8药品生物检定技术_课件
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药品生物检定的基础知识 微生物生长现象及常见控制菌的生长特(药品生物检定技术课件)
由于大肠埃希菌各菌株间的GUD的活性不 完全相同，对底物和底物的浓度反应的差 异；培养基中选择因子的影响；培养温度 ；pH的改变；大量竞争菌和样品本身物质 成分的试品的MUG试验管、阳性对照管、阴性 对照管同时在366nm紫外灯下观察，阳性对 照管应有较强蓝白色荧光，阴性对照管无荧 光。供试品MUG管是否有荧光，应仔细观察 比较，或将各管调换位置（阴性管居中）， 适当倾斜试管。如阳性对照管荧光强烈，影 响供试品管与阴性对照管的观察时，亦可移 去阳性对照管
2 对照用菌液
菌种为大肠杆菌［ＣＭＣＣ（Ｂ）44102］ 对照菌液加入量含菌50～100cfu（一般用量 为0.1ml）
制作方法：营养琼脂斜面培养物少许，接种至5ml 营养肉汤培养基内，36±1℃培养18～24h后，用 0.9％无菌氯化钠溶液稀释至1：106
其用途：
做阳性对照 检查培养基灵敏度
3 操作步骤
1.1 药物对沙门菌的影响
此外，由于药品在生产过程中，常受到加热、 干燥等加工步骤的影响，药品中污染的沙门菌 可受到损伤或呈休眠状态，故须在增菌培养前 先进行预增菌。然后再进行增菌及分离、三糖 铁琼脂初步鉴别、生化试验、血清学试验等步 骤。其他控制菌也可能存在相同状况
2 对照用菌液
乙型副伤寒沙门菌〔CMCC(B)50094〕的营养琼 脂 斜面培养物少许，接种至5ml营养肉汤培养基内 。36±1℃培养18～24h后，用0.9%无菌氯化钠 溶液释至1：106，浓度相当于50-100个 cfu/0.1ml
配制MUG培养基时，务必校正pH值，灭 菌后pH不得过7.4，否则pH值偏高， MUG分解，本身则显荧光 分装MUG培养基的试管应挑选，试管、 蛋白胨不得显荧光
3.2.3 培养时间及干扰因素
供试品培养液接种于MUG培养基中的培养 时间，一般在4h、24h观察是否产生荧光 ，如荧光很微弱，不能准确判断时，可延 长培养至48h再观察结果
2 对照用菌液
菌种为大肠杆菌［ＣＭＣＣ（Ｂ）44102］ 对照菌液加入量含菌50～100cfu（一般用量 为0.1ml）
制作方法：营养琼脂斜面培养物少许，接种至5ml 营养肉汤培养基内，36±1℃培养18～24h后，用 0.9％无菌氯化钠溶液稀释至1：106
其用途：
做阳性对照 检查培养基灵敏度
3 操作步骤
1.1 药物对沙门菌的影响
此外，由于药品在生产过程中，常受到加热、 干燥等加工步骤的影响，药品中污染的沙门菌 可受到损伤或呈休眠状态，故须在增菌培养前 先进行预增菌。然后再进行增菌及分离、三糖 铁琼脂初步鉴别、生化试验、血清学试验等步 骤。其他控制菌也可能存在相同状况
2 对照用菌液
乙型副伤寒沙门菌〔CMCC(B)50094〕的营养琼 脂 斜面培养物少许，接种至5ml营养肉汤培养基内 。36±1℃培养18～24h后，用0.9%无菌氯化钠 溶液释至1：106，浓度相当于50-100个 cfu/0.1ml
配制MUG培养基时，务必校正pH值，灭 菌后pH不得过7.4，否则pH值偏高， MUG分解，本身则显荧光 分装MUG培养基的试管应挑选，试管、 蛋白胨不得显荧光
3.2.3 培养时间及干扰因素
供试品培养液接种于MUG培养基中的培养 时间，一般在4h、24h观察是否产生荧光 ，如荧光很微弱，不能准确判断时，可延 长培养至48h再观察结果
药品生物检定的基础知识 染色技术(药品生物检定技术课件)
革兰氏染色 放大倍数_×__ 菌种______
Gram Stain of Staphylococcus aureus
Gram Stain of Escherichia coli
A Gram Stain of a Mixture of Gram-Positive and Gram-Negative Bacteria.
芽孢染色
方法一
1、制备菌液：加1-2滴蒸馏水于试管中，从斜面挑取2-3环的 菌苔于试管中并充分打匀，制成浓稠的菌液。 2、加染色液：加5%孔雀绿2-3滴于试管中用接种环搅拌，使 其充分混合。 3、加热：将此试管浸于沸水浴中，加热15-20分钟。 4、涂片：从试管底部挑菌液于洁净的玻片上，涂成薄膜，晾 干。 5、固定：将涂片通过微火3次。 6、脱色：水洗，直到流出的水中无绿色为止。 7、复染：加番红染色2-3分钟后，倾去染色液，不用水洗，直 接用吸水纸吸去余水，于酒精灯火焰上烘干。 8、镜检：用油镜观察绘图。
方法二
1、 涂片、干燥及固定 2、加温染色：加5%孔雀绿染色液于玻片上，微火加 热至冒蒸汽维持5分钟。 3、水洗 将玻片冷却，水洗直到流出的水中无绿色为 止。 4、常温复染：加番红染色2分钟后，倾去染色液，水 洗，直接用吸水纸吸去余水。 8、镜检：用油镜观察绘图。
五、实验结果
记录所观察到的两种菌的革兰氏染色结果(说明各 菌的形状、颜色和革兰氏染色反应等）并绘图； 记录枯草杆菌芽孢染色结果，并判断是阳性还是 阴性，绘图。
含量较高
革兰氏染色的意义
细菌分类鉴定 指导临床用药
微生物分类鉴定的特征
❖ 形态学和生理生化特征 ❖ 血清学实验和噬菌体分型 ❖ 氨基酸序列和蛋白质分析 ❖ 核酸碱基组成和序列分析
形态学特征
Gram Stain of Staphylococcus aureus
Gram Stain of Escherichia coli
A Gram Stain of a Mixture of Gram-Positive and Gram-Negative Bacteria.
芽孢染色
方法一
1、制备菌液：加1-2滴蒸馏水于试管中，从斜面挑取2-3环的 菌苔于试管中并充分打匀，制成浓稠的菌液。 2、加染色液：加5%孔雀绿2-3滴于试管中用接种环搅拌，使 其充分混合。 3、加热：将此试管浸于沸水浴中，加热15-20分钟。 4、涂片：从试管底部挑菌液于洁净的玻片上，涂成薄膜，晾 干。 5、固定：将涂片通过微火3次。 6、脱色：水洗，直到流出的水中无绿色为止。 7、复染：加番红染色2-3分钟后，倾去染色液，不用水洗，直 接用吸水纸吸去余水，于酒精灯火焰上烘干。 8、镜检：用油镜观察绘图。
方法二
1、 涂片、干燥及固定 2、加温染色：加5%孔雀绿染色液于玻片上，微火加 热至冒蒸汽维持5分钟。 3、水洗 将玻片冷却，水洗直到流出的水中无绿色为 止。 4、常温复染：加番红染色2分钟后，倾去染色液，水 洗，直接用吸水纸吸去余水。 8、镜检：用油镜观察绘图。
五、实验结果
记录所观察到的两种菌的革兰氏染色结果(说明各 菌的形状、颜色和革兰氏染色反应等）并绘图； 记录枯草杆菌芽孢染色结果，并判断是阳性还是 阴性，绘图。
含量较高
革兰氏染色的意义
细菌分类鉴定 指导临床用药
微生物分类鉴定的特征
❖ 形态学和生理生化特征 ❖ 血清学实验和噬菌体分型 ❖ 氨基酸序列和蛋白质分析 ❖ 核酸碱基组成和序列分析
形态学特征
药品生物检定的基础知识 洁净区的微生物检查(药品生物检定技术课件)
微生物生长繁殖的控制—防腐
使用同一种化学药品在低浓度时常为防腐剂， 在高浓度时为消毒剂。防腐作为一种防止或抑 制细菌生长繁殖的方法，在药品生产中得到广 泛应用。例如，非无菌药品处方中添加防腐剂。 防腐剂与消毒剂在本质上没有区别，只是浓度 不同而已。有时统称为消毒（防腐）剂。
微生物生长繁殖的控制—消毒
第三部分 药品生产中的微生物生态学分布
微生物生长繁殖的速度是十分惊人的，生态分 布是十分广泛的，这里有一组数字，可以给参 与药品生产的人们一个启迪：
每克新鲜植物叶子表面附生着大约100万个 微生物。
药品生产中的微生物生态学分布
人的皮肤上平均每平方厘米含有10万个细菌，而且 繁殖速度惊人，刚洗过的皮肤，在几小时之内细菌 就可恢复到原来的数量。人的肠道内聚集有100万 亿左右的微生物，粪便中细菌大约占粪便干重的 1/3。这就告诉人们，为什么要便后洗手，而无菌 药品车间的操作工为什么不能裸手操作。
2、制药用水中的微生物
水中的微生物种类较多见的有：假单胞菌属、产碱杆 菌属、产黄菌属、产色细菌属和沙雷菌属等。
在饮用水标准中，大肠杆菌（又称大肠埃希菌）的含 量是判断饮用水水质污染程度的指标。
大肠埃希菌 2-3 μm
2、制药用水中的微生物
垃圾和工业废液污染的水源中约98%含有革兰 阴性细菌、微球菌属、噬细胞菌属，此外还有 酵母菌、类酵母菌和放线菌。
4、人体的微生物和微粒
人体不同部位所带细菌数量
部位
细菌数量
手部
100-1000/c㎡
前额
1000-100000/c㎡
头皮
约100万/c㎡
腋窝
约1000万/c㎡
鼻腔分泌物
约1000万/g
唾液
药品生物检定技术
1.检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内 进行。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。 2.单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬 浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。 3.供试品检查时，如果使用了表面活性剂、中和剂或灭活剂，应证明其有 效性及对微生物无毒性。 4.细菌培养温度为30～35℃；霉菌、酵母菌培养温度为23～28℃；控制菌 培养温度为35～37℃。 5.检验结果以1g、1ml、10g、10ml或10cm2为单位报告，特殊品种可以最 小包装单位报告。
二、样品供试液的制备
《中国药典》现行版附录中提供了液体供试品、固体 、半固体或黏稠性供试品以及需用特殊方法制备供试 液的供试品的供试液制备方法。 需用特殊方法制备供试液的供试品有：非水溶性供试 品、膜剂供试品、肠溶及结肠溶制剂供试品、气雾剂 、喷雾剂供试品及具抑菌活性的供试品。
无菌检查法 系用于检查药典要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及 其他品种是否无菌的一种方法。 将药品或材料，在严格的无菌操作条件下，接种于适合各种 微生物生长的不同培养基中，置于不同的适宜温度下培养一 定的时间，逐日观察微生物的生长情况，并结合阳性和阴性 对照试验的结果，判断供试品是否无菌。 包括薄膜过滤法和直接接种法两种方法
四、无菌检查法
（二）对照试验 2.阴性对照 不得长菌，用以检查试验过程中使用的溶剂、稀释液 、冲洗液等对微生物生长及存活无影响
四、无菌检查法
（三）检查方法 1.薄膜过滤法 通过滤膜过滤，将供试品中可能存在的微生物富集于 滤膜上，再冲洗掉滤膜上的抑菌成分后，在薄膜过滤 器滤筒内加入培养基，在所需温度下培养，观察是否 有菌生长
一、常规技术要求
二、样品供试液的制备
《中国药典》现行版附录中提供了液体供试品、固体 、半固体或黏稠性供试品以及需用特殊方法制备供试 液的供试品的供试液制备方法。 需用特殊方法制备供试液的供试品有：非水溶性供试 品、膜剂供试品、肠溶及结肠溶制剂供试品、气雾剂 、喷雾剂供试品及具抑菌活性的供试品。
无菌检查法 系用于检查药典要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及 其他品种是否无菌的一种方法。 将药品或材料，在严格的无菌操作条件下，接种于适合各种 微生物生长的不同培养基中，置于不同的适宜温度下培养一 定的时间，逐日观察微生物的生长情况，并结合阳性和阴性 对照试验的结果，判断供试品是否无菌。 包括薄膜过滤法和直接接种法两种方法
四、无菌检查法
（二）对照试验 2.阴性对照 不得长菌，用以检查试验过程中使用的溶剂、稀释液 、冲洗液等对微生物生长及存活无影响
四、无菌检查法
（三）检查方法 1.薄膜过滤法 通过滤膜过滤，将供试品中可能存在的微生物富集于 滤膜上，再冲洗掉滤膜上的抑菌成分后，在薄膜过滤 器滤筒内加入培养基，在所需温度下培养，观察是否 有菌生长
一、常规技术要求
药品的生物检定法
特点
具有灵敏度高、特异性强、能够对药 品的生物活性进行检测等优点，是药 品质量控制中不可或缺的一部分。
生物检定法的应用范围
抗生素类药物
用于检测抗生素类药物的效价 ，以确保药物质量和治疗效果
。
免疫调节剂
用于检测免疫调节剂的免疫活 性，以确保药物质量和安全性 。
激素类药物
用于检测激素类药物的含量和 活性，以确保药物质量和治疗 效果。
对于有毒、有害、易燃、易 爆的药品，应严格按照规定 进行储存和使用，并配备相 应的安全设施。
对于放射性药品，应遵循国 家相关法律法规和标准，采 取特殊的安全措施和防护要 求。
实验废弃物的处理与环保要求
实验废弃物应按照国家相关法律 法规和标准进行分类、储存和处
理。
对于有毒、有害、易燃、易爆的 废弃物，应采取特殊处理措施，
可靠性检验
对实验结果进行可靠性检验，判断结果的可 靠性。
误差处理方法
采取有效措施减小误差，提高实验结果的可 靠性。
可靠性分析
根据可靠性检验结果，对实验结果的可靠性 进行分析，得出结论。
05
药品生物检定法的实验 注意事项与安全措施
实验注意事项
实验前应充分了解药品的性质 和可能的危险性，遵循安全操
作规程。
细胞检定法
细胞检定法是一种利用细胞生长增殖特 性进行药物检测的方法，主要用于肿瘤
细胞、免疫细胞等特定细胞的检测。
细胞检定法的基本原理是利用药物对特 细胞检定法的优点是能够反映药物在细
定细胞生长增殖的抑制或促进作用，通 胞水平的作用效果，具有较高的特异性。
过观察细胞的形态、数量、活性等指标， 缺点是操作复杂，需要特定的细胞培养
实验过程中应保持实验室整洁 ，避免药品交叉污染。
具有灵敏度高、特异性强、能够对药 品的生物活性进行检测等优点，是药 品质量控制中不可或缺的一部分。
生物检定法的应用范围
抗生素类药物
用于检测抗生素类药物的效价 ，以确保药物质量和治疗效果
。
免疫调节剂
用于检测免疫调节剂的免疫活 性，以确保药物质量和安全性 。
激素类药物
用于检测激素类药物的含量和 活性，以确保药物质量和治疗 效果。
对于有毒、有害、易燃、易 爆的药品，应严格按照规定 进行储存和使用，并配备相 应的安全设施。
对于放射性药品，应遵循国 家相关法律法规和标准，采 取特殊的安全措施和防护要 求。
实验废弃物的处理与环保要求
实验废弃物应按照国家相关法律 法规和标准进行分类、储存和处
理。
对于有毒、有害、易燃、易爆的 废弃物，应采取特殊处理措施，
可靠性检验
对实验结果进行可靠性检验，判断结果的可 靠性。
误差处理方法
采取有效措施减小误差，提高实验结果的可 靠性。
可靠性分析
根据可靠性检验结果，对实验结果的可靠性 进行分析，得出结论。
05
药品生物检定法的实验 注意事项与安全措施
实验注意事项
实验前应充分了解药品的性质 和可能的危险性，遵循安全操
作规程。
细胞检定法
细胞检定法是一种利用细胞生长增殖特 性进行药物检测的方法，主要用于肿瘤
细胞、免疫细胞等特定细胞的检测。
细胞检定法的基本原理是利用药物对特 细胞检定法的优点是能够反映药物在细
定细胞生长增殖的抑制或促进作用，通 胞水平的作用效果，具有较高的特异性。
过观察细胞的形态、数量、活性等指标， 缺点是操作复杂，需要特定的细胞培养
实验过程中应保持实验室整洁 ，避免药品交叉污染。
药品生物检定的基础知识 消毒灭菌技术(药品生物检定技术课件)
̶ 常用的消毒防腐剂及应用
类型 名称及使用方法
作用原理
应用范围
重 0.05%—0.1%升汞 金 2%红汞 属 0.1%—1%硝酸银 盐 0.1%—0.5%硫酸铜 类
蛋白质变性、酶失活 变性、沉淀蛋白
蛋白质变性、 酶失活
非金属器皿、体温计 皮肤、粘膜、伤口 皮肤、新生儿眼睛 防治植物病害
表 0.05%—0.1%
酸类
0.1%苯甲酸 0.1%山梨酸
作用原理 破坏细胞膜、蛋 白质
与蛋白质的羧基 结合
应用范围
饮水、游泳池 水 地面 水、空气等 皮肤 皮肤、伤口
食品防腐 食品防腐
45
二、实验器材
溶液和试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、可溶性淀粉、 KNO3、K2HPO4·3H2O、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O、 KH2PO4、葡萄糖、孟加拉红（1%的水溶液）、链霉 素（1%的水溶液）、1mol/L NaOH、1mol/L HCl。
高压灭菌锅
19
消毒与灭菌技术
(2)热力法：湿热灭菌与干热灭菌的比较
同一温度下，湿热灭菌比干热灭菌效果好 湿热中细菌菌体蛋白较易凝固 湿热的穿透力比干热大 湿热的蒸汽有潜热
消毒与灭菌技术
(2)辐射灭菌
波长240-300nm（254nm） 杀菌机理：干扰DNA的复制与转录 特点：紫外线穿透力较弱 房间静态空气消毒时剂量
蛋白质变性
房间、物品消毒（不 适合食品厂）
酚 3%—5%石炭酸
类 2%来苏儿（煤酚皂）
3%—5%来苏儿
氧 0.1%高锰酸钾 化 3%过氧化氢
剂 0.2%—0.5%过氧乙酸
43
破坏细胞膜、蛋白质变 地面、器具
性
皮肤
类型 名称及使用方法
作用原理
应用范围
重 0.05%—0.1%升汞 金 2%红汞 属 0.1%—1%硝酸银 盐 0.1%—0.5%硫酸铜 类
蛋白质变性、酶失活 变性、沉淀蛋白
蛋白质变性、 酶失活
非金属器皿、体温计 皮肤、粘膜、伤口 皮肤、新生儿眼睛 防治植物病害
表 0.05%—0.1%
酸类
0.1%苯甲酸 0.1%山梨酸
作用原理 破坏细胞膜、蛋 白质
与蛋白质的羧基 结合
应用范围
饮水、游泳池 水 地面 水、空气等 皮肤 皮肤、伤口
食品防腐 食品防腐
45
二、实验器材
溶液和试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、可溶性淀粉、 KNO3、K2HPO4·3H2O、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O、 KH2PO4、葡萄糖、孟加拉红（1%的水溶液）、链霉 素（1%的水溶液）、1mol/L NaOH、1mol/L HCl。
高压灭菌锅
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消毒与灭菌技术
(2)热力法：湿热灭菌与干热灭菌的比较
同一温度下，湿热灭菌比干热灭菌效果好 湿热中细菌菌体蛋白较易凝固 湿热的穿透力比干热大 湿热的蒸汽有潜热
消毒与灭菌技术
(2)辐射灭菌
波长240-300nm（254nm） 杀菌机理：干扰DNA的复制与转录 特点：紫外线穿透力较弱 房间静态空气消毒时剂量
蛋白质变性
房间、物品消毒（不 适合食品厂）
酚 3%—5%石炭酸
类 2%来苏儿（煤酚皂）
3%—5%来苏儿
氧 0.1%高锰酸钾 化 3%过氧化氢
剂 0.2%—0.5%过氧乙酸
43
破坏细胞膜、蛋白质变 地面、器具
性
皮肤
药物生物测定技术PPT课件
02
药物生物测定的基本原理
药物与生物体的相互作用
药物与受体相互作用
药物通过与靶点受体结合，发挥药理作用。
药物与酶相互作用
药物可能作为酶的抑制剂或激活剂，影响酶的活性。
药物与免疫系统相互作用
药物可能影响免疫细胞的活性，从而调节免疫反应。
药物代谢与排泄
药物代谢
药物在体内经过一系列代谢反应，转化为水溶性代谢物，便 于排泄。
数据处理算法复杂
药物生物测定的数据处理 算法较为复杂，需要专业 的数据处理和分析技能。
数据质量难以保证
由于实验误差和数据采集 的限制，导致数据质量难 以保证。
新药研发的高风险与高成本
研发周期长
新药研发需要经过多个阶段，包括靶点发现、药物筛选、临床试验 等阶段，每个阶段都需要耗费大量的时间和资金。
成功率低处理。源自药物的分离与纯化02
采用合适的分离与纯化技术，将目标药物从生物检材中提取出
来。
药物的定量与定性分析
03
采用化学、光谱、色谱等方法对目标药物进行定量与定性分析，
以确定药物浓度或存在状态。
03
药物生物测定的实验技术
细胞培养技术
细胞培养技术
细胞培养技术的应用
通过在无菌条件下，将动物或人体内的组 织取出，放在模拟体内生理环境的培养液 中培养，以观察药物对细胞的作用。
药物相互作用研究
01
药物配伍禁忌研究
通过生物测定技术评估不同药物间的相互作用及其对疗效和安全性的影
响。
02
药物代谢酶活性测定
测定药物对药物代谢酶活性的影响，预测新药与其他药物的相互作用风
险。
03
药物受体拮抗与激动作用研究
利用生物测定技术评估新药与其他药物的相互作用及其对治疗效果的影
《生物检定法》课件
讨论等内容，并遵循学术规范和格式要求。
报告撰写
对实验过程中可能产生的误差进行分析，包括操作误 差、测量误差等。通过误差分析，提高实验的准确性 和可靠性。
04
生物检定法的应用实例
在药物研究中的应用
药物筛选
生物检定法可用于筛选具有特定 生物活性的药物候选物，通过检 测其与靶点的相互作用或对细胞 功能的调控作用，评估其潜在的
生物检定法通常涉及使用动物模型或离体组织，通过测量药物引起的生理变化来评 估其作用强度和效果。
生物检定法的分类
根据实验对象的不同，生物检定法可以分为离体实验和整体 实验两大类。离体实验是指在体外进行的实验，如离体器官 、组织或细胞培养等；整体实验则是指动物整体或人体实验 。
根据实验目的的不同，生物检定法可以分为药效学检定和药 代动力学检定两大类。药效学检定主要关注药物对生物体的 作用效果和机制，而药代动力学检定则关注药物在体内的吸 收、分布、代谢和排泄过程。
在环境监测中的应用
环境污染物的检测
生物检定法可用于环境监测中，检测 水体、土壤、空气等介质中的有毒有 害物质，如重金属、有机污染物等。
生态毒理学研究
生物检定法可用于生态毒理学研究， 通过观察生物体对环境污染物的反应 ，了解环境污染对生态系统的长期影 响。
05
生物检定法的未来发展
生物检定法的发展趋势
实验结果分析
对实验数据进行整理和分析，包括统计处理、图表制 作等，以便更好地展示和解释数据。
输入 标题
结果解读
根据实验目的和预期结果，对实验数据进行解读。比 较实际结果与预期结果的差异，分析原因并提出结论 。
数据整理
误差分析
根据实验目的、操作过程和结果分析，撰写详细的实 验报告。报告应包括实验目的、材料与方法、结果与
报告撰写
对实验过程中可能产生的误差进行分析，包括操作误 差、测量误差等。通过误差分析，提高实验的准确性 和可靠性。
04
生物检定法的应用实例
在药物研究中的应用
药物筛选
生物检定法可用于筛选具有特定 生物活性的药物候选物，通过检 测其与靶点的相互作用或对细胞 功能的调控作用，评估其潜在的
生物检定法通常涉及使用动物模型或离体组织，通过测量药物引起的生理变化来评 估其作用强度和效果。
生物检定法的分类
根据实验对象的不同，生物检定法可以分为离体实验和整体 实验两大类。离体实验是指在体外进行的实验，如离体器官 、组织或细胞培养等；整体实验则是指动物整体或人体实验 。
根据实验目的的不同，生物检定法可以分为药效学检定和药 代动力学检定两大类。药效学检定主要关注药物对生物体的 作用效果和机制，而药代动力学检定则关注药物在体内的吸 收、分布、代谢和排泄过程。
在环境监测中的应用
环境污染物的检测
生物检定法可用于环境监测中，检测 水体、土壤、空气等介质中的有毒有 害物质，如重金属、有机污染物等。
生态毒理学研究
生物检定法可用于生态毒理学研究， 通过观察生物体对环境污染物的反应 ，了解环境污染对生态系统的长期影 响。
05
生物检定法的未来发展
生物检定法的发展趋势
实验结果分析
对实验数据进行整理和分析，包括统计处理、图表制 作等，以便更好地展示和解释数据。
输入 标题
结果解读
根据实验目的和预期结果，对实验数据进行解读。比 较实际结果与预期结果的差异，分析原因并提出结论 。
数据整理
误差分析
根据实验目的、操作过程和结果分析，撰写详细的实 验报告。报告应包括实验目的、材料与方法、结果与
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全国高职高专药品类专业第二轮规划教材 —《药物分析》
第八章 药品生物检定技术简介
药品生物检定技术是指利用生，来测定生物药品的效价、检查药品 中的有害物质以及对制剂进行微生物限度或无 菌检查的技术方法
Page ▪ 2
无菌检查 微生物限度检查 抗生素效价的微生物检定法 生化药物效价的生物测定法 药品的安全性检查
方法：薄膜过滤法、直接接种法
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四、无菌检查法
（一）检验数量及检验量 《中国药典》现行版附录 批出厂产品最小检验数量表 液体制剂最小检验量及上市抽验样品的最少检验数 量表 固体制剂最少检验量及上市抽验样品的最少检验数 量表
Page ▪ 12
四、无菌检查法
（二）对照试验 1.阳性对照
Page ▪ 17
第二节 微生物限度检查
Page ▪ 18
微生物限度检查法 系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受到 微生物污染程度的方法，检查项目包括细 菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。 微生物限度检查成为非规定灭菌制剂保证药 品质量的重要检查内容，也是综合评价药 品生产各环节卫生状况的一个依据。
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四、无菌检查法
（三）检查方法 2.直接接种法 3.培养及观察 将含培养基的容器在规定的温度培养14天，逐日观察 并记录是否有菌生长。必要时可转种及涂片
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五、无菌检查结果判断
（三）检查方法
1.阳性对照管应生长良好，阴性对照管 不得有菌生长。否则，试验无效。 2.若供试品管显澄清，或虽显浑浊但经 确证无菌生长，判供试品符合规定。 3.若供试品管中任何一管显浑浊并确证 有菌生长，判供试品不符合规定，除非 能充分证明试验结果无效，即生长的微 生物非供试品所含。 4.试验若经确认无效，需依法重试。
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一、常规技术要求
1.应在环境洁净度10000级以下的局部洁净度100级的单向流空 气区域内或隔离系统中进行检查。
2.全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染。 3.单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室
（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家 标准进行洁净度验证。
必须长菌，用以证明微生物确实可在应用的试验条件下生长 • 根据供试品特性选择阳性对照菌 • 无抑菌作用和抗革兰阳性菌为主的供试品，以金黄色葡萄 球菌为对照菌 • 抗革兰阴性菌为主的供试品，以大肠埃希菌为对照菌 • 抗厌氧菌的供试品，以生孢梭菌为对照菌 • 抗真菌的供试品，以白色念珠菌为对照菌 • 阳性对照管培养48～72小时应生长良好
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一、常规技术要求及检验量
（一）技术要求
1.检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内 进行。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。 2.单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬 浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。 3.供试品检查时，如果使用了表面活性剂、中和剂或灭活剂，应证明其有 效性及对微生物无毒性。 4.细菌培养温度为30～35℃；霉菌、酵母菌培养温度为23～28℃；控制菌 培养温度为35～37℃。 5.检验结果以1g、1ml、10g、10ml或10cm2为单位报告，特殊品种可以最 小包装单位报告。
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二、样品供试液的制备
《中国药典》现行版附录中提供了液体供试品、固体 、半固体或黏稠性供试品以及需用特殊方法制备供试 液的供试品的供试液制备方法。 需用特殊方法制备供试液的供试品有：非水溶性供试 品、膜剂供试品、肠溶及结肠溶制剂供试品、气雾剂 、喷雾剂供试品及具抑菌活性的供试品。
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第一节 无菌检查
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概述
无菌检查法 系用于检查药典要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及 其他品种是否无菌的一种方法。 将药品或材料，在严格的无菌操作条件下，接种于适合各种 微生物生长的不同培养基中，置于不同的适宜温度下培养一 定的时间，逐日观察微生物的生长情况，并结合阳性和阴性 对照试验的结果，判断供试品是否无菌。 包括薄膜过滤法和直接接种法两种方法
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一、常规技术要求及检验量
（二）检验量
一次试验所用的供试品量(g、ml或cm2)。除另有规定外，一般 供试品的检验量为10g或10ml；膜剂为100cm2；贵重药品、微 量包装药品的检验量可以酌减。要求检查沙门菌的供试品， 其检验量应增加 20g或20ml。 检验时，应从2个以上最小包装单位中抽取供试品，膜剂还不 得少于4片。一般应随机抽取不少于检验用量（两个以上最小 包装单位）的3倍量供试品。
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二、培养基
（二）培养基的适用性检查
适用性检查的菌种：
金黄色葡萄球菌
铜绿假单胞菌
枯草芽孢杆菌
生孢梭菌
白色念珠菌
黑曲霉
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图片取自青岛海博生物技术有限公司
三、方法验证试验
建立产品的无菌检查法时，应进行方法的验证 证明所采用的方法适合于该产品的无菌检查
–排除供试品是否具有抑细菌和抑真菌作用 –避免假阴性结果
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四、无菌检查法
（二）对照试验 2.阴性对照 不得长菌，用以检查试验过程中使用的溶剂、稀释液 、冲洗液等对微生物生长及存活无影响
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四、无菌检查法
（三）检查方法 1.薄膜过滤法 通过滤膜过滤，将供试品中可能存在的微生物富集于 滤膜上，再冲洗掉滤膜上的抑菌成分后，在薄膜过滤 器滤筒内加入培养基，在所需温度下培养，观察是否 有菌生长
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二、培养基
（二）培养基的适用性检查
2.灵敏度检查 灵敏度检查
方法：取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基9支，分别接种 小于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、 生孢梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照，培养3天；取每管装 量为9ml的改良马丁培养基5支，分别接种小于100cfu的白色念珠 菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照，培养5天。逐日观 察结果。 结果判断：空白对照管无菌生长，加菌培养基管均生长良好，判 该培养基的灵敏度检查符合规定
第八章 药品生物检定技术简介
药品生物检定技术是指利用生，来测定生物药品的效价、检查药品 中的有害物质以及对制剂进行微生物限度或无 菌检查的技术方法
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无菌检查 微生物限度检查 抗生素效价的微生物检定法 生化药物效价的生物测定法 药品的安全性检查
方法：薄膜过滤法、直接接种法
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四、无菌检查法
（一）检验数量及检验量 《中国药典》现行版附录 批出厂产品最小检验数量表 液体制剂最小检验量及上市抽验样品的最少检验数 量表 固体制剂最少检验量及上市抽验样品的最少检验数 量表
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四、无菌检查法
（二）对照试验 1.阳性对照
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第二节 微生物限度检查
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微生物限度检查法 系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受到 微生物污染程度的方法，检查项目包括细 菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。 微生物限度检查成为非规定灭菌制剂保证药 品质量的重要检查内容，也是综合评价药 品生产各环节卫生状况的一个依据。
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四、无菌检查法
（三）检查方法 2.直接接种法 3.培养及观察 将含培养基的容器在规定的温度培养14天，逐日观察 并记录是否有菌生长。必要时可转种及涂片
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五、无菌检查结果判断
（三）检查方法
1.阳性对照管应生长良好，阴性对照管 不得有菌生长。否则，试验无效。 2.若供试品管显澄清，或虽显浑浊但经 确证无菌生长，判供试品符合规定。 3.若供试品管中任何一管显浑浊并确证 有菌生长，判供试品不符合规定，除非 能充分证明试验结果无效，即生长的微 生物非供试品所含。 4.试验若经确认无效，需依法重试。
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一、常规技术要求
1.应在环境洁净度10000级以下的局部洁净度100级的单向流空 气区域内或隔离系统中进行检查。
2.全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染。 3.单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室
（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家 标准进行洁净度验证。
必须长菌，用以证明微生物确实可在应用的试验条件下生长 • 根据供试品特性选择阳性对照菌 • 无抑菌作用和抗革兰阳性菌为主的供试品，以金黄色葡萄 球菌为对照菌 • 抗革兰阴性菌为主的供试品，以大肠埃希菌为对照菌 • 抗厌氧菌的供试品，以生孢梭菌为对照菌 • 抗真菌的供试品，以白色念珠菌为对照菌 • 阳性对照管培养48～72小时应生长良好
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一、常规技术要求及检验量
（一）技术要求
1.检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内 进行。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。 2.单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬 浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。 3.供试品检查时，如果使用了表面活性剂、中和剂或灭活剂，应证明其有 效性及对微生物无毒性。 4.细菌培养温度为30～35℃；霉菌、酵母菌培养温度为23～28℃；控制菌 培养温度为35～37℃。 5.检验结果以1g、1ml、10g、10ml或10cm2为单位报告，特殊品种可以最 小包装单位报告。
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二、样品供试液的制备
《中国药典》现行版附录中提供了液体供试品、固体 、半固体或黏稠性供试品以及需用特殊方法制备供试 液的供试品的供试液制备方法。 需用特殊方法制备供试液的供试品有：非水溶性供试 品、膜剂供试品、肠溶及结肠溶制剂供试品、气雾剂 、喷雾剂供试品及具抑菌活性的供试品。
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第一节 无菌检查
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概述
无菌检查法 系用于检查药典要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及 其他品种是否无菌的一种方法。 将药品或材料，在严格的无菌操作条件下，接种于适合各种 微生物生长的不同培养基中，置于不同的适宜温度下培养一 定的时间，逐日观察微生物的生长情况，并结合阳性和阴性 对照试验的结果，判断供试品是否无菌。 包括薄膜过滤法和直接接种法两种方法
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一、常规技术要求及检验量
（二）检验量
一次试验所用的供试品量(g、ml或cm2)。除另有规定外，一般 供试品的检验量为10g或10ml；膜剂为100cm2；贵重药品、微 量包装药品的检验量可以酌减。要求检查沙门菌的供试品， 其检验量应增加 20g或20ml。 检验时，应从2个以上最小包装单位中抽取供试品，膜剂还不 得少于4片。一般应随机抽取不少于检验用量（两个以上最小 包装单位）的3倍量供试品。
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二、培养基
（二）培养基的适用性检查
适用性检查的菌种：
金黄色葡萄球菌
铜绿假单胞菌
枯草芽孢杆菌
生孢梭菌
白色念珠菌
黑曲霉
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图片取自青岛海博生物技术有限公司
三、方法验证试验
建立产品的无菌检查法时，应进行方法的验证 证明所采用的方法适合于该产品的无菌检查
–排除供试品是否具有抑细菌和抑真菌作用 –避免假阴性结果
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四、无菌检查法
（二）对照试验 2.阴性对照 不得长菌，用以检查试验过程中使用的溶剂、稀释液 、冲洗液等对微生物生长及存活无影响
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四、无菌检查法
（三）检查方法 1.薄膜过滤法 通过滤膜过滤，将供试品中可能存在的微生物富集于 滤膜上，再冲洗掉滤膜上的抑菌成分后，在薄膜过滤 器滤筒内加入培养基，在所需温度下培养，观察是否 有菌生长
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二、培养基
（二）培养基的适用性检查
2.灵敏度检查 灵敏度检查
方法：取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基9支，分别接种 小于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、 生孢梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照，培养3天；取每管装 量为9ml的改良马丁培养基5支，分别接种小于100cfu的白色念珠 菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照，培养5天。逐日观 察结果。 结果判断：空白对照管无菌生长，加菌培养基管均生长良好，判 该培养基的灵敏度检查符合规定