全血胆碱酯酶活性的测定
全血胆碱酯酶活性的测定
——羟胺三氯化铁法
实验目的
1. 掌握三氯化铁比色法的实验原理、分析步骤及酶测定的临床意义。
2. 了解常见全血胆碱酯酶活性测定方法的优缺点、注意事项。
3. 学会末梢血的采集。
实验原理
血液胆碱酯酶使乙酰胆碱分解为胆碱和乙酸。未被胆碱酯酶水解而剩余的乙酰胆碱和碱性羟胺反应，形成红色羌酸铁络合物。颜色深度与剩余乙酰胆碱的量成正比。在波长520nm比色定量，由水解的乙酰胆碱的量计算胆碱酯酶活性。
试剂和材料
蒸馏水
盐酸溶液(1＋2)
碱性羟胺溶液
磷酸盐缓冲液(PH＝7.20)三氯化铁溶液
氯化乙酰胆碱标准液分光光度计
10mL比色管
漏斗
恒温水浴箱，控温±0.5℃采血针头血色素吸管
采样、运输和保存
用血色素吸管，取指血20μL，注入比色管中(事先加入0.98mL磷酸盐缓冲液)，立即进行测定。
实验步骤
A 样品管+0.98mL 磷酸盐缓冲液+0.02mL全血 37℃水浴 5min +1.0mL乙酰胆碱应用液 37℃水浴 30min
B 对照管0.98mL磷酸盐缓冲液+0.02mL全血 37℃水浴 5min +1.0mL水 37℃水浴 30min
C 标准管 1.0mL 磷酸盐缓冲液 37℃水浴 5min +
1.0mL乙酰胆碱应用液 37℃水浴 30min
D 空白管1.0mL 磷酸盐缓冲液 37℃水浴 5min +1.0mL 水
37℃水浴 30min
水浴之后对A、B、C、D四个试管分别进行以下操作：
1.加入 4.0mL 碱性羟胺溶液，充分振摇 2min；
2.加入 2.0mL 盐酸溶液，充分振摇 2min ；
3.加入 2.0mL 三氯化铁溶液，充分振摇；
4.滤纸过滤，520nm 比色。
实验结果
表1-1 520nm 波长下样品的吸光度
样品编号 A B C D
吸光度 0.299 0.003 0.538 0.000
结果计算
①计算酶活性的绝对值
带入得： Xs=7538
.0299.0003.0538.0?-+=3.149μmol Xs ：水解乙酰胆碱的浓度，μmol(0.02mL ·37℃·30min)；
A ：以
试剂空白为参比的在波长520nm 处样品管的吸光度值；
B ：以试剂空白为参比的在波长520nm 处对照管的吸光度值；
C ：以试剂空白为参比的在波长520nm 处标准管的吸光度值。 ②计算酶活性的相对值
Y=
10060
.1149.3 =197 Y —酶活性的相对值，%； Xs —被测血样中酶活性的绝对值，μmol(0.02mL ·37℃·30min)； Xc —正常人血中酶活性绝对值，μmol(0.02mL ·37℃·30min)。Xc=1.60μmol(0.02mL ·37℃·30min)
讨论
1.由于未在网上查到北京市居民胆碱酯酶活性的参考标准，遂以课件上浙江地区健康人胆碱酯酶活性绝对值作为参考。即：女：3.19 ± 0.398 μmol ；因3.149μmol 在3.19 ± 0.398 μmol 的区间内，故该样本的胆碱酯酶活性属正常范围。
2.各组所测数值偏差较大，可能与操作差异如采血时间、振摇是否充分、加热时间等导致胆碱酯酶活性变化有关。
3. 采血要迅速，防止凝固及氧化；振摇要充分，同时防止液体溅出；比色时有以D 管调零。
注意事项
1.采血前应准备好试管，提前加入磷酸盐缓冲液；
2.采血时严格消毒，用过的采血针放入利器筒中，棉签放入垃圾桶中，不可混放；
3.准确控制水浴的温度和时间，否则会影响实验结果；
4.加入三氯化铁显色后，20 min内比色。
全血胆碱酯酶活性的测定
全血胆碱酯酶活性的测定 ——羟胺三氯化铁法 实验目的 1. 掌握三氯化铁比色法的实验原理、分析步骤及酶测定的临床意义。 2. 了解常见全血胆碱酯酶活性测定方法的优缺点、注意事项。 3. 学会末梢血的采集。 实验原理 血液胆碱酯酶使乙酰胆碱分解为胆碱和乙酸。未被胆碱酯酶水解而剩余的乙酰胆碱和碱性羟胺反应，形成红色羌酸铁络合物。颜色深度与剩余乙酰胆碱的量成正比。在波长520nm比色定量，由水解的乙酰胆碱的量计算胆碱酯酶活性。试剂和材料 蒸馏水 盐酸溶液(1＋2) 碱性羟胺溶液 磷酸盐缓冲液(PH＝7.20) 三氯化铁溶液 氯化乙酰胆碱标准液分光光度计 10mL比色管 漏斗 恒温水浴箱，控温±0.5℃采血针头 血色素吸管 采样、运输和保存 用血色素吸管，取指血20μL，注入比色管中(事先加入0.98mL磷酸盐缓冲液)，立即进行测定。 实验步骤 A 样品管+0.98mL 磷酸盐缓冲液+0.02mL全血37℃水浴5min +1.0mL乙酰胆碱应用液37℃水浴30min B 对照管0.98mL磷酸盐缓冲液+0.02mL全血37℃水浴5min +1.0mL水37℃水浴30min C 标准管1.0mL 磷酸盐缓冲液37℃水浴5min + 1.0mL乙酰胆碱应用液37℃水浴30min D 空白管1.0mL 磷酸盐缓冲液37℃水浴5min +1.0mL水 37℃水浴30min
水浴之后对A 、B 、C 、D 四个试管分别进行以下操作： 1.加入 4.0mL 碱性羟胺溶液，充分振摇 2min ； 2.加入 2.0mL 盐酸溶液，充分振摇 2min ； 3.加入 2.0mL 三氯化铁溶液，充分振摇； 4.滤纸过滤，520nm 比色。 实验结果 表1-1 520nm 波长下样品的吸光度 样品编号 A B C D 吸光度 0.299 0.003 0.538 0.000 结果计算 ①计算酶活性的绝对值 带入得： Xs=7538 .0299.0003.0538.0?-+=3.149μmol Xs ：水解乙酰胆碱的浓度，μmol(0.02mL ·37℃·30min)； A ：以 试剂空白为参比的在波长520nm 处样品管的吸光度值； B ：以试剂空白为参比的在波长520nm 处对照管的吸光度值； C ：以试剂空白为参比的在波长520nm 处标准管的吸光度值。 ②计算酶活性的相对值 Y=10060 .1149.3?=197 Y —酶活性的相对值，%； Xs —被测血样中酶活性的绝对值，μmol(0.02mL ·37℃·30min)； Xc —正常人血中酶活性绝对值，μmol(0.02mL ·37℃·30min)。Xc=1.60μmol(0.02mL ·37℃·30min) 讨论 1.由于未在网上查到北京市居民胆碱酯酶活性的参考标准，遂以课件上浙江地区健康人胆碱酯酶活性绝对值作为参考。即：女：3.19 ± 0.398 μmol ；因3.149μmol 在3.19 ± 0.398 μmol 的区间内，故该样本的胆碱酯酶活性属正常范围。 2.各组所测数值偏差较大，可能与操作差异如采血时间、振摇是否充分、加热时间等导
胆碱酯酶活力测定在1例昏迷病人诊治中的运用体会
胆碱酯酶活力测定在1例昏迷病人诊治中的运用体会 有机磷酸酯类杀虫剂中毒机制是抑制体内胆碱酯酶活性，从而失去分解乙酯胆碱的功能，致 使乙酯胆碱在其生理作用部位积聚，发生胆碱能神经过度兴奋的一系列临床表现。急性中毒 一般可分轻、中、重三度。轻度中毒：全血或红细胞胆碱酯酶活力一般在50-70%；中度中毒：全血或红细胞胆碱酯酶活力一般在30-50%；重度中毒：全血或红细胞胆碱酯酶活力一般30% 以下[1]。我院成功抢救一例急性重度有机磷农药中毒，现将诊治体会报告如下： 1 病例介绍 患儿，女，13岁。不明原因晕倒伴恶心，呕吐，全身出冷汗，心慌3小时，于下午15：00 入住儿科病房。体检：T35.6℃，BP90/60mmhg，HR78次/分，神志清楚，能回答问题，瞳孔 稍小，对光反射存在。即给10%葡萄糖500ml，10%氯化钠10ml，头孢噻肟钠4g治疗：15：20大便失禁：糊状，恶臭。大便镜检：黄、稀。急查血象：WBC38.4×109/L。N76.6%。按“中毒性痢疾？”、“中毒性脑病”治疗。15：40患儿突然昏迷，叹息样呼吸，面色紫绀，HR90 次/分，给吸氧，吸痰，静推20%甘露醇150ml，10%葡萄糖酸钙10ml，10%葡萄糖250ml， 丁胺卡那0.4g，地塞米松10mg抗炎，抗感染治疗。16：00患儿呼吸、心跳停止。立即气管 插管，同时上呼吸机。胸外心脏按压，肾上腺素1mg，去甲肾上腺素1mg，阿托品1mg静推，1分钟后心跳复苏，HR92次/分。我在管理呼吸机运行过程中观察到患儿瞳孔针尖大小，多 年的急诊科工作经验，凡是临终病人或心跳骤停的病人瞳孔都是散大固定的。除有机磷急性 中毒死亡者外，再仔细观察发现患儿头发湿透，心里不免产生疑问，会不会是有机磷中毒， 向院专家组建议是否为有机磷中毒，但其家长坚决否认有有机磷接触史，否认家中有有机磷 农药及中毒诱因。其母认为患儿头发湿透是因晕倒在卫生间地面潮湿有水所致。心中存在疑 问就带着问题去找答案。随即又观察到患儿双侧小腿腓肠肌肌维颤动现象，简直是如获至宝。瞳孔针尖大小，头发湿露，皮肤潮湿，肌束震颤现象是典型的有机磷中毒症状。遂再次向专 家组建议查全血胆碱酯酶活力测定。全血胆碱酯酶活力测定是诊断有机磷农药中毒的特异性 实验室指标，也是判断中毒程度，治疗效果以及估计预后的重要指标[2]。急诊头部CT排除 了颅内出血及颅内肿瘤病变。同时抽取患儿及其母亲血液做血清胆碱酯酶活力测定：患儿胆 碱酯酶活力0单位，其母亲胆碱酯酶活力45单位。我院采用血清胆碱脂酶活力测定试纸其 正常值为30—80单位。确诊为有机磷中毒。患儿仍昏迷，瞳孔针尖大小，改用阿托品0.3mg，5分钟静推1次，20：30患儿出现人机对抗自主呼吸恢复，瞳孔开始散大0.3mm,撤离呼吸机，阿托品10mg每5分钟静推，21:15患儿神志恢复，否认有有机磷中毒史。经阿托品解磷定及支持治疗，患儿胆碱酯酶活力逐渐上升为8单位、23单位、30单位、38单位。次日上午9：00患儿向其父亲承认于昨日中午自服农药--虫敌约15ml（属辛硫磷类有机磷杀虫剂）。经用 阿托品，解磷定，能量合剂等综合治疗住院13天痊愈出院。随防1年患儿智力、健康状况 如常。 2 诊治体会 正确的诊断是正确治疗的基础。接诊医生过度强调农药接触史，观察病情不仔细，轻视客观 体征是误诊的原因。患儿就诊时神志清楚，症状不典型，有意隐瞒毒物接触史造成诊断困难。急诊科护士是工作在抢救生命的第一线，是医生掌握、了解病情变化的前哨兵，对每一位诊 断不清的急危重症患者认真仔细地观察其临床体征的变化，从蛛丝马迹中捕捉某些特异性体 征作为诊断依据或迅速提供线索为正确诊断提供帮助。该患儿在心跳呼吸停止心脏复苏后， 瞳孔无散大表现，反而瞳孔针尖大小，这一与临床不相符的症状要立即报告并根据瞳孔缩小 是有机磷中毒特征表现之一，要积极观察寻找其它支持症状，该患儿由于气管插管呼吸机维 持呼吸影响面部小肌群是否有抽动现象的观察。因为带着疑问仔细查找是否有肌束颤动现象，继而很快就发现双侧腓肠肌有颤抖现象。瞳孔缩小，多汗，肌束颤动是有机磷中毒的特征性 临床表现。如你不敢确定诊断应立即抽取患儿及家属的血液做血清胆碱酯酶活动力测定，尽 快明确诊断。本例病例正确诊治，成功救治，充分说明在临床工作中要有高度的责任心，耐
有机磷中毒患者血胆碱酯酶活性的变化规律及临床意义
有机磷中毒患者血胆碱酯酶活性的变化规律及临床意义 【摘要】目的研究急性有机磷中毒(AOPP)患者全血及血清胆碱脂酶(ChE)活性的变化规律。方法所有51例患者入院后均给予清除毒物、应用双复磷或氯磷定、阿托品及积极的对症支持治疗。分别于治疗前、治疗后6~12、24、48、72、96、120 h及出院时抽末梢血测定全血及血清ChE活性,并于同期测定37名均为健康者血ChE活性作为正常对照。结果全血、血清ChE活性在中毒患者治疗前均较正常对照组明显降低(P＜0.01),治疗后轻度患者的全血ChE活性恢复较快,至出院时基本恢复正常;中、重度患者的全血ChE活性于治疗后24 h降至最低,于48 h缓慢回升,至出院时仍未恢复至正常水平;3例死亡患者全血ChE活性持续不回升。血清ChE活性值波动较大,分布较离散,恢复相对较快。结论全血ChE 活性是对急情有机磷中毒进行早期诊断,判断疗效和估计预后的重要指标,在治疗上具有重要的指导意义。 【Abstract】Objective TO investigate the changing regularity and significance of cholinesterase activity of complete blood and serum in patients with acute organophosphate poisoning(AOPP).Methods All of the fifty-one cases of AOPP were given cleaning poison,administrating ujophosan or protopam chloride,atropine and acitively assistant treatment.They were respectively detected the cholinesterase activity of complete blood and serum from peripheral venous blood before therapy and at the time of 6-12,24,48,72,96,120 h after therapy and discharge.And at the same time thirty-seven cases of healthy people were done the same thing to act as normal control group.Results The cholinesterase activity of complete blood and serum in mild,moderate and severe group were significantly decreased as compared with that of normal control group before therapy(P＜0.01).The cholinesterase activity of complete blood in mild group recovered quicklier than that of moderate and severe group after therapy and was about normal when discharged.The cholinesterase actvity of complete blood in moderate and severe group decreased to the lowest level at the time of 24 h and began to increase at the time of 48 h after therapy.But it was abnormal until discharge.The cholinesterase activity of complete blood of three cases of death always did not recover.The cholinesterase activity of serum fluctuated greatly,distributed extensively and recovered quickly.Conclusion The cholinesterase activity of complete blood is a very important marker for early diagnosis,judging effect and prognosis.It has the directive value in therapy. 【Key words】Cholinesterase; Activity ; AOPP 急性有机磷中毒(AOPP)是内科常见的急症之一,本研究总结了我院1997年10月至2008年4月间收治的AOPP患者共51例,全部应用改良的EIIman法[1]测定患者全血及血清胆碱酯酶(ChE)活性,现报告如下。
实验2 乙酰胆碱酯酶抑制法快速测定果蔬中的残留农药
K 0 K t 吸光度A 实验二 乙酰胆碱酯酶抑制法快速测定果蔬中的残留农药 目前有机磷、氨基甲酸酯类农药是我国大量使用的杀虫剂，虽然这类农药与过去使用的有机氯农药相比，降解速度较快，但在果蔬中的残留仍然较为严重。由于该类农药能抑制人体内乙酰胆碱酯酶的生理活性，神经传导因此受阻，引起神经麻痹乃至死亡，对人类健康造成极大危害。对于果蔬中的农药通常采用气相色谱等方法进行分析，但分析时间长，操作步骤烦琐，适用于实验室分析。长期以来在大部分果蔬市场中，通常采用乙酰胆碱酯酶抑制法进行快速检测，即以乙酰胆碱酯酶作为检测试剂，采用农药残留检测仪，根据乙酰胆碱酯酶活性变化的程度来测定果蔬样品中的残留农药。 一、 实验目的 1． 了解果蔬中残留农药的分析方法； 2． 掌握酶抑制分析方法的原理及操作方法； 3． 理解农药残留性评价的意义。 二、 实验原理 有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制昆虫中枢和周围神经系统中乙酰胆碱酯酶的活性，造成神经传导介质乙酰胆碱的积累，影响正常传导，使昆虫中毒致死，酶抑制法就是根据这一昆虫毒理学原理，对农药残留进行检测。 以乙酰胆碱为底物，在乙酰胆碱酯酶（ACHE ）的作用下，乙酰胆碱水解成胆碱和乙酸，胆碱和二硫双对硝基苯甲酸（DNTB ）产生显色反应，使反应液呈黄色（于410nm 处有最大吸收峰）。 根据酶促反应动力学原理，在没有有机磷和氨基甲酸酯类农药存在时，底物在酶的催化作用下发生水解，反应速率可以用吸光度值随时间的变化率K 0来表示。当有机磷和氨基甲酸酯类农药加入到酶的显色体系中时，农药抑制了酶的活性，影响显色体系的反应速度，此时体系吸光度随时间的变化率为K t ，则有机磷和氨基甲酸酯类农药对酶的活性的抑制率Y 的计算公式如下： %1000 0?-= K K K Y t K 0：空白样品的吸光度随时间变化曲线的斜率值 K t ：样品溶液的吸光度随时间变化曲线的斜 率值 其中K 0和K t 都可通过以下过程进行推导和计算。 在样品的测量过程，选取每隔等步长时间测定一次吸光度值，3分钟内共测定7个数据点。设数据点如下 表： t 1 2 3 4 5 6 7 A A 1 A 2 A 3 A 4 A 5 A 6 A 7 则线性回归所得A ～t 曲线的斜率K 为： 2 22272176543212 2 )721(7 1 )721() ()721(71 )765432()(7171 +++-++++++?+++-++++++= -- = ∑∑∑∑∑ A A A A A A A A A A t t A t A t K i i i i i i
胆碱酯酶活
胆碱酯酶活性测定（干化学法）操作规程 1.预期用途 快速定性检测人血清、血浆中胆碱酯酶活性。 2.检验原理 胆碱酯酶催化水解乙酰胆碱（Ach）生成乙酸和胆碱，乙酸能使指示剂溴百里香酚蓝（BTB）发生颜色变化，通过颜色的改变反映生成乙酸的量，乙酸量的多少即可表示酶活力的高低；反应结果可与胆碱酯酶活性测定比色表直接进行比色测定。 3.主要组成成份 本产品系由乙酰胆碱(Ach)、溴百里香酚蓝等试剂固定在通过双面胶粘贴有中速滤纸的PVC板上，干燥后裁切成胆碱酯酶活性测定试纸。 4.样本要求 4.1、在无菌条件下采集静脉血样本，尽快分离血清或血浆以避免溶血。 4.2、检测时应使用新鲜标本。 4.3、常规抗凝剂不影响检测结果。 5.检验方法 在进行测试前必须先完整阅读使用说明书。 5.1、取测定试纸一片，放在培养皿中，向反应纸片中央加上8～10μl待测新鲜血清或血浆，盖上培养皿盖保持密封（保持一定的湿度以防血清蒸发，同时防外界酸碱影响），放置37℃水浴箱中并开始记时。 5.2、11分30秒后取出，所呈现色泽与胆碱酯酶活力比色表(见图一)比较，即得胆碱酯酶活力单位。 5.3、如无水浴箱，根据测定时室温，查附表确定反应所需时间，在到达反应所需时间后立即比色。 5.4、正常值30-80单位，如低于30单位的标本，欲求得较精确的结果，可将时间延长一倍，再观察结果。 附表：20～40℃内反应终点时间表
6.结果判定 阳性：胆碱酯酶活力单位小于30。 阴性：胆碱酯酶活力单位大于等于30。 无效：向胆碱酯酶活性测定试纸加上待测新鲜血清或血浆后不出现墨绿色，表明标本受污染或试纸失效。 7.检验结果的解释 7.1、阳性结果表明胆碱酯酶活力降低，可能是由于有机磷农药中毒或肝实质性损害（如急性肝炎、慢性肝炎活动期、肝硬化失代偿期及肝癌等）造成。 7.2、阴性结果表明胆碱酯酶活性正常。 7.3、检验结果无效时应考虑标本是否受污染，如排除标本受污染，应换用其它批号胆碱酯酶活性试纸重新检测。 8.检验方法的局限性 本法为临床诊断初筛产品，任何检测阳性的样本都应用其它方法进行进一步的确认。 9.产品性能指标 9.1、准确度：胆碱酯酶活性测定试纸对胆碱酯酶质控标准品各活力单位的检测结果与参考标示值一致。 9.2、批内精密度：活力单位为15的胆碱酯酶质控标准品重复性试验，规定时间内检测结果与参考标示值相差同向不超过一个量级。 9.3、批间精密度：活力单位为15的胆碱酯酶质控标准品重复性试验，规定时间内检测结果与参考标示值相差不超过一个量级。 10.说明及注意事项 10.1请使用新鲜标本，以防胆碱酯酶活力变化。
胆碱酯酶活力测定在有机磷中毒中的作用评价
胆碱酯酶活力测定在有机磷中毒中的作用评价关键词：有机磷中毒；胆碱酯酶活力；评价 胆碱酯酶是一类糖蛋白，以多种同功酶形式存在于体内。有机磷农药进入人体后与乙酰胆碱酯酶结合，形成稳定而无活性的磷酰化胆碱酯酶，从而失去水解乙酰胆碱的能力，导致乙酰胆碱积聚而引起的一系列临床综合症。故胆碱酯酶活力测定对于诊断、临床抢救和治疗有着重要意义。 1 诊断价值 血清胆碱酯酶活力检测是诊断有机磷农药中毒的特异性指标。有机磷农药进入人体后与胆碱酯酶结合形成较为稳定的磷化胆碱酶，使其失去分解乙酰胆碱的能力，引起乙酰胆碱在体内大量蓄积，导致神经功能过度兴奋，继而转入抑制，出现一系列毒蕈碱样、烟碱样及中枢神经系统中毒症状和体征［1］。因此，急性有机磷农药中毒可根据有机磷农药接触史，结合临床呼出气有蒜臭味、瞳孔针尖样缩小、大汗淋漓、腺体分泌增加、肌纤维颤动和意识障碍等中毒表现，一般可做出诊断，如有全血胆碱酯酶活力降低，更可确诊。但在早期轻度中毒患者其活力可不降低。 2 抢救价值 急性有机磷农药中毒的抢救过程中，快速阿托品化是决定抢救成败非常关键的环节之一，有的医院甚至采用宁多勿少的原则，极易出现阿托品中毒。轻度有机磷农药中毒时，阿托品化较易识别，而对于极重型中毒，由于各种原因造成脑细胞中毒和代谢障碍，皮层下中枢失去了对血管神经的调节，影响了阿托品化的正确判断［2］。长期以来，在急性有机磷中毒的抢救中，一直采用阿托品化指标作为抗胆碱药使用依据，由此引起的阿托品使用过量，中毒而致死者并不少见。由于阿托品化指标受多种因素的影响，如急性有机磷农药中毒（AOPP）合并脑水肿时，瞳孔散大，烦躁不安；合并心衰时，心率快，双肺啰音；合并感染时，体温升高等。阿托品化指标已不能作为指导抗胆碱药使用的依据。胆碱酯酶活力（ChE）是诊断AOPP的特异性实验室指标，对中毒程度、疗效判断及预后估计均极为重要，AOPP时活力变化与中毒症状平行，当ChE活力>50%时一般不再出现反跳症状［3］。故动态胆碱酯酶活力监测，可以为合理使用抗胆碱药提供了客观依据，便于及时调整抗胆碱药用量，避免抗胆碱药过量或不足，节省用药量，减少用药次数。在对有机磷农药重度中毒患者抢救过程中如足量应用阿托品症状改善不快，血清胆碱酯酶活力恢复缓慢要及时查找原因，必要时采用输血或换血疗法。 3 后续治疗价值 随着解毒药物的应用，多数患者的临床症状会明显缓解，通常于6h内达阿托品化，甚至出现阿托品中毒表现。个别患者治疗后24、48h血清胆碱酯酶活力
全血胆碱酯酶活性的测定
全血胆碱酯酶活性的测定 ――羟胺三氯化铁法 实验目的 1. 掌握三氯化铁比色法的实验原理、分析步骤及酶测定的临床意义。 2. 了解常见全血胆碱酯酶活性测定方法的优缺点、注意事项。 3. 学会末梢血的采集。 实验原理 血液胆碱酯酶使乙酰胆碱分解为胆碱和乙酸。 未被胆碱酯酶水解而剩余的乙 酰胆碱和碱性羟胺反应，形成红色羌酸铁络合物。颜色深度与剩余乙酰胆碱的量 成正比。在波长520nm 比色定量，由水解的乙酰胆碱的量计算胆碱酯酶活性。 试剂和材料 采样、运输和保存 用血色素吸管，取指血20卩L ,注入比色管中（事先加入0.98mL 磷酸盐缓冲液）, 立即进行测定。 实验步骤 A 样品管+0.98mL 磷酸盐缓冲液+0.02mL 全血 ------- 却37C 水浴 5min ——> +1.0mL 乙酰胆碱应用液 —— 37C 水浴30min B 对照管0.98mL 磷酸盐缓冲液+0.02mL 全血 +1.0mL 水 ----- > 37 C 水浴 30min C 标准管1.0mL 磷酸盐缓冲液------ -> 37C 水浴5min ----------- > + 1.0mL 乙酰胆碱 应用液 ----- > 37C 水浴30min D 空白管1.0mL 磷酸盐缓冲液 ------- 37C 水浴 30min 蒸馏水 盐酸溶液（1 + 2） 碱性羟胺溶液 磷酸盐缓冲液（PH= 7.20） 三氯化铁溶液 分光光度计 10mL 比色管 漏斗 恒温水浴箱，控温土 05C 采血针头 血色素吸管 37C 水浴5min ——> 37 C 水浴 5min 手+1.0mL 水
水浴之后对A、B、C、D四个试管分别进行以下操作: 1. 加入4.0mL碱性羟胺溶液，充分振摇2min； 2. 加入2.0mL盐酸溶液，充分振摇2min ； 3. 加入2.0mL三氯化铁溶液，充分振摇； 4. 滤纸过滤，520nm比色。 实验结果 表1-1 520nm波长下样品的吸光度 样品编号A B C D 吸光度0.2990.0030.5380.000 结果计算 ①计算酶活性的绝对值 3.149 Y= 100=197 1.60 Y—酶活性的相对值，%; Xs—被测血样中酶活性的绝对值，卩mol(0.02mL ? 37C?30min); Xc —正常人血中酶活性绝对值，卩mol(0.02mL ? 37 C ? 30min)。Xc=1.60卩mol(0.02mL ? 37C ?30min) 讨论 1. 由于未在网上查到北京市居民胆碱酯酶活性的参考标准，遂以课件上浙江地区健康人 胆碱酯酶活性绝对值作为参考。即：女： 3.19 ± 0.398卩mol ;因3.149卩mol在3.19 ± 0.398卩mol的区间内，故该样本的胆碱酯酶活性属正常范围。 2. 各组所测数值偏差较大，可能与操作差异如采血时间、振摇是否充分、加热时间等导 致胆碱酯酶活性变化有关。 带入得: Xs=0.538 0.003 0.299 7=3.149^ mol Xs：水解乙酰胆碱的浓度，卩 A: 试剂空白为参比的在波长 以 0.538 mol(0.02mL ? 37 30min); 处 样品管的吸光度值; 520nm B:以试剂空白为参比的在波长 C:以试剂空白为参比的在波长 ②计算酶活性的相对值 520nm 520nm 处对照管的吸光度值; 处标准管的吸光度值。
乙酰胆碱酯酶活性测定
乙酰胆碱酯酶酶活的测试 作者：陈志坚 1 准备工作 0.1mol/L pH=8.0的磷酸缓冲液：NaH2PO4 1.68g，Na2HPO4 12.21g溶于1L水。 2 酶液制备 SD大鼠，断头处理后，冰台快速取大脑，放入玻璃皿中，玻璃皿加入少量冰冻的磷酸盐缓冲液( 磷酸盐缓冲液漂洗，用干净的滤纸吸去大脑组织表面的水分和血液，称质量) ，用眼科剪尽快剪碎组织块。将剪碎的组织倒入玻璃匀浆器中，再用少许冰冻磷酸盐缓冲液冲洗残留在烧杯中的碎组织块，一起倒入匀浆器中进行冰浴匀浆。然后再加入冰冻的磷酸盐缓冲液，按脑组织质量与匀浆总体积1:10的比例，稀释混匀。将制备好的10%脑匀浆以3000r/min离心15min，取上清液待测。 3 酶活性抑制测试 3.1 配药液 参照脲酶实验 3.2DTNB 5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)、ATCh碘化硫代乙酰胆碱 0.0314mol/L DNTB，0.0314mol/L ATCH 3.3 酶活测试 在3.00ml磷酸盐缓冲液(0.lmol/L,pH=8.0)中加入20uL酶液,混匀后37℃保温20min后, 依次加入100ulDTNB溶液(终浓度1.0mmol/L)和20uLATCh溶液(终浓度1.0mmol/L),充分混合,反应体积为3.14mL。在412mn处用1cm比色皿，每隔0.5min读数,连续测定3min。酶活力定义为每克脑蛋白每分钟水解底物的umol数。这是未加药酶活力为E1。 在2.98ml磷酸盐缓冲液(0.lmol/L,pH=8.0)中加入20uL酶液，并加入不同浓度的药物（一个浓度测定一次），依次加入100ulDTNB溶液(终浓度1.0mmol/L)和20uLATCh溶液(终浓度1.0mmol/L),充分混合,反应体积为3.14mL。在412mn处用1cm比色皿，每隔0.5min读数,连续测定3min。计算出此时酶活，为E2。 抑制率计算公式为I（%）=(E1-E2)/E1*100% 得到一系列不同浓度的抑制率以后，利用SPSS计算出药物的IC50。
胆碱酯酶抑制剂
胆碱酯酶抑制剂治疗阿尔茨海默病的系统评价 自1997年首次使用胆碱酯酶抑制剂(ChEI)治疗阿尔茨海默病以来,多数临床医师和绝大多数患者均把胆碱能药物,如多奈哌齐、加兰他敏和利凡斯的明作为轻至重度阿尔茨海默病的一线药物治疗用药。这些药的药代动力学特征有轻度差异,但都是通过阻断乙酰胆碱酯酶,抑制乙酰胆碱这种与记忆相关的重要神经递质的失活。这类药物可以改善阿尔茨海默病的临床表现。为评估上述药物治疗因阿尔茨海默病引发的轻、中或重度痴呆的疗效,英国牛津大学的Birks检索了Cochrane痴呆与认知改善组登记库,从中提取相关数据进行分析,并于今年1月25日在线发表了分析结果。 多奈哌齐、加兰他敏和利凡斯的明这3种ChEI对轻至重度阿尔茨海默病都是有效的。在治疗开始前,无法确定药物治疗对哪些患者更有效。无证据表明ChEI治疗是没有价值效益的。尽管上述3种药的作用模式略有不同,但没有证据表明其疗效存在差异。与利凡斯的明相比,多奈哌齐导致的不良反应更少。如果在给患者用药前逐步细致地进行超过3个月的常规剂量滴定,患者对加兰他敏和利凡斯的明的耐受性与多奈哌齐相当。多奈哌齐的滴定较简单,因考虑使用较低剂量。 阿尔茨海默预后和治疗 认知功能的衰退是不可避免的,但病情进展的速度是不可预料的.存活期自2年至20年不等,平均为7年. 对阿尔茨海默病的一般性治疗原则与所有痴呆的治疗相同(见上文痴呆的治疗). 某些能增强胆碱能神经传递的药物,例如Donepezil[即安理申(aricept)],至少在疾病的早期阶段能暂时改善记忆功能.不过,这些药物并不能改变基本病理变化的稳步恶化.他克林(tacrine)引起的不良反应较多.安理申开始试用的剂量是每天晚上1次5mg,过4~6周以后,可增加至10mg；须连续用药数月才能评估其疗效.有关抗氧化剂(如维生素E),雌激素和非类固醇抗炎药的治疗尚在研究之中. 许多药物都能引起中枢神经系统不良反应,包括精神错乱和倦怠.镇静剂如苯二氮类药物,应尽可能避免使用.抗胆碱能药物,例如某些三环类抗抑郁剂,抗组胺制剂,抗精神病药物以及苯甲托品,均应避免使用. 银杏叶浸出物能使阿尔茨海默病或血管性痴呆病例的记忆丧失与其他症状进展有所减慢或有中度的逆转.银杏叶制剂可能起着自由基清除剂的作用.不良反应很轻微；治疗应用尚需进一步研究. 老年痴呆症前兆是什么 导读：一般老年痴呆症前兆有什么呢?由于前期老年痴呆症患者的生活基本可以自理，所以很多时候人们往往忽视了老年痴呆症前兆，被发现时基本都是中晚期了。因此了解老年痴呆症前兆可以帮助患者及时发现病情，以及更好的治疗老年痴呆症。 老年痴呆症,指的是一种持续性高级神经功能活动障碍,简单点说就是在没有意识障碍的状态下,记忆、思维、分析判断、视空间辨认、情绪等方面发生了障碍。一般老年痴呆症常常发生在50岁以后,起病隐匿,发展缓慢,最早期往往是以逐渐加重的健忘开始,如果不注意,通常不容易发现,常听有些老年人说:“老了,记性不行了,不中用了。”这其实可能就是老年痴呆症的先兆。 一般老年痴呆症前兆有什么呢?下面请百济药师来为大家介绍老年痴呆症前兆。 老年痴呆症前兆 1、记忆力减退：尤其是近记忆力减退是老年痴呆症早期最常见的前兆。经常忘记近期得到的一些信息，如约会、人名或电话，忘记熟人的名字，不记得刚刚发生(甚至自己做过)的事，还有拿什么东西转手就忘。 2、不能完成熟悉的工作：难以胜任日常家务，而这些家务通常不需要思考。例如，经常做饭的人现在却不知如何做，以前是个精于计算的人，现在连买菜的小账和简单的加减法都算不清。
乙酰胆碱酯酶(AchE)活性测定试剂盒说明书
货号：MS2000 规格：100管/96样乙酰胆碱酯酶（AchE）活性测定试剂盒说明书 微量法 注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义： AchE属于丝氨酸水解酶，广泛存在于各种动物组织和血清中。AchE催化乙酰胆碱（Ach）水解，在神经传导调节中起重要作用。 测定原理： AchE催化Ach水解生成胆碱，胆碱与二硫对硝基苯甲酸（DTNB）作用生成5-巯基-硝基苯甲酸（TNB）；TNB在412nm处有吸收峰，通过测定412 nm吸光度增加速率，计算AchE活性。 自备实验用品及仪器： 可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪和蒸馏水。 试剂组成和配制： 试剂一：液体×1瓶，4℃保存。 试剂二：液体×1瓶，4℃避光保存。 试剂三：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加入1.3 mL试剂二，充分震荡溶解。 试剂四：粉剂×1支，4℃保存。临用前加入1.3 mL试剂二，充分震荡溶解。 粗酶液提取： 1.组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加 入1mL试剂一）进行冰浴匀浆，8000g 4℃离心10min，取上清液待测。 2.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500 万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。 3.血清等液体：直接测定。 测定操作： 1.分光光度计/酶标仪预热30 min，调节波长到412 nm，蒸馏水调零。 2. 试剂二置于37℃水浴中预热30min。 3. 取微量石英比色皿/96孔板，依次加入20μL上清液、160 μL试剂二、10μL试剂三和10μL 试剂四，迅速混匀，于412nm处测定3min内吸光值变化，第10s吸光值记为A1，第190s吸光值记为A2。△A测定管=A2-A1。 注意：空白管只需测定一次。 AchE活性计算： a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下 1.组织AchE活性 （1）按照蛋白浓度计算 活性单位定义：每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol TNB的酶量为1个酶活单位。 AchE酶活(nmol/min/mg prot)= (△A÷ε÷d×V反总×109)÷（Cpr ×V样）÷T 第1页，共2页
三种基质测定血清胆碱酯酶活力的比较
参考文献: [1]Biao He,Liang Y ou et al.S OCS23is frequently silenced by hypermethyla2 tion and suppresses cell growth in human lung cancer[J].Proc Natl Acad Sci U S,2003,100(24):14133. [2]Farabeg oli F,Ceccarelli C,Santini D,et al.Suppress or of cytokine sig2 nalling2(S OCS22)expression in breast carcinoma[J].J Clin Pathol, 2005,58(10):1046. [3]Lee H,Y u H.M ethylation of S tat1prom oter can contribute to squam ous cell carcinogenesis[J].J Natl Cancer Inst,2006,98(3):154. [4]C orvinus FM,Orth C,M origgl R,et al.Persistent ST AT3activation in colon cancer is ass ociated with enhanced cell proliferation and tum or growth[J].Neoplasia,2005,7(6):545. [5]Brnder C,Nielsen M,K altoft K,et al.ST AT32mediated constitutive ex2 pression of S OCS23in cutaneous T2cell lym phoma[J].Blood,2001,97 (2):1056. [6]Niwa Y,K anda H,Shikauchi Y,et al.M ethylation silencing of S OCS23 prom otes cell growth and migration by enhancing JAK/ST AT and FAK signalings in human hepatocellular carcinoma[J].Oncogene,2005,24 (42):6406. [7]贾芙蓉,周劲松,张哲雄,等.S OCS23mRNA在胃癌组织及胃癌细 胞系中的表达[J].中国实验诊断学杂志,2006,10(5):446. (收稿日期:2006-11-27) 文章编号:1007-4287(2007)04-0490-02 三种基质测定血清胆碱酯酶活力的比较 谢 萍1,潘洪涛2,刘国良3 (1.吉林出入境检验检疫局,吉林长春130062;2.中国人民解放军第二○八医院,吉林长春130062; 3.吉林大学公共卫生学院卫生检测教研室,吉林长春130021) 人的血液胆碱酯酶(Cholinesterase)有两类。一类是真性胆碱酯酶(AChE EC.3.1.1.7),或胆碱酯酶Ⅰ。它分布于红细胞和中枢神经系统的灰质内,支配肌细胞的交感神经节的运动神经终板。此酶仅水解胆碱酯类,不水解芳基或烷基酯类。另一类是拟胆碱酯酶(PChE EC.3.1.1.8)亦称胆碱酯酶Ⅱ,或特异性胆碱酯酶,分布于肝、血浆、肠粘膜和中枢神经系统的白质内。乙酰胆碱酰基水解酶可分解胆碱酯类,还包括苯甲酰胆碱、丁酰胆碱和烷基酯类。与其它酶活力增高反映病理改变的情况相反,血清胆碱酶测定的临床意义在于酶活力降低。 肝脏合成PChE,肝实质细胞损害时酶活力降低。有机磷毒剂是两类胆碱酯酶的激烈抑制剂,测定血清胆碱酯酶与测定全血一样,是临床诊断有机磷农药中毒及予后评价重要手段[1]。 测定血清胆碱酯酶(SChE)活力的方法有多种,传统的pH法、羟胺比色法比较成熟。近年出现了新方法,如:表面光伏传感器法[2]、膜电位分析法[3]、流动注射动力学光度法[4]等。这些新方法都需要特殊设备,而且操作比较麻烦。1990年以后,许多国外厂家SChE测定试剂盒的引入,应用Ellman’s试剂,使测定方法简化,而且可以很方便地使用生化分析仪测定血清胆碱酯酶活力。 据文献介绍用乙酰、丙酰、丁酰硫代胆碱的碘化物作基质均可测定SChE,但最好选用碘化丙酰硫代胆碱[5,6]。但是,现国内外试剂厂家提供的测定SChE试剂盒均使用碘化丁酰硫代胆碱。为此,我们应用乙酰、丙酰、丁酰三种硫代碘化物测定SChE,并对其结果进行了比较。 1 材料和方法 1.1 材料来源 血清样本为健康人体检查,肝功能正常,H BS Ag阴性,年龄25-50岁,均为男性。 1.2 检测方法 COU LTER2Beckman CX9全自动生化分析仪测定胆碱酯酶活力,试剂均为SIG M A公司产品。 A.碘化乙酰硫代胆碱(Acethlthiochaline iodide)、 B.碘化丙酰硫代胆碱(Propionylthiocholine iodide)、 C.碘化丁酰硫代胆碱(S2Butyzylthiocholine iodide)、 D.5, 5’2二硫代双(22硝基)苯甲酸(DT NB) 参照资料[7]自配试剂,连续监测法进行测定。 1.3 统计学处理 所有数据用x—±s表示,组间差异应用t检验。 2 结果 2.1 3种基质对同一分血清样品测定 结果见表1。 2.2 3种基质对不同病理样本的测定 分别用A、B、C3种基质按上述条件对57例疾病患者测定SChE活力,结果见表2。 — 9 4 —Chin J Lab Diagn,April,2007,V ol11,N o.4
2020年护考试题及答案解析第六节 有机磷中毒病人的护理
2020年第六节有机磷中毒病人的护理 一、A1 1、敌敌畏中毒的临床特征是 A、瞳孔散大 B、瞳孔正常，心率加快 C、瞳孔缩小，肺水肿 D、血压下降，心率减慢 E、四肢抽搐 2、抢救敌敌畏口服中毒者禁用的是 A、大量水催吐 B、2%碳酸氢钠溶液反复洗胃 C、对服毒超过6小时者仍应洗胃 D、洗胃后由胃管灌入液状石蜡导泻 E、肥皂水灌肠 3、口服有机磷农药中毒患者的饮食护理，错误的是 A、洗胃后需禁食24小时 B、开始进食前口服氢氧凝胶 C、从流质过渡为普食 D、给予高蛋白、高糖、高脂饮食 E、重度中毒者，清醒后24小时暂停饮水 4、有机磷农药职业性中毒的原因多是 A、误服 B、误用 C、违反操作规定 D、生产设备密闭 E、防护完善 5、急性有机磷中毒患者病情危重时给予高流量吸氧的浓度是 A、3～4L/min B、4～5L/min C、5～6L/min D、6～7L/min E、6～8L/min 6、有机磷中毒的患者，医嘱给予阿托品静脉注射，在给药后患者最可能出现 A、口干 B、血压下降 C、心率减慢 D、出汗增多 E、呼吸加快 7、对有机磷中毒患者采取的急救措施，不包括 A、早期足量使用阿托品
B、及时吸氧、吸痰 C、遵医嘱给予阿托品及胆碱酯酶复能药 D、对受污染的皮肤和头发用大量的热水擦洗 E、口服中毒者用清水反复洗胃 8、急性有机磷农药中毒患者使用胆碱酯酶复能剂的原则，正确的是 A、应该尽量地少用 B、应该尽早地使用 C、不与阿托品合用 D、只用于轻度中毒 E、只用于重度中毒 二、A2 1、患者女性，30岁，从事园林工作，给果树喷药时不慎将农药污染衣服，农药会通过接触皮肤黏膜吸收而发生中毒。嘱中毒者立即 A、现场抢救 B、脱离现场、脱去污染衣服 C、肥皂水清洗皮肤 D、用热水擦洗皮肤 E、酒精清洗皮肤 2、患者女性，45岁。有机磷中毒住院，表现为轻度呼吸困难、大汗、轻度障碍，步态蹒跚、肺水肿、假有惊厥、昏迷及呼吸麻痹。考虑为重度有机磷中毒。血胆碱酯酶活性是 A、血胆碱酯酶活性70％～50％ B、血胆碱酯酶活性50％～30％ C、血胆碱酯酶活性60％～35％ D、血胆碱酯酶活性<35％ E、血胆碱酯酶活性<30％ 3、患者女性，24岁，因与朋友生气后自服敌敌畏50ml，出现头晕、头痛、多汗、流涎、恶心、呕吐、腹痛、腹泻、瞳孔缩小、视力模糊等症状。有机磷农药口服中毒，出现症状的时间是 A、可在10分钟至1小时内 B、可在10分钟至2小时内 C、可在10分钟至3小时内 D、可在10分钟至4小时内 E、可在10分钟至5小时内 4、患者女性，24岁。因与朋友生气后自服敌敌畏150ml，因未被及时发现，约近2个小时才送医院。来急诊科时，患者出现肺水肿、惊厥、昏迷等严重症状，导致抢救无效死亡。有机磷中毒的死亡原因是 A、肺部感染 B、脑水肿 C、中间综合征 D、心脏骤停 E、呼吸衰竭
不同酶源乙酰胆碱酯酶的抑制剂筛选
· 27 · 刘佳莉1，2 ?苑玉和1?陈乃宏1 1. 天然药物活性物质与功能国家重点实验室，中国医学科学院北京协和医学院药物研究所，北京，100050，中国 2. 天津中医药大学，天津，300193，中国 【摘要】 目的：建立一种可靠、快速、便捷、经济的乙酰胆碱酯酶（acetylcholinesterase ，AChE ）抑制剂的筛选方法，为新药发现阶段AChE 抑制剂的筛选提供经济可靠的微量筛选方法，然后对植物提取物样品进行筛选。方法：分别采用电鳗AChE 、人源红细胞AChE 、大鼠海马区、纹状体匀浆液中的AChE 为酶源。以96孔板为载体，利用优化的Ellman 方法，在生理pH 值和温度的条件下，以他克林和石杉碱甲作为阳性对照，检测对不同酶源AChE 的抑制作用，确定最佳酶反应条件（最佳底物浓度、反应时间、显色剂浓度），并对植物提取物样品的AChE 抑制作用进行检测。结果：采用上述四种酶源的AChE 进行AChE 抑制剂微量筛选方法操作简便快速、可靠经济。其中应用电鳗AChE 进行筛选显示灵敏度较高，他克林和石杉碱甲对电鳗AChE 的抑制作用相当，而对人源红细胞AChE 、大鼠海马区、纹状体匀浆酶源的抑制作用，石杉碱甲明显优于他克林，所筛选植物提取物对AChE 均没有抑制作用。结论：本实验中所建立的筛选方法操作简便、快速、可靠经济，可用于纯化合物的筛选。【关键词】 乙酰胆碱酯酶；石杉碱甲；他克林；阿尔茨海默病 【中图分类号】 R965.1 【文献标识码】 A 文章编号：2095-1396（2011）03-0027-004 Comparative Study on Screening Acetylcholinesterase Inhibitors from Different Enzyme Sources LIU Jia -li 1，2 ，YUAN Yu -he 1，CHEN Nai -hong 1 1. S tate Key Laboratory of Bioactive Substance and Function of Natural Medicines ，Institute of Materia Medica ，Chinese Academy of Medical Science and Peking Union Medical College ，Beijing ，100050，China 2. Tianjin University of Traditional Chinese Medicine ，Tianjin ，300193，China 【ABSTRACT 】 Objective ：To establish a reliable ，fast ，convenient and economical method of screening acetylcholinesterase inhibitors ，and use it to screen acetylcholinesterase inhibitors from extracts of plants. Methods ：Using the optimized Ellman method ，we examined the inhibition effects of tacrine and huperzine on acetylcholinesterase enzyme from electric eel ，human erythro-cyte ，rat hippocampus ，striatum homogenate in 96-well plates under physiological pH value and temperature. The concentration of AChE ，substrate and DTNB ，and reaction time were optimized. We also detected the inhibition effect of plant extracts on AChE. Results ：Practical microassays for screening AChE inhibitors were successfully established by using AChEs mentioned above. 不同酶源乙酰胆碱酯酶的抑制剂筛选方法比较 基金项目： 国家自然科学基金项目（No.U832008，30973887，81073078，81102831，90713045，81072541），科技部项目（No.2010DFB32900）， 国家科技重大专项（No.2012ZX09301002-004） 作者简介：刘佳莉，女，硕士生；研究方向：神经药理学和神经生物学；Tel/Fax：+86-10-63165182，E -mail：liujialiyx@https://www.360docs.net/doc/0b8099921.html, 通讯作者：?陈乃宏，男，研究员，博士生导师；研究方向：神经系统疾患创新药物开发及作用机制；Tel/Fax：+86-10-63165177，E -mail： chennh@https://www.360docs.net/doc/0b8099921.html,