储良龙眼果实发育的Logistic生长曲线方程

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储良龙眼结果树环剥保果效果试验初探

储良龙眼结果树环剥保果效果试验初探作者：金华春叶理清来源：《南方农业·中旬》2018年第10期摘要龙眼产业是化州市农村经济的重要支柱，是部分农民经济收入的重要来源。

在常规栽培条件下，除了树体养分积累外，还需要适度的低温和干旱的气候条件下才能进行花芽分化。

为了调节树体养分积累，促进花芽分化，提高产量，笔者进行了3年的螺旋环剥保果试验。

结果表明：通过环剥促进营养集中在树枝、芽上积累，促进花芽形成，提高花质，减少落花落果，从而达到高产稳产的目的。

关键词龙眼；螺旋环剥；养分积累；花芽分化中图分类号：S667.2 文獻标志码：B DOI：10.19415/ki.1673-890x.2018.29.018龙眼是化州市的主要水果之一，储良龙眼是化州市水果生产上主要优稀品种。

为探讨储良龙眼高产栽培技术，开展了环剥在储良龙眼结果树上的试验效果。

2010—2012年，在官桥镇丰村村委会径口村陈金全果场进行了螺旋环剥保果试验。

储良龙眼末次秋梢10月上旬抽，10月中旬进行螺旋环剥，可连年抽穗挂果，提早上市。

储良龙眼螺旋环剥保果试验结果报告如下。

1 试验方法1.1 螺旋环剥10月20日，末次秋梢长5～8 cm时，使用3 mm螺旋环剥刀在储良龙眼树主干离地面上20 cm进行螺旋环剥树主干1.3圈，螺旋环剥刀路交界之间距离大于树主干直径3 cm。

然后遇持续阴天气，螺旋环剥口吻合，进行原口复剥。

临近30 d见红点不宜原口复剥。

1.2 试验设计设螺旋环剥、空白对照2个处理，每处理3次重复，共6个小区，每小区5棵，共30棵，各处理小区随机排列。

1.3 使用促花剂11月30日，喷施花果灵50 g兑水30 kg，用工农16型背负式喷雾器喷至梢叶面湿润，不宜重喷。

提早抽穗。

1.4 施肥抽穗12月10日，每棵储良龙眼树产果30 kg，施过磷酸钙1 kg、氯化钾1 kg、尿素0.25 kg、硫酸镁0.1 kg、硼砂0.05 kg、农家肥15 kg混合。

储良龙眼果实发育的Logistic生长曲线方程

-
x
)
2
,
S S y′= ∑
-
-
-
( y′- y′) 2 , S Px y′= ∑( x - x ) ( y - y′)
(4) 计算 x 和 y′的相关系数 ry′x : ry′x = S Px y′/ S S x S S y′,根据 ry′x判断 x 和 y′的直线关系是否显著 , 判断表 1 的果实生长发育资料配合 Logistic 生长曲线
(7) 绘 Logistic 生长曲线 : 将表 1 中的 x 值代入 Logistic 方程 ,得到相应的 y 值 ,并绘出曲线图。
2 结果与分析
2. 1 果实发育过程在广州 ,储良龙眼谢花期为 4 月中下旬。果皮首
先增厚生长 , 果实发育 5 周时 , 增至最厚 , 平均厚度达 1. 58 mm ; 之后 , 果皮慢慢变薄 , 果实发育 16 周采收时 ,平均厚度为 0. 87 mm 。谢花后即可见胚珠 , 种皮迅速增厚 ; 果实发育 4 周时 , 种腔内可见液状物 ; 果实发育 7 周时 , 固体胚开始形成 ; 果实发育 9 周时 ,
由表 2 可知 ,当果实生长量 y 分别以累计鲜重、干重、纵径、横径表示时 , 果实发育时间 x 与数据转换后的 y′的相关系数分别为 - 0. 9971 、- 0. 9967 、 - 0. 9962 、- 0. 9992 , 均接近 - 1 , 说明这 4 组 x 与 y′ 的直线关系是极显著的 , 用表 1 的数据资料配合表 2 的 Logistic 生长曲线方程是适合的 , 以累计鲜重、干重、纵径、横径表示的储良龙眼生长型均为单 S 型。生产上可以据此公式 , 通过发育时间估算储良龙眼的果实发育。当果实发育时间无限延长时 , 储良龙眼果实累计鲜重、干重、纵径、横径的生长终极量分别为

两个品种龙眼果汁芳香及营养成分测定与分析

用等方法对两个龙眼品种储良和石硖的果汁芳香成分及氨基酸、单糖和
总糖进行测定及分析。结果表明：虽然储良和石硖果汁的芳香成分均主要为萜烯类、醇类、酯类等，并且两者都富含
一
氨基丁酸和糖，但利用电子鼻能很好地区分这两个龙眼品种。
关键词：龙眼，电子鼻，芳香成分，营养成分，检测
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎａｎｄａｎａｌｙｓｉｓｏｆａｒｏｍａａｎｄｎｕｔｒｉｅｎｔｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ
２．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｙ，ｇＨｕａｚｈｏｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｈａｎ４３００７０，Ｃｈｉｎａ）
中图分类号：ＴＳ２５５．１
文献标识码：Ａ
文章编号：１００２ — ０３０６（２０１７）１６ — ０２６３ — ０５
ｄｏｉ：１０．１３３８６／ｊ．ｉｓｓｎｌ００２— ０３０６．２０１７．１６．０５０
分析检测
Ｖ
食品，盐斜技
ｏ１．３８，．Ｎｂ．１６，２０１７
两个品种龙眼果汁芳香
及营养成分测定与分析

龙眼果实发育过程中内源多胺含量的变化

相对落果率／％
２０
热带作物学报
２７卷
２．１．３石硖龙眼的落果动态从图２可以看出，
在果实生长发育全过程，石硖龙眼总体上存在３次
相对大量的生理落果，分别是花后５￣２５ｄ，６５￣７５ｄ
鲜、干重／ｇ
和９５ｄ。其中以第１次生理落果最多，占总落果
ＲＡＲ＝（Ｘｔ－Ｘｔ－１）（／Ｘｔ－１×ｄ）
陈杰忠男，１９５８年生，教授，博士生导师。研究方向：果树生理与栽培。Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｊｚｌｘｂ＠１６３．ｃｏｍ＊通讯作者收稿日期：２００５－０１－３１修回日期：２００６－０５－１５
２期
陈杰忠等：龙眼果实发育过程中内源多胺含量的变化
１９
Ｘｔ和Ｘｔ－１分别为每个时期及上一时期的存留果数，ｄ为２次统计之间相隔的天数。果实解剖与观察：同时在以上树上取果实５个，并对各部分组织进行解剖、观察和记录，手绘简单的果实纵切解剖图。１．２．３可溶性总糖的测定参照文献［８］，用３，５— 二硝基水杨酸比色定糖法（ＤＮＳ）测定可溶性总糖的含量（％）。１．２．４可溶性蛋白质的测定用考马斯亮蓝Ｇ２５０染色法测定可溶性蛋白质含量（ｍｇ／ｇ，ＦＷ）。１．２．５多胺含量的测定ＰＡｓ的提取参照文献［９］的方法。分别称取０．５０ｇ果皮、种子，１．００ｇ果肉，用５ｍＬ预冷的５％（ｖ：ｖ）高氯酸（ＨＣｌＯ４）在冰浴中研磨成匀浆，冰浴中浸提１ｈ，低温下（０￣４ ℃）１６０００ｒ／ｍｉｎ离心２０ｍｉｎ，收集上清液用于ＰＡｓ的测定。取ＰＡｓ的上清液１ｍＬ，加入１．０ｍｏｌ／Ｌ的ＮａＯＨ，１０ μＬ苯甲酰氯，旋涡振荡２０ｓ后置室温下保温３０ｍｉｎ，然后加入２．０ｍＬ饱和ＮａＣｌ，２．０ｍＬ冷乙醚，旋涡振荡２０ｓ后在１５００ｒ／ｍｉｎ下离心５ｍｉｎ，收集１．０ｍＬ醚相于小试管中，用热空气吹干，剩余物置于－２０ ℃下低温冰箱保存备用。ＰＡｓ含量测定采用高效液相色谱法（ＨＰＬＣ），测定方法参照文献［９］的方法略加改进。Ｐｕｔ，Ｓｐｄ，Ｓｐｍ标样均购自Ｓｉｇｍａ公司。高效液相色谱仪为Ａｇｉｌｅｎｔ１１００ｓｅｒｉｅｓ，紫外检测器为ＶＷＤＧ１３１４Ａ，波长２５４ｎｍ，色谱柱为ＨｙｐｅｒｓｉｌＯＳＤ反相柱（５ μｍ，５．０ｍｍ×２５０ｍｍ），柱温２５ ℃，流动相为甲醇：乙腈：水＝６４：２．５：３３．５（ｖ：ｖ），流速为０．５ｍＬ／ｍｉｎ。待测样品用２００ μＬ６０％（ｖ：ｖ）甲醇溶解，用微孔滤膜（孔径０．４５ μｍ）过滤后上机测定，进样量为１０ μＬ，外标法定量计算，单位是ｎｍｏｌ／ｇ，ＦＷ。

龙眼果皮发育解剖学观察

龙眼果皮发育解剖学观察邓斯聪;杨为海;朱效传;补建华;黄旭明;吴鸿【期刊名称】《果树学报》【年(卷),期】2008(25)2【摘要】以储良龙眼品种为试材,观察了果皮的解剖结构发育特点。

果皮发育早期(花后10d前),细胞体积小,排列紧密,细胞分裂活跃,外果皮有凸起的皱褶结构,有大量的表皮毛分化。

果皮发育中期(花后10～52d),细胞体积变大,表皮毛开始脱落,外果皮逐渐平滑,中果皮处有石细胞群和海绵状组织的分化。

果实发育后期(花后52d 后,假种皮快速膨大阶段),有木栓形成层出现,形成周皮代替表皮起保护作用,随着果实生长,木栓层出现局部破裂。

龙眼果皮可划分为外、中、内3层。

中外果皮在发生次生木栓化前,由外表皮细胞及其附属物和角质层组成;在形成木栓形成层产生次生结构后,外果皮则由周皮组成。

内果皮来源于子房内壁的几层细胞,由一层内表皮细胞和与之紧密相连的几层薄壁细胞组成。

中果皮根据其组织特点可进一步分为上中果皮和下中果皮,上中果皮包括石细胞群、外层维管束和外果皮之内的薄壁细胞;下中果皮则主要包括海绵组织和其中的维管束。

【总页数】5页(P193-197)【关键词】龙眼;果皮;结构;发育【作者】邓斯聪;杨为海;朱效传;补建华;黄旭明;吴鸿【作者单位】华南农业大学园艺学院南方果树研究室,广州510642;广东工业大学材料科学学院,广州510000;广东阳江儒洞林场,广东阳江529800;华南农业大学生命科学学院,广州510642【正文语种】中文【中图分类】S667.2【相关文献】1.核桃果皮的发育解剖学研究 [J], 肖玲;蛋耀平2.模拟低温对龙眼果实发育及其果皮H2O2代谢的影响 [J], 杨为海;邹明宏;曾辉;万继锋;张汉周;石胜友;陆超忠3.‘石硖’龙眼果皮发育过程中糖代谢及相关酶活性变化 [J], 张红娜;李建光;舒波;杨为海;邓旭;决登伟;石胜友;刘丽琴4.扁桃内果皮发育的组织解剖学观察 [J], 朱秋萍;郭春苗;许娟;吐迪·麦麦提;龚鹏;吐尔逊古·艾克拜尔;杨波;廖康5.荔枝果实发育期间果皮的生理学和解剖学特性 [J], Und.,SJR;莫治雄因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

不同早熟龙眼品种（系）果实生长发育和品质变化规律比较

不同早熟龙眼品种（系）果实生长发育和品质变化规律比较作者：彭杰椿何嘉楠吴玉邓英毅潘介春徐炯志来源：《热带作物学报》2021年第09期摘要：本文以‘桂丰早’‘桂冠早’‘桂龙1号’‘古山2号’‘石硖’5个早熟品种（系）为材料，研究不同品种（品系）果实生长发育和品质变化规律。

结果表明：在果实发育过程中，5个早熟龙眼品种（系）的横纵径、单果重、可食率、色差a*和c*值均呈上升或波动上升;色差L*和b*值呈快速上升后缓慢波动;可溶性固形物含量和大多数品种的维生素C呈先快速上升后缓慢下降;色差hº值和大多数品种的可滴定酸呈逐渐下降或波动下降;可溶性糖在成熟前是逐渐上升的，到后期则波动变化;可溶性蛋白呈“M”或“W”型波动;‘桂丰早’和‘桂冠早’比‘石硖’提前1周进入成熟期;‘桂龙1号’的退糖最慢;‘桂丰早’的横径、单果重及可溶性蛋白质含量最大，‘桂冠早’的纵径最大，‘桂龙1号’的可溶性固形物含量、维生素C和可溶性糖含量最高而可滴定酸含量最低，‘石硖’的可食率最高;综合评价成熟期的果实品质，则‘桂丰早’最佳，其次是‘石硖’，最后是‘桂龙1号’‘古山2号’和‘桂冠早’。

关键词：龙眼;早熟品种（系）;果实发育;果实品质;变化规律中图分类号：S667.2 文献标识码：AComparison of Change Rules of Fruit Growth and Quality of Different Early Season Longan Varieties （Lines）PENG Jiechun*， HE Jianan， WU Yu， DENG Yingyi**， PAN Jiechun*， XU JiongzhiCollage of Agronomy， Guangxi University， Nanning， Guangxi 530004， ChinaAbstract： In this study， five early season longan varieties （lines）of ‘Guifengzao’‘Guiguanzao’ ‘Guilong No.1’ ‘Gushan No.2’ and ‘Shixia’ were taken as study materials to study the change rules of their fruit growth and quality. During fruit development， the transverse and longitudinal diameter， single fruit weight， edible rate， a* and c* values of color difference of the five early season longan varieties （lines） increased or fluctuated. Color difference L* and b* values increased rapidly and then slowly fluctuated. Soluble solids and vitamin c of most varieties increased rapidly and then decreased slowly. hº value of color difference and titratable acid of most varieties decreased gradually or fluctuated. Soluble sugar increased gradually before ripening and fluctuated in the later stage. Soluble protein fluctuated in the form of “M” or “W”. ‘Guifengzao’ and ‘Guiguanzao’ entered the mature stage one week earlier than ‘Shixia’. ‘Guilong No.1’ had the slowest sugar withdrawal. ‘Guifengzao’ had the largest t ransverse diameter， single fruit weight and soluble protein. ‘Guiguanzao’ had the largest longitudinal diameter. ‘Guilong No.1’ had the highest soluble solids，vitamin C and soluble sugar contents and the lowest titratable acid content. ‘Shixia’ had the hi ghest edible rate. Comprehensive evaluation of fruit quality at mature stage，‘Guifengzao’ was the best，followed by ‘Shixia’ ‘Guilong No.1’，‘Gushan No.2’ and ‘Guiguanzao’.Keywords： longan; early season variety （lines）; fruit development; fruit quality; change ruleDOI： 10.3969/j.issn.1000-2561.2021.09.017龍眼（Dimocarpus longan Lour），俗称桂圆，原产于中国，主产于闽、桂、粤、云、蜀、渝、黔等地[1]。

广东储良龙眼果实的成熟特性研究

ＦｒｉｒｎａｕｉｇｉａｇｏｇｕｔＤｕｉｇＭｔｒｎｎＧｕｎｄｎｓ
Ｌｉｎｇａｇ，Ｐｅｗｅ，Ｌｏｇ，ＷＵＺｅ —ｉｎ，ＺＩＪａ．ｕｎＡＮＸｕ．ｎＩＲｎｈｎｘａＥＮＧＴｎｉｇ，ＨＡＮＤｎ — ｉｏｇｍｅ（ｎｔｕｆｒｉＴｅｅｅｒｈＧａｇｏｇＡａｅｆｇｉｔａＳｉｎｅＧａｇｈｕ５０４，ｈｎ；１ＩｓｔｅｏｕｔｒｅＲｓａｃ，ｕｄｎｃｄｍｙｏｒｕｕｌｃｅｃ，ｕｚｏ６０ＣｉｉＦｎＡｃｒｌｎ１ａ
ｃｅｓｄｔｅｑａｔｉｄｘｓｉｃｄｎｅｔｔｏｂｅｓｇｒＴＳ，ｕｒｓ，ｏｌｕａ，ｎｃｃｎｒａｅ；ｕｌｙｎｅｅｌｉｔａｓｌｌｕａ（Ｓ）ｓｃｏｅｔｔｇｒａｄＶｏ－ｈｉｎｕｇｈｏｌｕａｓ
ｔｎｎｒａｅｌｎｔｅｍａｕｒｎｎｄｄｃｉｅｉｌｔｔｅｌｓｔｇｅｔｉｃｅｓｄａｏｇｗｉｔｔｉｇａｅｌｎｄａｌｔｅａａｔｓａｅ，ｗｈｉｅｕｔｎｔｓｇｒａｄｔ— ｈｈｔｈｌｒｄｃａｕａｎｏｅ
（Ｓ）蔗糖、ＴＳ、全糖和ｖｃ含量随果实成熟表现出上升趋势，过熟后稍下降；还原糖含量和可滴定酸（Ａ）Ｔ含量变化不大；相对指标果形指数、／ｍ皮ｍ果、／ｍ核ｍ果表现为下降趋势，ｍ皮ｍ核表现为上升趋势；而／内果皮褐变指数在果实完熟以后明显上升．比熟度、ＳＴＳ含量与果实的质ห้องสมุดไป่ตู้ 、大小、品质指标表现出了显著或极显著的相关性，比熟度结合以

龙眼储藏过程中生理变化研究

龙眼储藏过程中生理变化研究作者：丁晶晶来源：《中国果菜》 2015年第8期丁晶晶（安徽省菜篮子工程办公室，安徽合肥 230001）摘要：龙眼采后呼吸代谢旺盛，易脱水褐变，特别是在前5d，果皮失水严重，褐变指数急剧上升，这些都严重限制了龙眼的贮运与销售。

加强龙眼采后生理研究可为龙眼的贮藏保鲜提供基础理论依据。

本文以储良龙眼为实验材料，研究了室温采后龙眼衰老过程中每隔24h的一些生理与外观品质的变化，结果发现，龙眼果皮衰老速度比果肉快，在前5d内，果皮迅速脱水，累计失水量达到31.7%，褐变指数达到53%。

关键词：龙眼；衰老；生理变化中图分类号：S667.2 文献标志码：A 文章编号：1008-1038(2015)08-0004-06Research on Physiological Changes of Longan During the Storage ProcessDING Jing-jing(Vegetables Project Office of Anhui Province, Hefei 230001, China)Abstract: Longan postharvest respiration metabolism is exuberant, and easily dehydrated and browning. Especially in the first 5 days, skin water loss is serious and browning index rose sharply, which severely limits the longan storage and sale. Strengthening the longan postharvest physiology research provides the basis for postharvest technology of longan development. We used trulia longan as experimental material, and studied the physiology and exterior quality change of the postharvest longan aging process in every 24h at room temperature. The results showed that longan fruit peel aging faster than the flesh, and endocarp rapid dehydrated in the first 5d, and accumulated water loss reached 31.7%, and browning index reached 53%. Because of skin protection, water loss of fruit peel changed obviously in the 6d, up to 10.3%. During Longan mesocarp aging process, the relative conductivity and pH of the pulp and peel gradually rise. Chlorophyll a and chlorophyll b content offruit peel gradually increased.Key words: Longan; aging; physiological changes收稿日期：2015-03-21作者简介：丁晶晶（1987—），女，研究方向为园艺作物栽培与管理龙眼（Dimocarpus longan Lour），无患子科龙眼属植物，是重要的亚热带果树之一。

四季蜜龙眼果实生长发育动态及其数学模型研究

四季蜜龙眼果实生长发育动态及其数学模型研究作者：邱宏业朱建华刘冰浩潘介春朱松生秦献泉徐宁来源：《南方农业学报》2016年第06期摘要：【目的】研究反季节四季蜜龙眼果实生长发育动态，为制定高产、优质四季蜜龙眼栽培管理措施提供参考依据。

【方法】跟踪测定反季节四季蜜龙眼发育期果实的纵径、大横径、小横径、单果重、果皮重、果肉重、种子重及可溶性固形物含量等指标，分别采用多项回归和求导方法建立四季蜜龙眼果实的生长发育数学模型和物质累积速度模型。

【结果】反季节四季蜜龙眼果实生长发育需108 d，成熟阶段历时21 d。

果径生长曲线前期上升较慢，中期上升较快；果肉重、果皮重、种子重和单果重在花后52 d开始快速增加；可溶性固形物含量在花后66～94 d快速增长，最高峰达25.1%。

根据果实各指标数据建立的四季蜜龙眼果实生长发育数学模型，拟合出多项回归方程式，其中纵径、大横径、小横径、单果重及果肉重的拟合方程为二次方程，果皮重、种子重及可溶性固形物含量的拟合方程为三次方程，动态模型回归方程经F检验均达显著差异水平（P关键词：四季蜜龙眼；果实；发育动态；数学模型中图分类号： S667.2 文献标志码：A 文章编号：2095-1191（2016）06-0960-050 引言【研究意义】龙眼隶属于无患子科（Sapindaceae）龙眼属（Dimocarpus Lour.）龙眼亚种（Dimocarpus longan ssp. Longan），是广西重要的南亚热带果树。

四季蜜龙眼是廣西农业科学院园艺研究所等单位从国外引种选育，并已通过广西农作物品种审定委员会审定的热带生态型龙眼新品种。

该品种对生境条件要求不苛刻，与南亚热带生态型龙眼相比无需低温诱导即能完成花芽分化，且一年内多次开花结果，耐强修剪，应用春季修剪结合外施生长调节剂调控可实现夏季集中成花、秋冬季果实成熟，形成了产期调节的栽培模式，也已完成了对其生物学特性的研究（朱建华等，2011），但尚未开展果实发育的相关研究。

龙眼和红毛丹在贮藏期间果实成分的变化

天和红毛丹在 1 2 ℃ 下贮藏2 0 天后果实的其它成分的变化很小
本试验旨在研究龙眼和红毛丹果实采后品质的变化情况供试的
,
靛酚染色还原法测定维生素 C ; 花青贰的含量是用甲醇一氯化氢制备提取液后在 5 3 米波段测定其吸光度一乔长梯奥 ( 定
眼
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。
。
8 8土 0
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。
可溶性固形物总搪毫克毫克毫克毫克
(
,
每 1 6 土O 3 (
3 ) 1
( (
1 9 8 4 年的糖
变黑
。
年低
,
含量也比
一9 8 3
0 个龙眼和 2 0 个红毛丹每隔一定时间取 3
低度
不同年份龙眼和红毛丹果实成分含量的
果进行测定化钠溶液 (
,
测试方法为
,
.
:
`
通过折射率测定

华南地区储良龙眼标准化生产技术规程

华南地区储良龙眼原则化生产技术规程前言储良龙眼果实粒大、外形漂亮、果肉厚、色泽晶莹、质地爽脆, 果汁甜美, 令人百食不厌, 是全国优稀、名贵旳龙眼品种。

上世纪九十年代, 华南地区大力发展储良龙眼, 其种植面积迅速扩大, 成为水果中种植面积最大旳品种。

为了使储良龙眼旳生产能顺利发展, 充足发挥其丰产性能和保持果实旳优秀品质, 增长农民旳收入, 同步也为了更好地与世界接轨, 我们制定了本原则, 规定了储良龙眼旳建园、栽培管理、采收等技术和产量指标。

本原则结合华南地区（北回归线以南）旳气候、土壤及生态环境等实际条件, 制定对应旳生产技术措施, 可操作性强, 但由于各地旳实际条件及每年旳天气状况有所不一样, 在生产实践中, 要结合详细旳状况灵活应用。

储良龙眼原则化生产技术规程1 范围本原则规定了储良龙眼旳建园、定植、幼龄树、成果树旳管理及病虫害防治、采收等技术。

本原则合用于储良龙眼旳生产。

2 引用文献下列文献中旳条款通过本原则旳引用而成为本原则旳条款。

但凡注日期旳引用文献, 其随即所有旳修改单（不包括勘误旳内容）或修订版均不合用于本原则, 然而, 鼓励根据本原则到达协议旳各方研究与否可使用这些文献旳最新版本。

但凡不注日期旳引用文献, 其最新版本合用于本原则。

GB12049—1998 鲜龙眼3 术语本原则采用下列术语:3.1 砧木龙眼嫁接繁殖时, 用以承受接穗旳植株。

3.2 接穗龙眼嫁接时, 所需繁殖品种旳枝或芽。

3.3 嫁接苗龙眼旳接穗和砧木组合下旳芽接或枝接苗。

3.4 嫁接口接穗与砧木连接旳部位。

3.5 一级分枝直接由主干发出旳枝条。

3.6 二级分枝由一级分枝发出旳枝条。

3.7 短截剪断枝梢旳部分。

3.8 花穗着生花旳穗枝。

3.9 果穗着生果实旳穗枝。

3.10 葫芦节龙眼果穗枝基部节密粗大处。

3.11 螺旋环剥在龙眼主干或分枝上进行螺旋状剥皮。

4 建园4.1 园地选择4.1.1 气候条件年平均气温21～23.5℃, 冬季绝对低温不低于0℃, 年日照时数1797小时以上, 年日照百分率41%以上, 平均霜日少于5天。

回归方程法测定两个龙眼品种叶面积研究

回归方程法测定两个龙眼品种叶面积研究潘介春;王金英;李琳;王颖;黄幸;邓英毅;丁峰;徐炯志;徐石兰;黄思婕;杨亚涵;龙蔷宇【摘要】以'储良'和'石硖'2个龙眼品种的成熟叶为材料,对叶片的周长、长、宽、长/宽、宽×宽、长×长、长×宽等指标与叶面积的相关性进行分析,建立9种模拟回归方程.结果表明,'储良'和'石硖'的叶面积均可用叶片的周长、长、宽、长/宽、宽×宽、长×长、长×宽等指标进行估算,基于叶长×叶宽建立的9种叶面积回归方程R2均最高,拟合效果最好,且相关性最大,因此叶片长×宽可作为龙眼叶面积估测的首选指标.基于叶长×宽建立的9个回归方程中,一元线性方程、二次方程、三次方程、幂函数能较好拟合,其中以幂函数估算的精度最高,较适合用来估测龙眼的叶面积.'储良'和'石硖'叶面积对应的较为精准的叶面积幂函数方程分别为:y=0.751x1.006和y=0.986x0.973.最适合两个龙眼品种的总叶面积幂函数方程为y=0.869x0.988.【期刊名称】《亚热带植物科学》【年(卷),期】2019(048)002【总页数】6页(P155-160)【关键词】储良;石硖;叶面积;回归方程;幂函数【作者】潘介春;王金英;李琳;王颖;黄幸;邓英毅;丁峰;徐炯志;徐石兰;黄思婕;杨亚涵;龙蔷宇【作者单位】广西大学农学院,广西南宁 530004;广西大学农学院,广西南宁530004;广西大学农学院,广西南宁 530004;广西大学农学院,广西南宁 530004;广西大学农学院,广西南宁 530004;广西大学农学院,广西南宁 530004;广西大学农学院,广西南宁 530004;广西大学农学院,广西南宁 530004;广西大学农学院,广西南宁 530004;广西大学农学院,广西南宁 530004;广西大学农学院,广西南宁530004;广西大学农学院,广西南宁 530004【正文语种】中文【中图分类】S667.2叶片是植物进行光合作用、蒸腾作用、呼吸作用、合成有机物的重要器官，叶面积是反映植物生长发育、遗传特性等生理生化过程的主要参数之一[1]，它对植物的光能利用、水分蒸发量、干物质积累、收获量及经济效益有显著影响[2]。

龙眼果实发育过程果肉黄酮和氨基酸含量的变化

龙眼果实发育过程果肉黄酮和氨基酸含量的变化黄爱萍;郑少泉【摘要】在晚熟龙眼品种‘立冬本'果实发育过程中,果肉黄酮含量存在差异.其积累消长动态呈"双S型"变化曲线.龙眼果实成熟后,果肉黄酮含量呈下降趋势,但随着挂树期延长,果肉黄酮含量又回升.龙眼果肉同时还含17种蛋白氨基酸和非蛋白氨基酸(γ-氨基丁酸,GABA),果实发育过程果肉黄酮含量与总蛋白氨基酸含量呈负相关,与GABA含量呈正相关,与丝氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、组氨酸和脯氨酸含量呈显著负相关(P<0.05),而与甘氨酸含量呈极显著负相关(P<0.01).生产中如以植物功能性活性成分高黄酮含量为目标,研究确立了‘立冬本'龙眼成熟前期的9月22日为最佳采收时间.【期刊名称】《热带作物学报》【年(卷),期】2010(031)009【总页数】5页(P1519-1523)【关键词】龙眼;果实发育;黄酮;蛋白氨基酸;非蛋白氨基酸(γ-氨基丁酸,GABA)【作者】黄爱萍;郑少泉【作者单位】福建省龙眼枇杷育种工程技术研究中心,福建福州,350013;福建省农业科学院农业经济与科技信息研究所,福建福州,350003;福建省龙眼枇杷育种工程技术研究中心,福建福州,350013;福建省农业科学院果树研究所,福建福州,350013【正文语种】中文【中图分类】S667.2随着生活水平的提高，人们对果品品质的要求不仅局限于外观，而且更加注重内在品质，特别是对营养保健功能倍加关注。

植物功能活性成分的研究与开发已成为国内外研究的热点和生命科学研究的前沿[1]。

黄酮是一类天然植物代谢产物，具有抗肿瘤、抗氧化等生物活性，是人体所必需的功能营养成分之一，人体不能直接合成，只能从食物吸取；氨基酸不仅是一种很重要的营养成分，而且影响果实风味品质。

龙眼为我国南方特产的名贵佳果，其果肉营养价值很高，自古以来被视为珍贵的滋补品[2]，而有关龙眼黄酮、氨基酸的研究报道甚少。

龙眼果实挂树成熟与退糖期间的解剖学结构比较

龙眼果实挂树成熟与退糖期间的解剖学结构比较韩冬梅;曾婷;李建光;罗焘;李保建;吴振先【摘要】以石硖和储良两个品种龙眼(Dimocarps longana Lour.cv.Shixia and Chuliang)果实为试材,比较了挂树成熟与衰老(退糖)期间果皮和果肉的解剖学结构,测定了成熟与衰老期间果肉可溶性固形物(TSS)含量.结果表明:石硖成熟期比储良短,分别为14 d和21 d,之后退糖,TSS含量的下降速率分别为每天0.60％和0.31％.完全成熟时,龙眼果皮组织结构较为完整,外果皮为数层平行排列的变形细胞,附着不连续的角质层和蜡块;中果皮为大的层状薄壁细胞,间以块状栓质组织、石细胞和维管束;内果皮为1～2层紧密排列的薄壁细胞,胞壁角质层深厚;果肉表面光滑,薄壁细胞结构清晰完整、排列整齐.退糖时,外表皮的蜡质层和表皮毛脱落,外、中果皮里的胞间隙或层状缝隙增大,内果皮表面出现破损和"钉"状突起物;果肉表面皱褶增多,结构塌陷,胞壁可能增厚.不同龙眼品种之间的果皮结构差异主要在于成熟时的中果皮,石硖细胞排列紧密、缝隙小而少,而储良细胞间隙较大;果肉结构差异在于成熟时石硖胞壁坚挺、呈长圆形,而储良胞壁卷曲、呈狭长型,刚性弱于石硖;退糖时储良果肉皱缩塌陷比石硖明显,但后者出现细胞壁纤维化增厚的特异现象.%This paper studied the changes of pericarp and aril structure of longan fruit during ripening and senescence (sugar-dropping) on tree,and the two longan cultivars cv. Shixia and Chuliang were used as the materials,and the TSS content was also been determined. The results showed that duration of ripening of Shixia and Chuliang fruit was 14 d and 21 d,then the sugar-drpping began,and their TSS content dropping rate was 0.60％ and 0.31％every day,respectively. When the fruit got ripening,the pericarp structure was still intact,the exocarp was composed of severral layers of parallelarranged metamorphic cells with some discontinuous cuticle and wax blocks attached to the outer epidermis,the mesocarp composed of large lamellar parenchyma cells with lumpish suberins, stone cells and vascular bundles among them,and the endocarp composed of 1～2 layers of tightly arranged parenchyma cells with thick cuticle in cell wall. Meanwhile,the aril surface was smooth,and the parenchyma cell was complete,clear and arranged neatly. When the TSS content dropping,there was less waxy layer and epidermal hairs on epidermis,while much larger chinks or layered gaps within exocarp and mesocarp,and some crackes, holes and some prejections like a nail on the endocarp surface. At the same time,the aril structure collapsed with many creases,and the cell wall might turn thicken with sags and fractures. It's found that the difference in pericarp between cultivars when ripening was mainly due to the mesocarp,where the cells in Shixia were arranged more closely with smaller and fewer gaps than Chuliang,as well as the significant differences in aril. The aril cell wall of Shixia was firmer in a oblong shape than that of Chuliang,yet the latter's cell wall at the incision crooked in a narrow shape with weaker rigidity than the former. Forthermore,when sugar-dropping,the shrinkage and collapse of Chuliang's aril were more serious than those of Shixia,but in which the thickening of cell wall was more obvious.【期刊名称】《广东农业科学》【年(卷),期】2018(045)004【总页数】8页(P43-50)【关键词】龙眼;挂树成熟;退糖;果皮结构;果肉结构;纤维化【作者】韩冬梅;曾婷;李建光;罗焘;李保建;吴振先【作者单位】广东省农业科学院果树研究所/农业部南亚热带果树生物学与遗传资源利用重点实验室,广东广州 510640;华南农业大学园艺学院/广东省果蔬保鲜重点实验室,广东广州 510642;广东省农业科学院果树研究所/农业部南亚热带果树生物学与遗传资源利用重点实验室,广东广州 510640;华南农业大学园艺学院/广东省果蔬保鲜重点实验室,广东广州 510642;江门市农业技术服务中心,广东江门529000;华南农业大学园艺学院/广东省果蔬保鲜重点实验室,广东广州 510642【正文语种】中文【中图分类】S667.2龙眼（Dimocarpus longan Lour.）俗称桂圆，成熟于高温乃至酷暑季节，高糖多汁，成熟快，采收期短，适宜的采收成熟度是保证龙眼果实采后品质及贮运寿命的重要因素［1］。

龙眼果实发育过程中果糖激酶活性及其基因表达分析

龙眼果实发育过程中果糖激酶活性及其基因表达分析帅良;薛晓清;牛佳佳;顾渝娟;韩冬梅;吴振先【摘要】[目的]以石硖龙眼Dimocarpus longan cv.shixia为材料,研究了龙眼果实在发育过程中假种皮蔗糖、葡萄糖和果糖含量的变化规律,以及果糖激酶活性及其基因的表达变化情况.[方法]利用高效液相色谱测定果实糖含量变化;RT-qPCR测定基因表达变化量;构建原核表达载体,并在大肠埃希菌Escherichia coli Rosetta(DE3)中进行表达.[结果和结论]随着龙眼果实的发育,假种皮中蔗糖、葡萄糖和果糖的含量逐渐增加,但进入成熟期后,糖含量水平趋于稳定;在果实成熟前,果糖激酶活性随着果实发育逐渐降低,由发育最初的25.97μmol·g-1·h-1下降到13.18 μmol·g-1·-1,而在成熟时增大到22.44 μmol·g-1·h-1;荧光定量分析显示,龙眼果糖激酶基因的表达量在果实发育前期变化不大,而在假种皮迅速膨大、含糖量迅速上升时期则呈下降趋势;SDS-PAGE结果表明,成功构建了pET-32a-DlFRK原核表达载体,经IPTG诱导能够在大肠埃希菌中得到高效表达.【期刊名称】《华南农业大学学报》【年(卷),期】2015(036)005【总页数】6页(P99-104)【关键词】龙眼;果糖激酶;荧光定量;原核表达【作者】帅良;薛晓清;牛佳佳;顾渝娟;韩冬梅;吴振先【作者单位】华南农业大学园艺学院,广东广州510642;华南农业大学园艺学院,广东广州510642;华南农业大学园艺学院,广东广州510642;华南农业大学园艺学院,广东广州510642;广东省农业科学院果树研究所,广东广州510640;华南农业大学园艺学院,广东广州510642【正文语种】中文【中图分类】S667.2龙眼果实发育过程中果糖激酶活性及其基因表达分析帅良1，薛晓清1，牛佳佳1，顾渝娟1，韩冬梅2，吴振先1( 1华南农业大学园艺学院，广东广州510642; 2广东省农业科学院果树研究所，广东广州510640)摘要:【目的】以石硖龙眼Dimocarpus longan cv．shixia为材料，研究了龙眼果实在发育过程中假种皮蔗糖、葡萄糖和果糖含量的变化规律，以及果糖激酶活性及其基因的表达变化情况．【方法】利用高效液相色谱测定果实糖含量变化; RT-qPCR测定基因表达变化量;构建原核表达载体，并在大肠埃希菌Escherichia coli Rosetta( DE3)中进行表达．【结果和结论】随着龙眼果实的发育，假种皮中蔗糖、葡萄糖和果糖的含量逐渐增加，但进入成熟期后，糖含量水平趋于稳定;在果实成熟前，果糖激酶活性随着果实发育逐渐降低，由发育最初的25. 97 μmol·g－1·h－1下降到13. 18 μmol·g－1·h－1，而在成熟时增大到22. 44 μmol·g－1·h－1;荧光定量分析显示，龙眼果糖激酶基因的表达量在果实发育前期变化不大，而在假种皮迅速膨大、含糖量迅速上升时期则呈下降趋势; SDS-PAGE结果表明，成功构建了pET-32a-DlFRK原核表达载体，经IPTG诱导能够在大肠埃希菌中得到高效表达．关键词:龙眼;果糖激酶;荧光定量;原核表达中图分类号: S667．2文献标志码: A文章编号:1001-411X( 2015) 05-0099-06帅良，薛晓清，牛佳佳，等．龙眼果实发育过程中果糖激酶活性及其基因表达分析［J］．华南农业大学学报，2015，36( 5) : 99-104．收稿日期:2014-04-10 优先出版时间:2015-07-27优先出版网址: http: //www．cnki．net/kcms/detail/44．1110．s．20150727．1424．005．html 作者简介:帅良( 1986—)，男，博士研究生，E-mail: litchi_0134@ qq．com;通信作者:吴振先( 1971—)，男，教授，博士，E-mail: litchi2008@126．com;韩冬梅( 1972—)，女，研究员，硕士，E-mail: handm2009@ qq．com基金项目:国家荔枝龙眼产业技术体系资助( CARS-33-14)Analyses of the fructokinase activity and its gene expression during thedevelopment of longan fruitsSHUAI Liang1，XUE Xiaoqing1，NIU Jiajia1，GU Yujuan1，HAN Dongmei2，WU Zhenxian1( 1 College of Horticulture，South China Agricultural University，Guangzhou 510642，China; 2 Institute of Fruit Tree Research，Guangdong Academy of Agricultural Sciences，Guangzhou 510640，China)Abstract:【Objective】Changes in the contents of sucrose，glucose and fructose，the activity of fructokinase ( FRK) and its gene expression during the development of longan ( Dimocarpus longan Lour．cv．Shixia) fruit aril were studied．【Method】Sugar contents were determinated using HPLC，and the FRK activity was analyzed using colorimetric method．Real-time qPCR was used to analyze the expression of DlFRK gene．Prokaryotic expression vector was constructed using in-fusion method to express DlFRK gene in Escherichia coli Rosetta ( DE3)．【Result and conclusion】The results showed that the contents of sucrose，glucose and fructose in the aril increased gradually with the development of longan fruits，and they tended to become stable at the mature stage．The fructokinase activity decrea sed gradually from 25. 97 μmol·g－1·h－1to 13. 18 μmol·g－1·h－1at the early stages before maturation，and increased during maturation to 22. 44 μmol·g－1·h－1at full maturity．Quantitative RT-PCR analyses showed that the expression of fructokinase gene was relatively stable at the early stages，but it declined during the aril expanding period with a rapid sugar accumulation．The result of SDS-PAGE showed that pET-32a-DlFRK prokaryotic expression vector has been constructed．Gene expression has been successfully induced by IPTG in E．coil BL21．Key words: longan; fructokinase; quantitative RT-PCR; prokaryotic expression龙眼Dimocarpus longan属无患子科龙眼属果树，是原产于我国南方热带亚热带的名优果树之一，其果实的果肉部分由假种皮发育而来，属于糖直接积累型，发育前期只有极少数的淀粉积累，随后均以可溶性糖的形式贮藏于液泡中［1］，蔗糖是植物体内碳水化合物从源到库的主要运输形式，蔗糖进入库器官后可以由转化酶分解为葡萄糖和果糖，或由蔗糖合成酶分解为尿苷二磷酸葡萄糖和果糖［2-4］．果糖在进入下一步代谢前必须由果糖激酶或己糖激酶进行磷酸化，而果糖激酶是催化果糖磷酸化的主要酶［5］．此外，果糖激酶还可以作为植物的己糖感受器和信号分子，通过影响植物的生长周期来调控植物的代谢和生长发育进程［6］．因此，研究龙眼果糖激酶基因的表达特性，对研究龙眼果实中果糖代谢调节机制具有十分重要的意义．果糖激酶首先从酵母细胞中提取分离出来，在高等植物中则是先从小麦中分离鉴定到果糖激酶［7］．到目前为止，人们已经在拟南芥［8］、甜菜直根［9］、马铃薯块茎［10］、番茄果实［11］、水稻［12］、大豆［13］、毛果杨［14］、大麦叶片［15］、鳄梨［16］、和蜜柑［17］等植物组织中克隆和鉴定出果糖激酶基因．Jiang等［12］、Zhang等［18］和Qin等［19］对水稻、玉米和温州蜜柑中果糖基因的表达进行了分析．Schaffer等［20］的研究显示，在番茄果实中果糖激酶能够调节蔗糖与淀粉之间的相互转化．目前对于果实中果糖激酶的研究主要集中在基因全长的克隆、酶的亚细胞定位、酶学特性的分析上［21］．关于龙眼果实在发育过程中果糖激酶所起的作用及其表达情况的研究鲜见报道．1材料与方法1．1 材料以石硖龙眼D．longan cv．Shixia作为试验材料，采自广东省农业科学院果树研究所．分别于花后59、73、87、94、101、110 d摘取不同发育阶段龙眼果实，其中花后110 d为果实成熟采收时期．摘取的果实立即运回实验室，去梗，选取发育正常、外观良好的果实作为试验材料．采集的假种皮样品于液氮中速冻，置于－80℃超低温冰箱中保存．所用引物均由上海生工生物工程有限公司合成(表1)．表1引物序列与用途Tab．1 Sequences of primers and their application1)下划线为载体上的酶切位点BamH I ( GGATCC)和Sal I ( GTCGAC)．1．2龙眼果实糖组分及其含量的测定龙眼果实糖含量测定参照胡志群等［22］的方法并有所改进．准确称取龙眼假种皮磨成粉末后的速冻样品1 g，放入研钵，在微波炉杀酶30 s，加入5 mL水研磨匀浆，4 000 r·min－1离心15 min，残渣加入5 mL水混匀再提取15 min，4 000 r·min－1离心10 min，合并上清液，用水定容至10 mL;从中移取2 mL溶液于离心管中，13 000 r·min－1离心15 min，再取1 mL上清液经Water Sep-Pak C18小柱纯化后待测．使用美国Agilent 1200 LC高效液相色谱仪，该仪器配有RID示差检测器，色谱柱为Transgenomic coregel 87 C色谱柱，流动相为水，流速0. 6 mL·min－1，柱温80℃，进样量10 μL．所用标样为分析纯的果糖、葡萄糖和蔗糖．通过保留时间和峰面积的比较测定糖的种类和含量．设3个取样重复，每个样品测定1次，取平均值．1．3龙眼假种皮果糖激酶( FRK)活性测定酶的提取参照Zhu等［23］的方法，并略有改动．整个提取过程在0～4℃条件下进行，将龙眼假种皮冻样用液氮研磨成粉末，准确称量1 g冻粉，加入1. 5 mL的预冷提取缓冲液( 50 mmol·L－1Hepes-NaOH，1 mmol·L－1EDTA，2. 5 mmol·L－1DTT，5 mmol·L－1MgCl2，体积分数为0. 05%的Triton-100，0. 5 mg·mL－1的BSA，体积分数为10%的甘油)至2 mL离心管中，4℃条件下13 000 r·min－1离心10 min，取1 mL上清液过PD-10脱盐柱，过滤后定容到2 mL，作为酶提取液待用．每个样品重复3次．参照Huber等［24］的方法测定果糖激酶( FRK)活性并略作修改．在0. 4 mL的反应体系中含: 30 mmol·L－1Hepes-NaOH ( pH 7. 5)，1 mmol·L－1MgCl2，0. 6 mmol·L－1Na2EDTA，1 mmol·L－1KCl，1 mmol·L－1NAD，1 mmol·L－1ATP，1 U G-6-PDH，酶提取液0. 08 mL．测定酶活性时，再顺序加入1 U的PGI ( Sigma公司产品)和2 mmol·L－1的果糖启动反应．反应在37℃条件下进行，根据一定时间内D 340 nm的变化，计算FRK活性．上述酶的提取和测定均重复3次．1．4龙眼假种皮RNA的提取和cDNA的合成从龙眼各发育阶段假种皮中分别提取总RNA，参照热硼酸方法［25］，并稍做改动．以纯度合格的RNA为模板(去除基因组DNA)，使用TaKaRa公司的反转录试剂盒合成第1链cDNA，合成cDNA的方法详细参照说明书上的步骤进行，产物于－40℃条件下保存备用．1．5龙眼果糖激酶基因( DlFRK)的表达为检测DlFRK基因在龙眼果实中的相对表达水平，使用GAPDH为内参基因用于后期的RT-qPCR分析．RT-qPCR使用20 μL体系: cDNA模板1 μL，上游引物P5和下游引物P6各1 μL，反应MIX 10 μL ( Toyobo公司产品)，ddH 2O 7 μL．荧光定量反应程序: 50℃2 min，95℃10 min; 95℃15 s，60℃25 s，72℃35 s，40个循环．PCR扩增程序结束之后添加溶解程序，得到溶解曲线．内参基因GAPDH扩增体系使用引物为P3和P4．1．6原核表达载体的构建及重组质粒的诱导表达和SDS-PAGE分析之前已经克隆出DlFRK基因，NCBI登录号为JN166014. 1．原核表达载体的构建方法参照文献［26］，将构建成功的重组质粒命名为pET-32a-Dl-FRK，将测序正确的重组质粒转化到大肠埃希菌Escherichia coli Rosetta( DE3)感受态细胞中．重组质粒的诱导表达和SDS-PAGE分析方法参照文献［26］．2结果与分析2．1龙眼果实发育过程中糖组分含量变化糖含量分析显示，龙眼果实在不同发育时期蔗糖、葡萄糖和果糖在假种皮中的积累模式大致相同(图1)，即在整个果实发育过程中3种糖的含量均随着果实发育不断积累，蔗糖积累量在谢花后101 d达到最高值82. 76 mg·g－1，葡萄糖和果糖积累量均在谢花后110 d达到最高值46. 31和41.37 mg·g－1．在果实整个发育过程中，蔗糖与己糖积累均于花后73 d开始迅速增长，进入糖分迅速积累阶段;花后94 d则缓慢增长，水平相对稳定，说明此时糖分含量达到品种固有水平，果实进入成熟阶段．成熟果实中蔗糖含量积累显著高于葡萄糖和果糖的各自积累量，但是蔗糖的积累量与己糖的积累总量大致相等，由此可知，石硖龙眼果实属于胡志群等［22］分类的中间类型果实．图1龙眼果实发育期间糖含量的变化Fig．1 Changes in the contents of sucrose，glucose and fructose during the development of longan fruits2．2龙眼FRK酶活性变化石硖龙眼果实在不同发育时期果糖激酶活性变化表明，随着果实发育，假种皮中果糖激酶的活性随着花后时间的推移而出现下降趋势，到谢花后101 d达到最低值，但谢花后110 d时又显著升高．结合龙眼果实发育期间糖含量变化可知，在果糖激酶活性下降的过程中是果实糖分迅速积累的时期，说明此阶段糖分解相关酶活性受到抑制，成熟后期果糖激酶活性又出现上升，可能与果实呼吸消耗和相关成熟衰老生理活动增加有关(图2)．图2龙眼果实发育期间果糖激酶( FRK)活性变化Fig．2 Changes in the activity of fructokinase ( FRK) during the development of longan fruits2．3龙眼DlFRK基因的表达分析运用实时荧光定量PCR技术，以龙眼GAPDH基因为内参，检测龙眼果实发育期间的DlFRK基因的表达情况(图3)．检测后发现，在果实发育前期(即花后87 d之前)，DlFRK基因的相对表达量变化不大，相对维持在较高的表达水平，不利于果实发育阶段糖分的积累，这段时间果实糖分积累量处在一个相对较低的水平(图1)．在谢花后94 d DlFRK基因的相对表达量达最低值，此时果实糖分迅速积累结束，进入缓慢增长期;随着果实成熟，DlFRK基因表达量又逐渐上升，这可能与果实成熟后呼吸等各方面生理活动旺盛，从而消耗糖分有关．2．4龙眼DlFRK基因开放阅读框( ORF)的获得使用P1和P2引物进行PCR扩增获得1条长度约1 000 bp的条带(图4a)，切胶回收，连接、转化、测序后分析发现，此序列为DlFRK基因的ORF序列，并在起始密码子和终止密码子前面添加了In-Fusion连接片段．回收后的片段于－40℃条件下保存，用于In-Fusion连接．使用BamH I和Sal I对原核表达载体pET-32a的质粒进行双酶切(图4b)，回收酶切产物片段，将带有In-Fusion连接片段的DlFRK基因的ORF片段与载体连接，获得原核表达载体，命名为pET-32a-Dl-FRK，转化后挑选阳性克隆菌株进行菌液PCR和测序鉴定．菌液PCR检测结果表明，在1 000 bp的时候有目的条带(图4c)，送样测序比对后发现，未出现碱基突变及移码现象，结果表明成功构建了pET-32a-DlFRK原核表达载体．图3龙眼果实发育期间果糖激酶基因( DIFRK)表达变化Fig．3 Changes in the fructokinase gene ( DIFRK) expression during the development of longan fruits图4 PCR扩增及pET-32a载体的BamH I和Sal I双酶切电泳图Fig．4 Agarose gel electrophoresis of PCR amplification and pET-32a digested by BamH I and Sal I2．5原核表达产物的检测空载体pET-32a转入到大肠埃希菌Rosetta ( DE3)中后，使用0. 4 mmol·L －1的IPTG诱导重组蛋白表达，在相对分子质量18 000左右出现His 表达标签蛋白条带(图5a)．把重组质粒pET-32a-Dl-FRK转入到Rosetta( DE3)中后，使用0. 4 mmol·L－1IPTG诱导重组蛋白表达，结果表明，在相对分子质量54 200(含标签大小18 000)左右位置有目的蛋白的融合表达条带(图5b)，表达的融合蛋白分子与理论预测值相符，这表明融合蛋白在Rosetta( DE3)中成功表达．未诱导的pET-32a-DlFRK则没有在相对分子质量54 200左右出现条带(图5a)．在0．4 mmol·L－1的IPTG和37℃条件下，经过不同时间的诱导培养后，目的融合蛋白的表达量随着诱导时间的延长持续增加，但是诱导时间达5 h后表达量增加不显著，表明在IPTG诱导5 h时表达量几乎达到最高值(图5b)．图5龙眼DlFRK基因重组蛋白在大肠埃希菌中的表达Fig．5 Expressions of recombinant pET-32a-DlFRK protein in Escherichia coli Rosetta( DE3)3 讨论龙眼果实属于糖直接积累型［17］，假种皮中含有较高的可溶性糖，其组分主要包括蔗糖、葡萄糖和果糖．胡志群等［22］根据龙眼果实单、双糖含量比例将龙眼果实分为3类:蔗糖积累型、单糖积累型和中间类型．本试验通过对石硖龙眼发育及成熟过程中糖含量的积累研究发现，龙眼果实在发育过程中3种糖的积累随着果实发育不断增加，尤其在成熟前3周内增加迅速，至果实成熟分别达到最高值，之后的2周时间内则保持稳定高水平，其中以蔗糖水平最高，约为葡萄糖和果糖含量的总和．由此可见，石硖龙眼果实以糖分直接积累至固有水平作为其进入成熟阶段的形式，而且属于糖分积累中间型．在龙眼果实发育过程中，FRK活性的变化与糖组分的积累和含量变化显示出了密切的相关性．FRK活性随着糖分的积累增加出现了逐渐降低的趋势，但是在果实采收期活性突然略有增加，与秦巧平等［1］研究温州蜜柑果实发育过程果糖激酶活性变化相一致．其次，DlFRK基因相对表达量与糖分积累过程也呈现出一致性．实时荧光定量分析表明，在果实发育前期(即谢花前87 d)，DlFRK基因的相对表达量变化不大，而且也维持在较高的水平，结合果实发育阶段糖积累过程可知，这段时间果实糖分积累量相对处于一个较低的水平，在谢花后94 d出现表达量最低值，比糖含量最高值和FRK酶活性最低值均提前1周的时间，而这一阶段也是果实糖分积累变化最大时期，说明酶的生理活性和相关产物的形成与对应基因的表达时间相比，具有一定的滞后性．随着果实的成熟，DlFRK基因相对表达量逐渐上升，这可能与后期成熟果实呼吸等各方面生理活动旺盛，从而消耗糖分有关．可见在果实积累糖的过程中，与糖分解相关酶活性及其基因表达的降低将有利于果实糖分的积累．原核表达系统具有经济实惠、产量高、易操作、稳定性好等优点［27］．为研究龙眼果糖激酶蛋白的功能提供了一条高效可行的途径．本研究成功构建原核表达载体pET-32a-DlFRK，IPTG进行诱导表达后SDS-PAGE凝胶电泳分析发现，pET-32a-DlFRK能够在Rosetta ( DE3)中成功表达，并且获得了1个相对分子质量为54 200左右的重组蛋白，去除PET-32a相对分子质量约18 000的His标签蛋白，由此可知DlFRK表达蛋白相对分子质量在38 200左右，这与崔娜等［28］提到的FRK蛋白以二聚体形式存在，其功能部位由相对分子质量为30 000～40 000的亚基组成的二聚体相吻合，但其可溶性及酶活性如何还有待验证．因此有必要将得到的原核表达蛋白进一步进行纯化分离，为深入研究果糖激酶的功能奠定基础．参考文献:［1］秦巧平，张上隆，陈俊伟，等．温州蜜柑果实发育期间果糖激酶与糖积累的关系［J］．植物生理与分子生物学学报，2004，30( 4) : 435-440．［2］OFFER C E，PATRICK J W．Cellular pathway and hormonal control of short distance transfer in sink regions［J］．Plant Biol，1986，1: 295-306．［3］齐红岩，李天来，刘海涛，等．番茄不同部位中糖含量和相关酶活性的研究［J］．园艺学报，2005，32( 2) : 239-243．［4］崔娜，李天来，赵聚勇．外源生长素PCPA对番茄果实蔗糖代谢的影响［J］．北方园艺，2008( 5) : 8-12．［5］GRANOT D．Role of tomato hexose kinase［J］．Funct Plantbiol，2007，34( 6) : 564-570．［6］ROLLAND 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