高中生物实验知识：过氧化氢酶活性的测定
高中生物关于酶的实验
高中生物关于酶的实验
酶是生物体内一类具有生物催化作用的蛋白质，对于高中生物学习而言，了解酶的性质和作用具有重要意义。以下是一份关于酶的实验文档，旨在帮助高中生更好地掌握酶的相关知识。
一、实验目的
1.了解酶的特性和作用机理；
2.掌握酶的催化效率及其影响因素；
3.培养学生的实验操作能力和观察能力。
二、实验原理
酶是一种具有高效、专一、可逆等特性的生物催化剂，能显著降低化学反应的活化能。酶的活性受温度、pH值等因素的影响。
三、实验材料与仪器
1.材料：新鲜肝脏、过氧化氢溶液、碘液、淀粉溶液、唾液、蔗糖溶液等。
2.仪器：烧杯、量筒、滴定管、试管、温度计、磁力搅拌器等。
四、实验步骤
1.酶的提取
（1）将新鲜肝脏洗净，剪碎，放入烧杯中；
（2）加入适量生理盐水，用玻璃棒搅拌，使肝细胞破裂；
（3）用纱布过滤，收集滤液，备用。
2.过氧化氢酶活性测定
（1）取3支试管，分别加入2mL过氧化氢溶液；
（2）向1号试管中加入2滴提取的肝酶液，2号试管中加入2滴唾液，3号试管中加入2滴蒸馏水；
（3）观察各试管中气泡产生的速度，记录实验结果。
3.淀粉酶活性测定
（1）取3支试管，分别加入2mL淀粉溶液；
（2）向1号试管中加入2滴提取的肝酶液，2号试管中加入2滴唾液，3号试管中加入2滴蒸馏水；
（3）将各试管放入热水中加热，观察各试管中淀粉消失的速度，记录实验结果。
4.蔗糖酶活性测定
（1）取3支试管，分别加入2mL蔗糖溶液；
（2）向1号试管中加入2滴提取的肝酶液，2号试管中加入2滴唾液，3号试管中加入2滴蒸馏水；
（3）将各试管放入热水中加热，观察各试管中蔗糖消失的速度，记录实验结果。
2019-2020年高中生物必修1实验四比较过氧化氢酶和Fe3+的催化效率
2019-2020年高中生物必修1实验四比较过氧化氢酶和Fe3+的催化效率
酶：是活细胞产生的一类具有生物催化作用的有机物。酶的作用具有高效性。一、实验原理
新鲜的肝脏中含有过氧化氢酶，Fe3+是一种无机催化剂。它们都可以催化H
2O
2
分解
成H
2O + O
2
。
分别用一定数量的过氧化氢酶和Fe3+催化过氧化氢分解成水和氧，可以比较两者的
催化效率。
经计算，用质量分数为3.5%FeCl
3
溶液和质量分数为20%的肝脏研磨液做实验,每滴
FeCl
3
溶液中的Fe3+,大约是每滴肝脏研磨液中过氧化氢酶分子数的25万倍。
说明酶的高效性。
二、目的要求
1.初步学会探索酶的催化效率的方法。
2.探索过氧化氢酶和Fe3+催化效率的高低。
三、重点与难点
1.重点：初步学会探索酶的催化效率的方法。探索过氧化氢酶和Fe3+催化效率的高低。
2.难点：学习掌握探索实验的方法，培养学生独立实验的能力和创新思维能力。
三、材料用具
新鲜的质量分数为20%的肝脏(如猪肝、鸡肝)研磨液。
量筒，试管，滴管，试管架，卫生香，火柴。
体积分数为3%的过氧化氢溶液，质量分数为3.5%的氯化铁溶液。
四、实验步骤（录象观察）
1.取两支洁净的试管放H
2O
2
（20×200mm大试管）。
2.制取20%的肝脏研磨液。
3.对比催化效率。
说明:
①本实验通过观察哪一个试管先有较大、较多气泡逸出。判断催化效率高低，不是收集整个过程的总气量，因为Fe3+的后期也会大量冒泡。
②过氧化氢有一定的腐蚀作用，勿溅到皮肤上，不小心滴上要用清水冲洗。
③也可用马铃薯块茎代替肝脏，取5g去皮的马铃薯，加3mL水研磨成桨，用双层纱布过滤成滤液，即可使用。
高中生物第一轮复习 实验9 实验设计专题研究系列之探究酶的特性及影响酶活性的因素课件
二、探索淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用 实验原理：
(2)还原糖＋斐林试剂―→砖红色氧化亚铜沉淀 (3)用淀粉酶分别催化淀粉和蔗糖后，再用斐林试剂鉴定， 根据是否生成砖红色沉淀来判断淀粉酶是否对二者都有 催化作用，从而探索酶的专一性。
精选ppt
实验目的： (1)初步学会探索酶催化特定化学反应的方法； (2)探索淀粉酶是否只能催化特定化学反应。
精选ppt
(2)自变量的控制： 在确定了自变量是温度梯度后，应将淀粉酶置于温度梯度下，如 25℃、26℃、27℃…… 控制变量的方法，常用的有“施加”“改变”“去除”等。 3．无关变量的确定与控制 例如：请指出探究pH对唾液淀粉酶活性的影响实验中的无关变量 是什么，就如何控制？ 分析：在该实验中，自变量是“pH的大小”，无关变量有温度、 唾液淀粉酶的量、淀粉溶液的量、反应时间、加入碘液的量及时 间等，在做实验时，对照组和实验组的以上因素都要相同且适宜。
检测
O2
的生成情况
酶溶液＋pHn＋反应物
精选ppt
【能力拓展】 实验设计中的变量分析
1．变量的种类 变量是实验设计中可以变化的因素或条件，依据变量间 的相互关系，可分为以下两类： (1)自变量与因变量：自变量是实验中由实验者所操纵的 因素，该因素的改变将引起实验结果的相应改变，是实 验要研究的因素。因变量是因自变量不同而导致的不同 的实验结果。它们之间是因果关系，自变量是原因，因 变量是结果。
高中生物实验知识：过氧化氢酶活性的测定
高中生物实验知识：过氧化氢酶活性的测定
过氧化氢酶广泛存在于植物的所有组织中，能将过氧化氢分解为氧和水，可使生物机体免受过氧化氢的毒害作用。测定过氧化氢酶的方法有测压法、滴定法以及分光光度法等。用氧电极法测量放氧速度，方法灵敏而快速。放氧速度与过氧化氢酶活性成正比。
仪器药品
氧电极仪记录仪
电磁搅拌器超级恒温水浴
注射器、微量注射器容量瓶
反应杯亚硫酸钠
过氧化氢酶
50mmol/L磷酸缓冲液，pH7.0(见附表2)。
50mmol/L过氧化氢溶液：取1.4ml30%H2O2用磷酸缓冲液定容至250ml即得。
标准过氧化氢酶溶液：称取过氧化氢酶
(Sigma)1.0mg(110U/mg)，溶于50mmol/L磷酸缓冲液
(pH7.0)11ml中，使酶浓度为10U/ml。
操作步骤
1.仪器的标定
按实验88步骤进行仪器的标定，以求得记录纸上每小格相当的含氧量。
2.绘制酶活性标准曲线
(1)在反应杯中放满过氧化氢磷酸缓冲液，开启电磁搅拌器搅动10分钟，插入电极，吸去溢出在电极外面的溶液，调节移位旋钮，使记录笔位于满刻度的10─20%左右，使记录纸走动，1─2分钟后温度达到平衡，记录笔画出直线。(2)用微量注射器从电极塞小孔中注入10μ110U/ml过氧化氢酶，立即记录最初90秒钟内的氧释放曲线。
(3)根据上述同样步骤，注入不同浓度的过氧化氢酶
10μl(例如浓度为20、30、40、50U/ml等)，记录氧释放曲线。
(4)取放氧曲线的直线部分，根据其斜率及走纸速度，计算每分钟氧的释放量。
(5)以过氧化氢酶活性单位为横坐标，每分钟氧的释放量为纵坐标，绘制标准曲线。
高中生物所有实验归纳
高考生物实验所有知识点！
一、考纲要求的课本实验
1．观察类实验
在此类实验中常综合运用显微观察技术、染色技术、玻片标本制作技术等。归类如下：
2．鉴别类实验
在此类实验中，常利用某种试剂对生物体或细胞中成分进行鉴别．针对不同的鉴别对象，采用不同的试剂。归类如下：
3．实习和研究性课题
此类实验常通过调查法，调查法中常使用统计技术和测量技术。
4.探究性实验
此类实验需要对某些生物学现象作出合理化的假设并通过设计实验进行验证。如教材中“比较过氧化氢酶和Fe3+的催化效率”、“探索淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用”、“温度对酶活性的影响”、“植物向性运动的实验设计和观察”等。
探究性生物学实验应当要求学生在明确实验要求、目的的前提下，遵循实验设计“操作方便．程序合理，药品节约．依据现象推测结论”的原则进行设计．一般可分以下几个环节：
(1)理论假设的提出
根据题目要求，确定实验的条件即实验变量X。即惟一一个对实验结果可能产生影响的变量。在此基础上提出理论假设．它常常可以描述为：“当条件X存在时，事件P(实验现象)可能发生；当条件X改变时，若事件P发生，能得出何结论；当事件P不发生．能得出何结论。”
(2)设计探究性实验
分五个实验步骤进行：
①实验准备，包括必要的实验器材及实验药品的准备；
②满足条件X，设计一个实验，观察事件P能否发生；
③条件X改变，设计一个实验，观察事件P能否发生，发生的程度如何；
④设计对照实验。
⑤梳理，实验是否遵循“单一变量”、“平行重复”原则。
(3)观察，记录和结论
仔细观察并准确记录实验现象．并根据实验现象做出相应的结论，一般规律是：
实验过氧化物酶活性的测定
试剂应存放在阴凉、干燥的地 方，避免阳光直射和污染。
实验器具的清洗与消毒
01
使用前，将实验器具清洗干净， 确保无残留物。
02
采用高压蒸汽灭菌法或干热法对 实验器具进行消毒，确保无菌操 作。
04
实验操作过程与结果分析
实验操作步骤与注意事项
准备实验材料
过氧化物酶溶液、底物 溶液、缓冲液等。
设置对照组
实验结果的分析与解释
结果分析
根据实验数据，分析过氧化物酶的活性变化，判断酶活性的 高低。
结果解释
结合实验结果，解释过氧化物酶活性变化的原因，分析可能 的影响因素。
05
实验误差来源与控制措施
实验误差来源的分析
操作误差
环境误差
实验过程中，由于操作不当或技能不 熟练导致的误差。
实验环境温度、湿度、光照等因素对 实验结果的影响。
实验结果的解释与应用
解释
过氧化物酶是一种重要的生物催化剂，在许多生物化学反应中发挥着关键作用。实验结果表明，该酶具有较高的 活性，这为其在生物医学、农业和工业等领域的应用提供了重要依据。
应用
过氧化物酶可用于治疗某些疾病、催化有机合成反应以及作为生物传感器等。此外，在农业方面，过氧化物酶还 可用于提高作物的抗逆性和产量。
过氧化物酶通过催化过氧化氢等氧化 剂与底物的氧化反应，发挥其生物催 化作用。
过氧化氢酶活性测定实验报告
过氧化氢酶活性测定实验报告
实验目的，通过测定过氧化氢酶活性，探究不同条件下过氧化氢酶的活性变化
规律，为进一步研究过氧化氢酶的功能和应用提供实验数据支持。
实验原理，过氧化氢酶是一种重要的酶类，在生物体内起着重要的氧化还原作用。本实验采用比色法测定过氧化氢酶活性，其原理是过氧化氢酶催化过氧化氢分解成水和氧气，过氧化氢酶活性与生成的氧气量成正比。
实验材料与方法，实验中所需材料包括过氧化氢酶、过氧化氢、磷酸盐缓冲液、吡啶甲酸钠盐等。首先，按照一定比例将过氧化氢酶和过氧化氢混合，然后加入磷酸盐缓冲液和吡啶甲酸钠盐，使混合液在一定温度下进行反应。接着，通过比色法测定生成的氧气量，进而计算出过氧化氢酶的活性。
实验结果与分析，在不同温度、pH值、底物浓度等条件下，测得过氧化氢酶
的活性数据。通过对比分析不同条件下的活性数据，发现过氧化氢酶在不同条件下呈现出不同的活性变化规律。在温度较低时，过氧化氢酶活性较低；在酸性环境下，过氧化氢酶活性受到抑制；随着底物浓度的增加，过氧化氢酶活性呈现出逐渐增加的趋势。
结论与讨论，通过本实验，我们得出了过氧化氢酶活性与温度、pH值、底物
浓度等因素之间的关系。这些结果对于深入研究过氧化氢酶的功能机制，以及在生物医学、生物工程等领域的应用具有一定的指导意义。同时，我们也发现过氧化氢酶在不同条件下表现出不同的活性变化规律，这为进一步探究过氧化氢酶的调控机制提供了重要的实验数据支持。
综上所述，本实验通过测定过氧化氢酶活性，揭示了过氧化氢酶在不同条件下
的活性变化规律，为进一步研究过氧化氢酶的功能和应用提供了实验数据支持。希望本实验结果能够为相关领域的研究工作提供一定的参考价值。
【实验总结】高中生物实验知识：比较酶和Fe3+的催化效率
【实验总结】高中生物实验知识：比较酶和Fe3+的催
化效率
考点提示：
为何要选新鲜的肝脏?因为在不新鲜的肝脏中，过氧化氢酶的活性会由于细菌的破坏而降低。
该实验中所用试管应选较粗的还是较细的?为什么?应选用较粗的，因为在较细的试管中容易形成大量的气泡，而影响卫生香的复燃。
为何要选动物的肝脏组织来做实验，其他动植物的组织的研磨液能替代吗?因为肝脏组织中过氧化氢酶含量较丰富;其它动植物组织也含有少量的过氧化氢酶，所以能够替代。
相同质量的块状肝脏和肝脏研磨液，哪一个催化效果好?为什么?研磨液效果好;因为它增加过氧化氢酶与过氧化氢的接触面积。
滴入肝脏研磨液和氯化铁溶液时，可否共用下个吸管?为什么?不可共用，防止过氧化氢酶与氯化铁混合，而影响实验效果。
观察类实验
在此类实验中常综合运用显微观察技术、染色技术、玻片标本制作技术等。归类如下：
实验名称观察方式观察对象显微镜玻片标本染色剂生物材料观察叶绿体原色观察叶绿体高倍临时装片无菠菜叶观察细胞
质流动细胞质(以叶绿体作参照)高倍临时装片无黑藻
嫩叶
观察质壁分离与复原紫色大液泡高倍临时装片无洋葱
表皮
观察有
丝分裂染色观察染色体高倍临时装片龙胆紫
(醋酸洋红)洋葱根尖脂肪的鉴定脂肪高倍切片→临时装片苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液花生种子
鉴别类实验
在此类实验中，常利用某种试剂对生物体或细胞中成分进行鉴别.针对不同的鉴别对象，采用不同的试剂。归类如下：
实验名称鉴定对象试剂颜色水浴加热生物材料生物组织中糖类的鉴定淀粉碘液蓝色无脱色的叶片还原糖斐林试剂
(班氏试剂)砖红色需要(加热煮沸)含糖量高的白色或近白色的植物组织、尿液、血浆
(整理)高中生物必修1《实验探究影响酶活性的因素》教案
探究影响酶活性的因素教案
一、教学目标
1知识目标：概述温度、pH 的变化对酶活性的影响。
2能力目标：
①通过探究影响酶活性的因素，发展学生的科学探究能力
②培养学生观察、分析问题，解决问题的能力
③培养学生实验操作能力
④提高学生收集资料和语言表达能力。
3情感目标：
①通过探究影响酶活性的因素，培养学生的探索精神、创新精神和合作精神
②培养学生实事求是和严谨的科学态度
③激发学生对生物科学的兴趣和热爱，培养学生理论联系实际。
二、教学重点和难点
1. 教学重点：设计探究实验方案，实验操作动手能力
2．难点：影响酶活性因素的探究。
设计探究实验方案，实验操作动手能力
三、课时安排：1课时
四、教学过程：
一、导入：
播放“雕牌加酶洗衣粉”的广告视频，教师总结并导入新课：通过刚才的视频我们知道加酶洗衣粉的蛋白污渍去污能力比国家标准
高了2倍，这主要是和什么有关？酶（确切的说是和酶的活性有关）。细胞中几乎所有的化学反应都是由酶来催化的，那么环境条件的改变能否影响到酶的活性呢？今天我们就一起来探究影响酶活性的条件。什么是酶的活性呢？（酶对化学反应的催化效率。酶活性越高，催化效率越高，化学反应速率越快。）
下面我们来看一个雕牌洗衣粉包装袋背面的洗衣说明，在这个说明中你有什么疑问呢？加酶的洗衣粉的使用说明中为什么强调对温
度的要求？
二、师生互动探讨新课
（1）展示资料：
资料一：
①洗前浸泡三十分钟，效果更佳
②若衣服太脏，可适当增加用量
③用温水浸泡效果更好，但水温不要超过60℃,
实验证明：用加酶洗衣粉时，温水的洗涤效果要比冷水好
资料二：当口腔中的唾液淀粉酶进入胃中以后，不再具有催化淀粉分解的功能。胃中的蛋白酶随食糜进入小肠后也不再具有催化功能。
探索影响过氧化氢酶活性条件的实验设计
探索影响过氧化氢酶活性条件的实验设计
安徽省歙县中学高二年级罗琼李岚方声阳徐冉
指导教师吴宏昌吴美琴
问题由来：2002年10月上旬，在做高中《生物》（必修）第一册实验六《探索淀粉酶对淀粉和蔗糖水解作用》实验时，因没有α－淀粉酶，改用唾液淀粉酶，但取唾液极为繁琐。实验七《探索影响淀粉酶活性的条件》实验，如仍用唾液，唾液量比实验六多1倍，显然行不通，于是老师用新鲜猪肝中的过氧化氢酶替代，结果发现实验中存在着不足，还有许多亟待改正之处。于是萌发了用新鲜猪肝中的过氧化氢酶重新设计实验七的想法。
1 用新鲜猪肝中的过氧化氢酶替代α－淀粉酶实验设计优点
1）材料简单易推广据了解，α－淀粉酶难以购买（黄山市没有），价格较贵，且要新鲜。而大量的唾液淀粉酶也难取，故近两年新教材中的实验七几乎未做（黄山市内）。而猪肝购买和使用方便，价格便宜。
2）实验的时间短整个实验约15分钟，比用α－淀粉酶实验少5分钟。
3）现象明显易操作过氧化氢在过氧化氢酶的作用下生成水和氧气，氧气易检验和观察。
2实验计划①2002年10月上旬，做了高中《生物》第一册实验六和实验七之后，萌发重新设计实验的想法。②自学一些酶和实验设计的有关知识。
③2003年元旦放假时，组成实验小组，共同研究，初步确定实验方案。④寒假开始，实验小组分析实验方案，制订实验实施细则，分步实施。⑤2003年春节前，撰写小论文。⑥对论文中的不足之处，在开学前继续实验探讨。
3 实验原理利用酶专一性：新鲜的猪肝中含有过氧化氢酶能使过氧化氢分解产生水和氧气。
4实验材料用具
100ml烧杯、天平、研钵、20ml量杯、胶头滴管、纱布、15×150mm试
高二生物探究影响酶活性的因素实验知识点
高二生物探究影响酶活性的因素实验知识点
高中生物中的实验也是考试中经常出现的题型，大家要保持足够的重视。以下是店铺为您整理的关于高二生物探究影响酶活性的因素实验知识点的相关资料，希望对您的学习有所帮助。
高二生物探究影响酶活性的因素实验：
探究影响酶活性的因素
原理：淀粉遇碘后，形成蓝色的复合物。淀粉酶可以可以使淀粉水解成麦芽糖，麦芽糖遇碘后，不形成蓝色的复合物。
1、材料：新配置的淀粉酶溶液，新鲜肝脏研磨液，可溶性淀粉溶液，过氧化氢溶液等。
2、步骤：
(1)探究温度对酶活性的影响
温度对酶活性的影响
在温度对酶活性的影响的实验中，三支试管的条件，除温度外均相同。3号试管处在60℃的温度条件下，酶活性最大，试管中的淀粉被分解，滴入碘液后不会变蓝。2号试管的温度条件是100℃，这样高温度条件下，淀粉酶已失去活性，1号试管的温度条件是O℃，低温抑制淀粉酶的活性。所以2号和1号试管中的淀粉都没有被分解，滴上碘液后都会变蓝，此实验可以证明;酶的催化作用需要适宜的温度条件，温度过高和过低都将影响酶的活性。
(2)探究pH对酶活性的影响
实验1 过氧化氢(H2O2)在过氧化氢酶的催化作用下，可以分解成水和氧气，可以放入带火星的木条，看能否复燃来检测是否有氧气产生。
2号试管内加入了盐酸，溶液的pH较低，3号试管内加入了氢氧化钠，溶液的pH较高，在过低或过高pH环境中，过氧化氢酶失去活性，不能使过氧化氢分解，没有氧气产生而1号试管没有加入酸或碱，溶液近似中性，过氧化氢酶将过氧化氢分解成水和氧气，使木条复燃。
实验2
原理：淀粉在淀粉酶的作用下，被分解成麦芽糖，麦芽糖能与斐林试剂发生氧化还原反应，生成砖红色沉淀
高中生物课件—《酶的作用》—比较过氧化氢在不同条件下的分解
变量
自 变 量 — 人控为制改自变的变变量量
实因验变过量程中—可随观以自变察变化因量的变变因化素量而。变化的变量 无关变量— 减对少实验无结关果变造量成影响的干扰因素
步骤
试管编号
变量
1
2
3
4
一 H2O2 溶液 剂量
反应条件 二
剂量
3% 2ml
常温
—
3% 2ml
90℃
—
3% 2ml
FeCl3 2滴
3% 无关变量
2ml
肝脏研 磨液
自变量
2滴 无关变量
结 果
气泡产生 不明显 少量 较多
卫生香复燃 程度
不复燃
不复燃
变亮
大量 复燃
因变量
对照实验
对照组 实验组
对照
原则：单一变量
除一个因素外其余因素都保持不变的实验
对照步实骤验
对照组 试管编实号验组
1
2
3
4
变量
一 H2O2 溶液 剂量
反应条件 二
剂量
3% 2ml
常温
卫生香
燃烧 达到着火点
木棒
未燃烧 未到着火点
降低着火点、增强火力等
分子从常态转变为容易发生化学反应的活 跃状态也需要一定的能量；并称为活化能。
如果化学反应所需活化能越多；则反应越 不容易 （容易/不容易）发生；
高中生物必修一实验总结
高中生物必修一实验总结
必修一高中生物实验总结一
比较酶和Fe3+的催化效率
考点提示：
1为何要选新鲜的肝脏?因为在不新鲜的肝脏中，过氧化氢酶的活性会由于细菌的破坏而降低。
2该实验中所用试管应选较粗的还是较细的?为什么?应选用较粗的，因为在较细的试
管中容易形成大量的气泡，而影响卫生香的复燃。
3为何要选动物的肝脏组织来做实验，其他动植物的组织的研磨液能替代吗?因为肝脏组织中过氧化氢酶含量较丰富;其它动植物组织也含有少量的过氧化氢酶，所以能够替代。
4相同质量的块状肝脏和肝脏研磨液，哪一个催化效果好?为什么?研磨液效果好;因为它增加过氧化氢酶与过氧化氢的接触面积。
5滴入肝脏研磨液和氯化铁溶液时，可否共用下个吸管?为什么?不可共用，防止过氧
化氢酶与氯化铁混合，而影响实验效果。
必修一高中生物实验总结二
色素的提取和分离
1、原理：
叶绿体中的色素能溶解在有机溶剂丙酮或无水乙醇——提取色素
各色素在层析液中的溶解度不同，随层析液在滤纸上扩散速度不同——分离色素
2、步骤：
1提取色素研磨
2制备滤纸条
3画滤液细线：均匀，直，细，重复若干次
4分离色素：不能让滤液细线触及层析液
5观察和记录：结果滤纸条上从上到下依次为：橙黄色胡萝卜素、黄色叶黄素、蓝绿色叶绿素a、黄绿色叶绿素b。
考点提示：
1对叶片的要求?为何要去掉叶柄和粗的时脉?绿色、最好是深绿色。因为叶柄和叶脉中所含色素很少。
2二氧化硅的作用?不加二氧化硅对实验有何影响?为了使研磨充分。不加二氧化硅，会使滤液和色素带的颜色变浅。
3丙酮的作用?它可用什么来替代?用水能替代吗?溶解色素。它可用酒精等有机溶剂来代替，但不能用水来代替，因为色素不溶于水。
高中生物实验：影响酶活性的条件
高中生物实验：影响酶活性的条件
一、实验目的：
1、初步学会探索影响酶活性条件的方法。
2、探索过氧化氢酶在不同温度和PH下催化过氧化氢水解的情况。
二、实验原理：
淀粉遇碘后，形成紫蓝色的复合物。麦芽糖和葡萄糖遇碘后，不形成紫蓝色的复合物，但能
与斐林试剂发生氧化还原反应，生成砖红色的氧化亚铜沉淀。
三、实验材料：
质量分数为2%的新配置的淀粉酶溶液，新鲜的质量分数为20%的猪肝研磨液，
质量分数为3%的可溶性淀粉溶液，新配制的体积分数为3%的过氧化氢溶液，
质量分数为5%的盐酸，质量分数为5%的氢氧化钠溶液，蒸馏水，冰水，热水，
碘液，斐林试剂
四、实验用具：量筒，试管，滴管，试管夹，三脚架，火柴，酒精灯，小烧杯，大烧杯，石棉网，温度计，
五、方法步骤：
一、温度对酶活性的影响
1、取三支洁净的试管，编上号1，2，3，并分别注入2ml可溶性淀粉液。
2、分别向1，2，3号三支试管中各注入1ml新鲜的淀粉酶溶液，摇匀，依次放入沸水，37℃左右的热水，冰水中，维持各自的温度5分钟。
3、分别向1，2，3号三支试管中各滴入一滴碘液，然后摇匀。观察并记录这三只试管中，溶液颜色的变化情况。
二、pH对酶活性的影响
1、取三支洁净的试管，编上号1，2，3，并分别注入1ml的新鲜的淀粉酶溶液。
2、依次向1号，2号，3号试管中注入蒸馏水，氢氧化钠溶液，稀盐酸各1ml并摇匀。
3、分别向1号，2号，3号试管中各注入2ml可溶性淀粉溶液，震荡摇匀。
4、将三支试管的下半部浸到37℃左右的温水中，保温5分钟。
5、向三支试管中各加入2ml斐林试剂，震荡摇匀。
实验十一 植物体内过氧化物酶活性的测定
三、实验步骤
1. 提取酶液：
叶片2片（w gFW）+pH7.0磷酸缓冲液5mL 研磨，离心（4000rpm*10min），上清液 即为粗酶液。
2、配制反应液
1mol/L 磷酸缓冲液（pH6.0） 50ml +28uL愈创木酚+19uLH2O2(30%)
一般临用前配制，冰箱内短期保存。
2、酶反应
实验十一 植物体内过氧化物酶 活性的测定
——愈创木酚比色法
一、原理
过氧化物酶 过氧化物酶[perox idase, POD] 广泛 存在于各种动物、植物和微生物体内。 催化由过氧化氢参与的各种还原剂的氧 化反应: RH2+ H2O2→2H2O + R
•2 POD 分子结构特点
POD 是一种由单一肽链与卟啉构成的血 红素蛋白, 脱辅基蛋白分子须与血红素结 合才构成全酶。
3mL反应液+0.2mL粗酶液，震荡混匀后 立刻记时，以3mL反应液+ 0.2mL磷酸缓 冲液调零，测OD470，30’’内读第一次数， 之后每10S读数一次，至OD值>1.000。
wenku.baidu.com、计算酶活性
选取OD值变化较均匀的一段数据，代入公式 计算； 以每分钟OD值变化0.01作为1个过氧化物酶活 力单位（U）。
酶活力=
活力单位(U) w(g FW)
过氧化氢酶活力的测定碘量法
过氧化氢酶活力的测定碘量法
过氧化氢酶活力的测定可使用碘量法来进行。具体步骤如下：
1.准备样品：制备合适浓度的过氧化氢酶样品。
2.制备反应液：将适量的磷酸缓冲液倒入试管中，加入适量的
过氧化氢底物。
3.加入样品：向反应液中加入过氧化氢酶样品。
4.开始反应：立即加入一定浓度的碘化钾溶液。
5.反应停止：加入淀粉溶液，用以观察碘化物是否被消耗完。
6.蓝色终点的判定：当溶液出现蓝色时，立即停止加淀粉溶液，记录下此时的反应时间。
7.对照试验：进行空白对照实验，重复以上步骤，但不加入过
氧化氢酶样品。
8.测定活力：根据反应时间计算出过氧化氢酶的活力值，活力
值等于样品试验结果减去对照试验结果。
需要注意的是，测定过程中需保证反应均匀和充分，同时需要计算和排除非酶催化的部分反应速率。
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高中生物实验知识：过氧化氢酶活性的测定过氧化氢酶广泛存在于植物的所有组织中，能将过氧化氢分解为氧和水，可使生物机体免受过氧化氢的毒害作用。测定过氧化氢酶的方法有测压法、滴定法以及分光光度法等。用氧电极法测量放氧速度，方法灵敏而快速。放氧速度与过氧化氢酶活性成正比。
仪器药品
氧电极仪记录仪
电磁搅拌器超级恒温水浴
注射器、微量注射器容量瓶
反应杯亚硫酸钠
过氧化氢酶
50mmol/L磷酸缓冲液，pH7.0(见附表2)。
50mmol/L过氧化氢溶液：取1.4ml30%H2O2用磷酸缓冲液定容至250ml即得。
标准过氧化氢酶溶液：称取过氧化氢酶
(Sigma)1.0mg(110U/mg)，溶于50mmol/L磷酸缓冲液
(pH7.0)11ml中，使酶浓度为10U/ml。
操作步骤
1.仪器的标定
按实验88步骤进行仪器的标定，以求得记录纸上每小格相当的含氧量。
2.绘制酶活性标准曲线
(1)在反应杯中放满过氧化氢磷酸缓冲液，开启电磁搅拌器搅动10分钟，插入电极，吸去溢出在电极外面的溶液，调节移位旋钮，使记录笔位于满刻度的10─20%左右，使记录纸走动，1─2分钟后温度达到平衡，记录笔画出直线。
(2)用微量注射器从电极塞小孔中注入10μ110U/ml过氧化氢酶，立即记录最初90秒钟内的氧释放曲线。
(3)根据上述同样步骤，注入不同浓度的过氧化氢酶10μl(例如浓度为20、30、40、50U/ml等)，记录氧释放曲线。(4)取放氧曲线的直线部分，根据其斜率及走纸速度，计算每分钟氧的释放量。
(5)以过氧化氢酶活性单位为横坐标，每分钟氧的释放量为纵坐标，绘制标准曲线。
3.样品测定
(1)在反应怀内注入50mmol/L过氧化氢磷酸缓冲液搅动10分钟，插上电极，待记录为一直线后，注入10μl合适浓度的待测酶液样品，立即记下最初90秒钟内的放氧曲线。(2)根据样品的放氧曲线，计算得到每分钟的放氧量，在标准曲线上查得酶活性大小。
(3)如果没有标准的过氧化氢酶，不能计算酶活性单位时，也可以用每分钟的放氧量相对地表示酶的活性大小。