e t h o d a n d a u t o m a t i c a n t i m i c r o b i a l s u s c e p t i b i l i t y a n a l y s i s a r e b a s e d o n b a c t e r i a l g r o w t h m e t h o d s,a n d t h e o p e r a t i o n p r o c e s s i s c u m b e r s o m e,w h i c h t a k e s8-16h o u r s t o g e t t h e r e s u l t s.T h i s r e v i e w f o c u s e s o n t h e r e s e a r c h p r o g r e s s o f R a m a n s p e c t r o s c o p y i n t h e f i e l d o f r a p i d a n t i m i c r o b i a l s u s c e p t i b i l i t y t e s t i n g(R A S T).T h e d e t e c t i o n t i m e o f m e t a b o l i c p h e n o t y p e-b a s e d a n t i m i c r o b i a l s u s c e p t i b i l i t y t e s t i n g b y R a-m a n s p e c t r o s c o p y i s s i g n i f i c a n t l y s h o r t e r t h a n t h a t o f t h e c o n v e n t i o n a l g r o w t h-b a s e d a n t i m i c r o b i a l s u s c e p t i b i l i-t y t e s t i n g.H o w e v e r,t h i s m e t h o d l a c k s l a r g e-s c a l e v a l i d a t i o n o f c l i n i c a l i s o l a t e s,a n d i t i s d i f f i c u l t t o a c h i e v e t h e i s o l a t i o n f r e e d e t e c t i o n o f b a c t e r i a i n c l i n i c a l s a m p l e s.I n t h i s p a p e r,t h e c l i n i c a l v a l i d a t i o n,r e p e a t a b i l i t y e v a l u a-t i o n,c l i n i c a l a p p l i c a b i l i t y e v a l u a t i o n,a c c u r a c y e v a l u a t i o n,i n n o v a t i v e c o m b i n a t i o n o f R a m a n s p e c t r o s c o p y w i t h e l e c t r i c a l i m p e d a n c e a n d m i c r o f l u i d i c c o n t r o l t e c h n o l o g y,a s w e l l a s i t s d i r e c t a n t i m i c r o b i a l d e t e c t i o n i n c o m-p l e x c l i n i c a l s a m p l e s a r e p r o s p e c t e d.K e y w o r d s:R a m a n s p e c t r o s c o p y;r a p i d a n t i m i c r o b i a l s u s c e p t i b i l i t y t e s t i n g; b a c t e r i a;p h o t o l o g y; m i c r o f l u i d i c c o n t r o l细菌感染每年导致全球800多万人死亡,占所有报告的与感染有关的死亡人数的50%以上[1]㊂在得到准确的药敏结果前,30%~50%的细菌感染患者接受的一线抗菌药物治疗无效,而且每延迟1h给予正确的抗菌药物治疗,患者的存活率就会下降10%[2-4]㊂为了缩短药敏检测时间,各种快速药敏检测(R A S T)方法被开发出来,如基于光学㊁电阻抗㊁微流控㊁质谱及拉曼光谱等原理的技术,这些技术主要是基于细菌生长或代谢表型的药敏检测㊂但由于不同细菌繁殖速度存在差异,基于细菌生长的技术可能受限,在抗菌药物作用下,细菌代谢表型的变化会更快㊂以细菌代谢表型检测为目的的基于拉曼光谱的药敏检测技术已被证明是有前途的R A S T替代方案[5-7]㊂本文分析细菌耐药性的流行病学现状和R A S T发展现状,进一步讨论基于细菌代谢表型检测的拉曼光谱在R A S T方面的研究进展,为R A S T的研究提供新㊃245㊃检验医学与临床2024年2月第21卷第4期 L a b M e d C l i n,F e b r u a r y2024,V o l.21,N o.4*基金项目:国家自然科学基金项目(82272389)㊂ә通信作者,E-m a i l:r a i n f a l l1982@163.c o m㊂思路㊂1 R A S T发展现状1.1基于光学原理的R A S T方法 Z H A N G等[8]通过大体积溶液散射成像(L V S I)系统直接对临床尿液标本成像,并使用单细胞分裂跟踪方法分析尿液病原菌图像,在60m i n内就得到了药敏结果,与金标准药敏结果完全一致㊂C A N S I Z O G L U等[9]开发了一种快速超灵敏探测器(R U S D)药敏检测平台,可以检测到极低细胞密度的细菌,在2~4h内可测得常用抗菌药物对金黄色葡萄球菌㊁铜绿假单胞菌和大肠埃希菌的最低抑制浓度(M I C)㊂1.2基于电阻抗原理的R A S T方法H A N N A H 等[10]用琼脂糖基水凝胶沉积物修饰丝网印刷电极,将敏感和耐药的金黄色葡萄球菌菌株置于含有抗菌药物的电极上,利用电化学阻抗谱(E I S)和差分脉冲伏安法(D P V)监测细菌生长并建立生长曲线,在45m i n 内即可区分敏感菌和耐药菌㊂P I T R U Z Z E L L O等[11]基于电阻抗可直接检测活细菌代谢的原理,研究抗菌药物处理下单个细菌的电反应,可在30~60m i n内测得药敏结果㊂1.3基于微流控技术的R A S T方法 L I等[12]开发了一种在单细胞水平进行快速病原体分类和药敏试验的适应性微流控系统,通过结合可调微流体阀和实时光学检测,细菌被捕获并根据其物理特征进行分类,在单细胞水平监测它们在抗菌药物作用下的生长,最短30m i n就可以确定细菌的耐药性㊂K A N-D A V A L L I等[13]也提出了一种在微流控芯片中基于单细胞水平的药敏检测方法,该研究使用4种抗菌药物和7种细菌的混合标本进行检测,可在2h内确定混合标本中各种细菌的药敏谱㊂1.4其他R A S T方法 Z H A N G等[14]通过核苷酸胶体染料(S Y B R G r e e nⅠ)和碘化丙啶(P I)染色,在30~60m i n内检测到100株肺炎克雷伯菌临床分离菌株对4种不同抗菌药物的耐药性㊂KÁL L A I等[15]提出了一种基于流式细胞术的R A S T方法,在培养4 h后就能观察到细菌的生长,药敏结果的准确率在87%以上㊂L I等[16]采用基质辅助激光解吸/电离时间飞行质谱法(MA L D I-T O F M S)检测了大肠埃希菌在有无黏菌素条件下的生长状况,大肠埃希菌与抗菌药物孵育2h后,根据敏感株和耐药株之间的相对生长值测定了黏菌素的M I C㊂Y A N G等[17]以肺炎克雷伯菌和环丙沙星为细菌-抗生素模型,采用R N A测序技术确定了细菌暴露于抗菌药物后的R N A标志物用于药敏检测,肺炎克雷伯菌暴露于环丙沙星10m i n 就可检测到R N A标志物的变化,然后通过实时定量P C R在11株肺炎克雷伯菌分离株中进行验证,准确度良好㊂2拉曼光谱的基本原理及优势拉曼光谱基于非弹性散射原理,是一种非侵入性光谱技术,可用于分子表征和成像,具有高空间分辨率㊂在生物学中,它特别适用于生物分子的鉴定和细胞的光谱特征分析[18]㊂传统的拉曼光谱信号强度低㊁抗干扰能力弱,检测时需要较长的积分时间[19-20],限制了其在R A S T中的应用㊂表面增强拉曼光谱(S E R S)相比于自发拉曼光谱,有高灵敏度的优点[21],其基于离域电子集体相干振荡导致的激光与电磁场耦合,在金属纳米结构之间的间隙连接处或纳米间隙处通过局部表面等离子体共振产生 热点 ,从而产生强大的局部电磁场聚焦增强[22],可以将吸附在金或银纳米粒子上分子的拉曼信号增强1010~1014倍[23]㊂共聚焦拉曼光谱(C R S)能有效消除焦平面外的信号干扰,其空间分辨率㊁信噪比㊁精度等性能均高于普通拉曼光谱,它与显微技术联用,结合可移动的扫描平台,可在三维空间中精确定位样品和成像[24]㊂受激拉曼光谱(S R S)是一种无损的㊁无标记的振动光谱学方法,通过相干激发分子键振动并保留光谱指纹,克服了传统的自发拉曼散射固有缺点,可实现高速㊁高化学特异检测[25-26]㊂此外,S R S成像比传统自发拉曼成像速度快1000倍以上,且不受样品自发荧光干扰[27]㊂3拉曼光谱技术在R A S T领域中的应用3.1基于单细菌分子表型的R A S T 基于单细菌分子表型的R A S T可以省去细菌增殖所需时间㊂目前,基于单细胞水平的快速分子表型的药敏检测,主要依赖于活细菌对重水(D2O)的代谢摄入,生成细菌内部的生物分子,比如脂质和蛋白质等,通过检测C-D峰的强度可以实现抗菌药物M I C的快速检测㊂C-D峰位于拉曼光谱的2040~2300c m-1波段,该波段通常在未进行D2O标记的细菌中无可检测到的拉曼峰,具有高特异性㊂见图1[28]㊂此外,在含有D2O的培养基中生长的细菌C-D峰的强度变化与活细菌的代谢活性呈正相关[5,7,29-31]㊂任何活细菌的代谢都需要水,因此,在含有D2O 的培养基中生长的活细菌都会生成代谢表征的C-D 峰,这决定了C-D峰可作为分辨单细菌细胞代谢活动的通用生物标志物㊂在基于培养的药敏检测方法中,细菌增殖一代的时间比开始出现代谢表征的时间长,而且不同种细菌的生长时间差异也会使药敏时间难以缩短,因此,基于C-D峰的单细胞拉曼药敏检测方法在R A S T领域中有着极好的应用前景㊂在目前的研究中,运用单细胞拉曼技术进行M I C 的快速测定大致分为3步:(1)细菌在含有不同浓度梯度抗菌药物的培养基中先孵育1~2h;(2)按体积㊃345㊃检验医学与临床2024年2月第21卷第4期 L a b M e d C l i n,F e b r u a r y2024,V o l.21,N o.4比向培养基中加入D 2O (目前报道30%~100%D 2O浓度),同时保证培养基浓度和药物浓度与初始一致,继续孵育30m i n 左右;(3)根据耐药组和敏感组的相对C -D 比,即C -D /(C -H+C -D )来设定c u t o f f 值以测定M I C㊂图1 铜绿假单胞菌在正常和含D 2O 的培养基中培养3h 后的S R S 光谱3.1.1 运用C R S 技术进行R A S T T A O 等[32]证明了基于D 2O 活菌代谢标记的单细胞拉曼光谱可以检测细菌对抗菌药物的反应,2040~2300c m -1波段的C -D 拉曼带可作为单细菌代谢活性的通用生物标志物㊂Y A N G 等[5]开发了适用于临床尿液标本直接药敏检测的单细胞拉曼光谱技术,基于活菌的D 2O代谢掺入,通过相对C -D 比设置S /R 截止值用于药敏结果判读,达到了从接收尿液标本到结果读取总检测时间缩短至2.5h ,且准确度高的效果㊂Y U A N 等[33]将31株伊丽莎白菌分别与8种不同浓度抗菌药物和40%D 2O 共孵育,4h 即可测定抗菌药物的M I C ,除头孢吡肟外,其他7种抗菌药物的单细胞拉曼药敏结果与金标准药敏结果一致率为94%㊂在该研究中,头孢吡肟所测药敏结果与金标准结果不一致可能是因为不生长但代谢活跃的细菌存在,这种特性可能会影响药敏结果的准确性,也会成为细菌感染治疗后复发的根源[33]㊂因此,临床可以通过单细胞拉曼药敏检测技术来评估抗菌药物疗效,更好地指导临床给药㊂3.1.2 运用S R S 技术进行R A S T 快速准确的药敏试验对于多药耐药菌的安全㊁有效和环境友好型治疗至关重要[34]㊂Z H A N G 等[20]利用飞秒受激拉曼散射成像对经过70%D 2O 培养基和不同浓度抗菌药物孵育后的细菌进行单细胞成像,在不到2.5h 测定了14种抗菌药物对临床常见8种病原菌的M I C 值,与金标准药敏结果的符合率为94.6%㊂此外,该研究制备了模拟尿液和血液标本,通过直接过滤的方法分离细菌进行药敏检测,准确度良好㊂此外,Z H A N G 等[28]在单细胞水平上,通过S R S 成像监测抗菌药物作用下的D 2O 活菌代谢掺入,在2.5h 内测得抗菌药物的单细胞代谢失活浓度㊂该方法还适用于尿液或血液等复杂生物标本的直接R A S T ㊂3.2 基于多细菌分子表型的R A S T 虽然基于单细菌分子表型的R A S T 方法具有一定优势,但由于细菌是活体,同种菌的不同个体状态在不同时间或空间可能不同,这会影响药敏结果的准确性㊂因此,有研究者开发了基于多细胞水平分子表型检测的R A S T 方法,这种方法主要依赖于S E R S 技术㊂C H A N G 等[35]开发了集成膜过滤和S E R S 活性衬底的微流控系统,微通道内腔室的膜可过滤和浓集细菌,注射泵将培养基㊁抗菌药物和洗涤液等注入其中,在过滤室中培养细菌,细菌释放的代谢物被输送到附着S E R S 衬底的微通道中进行检测,药敏检测时间明显缩短㊂F U 等[36]筛得一种带负电荷的适配子,与细菌特异性结合,利用粗糙金属纳米颗粒的信号放大作用,测定了大肠埃希菌O 157ʒH 7和金黄色葡萄球菌在不同浓度抗菌药物作用下的拉曼光谱,首次发现735c m -1可作为标志峰位置,基于此峰强度的变化,在1h 内可测得药物的M I C ㊂H I L T O N 等[37]将纳米银颗粒印在S E R S 纸传感器上,利用便携式拉曼光谱仪对不同β-内酰胺类抗菌药物耐药的大肠埃希菌进行检测,在2.5h 内即可完成大肠埃希菌的耐药分析㊂新型R A S T 技术汇总见表1㊂表1 新型R A S T 技术汇总方法简述标本类型时间细菌特点是否为单细胞生长/代谢参考文献光学大体积溶液散射成像和单细胞分裂跟踪法尿液1h大肠埃希菌准确度高,灵敏度高;缺乏临床标本验证是生长[8]光学R U S D纯培养菌落2~4h金黄色葡萄球菌㊁铜绿假单胞菌和大肠埃希菌可测定M I C ,灵敏度高,成本低;缺乏临床标本验证否生长[9]E I S +D P V含抗菌药物的琼脂糖基水凝胶沉积物修饰丝网印刷电极纯培养菌落45m i n 至2.5h金黄色葡萄球菌㊁大肠埃希菌灵敏度高,成本低㊁重复性好;不适于生长慢的细菌否生长[10]E I S +微流控电阻抗可直接检测活细菌代谢纯培养菌落30~60m i n大肠埃希菌可测定M I C ,灵敏度高;缺乏临床标本验证是代谢[11]㊃445㊃检验医学与临床2024年2月第21卷第4期 L a b M e d C l i n ,F e b r u a r y 2024,V o l .21,N o .4续表1新型R A S T技术汇总方法简述标本类型时间细菌特点是否为单细胞生长/代谢参考文献微流控在微流控芯片中基于单细胞水平的药敏检测尿液㊁全血㊁不同细菌混合样品2h大肠埃希菌㊁肺炎克雷伯菌㊁铜绿假单胞菌㊁奇异变形杆菌㊁鲍曼不动杆菌㊁金黄色葡萄球菌等设备简单,混合细菌标本直接检测;对初始菌量有要求是生长[12][13]化学染色S Y B R G r e e nⅠ和P I的活细菌染色纯培养菌落30~60m i n肺炎克雷伯菌操作简单,准确度高;缺乏临床标本验证否生长[14]流式细胞术监测抗菌药物作用下细菌的生长纯培养菌落4h大肠埃希菌㊁肺炎克雷伯菌㊁铜绿假单胞菌㊁金黄色葡萄球菌等可测定M I C,成本低,重复性好,准确度高;缺乏临床标本验证否生长[15]质谱监测细菌在有/无黏菌素条件下的生长纯培养菌落2h大肠埃希菌可测定M I C,操作简单,灵敏度高;成本高,仅研究了多黏菌素耐药基因(m c r)阳性或m c r阴性大肠埃希菌否生长[16]R N A测序确定细菌暴露于环丙沙星后的R N A标志物纯培养菌落10m i n肺炎克雷伯菌可测定M I C,准确度高;流程复杂,需要高接种量否代谢[17]C R S/C R S显微技术细菌代谢掺入D2O,检测C-D带强度纯培养菌落㊁尿液0.5~4.0h常见口腔感染细菌㊁尿路感染细菌和血流感染细菌可测定M I C,可区分活菌和死菌,准确度高㊁灵敏度高㊁可以成像;缺乏临床标本验证是代谢[5][31][32]S R S/S R S显微技术细菌代谢掺入D2O,检测C-D带强度纯培养菌落㊁尿液㊁全血2.5~3.0h常见尿路感染细菌和血流感染细菌可测定M I C,灵敏度高㊁可飞秒成像;缺乏临床标本验证是代谢[34][35]S E R S技术检测特定拉曼峰强度变化纯培养菌落1.0~2.5h大肠埃希菌㊁金黄色葡萄球菌㊁伤寒沙门菌可测定M I C,成本低,灵敏度高,护理点检测;缺乏临床标本验证否代谢[36][37][38]4结论与展望基于细菌生长和代谢表型的R A S T技术相较于传统药敏方法的检测时间明显缩短,其中,运用拉曼光谱技术在细菌代谢表型水平进行R A S T具有很好的应用前景㊂虽然微流控㊁电阻抗和S Y B R G r e e nⅠ活菌染色等技术平均药敏检测时间为1h左右,但适用的细菌和抗菌药物都比较局限,也无法识别菌群中的异耐药菌,而且检测结果的准确性缺乏大标本量的验证㊂此外,这些基于生长的药敏检测对细菌的初始接种量有要求,而且细菌在刚接种到培养基中会经历1~3h的迟缓期,很难检测到数量上的微弱变化,还易受到细菌本身状态和环境等因素的影响㊂基于R N A测序的药敏检测目前只对环丙沙星作用于大肠埃希菌有研究,虽然其属于细菌代谢表型检测的R A S T,但操作复杂,初始菌量要求高,难以满足临床要求㊂基于单细菌和多细菌代谢表型的R A S T 技术准确度高㊁灵敏度高,但仍有许多不足之处:(1)缺乏大规模临床分离株和抗菌药物的验证;(2)缺乏标准化的检测流程㊁不能做质控和室间比对等;(3)细菌个体的异质性会影响单细菌药敏检测的准确性;(4)对于S E R S的药敏检测,增强基底合成复杂,容易受到残留培养基和其他成分的干扰,可重复性低等;(5)适用的标本类型局限于纯培养菌落㊁尿液和全血标本,而对于复杂的痰液㊁粪便等标本的直接药敏检测鲜有研究㊂未来还需要对基于细菌生长和代谢表型检测的R A S T技术进行大量的临床分离株和抗菌药物验证,并对检测结果的准确性进行评估;其次是标本处理流程的标准化,做好质控和室间比对,提高检测的可重复性和临床适用性;进行拉曼光谱药敏检测时要引入合适的内标,消除复杂因素对检测的影响,也可以将拉曼光谱与电阻抗㊁微流控㊁化学染色等技术相结合,开发更快㊁更准确㊁重复性更好的R A S T方法,实现在复杂标本中直接进行细菌快速鉴定及药敏检测㊂㊃545㊃检验医学与临床2024年2月第21卷第4期 L a b M e d C l i n,F e b r u a r y2024,V o l.21,N o.4参考文献[1]F U R S T A L,F R A N C I S M B.I m p e d a n c e-B a s e d d e t e c t i o n o f b a c t e r i a[J].C h e m R e v,2019,119(1):700-726.[2]L I Y Y,Y A N G X,Z HA O W A.E m e r g i n g m i c r o t e c h n o l o-g i e s a n d a u t o m a t e d s y s t e m s f o r r a p i d b a c t e r i a l i d e n t i f i c a-t i o n a n d a n t i b i o t i c s u s c e p t i b i l i t y t e s t i n g[J].S L A S T e c h n-o l,2017,22(6):585-608.[3]K UMA R A,R O B E R T S D,WO O D K E,e t a l.D u r a t i o n o fh y p o t e n s i o n b e f o r e i n i t i a t i o n o f e f f e c t i v e a n t i m i c r o b i a l t h e r a p y i s t h e c r i t i c a l d e t e r m i n a n t o f s u r v i v a l i n h u m a n s e p t i c s h o c k[J].C r i t 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分析全自动微生物鉴定药敏分析仪的临床应用价值
分析全自动微生物鉴定药敏分析仪的临床应用价值背景介绍随着医学技术的不断进步，医疗设备也在不断更新换代。
微生物鉴定药敏分析仪是一种可以对微生物进行快速鉴定和药物敏感性测试的自动化设备，并且具有较高的准确性和可靠性，被广泛应用于临床检验实验室。
全自动微生物鉴定药敏分析仪的基本原理全自动微生物鉴定药敏分析仪是一种全自动的设备，并且使用了多种现代生物技术手段进行微生物检测和药敏分析。
其基本工作流程如下：1.取样使用专门的试管拔取患者样本，将样本放入仪器中进行处理。
2.预处理在预处理环节，样品将被进行破碎及手性化学物质去除。
这是非常重要的操作，因为这可以有效地提高检测的准确性。
3.涂片将处理过的样品涂在标准涂片上，通过自动涂片仪操作，可以将样品涂在涂片上，这样可以保证样品的均匀性。
4.暴露使用UV灯照射，使细菌营养代谢分子产生荧光，然后使用高速扫描电子显微镜将菌落扫描得到图像。
5.鉴定在此环节中，根据扫描所得的图像，系统会识别出样品中是否存在微生物并进行初步分类及鉴定。
6.药敏测试在进行药敏测试时，将知名品牌的抗生素制剂通过划痕法在石蜡板上加以分布，将石蜡板改良以提高其药物溶解度，然后在涂片上加上石蜡板以进行药敏测试。
根据测试结果，系统会确定药物的有效性，并生成相应的检测报告。
全自动微生物鉴定药敏分析仪的优势1.准确性高全自动微生物鉴定药敏分析仪采用现代生物技术手段进行微生物检测和药敏分析，并在操作过程中减少了人为因素的影响，因此可以获得更准确的检测结果。
2.全自动操作全自动微生物鉴定药敏分析仪是一种全自动设备，可以减少人力投入，提高工作效率。
3.便捷快速使用全自动微生物鉴定药敏分析仪，可以非常快速地完成诊断和药物敏感性测试，并且操作过程非常简便。
全自动微生物鉴定药敏分析仪在临床应用中的价值1.确诊疾病使用全自动微生物鉴定药敏分析仪，可以快速、准确地诊断患者是否患有微生物感染，及其感染的类型和分布情况。
2.确定药物敏感性在治疗微生物感染时，选用正确的药物十分关键。
法国梅里埃微生物鉴定及药敏分析
法国梅里埃微生物鉴定及药敏分析法国梅里埃（bioMérieux）是一家全球领先的微生物鉴定和药敏分析解决方案供应商。
该公司成立于1963年，总部位于法国里昂，并在全球范围内拥有多个分支机构。
梅里埃公司致力于为医疗机构、实验室和生物制药行业提供先进的微生物鉴定和药敏分析。
微生物鉴定是确定和分类微生物的过程，这对于研究和诊断感染病例非常重要。
梅里埃公司提供了一系列鉴定试剂和设备，以帮助实验室快速、准确地确定微生物的种类。
例如，他们的VITEK®系统是一种自动化的鉴定系统，可以通过分析微生物的生化特征来快速鉴定细菌和真菌。
此外，他们还提供MALDI-TOF质谱仪，这是一种基于质谱技术的高通量鉴定系统，可以在几分钟内鉴定微生物。
药敏分析是评估微生物对不同抗生素的敏感性的过程。
通过确定微生物对抗生素的反应，医生可以选择最适合的治疗方案。
梅里埃公司开发了一系列药敏分析产品，以帮助实验室进行快速、准确的药敏测试。
例如，他们的VITEK®系统可用于自动化药敏测试，从而简化了实验室的工作流程，提高了测试效率。
此外，他们还提供梅里埃漂移测定仪，这是一种测量细菌生长速度来评估抗生素敏感性的新技术。
梅里埃公司还提供一系列支持和培训服务，以确保实验室正确使用和解释微生物鉴定和药敏分析结果。
他们的专业团队可以向用户提供实时技术支持，并提供培训课程，帮助用户掌握正确的操作和结果解释技巧。
总之，法国梅里埃公司是一家在微生物鉴定和药敏分析领域具有全球领先地位的供应商。
他们的先进技术和产品帮助实验室快速、准确地鉴定和评估微生物，为医疗机构、实验室和生物制药行业提供了重要的支持。
同时，他们的支持和培训服务确保用户正确使用和解释微生物鉴定和药敏分析结果。
通过与梅里埃公司合作，用户可以获得最新的技术和专业支持，为疾病诊断和治疗提供更准确、可靠的解决方案。
药敏试验发展历程
药敏试验发展历程药敏试验是一种用于测试细菌对抗生素的敏感性的实验方法。
它可以帮助医生选择最合适的抗生素治疗细菌感染，从而提高治疗效果。
下面将介绍药敏试验的发展历程。
药敏试验的历史可以追溯到20世纪初，当时发现抗生素的疗效很大程度上取决于细菌的敏感性。
早期的药敏试验主要依赖观察细菌在含有抗生素的培养基上的生长情况，来评估细菌对抗生素的敏感性。
这种方法虽然简单易行，但结果不够准确，容易受到其他因素的干扰。
随着科技的进步，20世纪50年代出现了第一个自动化的药敏试验系统。
这个系统使用离心分离技术来评估细菌对抗生素的敏感性。
然而，这种方法仍然需要长时间的培养过程，并且在测试大量细菌时效率低下。
在70年代，出现了巨大的突破，即药敏试验的微量化。
传统的药敏试验需要大量的培养基和试剂，而微量化试验只需要少量的试剂和培养基，大大降低了试验的成本。
此外，微量化试验还可以快速高效地测试多种抗生素的敏感性，提高了药敏试验的准确性和可行性。
随着分子生物学和生物技术的发展，近年来，药敏试验也迎来了新的发展机遇。
分子生物学技术为药敏试验提供了更精确的检测方法。
例如，聚合酶链反应（PCR）可以快速检测细菌对抗生素的耐药基因，从而判断细菌对抗生素的敏感性。
此外，细菌基因组测序技术的发展，也使得可以更全面地了解细菌的敏感性和耐药性。
在未来，随着人工智能和大数据技术的发展，药敏试验还将迎来更多的创新。
人工智能可以通过学习大量的药物和细菌数据，提供更准确的药敏试验结果和个体化的治疗方案。
此外，大数据技术可以分析大量的患者数据，并与药敏试验结果相结合，为临床医生提供更准确的治疗建议。
总的来说，药敏试验是细菌感染治疗中至关重要的一环。
它的发展经历了从观察细菌生长到自动化测试再到微量化和分子生物学检测的演变过程。
未来，随着人工智能和大数据技术的应用，药敏试验将迎来更多的创新，以提供更准确、个体化的治疗建议，帮助医生更好地治疗细菌感染。
国产细菌鉴定药敏分析仪对临床常见细菌鉴定能力的研究
【 要】 目的 摘 评 价 国产 细 菌鉴 定 药 敏 分 析 仪 ＨＸ ２ 一 １对 临 床 常 见 细 菌 的 鉴 定 能 力 。方 法 对 临 床 上 ５ Ｏ例 常
见 菌 株 分 别 在 法 国梅 里 埃公 司 Ｖ ｔ ２全 自动 微 生物 分 析 仪 和 国产 ＨＸ ２ ｉ ｋ３ ｅ － １细 菌 鉴 定 药 敏 分 析仪 ， 操 作 规 程 进 行 按
ｒ ｔ ｏｉ ｉｅ ｅｗ ｉｈ ａ ｔ ｒｕ ｐ ｃｅ ｓ ９ ０ ， ｉｈ ｂ ｃ ｅ ｉ ｍ ｎｕ ａ ｅｏｆｃ ｎｃｄ ｎｃ ｔ ｂ ｃ ｅ ｉ ｍ ｓ ｅ ｉｓ ｗａ ６． ０ ｗ ｔ ａ ｔ ｒｕ ｇｅ ｓ ｗａｓ９ ９９ ９． ｂ ｗ ｏ ｋｉ ｓ ｏ ｉｒ ｒ ｙ ｔ ｎｄ ｆｍ ｃ ｏｏ
ｇ ｎｉｍ ｄｅ ｉｉａ ｉｎ ｉ ｔ ｕｍｅ ． ｈ ｒ ｏ ａ ｅ ｗ ａ ｃ ｅ ｔ ｄ ｉ ｌｎｉ． ｎｃｕ ｉ ｎ Ｈ Ｘ一 ｃ ｎ ｍ ｅ ｔｔ ｄｅ ｔｆｃ ｔｏ ａ ｓ ｉ ｎｔｆｃ ｔｏ ｎｓ ｒ ｎｔ Ｔ ｅ ｅ ｒ ｒ ｒ ｔ ｓａ ｃ ｐ ｅ ｎ ｃｉ ｃ Ｃｏ ｌ ｓｏ ２１ ａ ｅ ｈｅ ｉ ｎ ｉｉ ａ ｉｎ ｎｅ ｄｓｏｆｃｉ ｃ ｌｂ ｃ ｅ ｉ ｎ ｔ ｅ ｓ ａｌａ ｄ ｍ ｅ ｕｍ ｓ ｉａ． ｅ ｌ ａ ａ ｔ ｒａ ｉ ｈ ｍ ｌ ｎ ｄｉ ｎｉ ｈｏ ｐ ｔ １
１ ４ １ 细 菌 鉴 别 按 《 国检 验 技 术 操 作 规 程 》 求 接 种 标 ．． 全 要 本 ， 纯 培 养 的待 鉴 定 菌 株 ， 据 菌 落 、 体 形 态 、 兰 染 色 结 取 根 菌 革
果 、 化 酶 、 酶 等 试 验 选用 相应 的板 条 。 氧 触 ］
细菌鉴定系统的应用研究进展
[作者简介]吴会桃(1979-),女,硕士,主要从事分析微生物工作。
=综述>细菌鉴定系统的应用研究进展吴会桃1,蔡芷荷1,吴清平2,卢勉飞1(1.广东环凯微生物科技有限公司,广州510663;2.广东省微生物研究所,广州510070)[关键词]细菌鉴定;生化鉴定;鉴定系统[中图分类号]R378[文献标识码]A[文章编号]1004-8685(2010)09-2381-04细菌鉴定在食品安全、医疗卫生以及科学研究等领域都占有重要地位。
细菌鉴定系统是将传统的生化鉴定试剂微型化,制成干燥的微型鉴定试剂条/板,采用数理统计原理的编码鉴定方法,结合现代电子技术而形成的一种鉴定方法。
细菌鉴定系统采用的微型化能够减少鉴定试验的工作量、简化鉴定程序并可实现产品的商品化和标准化;采用数理统计原理是细菌鉴定里程上的一个重大进步,使鉴定的结果更加科学和可靠;而现代电子技术的应用则大大简化了鉴定过程,使鉴定过程逐步实现了自动化。
但细菌鉴定系统的鉴定结果也不是完全可靠,很多时候使用者对其鉴定结果应慎重对待。
本文对一些常见鉴定系统的原理和应用范围做了简单介绍,并对一些鉴定系统的鉴定效果及评价进行了简单综述。
总的来说,细菌鉴定系统与传统方法相比具有简便、快速、可靠的优点,是微生物鉴定及检验的有力工具,具有广阔的应用前景。
1鉴定系统的原理1.1鉴定系统的反应原理细菌鉴定系统的种类繁多,但这些鉴定系统其基本的反应原理主要有以下五种,具体见表1。
表1细菌鉴定系统的主要反应原理[1]系统反应需要生长分析阳性结果显示系统例子p H基础反应是碳源利用p H指示剂颜色变化;利用碳源产酸,利用氮源产碱APIV I TEKM icr oScan酶谱否微生物已有的酶当无色复合物被适当酶水解时,色源/荧光源释放引起颜色变化M icr oScan I D S (Remel)碳源利用是有机产物因转移电子至无色四唑氮标记碳源使染料变为紫色Biolog挥发的或非挥发的酸检测是细胞脂肪酸以检测代谢产物为基础的层析技术,与数据库中的资料相比较M I D I生长可见检测是不同底物微生物利用某一底物产生浊度酵母菌1.2鉴定系统的鉴定原理鉴定系统多采用数码鉴定原理进行细菌鉴定,数码鉴定方法的应用是细菌鉴定分析史上的一个重大进步。
细菌检验自动化技术的应用.
2．随着人们对细菌本质认识的加深 而不断演变，使用自动化鉴定仪的实验室 应经常与生产厂家联系 ，及时更新数据 库。实验室技术人员应了解细菌分类的最 新变化，便于在系统更新之前即可进行手 工修改。 3．通过自动化鉴定仪得出的结果， 必须与其它已获得的生物性状（如标本来 源、菌落特征及其它的生理生化特征）进 行核对，以避免错误的鉴定。
VITEK-2是生物-梅里埃公司开发的新一代微 生物分析仪，其工作原理与VITEK AMS没有大的差 别，但它的容量更大，自动化程度更高，并且使 用64孔的反应卡片，鉴定更准确可靠，可同时测 定20种抗生素的药敏试验。
2. MicroScan Walk/ Away系统
系统构成 由主机、真空加样器、孵育箱/读 取器、计算机、打印机等组成。
鉴定系统的工作原理因不同的仪器和系 统而异。不同的细菌对底物的反应不同是生 化反应鉴定细菌的基础，而试验结果的准确 度取决于鉴定系统配套培养基的制备方法、 培养物浓度、孵育条件和结果判定等。 大多鉴定系统采用细菌分解底物后反应 液中pH的变化，色原性或荧光原性底物的酶 解，测定挥发或不挥发酸，或识别是否生长 等方法来分析鉴定细菌。
微量生化反应系统
Micro-ID系统
硫 化 氢
吲 哚
鸟 氨 酸
赖 氨 酸
丙 二 酸 盐
尿 素
七 叶 甘
O N P G
阿 拉 伯 糖
侧 金 盏 花 醇
肌 醇
三 梨 醇
2
1
4
2
1
4
2
1
4
2 — +
1 +
4
2
1
—+—
—+ +
+——
细菌自动鉴定及药敏系统的研究进展 精品
细菌自动鉴定及药敏系统的研究进展一、细菌自动鉴定及药敏系统的发展史细菌的鉴定是细菌分类的实验过程，长期以来，临床微生物实验室一直沿用100多年前由Gram、Pasteur、Koch、Petri等创造的传统的微生物学鉴定方法。
这些传统的鉴定方法不仅过程烦琐，费时费力，且在方法学和结果的判定、解释等方面易发生主观片面而引起的错误，难以进行质量控制。
20世纪60年代以后，微生物学家和工程技术人员密切合作，对微生物的研究采用了物理的、化学的分析方法，发明了许多自动化仪器，并根据细菌不同的生物学性状和代谢产物的差异，逐步发展了微量快速培养基和微量生化反应系统，使原来缓慢、烦琐的手工操作变得快速、简单，并实现了自动化和机械化。
微生物鉴定自动化方法，包括(1)临床微生物鉴定系统；(2)气液色谙分析；鉴定厌氧菌和分枝杆菌多用于研究；(3)核酸杂交；多用于研究；(4)化学发光技术；可鉴定一些细菌少数分枝杆菌属和一些真菌。
80到90年代发展迅速，并广泛用于临床。
1985年第一台自动化细菌分析仪器Vitek-AMS进入中国并成功使用。
1999年底法国梅里埃公司推出VITEK2系统，从接种物稀释、密度计比较及卡冲填和封卡等步骤均实现了全自动化。
目前已有多种微生物自动鉴定及药敏测试系统问世，如VITEK-AutoMicrobicSystem(AMS)、PHOENIXTM、MicroScan、Sensititre、ABBott(MS-2 System)、AUTOBACIDXSys-tern等。
这地自动化系统具有先进的微机系统，广泛的鉴定功能，适用于临床微生物实验室、卫生防疫和商检系统，主要功能包括细菌鉴定、细菌药物敏感性试验及最低抑菌浓度(MIC)的测定等。
其准确性和可靠性均已大大提高。
二、细菌自动鉴定及药敏系统原理及性能比较1.原理：临床微生物鉴定系统使细菌鉴定过程规范化和程序化，将细菌对底物的生化类型与已建立数据库类型相比较。
全自动细菌鉴定药敏系统在临床微生物教学中的应用
全自动细菌鉴定药敏系统在临床微生物教学中的应用作者：吴勇向小红周小媛来源：《人人健康》2019年第10期【摘要】目的：探讨全自动细菌鉴定药敏系统在临床微生物教学中的应用效果。
方法：选定2017年9月到2019年4月到本院实习的60例见习学生，完全随机法分为观察组（全自动细菌鉴定药敏系统+传统微生物教学）30例与对照组（传统微生物教学）30例，比较2组见习学生的理论、操作考核评分及教学满意度。
结果：教学结束，观察组理论成绩评分（90.63±5.14）分、操作成绩（88.34±4.87）分、教学满意率（93.33%）均高于对照组且差别有显著意义（P<0.05）。
结论：全自动细菌鉴定药敏系统可有效提高见习学生的教学质量及满意度，值得推广使用。
【关键词】教学;微生物;全自动细菌鉴定药敏系统【中图分类号】R446.5 【文献标识码】A 【文章编号】1004-597X（2019）19-0284-02医学院中较为重要的专业课之一即为临床微生物学，该课程具有内容抽象、知识点多、实践性强等特点[1]，常导致见习学生混淆病原微生物的生长特性、生化反应、镜下形态特征等，影响学生的学习积极性以及考核成绩[2]。
为改善上述问题，目前常采用全自动细菌鉴定药敏系统对见习学生进行辅助教学，可在激发学生学习兴趣的同时提升其教学效果。
本文为系统分析、研究全自动细菌鉴定药敏系统在见习学生学习中的应用价值，作如下阐述。
1.1一般资料选定2017.09.08-2019.04.21期间到本院实习的见习学生，总计入组60例，完全随机法分为两组，采用全自动细菌鉴定药敏系统联合传统微生物教学方法的一组（30例）作为观察组，应用传统微生物教学方法的一组（30例）作为对照组。
观察组中，女17例，男13例;年龄19-24岁，平均为（22.61±2.07）岁;对照组中，女18例，男12例;年龄19-25岁，平均为（22.37±2.13）岁。
药敏试验发展历程
药敏试验发展历程
药敏试验是评价化学药物对细菌或其他微生物的抗生素敏感性的一种常用方法。
它的发展历程可以追溯到20世纪40年代，在此之前，医生们对于某些病情的治疗选择只能依靠临床经验。
药敏试验的发展为医生正确选择抗生素治疗提供了依据。
起初，药敏试验的方法比较简单，常用的是观察与无菌试验纸或棉签上放置的药物盘的接触区域是否有菌落生长。
这种方法简单粗糙，结果也不够准确。
随着科技的进步，人们意识到了需要更加精确和标准化的药敏试验方法。
在20世纪50年代，药敏试验开始采用“量价试验法”。
这种方法通过测试药物对细菌的最低抑菌浓度来评价细
菌对药物的敏感性。
它能够提供更加客观和准确的结果，但是需要更多的实验操作和设备。
在20世纪70年代，药敏试验进一步发展了新的技术。
使用机器读取药物对细菌的作用，称为“自动化药敏试验”。
这种方法能够大大提高测试的速度和效率，减少了实验操作的人力和时间成本。
近年来，随着基因工程和生物技术的快速发展，药敏试验也出现了新的技术革新。
例如，基于PCR和DNA测序的分子药敏试验，可以更加准确地检测细菌对药物的敏感性和耐药性。
总体来说，药敏试验的发展经历了几十年的演变，从最简单的观察方法到量价试验法，再到自动化药敏试验和分子药敏试验。
这些不断的技术创新为医生们提供了更加客观准确的药物敏感性评价方法，帮助他们选择合适的抗生素治疗。
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细菌自动鉴定及药敏系统的研究进展(2)录入时间:2011-2-23 9:13:34 来源：中华检验医学网（四）Vitek Ⅱ：在第一代Vitek的基础上发展而成。
有4个架子，每个架子能容纳15片试验卡。
司同时容纳60片试验卡，每片试验卡包含64个反应孔，采用快速荧光法测定细菌，2小时提供鉴定报告，鉴定敏感度高，分辨能力强。
可在鉴定的同时进行药敏试验，结果可分级报告(先完成的药敏结果先报告)。
该仪器具有高级专家系统，可根据药敏试验的表则结果提示有何种耐药机制的存在，对耐药机制推断准确性大于90％，MIC 平均药敏检测所需时间9.74小时，比传统方法缩短1天检测时间，能对药敏试验的结果进行“解释性”判读。
该专家系统还能自动复核检验结果，如发现鉴定与药敏不符合的现象，即发出提示，要求进行复查。
（五）SENSITITRE MICROBIOLOGY SYSTEMS ARIS英国先德荧光快速微生物鉴定/药敏系统工作原理1.概述：SENSITITRE MICROBIOLOGY SYSTEMS ARIS由英国Accu Med公司于20世纪70年代开始研制生产。
1996年12月美国惠好公司正式成为SENSITITRE在中国的总代理。
分为全自动SENSITITRE Aris和半自动Auto-Reader两种组合。
可鉴定细菌180种。
数据库含500种细菌资料。
可对200种抗生素进行分析，在全世界有800家用户。
1996年12月进入中国。
国内5家用户。
2．原理：(1)鉴定原理：通过检测荧光的增加间接地测定MIC值。
SENSITITRE系统采用传统生化反应，8进位数码鉴定及荧光分析项结合。
荧光分析是用荧光标记细菌表面特异酶的底物，经细菌水解底物产生荧光来判断结果。
不同的细菌作用于不同的底物，激发出不同强度的荧光，即可鉴定不同的细菌。
Sensititre的96孔鉴定板中共有32个生化反应，每4项生化反应为一组，第1项生化反应阳性值为“8”，第二项反应阳性值为“4”，第三项反应阳性值为“2”，第四项反应阳性值为“1”，各项反应阴性记为“0”。
将每组4项反应的阴、阳性结果转换成数值并相加，如2、3项生化反应为阳什，其组值为“6”。
若组值超过9，则以字母代表，如第1、3项生化反应为阳性，组值应为“10”，此时就以“A”表示，若组值为11，则以“B”表示，以此类推。
将各组反应的组值相加，32项生化反应可得到一组8位数的生物数码。
(2)MIC测定原理：采用NCCLS推荐改良的微量肉汤稀释2-8点，在每一反应孔内参与荧光底物，若细菌生长，表面特异酶系统水解荧光底物，激发荧光，反之无荧光。
以最低药物浓度仍无荧光产生的浓度为最低抑菌浓度(MIC)。
首创荧光快速分析技术，鉴定／药敏分析时间明显缩短。
结果更准确。
卓越的药敏分析技术，可进行全值药敏和阈值药敏分析。
全值8点药敏分析法。
采用最先进的荧光8点药敏分析法，他是将每种抗生素稀释成8种不同浓度进行药敏分析，从而达到更准确的药敏结果，实现真正的MIC，对药剂量的控制更准确，大大提高临床检测及治疗水平。
3．结构组成（1）硬件模块式组件：手动、自动、全自动可自由组合，易于升级。
在ARIS的孵育箱有可盛放64板的转盘。
鉴定实验中无需添加试剂和另测试验。
A．Sensitouch(手动装置)B．ARIS(全自动装置)C．AutoReader(自动装置)D．AutoInoculatot(全自动加样器)(2)软件采用功能强大的UNIX工作站系统软件平台，可直接进入全院网络同应用，软件适用于各种组合的硬件系统。
根据NCCLS标准设定强大的流行病学统计功能。
可随时通过软件升级来增强系统功能。
(3)耗材96孔国际标准板，独创3个样本／每块板、鉴定板、全值药敏板、阈值药敏板、鉴定／药敏组合板、自由设定板。
超过500种革兰氏阴性致病菌及革兰氏阴性菌。
全世界最多最新的(300多种)抗生素药敏分析，各种板有效期为18-24各月。
全部消耗品常温保存，避免预升温过程。
4．性能特点(1)首创荧光快速鉴定／药敏分析(2)95％的革兰氏阴性菌鉴定在5小时内完成。
(3)独创每块板上分析3个样本(4)干燥试剂技术使各种板有效期为18-24个月(5)全部消耗品常温保存，避免预升温过程(6)符合NCCLS标准的全值药敏分析技术(7)半自动组合可升级为全自动装置。
（六）BD Phoenix System“凤凰”全自动细菌/鉴定药敏系统1．概况1998年Becton Dickinson and Company公司Phonenix全自动细菌鉴定药敏系统2．原理(1)鉴定原理：采用荧光增强原理与传统酶、底物生化呈色反应结合的原理。
(2)药敏试验原理：通过传统比浊法(Turbidity)和BD专利呈色(Chromogenic)反应双重标准及荧光的增加间接地测定MIC值。
3．结构与组成PHOENIXTM100主机(PHOENIXTM50)；BBL比浊仪；BDXPertTM微生物专家系统；BD EpiCenterTM微生物实验室专业数据管珲系统。
4．性能特点（1）同时检测100份鉴定／药敏标本，分别检测100份鉴定标本及100份药敏标本，总标本量为200份。
（2)140 GP database 80％ID 6 Hrs革兰氏阳性标本鉴定时间仅需4小时．准确度91％-95％；160 GN database 95％ID 3-5 Hrs革兰氏阴性标本鉴定药敏时间仅需3小时，准确度91％-95％；78种药物GN—90％ in 5 Hrs；GP—80％ in 6 Hrs，95％ in 10 Hrs?真正的MIC实验结果。
药敏试验时间4-6小时，准确度95％。
无需附加实验．(3)自动维护、自动质控。
(4)细菌鉴定种类革兰氏阳性菌112种，革兰氏阴性菌158种、厌氧菌、酵母菌、奈瑟氏菌及嗜血杆菌等。
药敏实验所选抗生素98种：青霉素类、头胞菌素类、氨基苷类、大环内脂类、喹诺酮类、四环素类、抗真菌药、抗菌复合剂。
(5)鉴定板、药敏板、或鉴定／药敏复合板。
鉴定／药敏复合板51孔用于鉴定实验，85孔用于药敏实验，可同时进行17种抗生素5种浓度或28种抗菌素3种浓度的MIC药敏实验。
(6)BD微生物专家数据处理系统对鉴定/药敏结果进行能够专业性分析判断。
（七）MicroScan微生物自动鉴定及药敏系统工作原理1．概况MicroScan自动细菌鉴定系统由DadeMicroScan公司生产，其中包括全自动系列Walkaway 40和Walkaway 96以及半自动系列AutoScan-4。
MicroScan系列是美国最普遍使用的(全自动、半自动、手工)鉴定系列之一，庞大的菌种资料库可鉴定近500种细菌。
1984年半自动AutoScan-4研制成功投入市场1989年全自动Walkaway研制成功，1991年正式上市。
2．原理MicroScan的WalkAway系列则采用8进制计算法分别将28个生化反应转换成8位生物数码。
计算机系统自动将这些生物数码与编码数据库进行对比，获得相似系统鉴定值。
快速荧光革兰阳(阴)性板则根据荧光法的鉴定原理，荧光物质均匀地混在培养基中，将菌种接种到鉴定板后，通过检测荧光底物的水解、底物被利用后的pH变化、特殊代谢产物的生成和某些代谢产物的生成率来进行菌种鉴定。
3．结构系统主要由WalkAway96仪器、测试板、快速接种系统和数据管理系统四部分组成。
1．WalkAwav96仪器部分测试板放入孵育箱后，在20min到3h内(山测试板的型号决定)系统要对测试板进行一次初读，初读的结果将作为以后读板结果的对照。
通过比色法测定的测试板经适当的孵育后，有些测试孔需添加试剂，此时WalkAway系统会自动添加，并延长孵育的时间，一般为5-30min。
通过荧光法测定的测试板不需添加试剂，孵育完成后，系统立即读板并将各孔的检测数据自动储存起来。
WalkAway的荧光测定系统可直接对荧光测试板各孔中产生的荧光进行测定，并将荧光信号转换成电信号，数据管理系统将这些电信号转换成数码，与原已储存的对照值相比较，推断出菌种的类型及药敏结果。
常规测试板则直接检测电信号，从干涉滤光片过滤的光通过光导纤维导入测试板上的96个测试孔，光感受二极管测定通过每个测试孔的光量，产生相应的电信号，从而推断出菌种的类型及药敏结果。
在特殊情况下，药敏测试板会出现读板失败的现象，此时可以用肉眼来校读。
直接观察各孔中细菌的生长情况，若长菌，则记为阳性，若不长菌，则记为阴性，将结果输入微机中，数据管理系统会得出药敏结果。
2. 测试板采用96孔塑料板作为测试板，孔内包被有用于菌种鉴定的生化反应的底物，或是用于测定MIC 的不同稀释浓度的各种抗生素，每孔可容纳120μl的液体。
每个板中均设有对照孔和生长孔。
若读板时检测到生长孔中的细菌生长量不够，就会给出“生长不充分”的提示，系统自动延长孵育时间。
MicroScan测试板的类型各测试板上都附有条形码，上机前经条形码扫描器扫描后可被系统识别，系统会自动给测试板编号，以防标本混淆。
MicroScan测试板的类型革兰阴性板普通显色革兰阴性板快速荧光革兰阴性板革兰阳性板普通显色革兰阳性板快速荧光革兰阳性板快速荧光显色板厌氧菌板酵母菌板苛氧菌板3．快速接种系统系统配有真空接种器，可一次完成96孔菌液的接种。
需指出的是，有许多细菌自动鉴定系统都配有自动接种器，大致可分为两类：真空接种器和活塞接种器，以真空接种器应用较多。
并且接种器上一般都配有标准麦氏浓度比浊仪，操作时只需将稀释好的菌液放入比浊仪中确定浓度即可。
4．数据管理系统负责数据的转换及分析处理，并具有强大的统计功能，可进行菌种发生率、菌种分离率、抗生素耐药率等流行病学统计。
四、注意事项1．待检细菌在用该系统测试前必须作涂片和革兰染色，根据染色反应选择所需试卡。
2．菌悬液配制后应在20min之内接种完毕并放入孵箱读数器。
3．测试卡号必须书写清楚。
4．被测试细菌要求培养时间在18—24h之间，新培养物最长不应超过48h，厌氧菌培养物不应超过72h。
5．加样器和盐水瓶应保持清洁、无菌。
6．认真标记外加试验。
7．卡片要轻拿轻放，防止气泡产生。
8．待检菌同时作鉴定和药敏试验时，二卡片应写同一测试卡号并放置同一卡片架上。
9．严格按手册规定进行开机和关机，防止因程序错误造成信息丢失。
五、细菌快速检测仪的仪器维修1．定期清洁真空仓、封口器和读数器反光镜，避免由于灰尘而影响判断的正确性。
2．定期(3个月)用ATCC标准菌株测试各种试卡一次，并作好质控记录。
3．建立故障和维修记录，详细记录每次故障的时间、内容、性质、原因和解决办法。
4．定期由工程师作全面保养，并排除故障隐患。