高效液相色谱柱效能的测定

高效液相色谱柱柱效测定

一、实验目的

1．了解高效液相色谱仪的基本结构和工作原理

2．学习高效液相色谱仪的使用

3．学习、掌握液相色谱柱柱效测定方法

二、基本原理

高效液相色谱法是以液体作为流动相的一种色谱分析法，它亦是根据不同组分在流动相和固定相之间的分配系数的差异来对混合物进行分离的。气相色谱中评价色谱柱柱效的方法及计算理论塔板数的公式同样适合于高效液相色谱，即：

式中：t R为组分的保留时间

Y1/2为色谱峰的半峰宽度

Y为色谱峰的峰底宽度

三、仪器和试剂

1．仪器1：KLC321型高效液相色谱仪（紫外检测器）

2．5μl微量进样器

3．试剂：甲酯、乙酯、丙酯、丁酯、混合液

四、实验条件

1．色谱柱1 长15cm，内径4.6mm，装填10 m的C-18烷基键合固定相

2．流动相甲醇:水（85:15），流量min

3．紫外光度检测器波长254nm，灵敏度

4．进样量5ul

五、实验步骤

1．根据实验条件和实验录像指导，按KLC321仪器操作步骤将仪器调节至进样状态，待仪器流路及电路系统达到平衡，色谱工作站之“采样系统”基线平直时，即可进样。

2．分别吸取5μl甲酯、混合液，并用色谱工作站记录色谱数据，同时记录色谱数据文件名。

3．用色谱工作站之“数据处理”系统处理数据文件并记录所需数据。

六、数据记录及处理

单位：min

单液