精子冻存小鼠基因型鉴定资料
小鼠胚胎-精子冷冻保种申请表-清华大学试验动物中心
小鼠胚胎/精子冷冻保种申请表需要填写的资料：说明：1.*表示必须填写；2.保种方式的选择：我们采用精子冻存和胚胎冻存的方法进行保种；假如为杂合子，雄性数量≥3只并且可以和B6交配做净化，我们推荐安乐死一只雄鼠使用精子冻存的方式保种，可以有效控制保种周期，不受雌鼠排卵多少的限制。
3.保种对提供小鼠的要求：精子冻存冷冻精子需要提供的小鼠信息：阳性纯合子雄鼠，2-3只，12-18W（最佳），生育能力良好，在实验前7d内进行过成功交配，而在3d内未交配过；冻存2只/品系，20个麦管。
费用：200元/麦管冷冻的流程和所需的时间：1)提前1周邮件预约申请，写明小鼠品系名称、数量、出生日期、所在位置。
2)通过申请后安排实验，精子冻存后至少1周进行复苏检测实验（1麦管）。
3)等待代孕小鼠生仔（孕期19.5天，小鼠出生后10-12天剪尾，通知取回鼠尾检测，（一周内反馈检测结果。
）冷冻后的保存：液氮中保存终生免费保存。
精子复苏（除复苏检测外）a、外来精子复苏提前1周邮件预约申请，写明小鼠冻精信息（品系，数量），送达时间。
从接收之日起，1周内安排复苏实验精子复苏采用体外受精的方式得到2-cell期胚胎，输卵管移植生仔。
（孕期19.5天，小鼠出生后10-12天剪尾，通知取回鼠尾检测，一周内反馈检测结果。
）费用：IVF 500元，IVF用B6（含激素）40元/只，移植用受体单侧100元/只，双侧180元/只，试剂和人工费100元。
如需其他品系雌鼠，需从外单位订购。
b、动物中心精子复苏提前1周邮件预约申请，写明复苏品系。
精子复苏采用体外受精的方式得到2-cell期胚胎，输卵管移植生仔。
（孕期19.5天，小鼠出生后10-12天剪尾，通知取回鼠尾检测，一周内反馈检测结果。
）费用：IVF 500元，IVF用B6（含激素）40元/只，移植用受体单侧100元/只，双侧180元/只，试剂和人工费100元。
注意事项：1. 运输过程中：请使用专业运输工具（航空罐）进行运输，运输过程中请避免磕碰，注意液氮充足。
flox cre小鼠基因型鉴定流程
floxed cre 鼠标代表一种基因工程的菌株，其特征是有loxP站点侧绕特定基因或基因。
将这种肌肉模型基因化的目的是明确确认软体基因
和cre rbinase基因的存在。
这种验证是研究人员不可或缺的先决条件，因为它直接影响到鼠标的phenotypic和行为特征。
基因分解程
序要求从老鼠身上提取DNA，然后扩大特定的DNA区域，然后对肽
进行分析，以确定浮离基因和cre基因是否存在。
在格诺泰平的微妙舞蹈中，第一个崇敬的步子始于从高尚的老鼠中温
柔地提取DNA。
一种小的供奉组织，无论是从耳朵还是从尾部，在经过温柔的处理以释放体内生命的精髓之前，都要以庄严的敬意来收集。
为此使用了一系列神秘的脱氧核糖核酸提取包和神圣协议，每项选择
都以虔诚的考虑为目的，考虑加固基因组仪式的具体需要。
珍贵的DNA被解放后，它被测量和稀释到一个统一的标准，确保每个片段携带相同的乙醚浓度，与宇宙的和谐共振。
基因分解程序的随后阶段，需要扩大含有loxP和cre序列的特定
DNA区域。
这一关键过程通常通过聚合酶链式反应（PCR）加以执行，这种反应使用精细设计的基本素，有选择地与上述区域结合。
随后，PCR产品通过agarose凝胶电泳检查，目的是可视化放大DNA碎片
的存在。
正乌将表现为与PCR产品预期大小相匹配的波段，表示浮离基因和cre基因的存在。
反之，负值将显示无带，表明目标基因的缺乏。
通过应用测序法或替代分子方法，可能有必要对基因组结果进行
后续核查。
小鼠精子畸形实验报告
一、实验目的本实验旨在探究不同因素对小鼠精子形态的影响，分析精子畸形率的变化，评估其对小鼠生殖健康的影响。
二、实验材料1. 实验动物：昆明种雄性小鼠，体重25~30g。
2. 实验药品：白头翁水提取物、硫酸镉、丝裂霉素C。
3. 实验器材：显微镜、染色液、培养皿、注射器、剪刀、眼科剪等。
三、实验方法1. 将实验动物随机分为五组，每组10只：阴性对照组、阳性对照组、硫酸镉诱变实验组、白头翁诱变实验组、白头翁+硫酸镉复合诱变实验组。
2. 阴性对照组：正常饲养，不予任何处理。
3. 阳性对照组：腹腔注射丝裂霉素C（1.0mg/kg）一次，模拟化学物质对精子的影响。
4. 硫酸镉诱变实验组：腹腔注射硫酸镉（44、22和11mg/kg，相当于1/2、1/4和1/8 LD50）一次，模拟重金属对精子的影响。
5. 白头翁诱变实验组：灌胃白头翁水提取物（1.0、2.0、4.0和8.0g/kg，相当于人5、10、20和40临床剂量）一次，模拟中药对精子的影响。
6. 白头翁+硫酸镉复合诱变实验组：同时给予硫酸镉和白头翁水提取物处理。
7. 实验后35天，处死动物，取出两侧副睾，放入盛有2mL生理盐水的平皿中。
8. 用眼科剪将副睾纵向剪1～2刀，静止3～5min，轻轻摇动。
9. 用四层擦镜纸过滤，吸滤液涂片。
10. 空气干燥后，用甲醇固定5min以上干燥。
11. 用1%～2%伊红染色1min，用水冲洗。
12. 镜检精子形态，记录精子畸形率。
四、实验结果1. 阴性对照组：精子畸形率为5%。
2. 阳性对照组：精子畸形率为30%。
3. 硫酸镉诱变实验组：精子畸形率为20%。
4. 白头翁诱变实验组：精子畸形率为10%。
5. 白头翁+硫酸镉复合诱变实验组：精子畸形率为35%。
五、讨论1. 实验结果表明，硫酸镉和丝裂霉素C对小鼠精子形态有显著的畸形作用，导致精子畸形率升高。
2. 白头翁水提取物对硫酸镉诱变有明显的抑制作用，降低精子畸形率。
实验四 小鼠精子畸形试验
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开 始
结 束
3
经口急性毒性 实验
实验目的 实验内容 实验材料 实验步骤 实验结果 结果分析
2. 实验原理
检查雄性动物接触化学毒物后精子畸形率 检查雄性动物接触化学毒物后精子畸形率 的高低，来反映该化学毒物的生殖毒性 生殖毒性和 的高低，来反映该化学毒物的生殖毒性和 对生殖细胞潜在的致突变性 致突变性。 对生殖细胞潜在的致突变性。 化学毒物引起精子畸形的机制尚未完 全清楚。正常情况下， 全清楚。正常情况下，精子的成熟和正常 形态发生过程受多种基因调控，一旦这些 形态发生过程受多种基因调控， 基因中的一个或多个在化学毒物的作用下 发生突变，就会导致畸形精子数量 畸形精子数量的大量 发生突变，就会导致畸形精子数量的大量 增加。一般认为， 增加。一般认为，常染色体上的基因控制
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开 始
结 束
南京晓庄学院
3
经口急性毒性 实验
实验目的 实验内容 实验材料 实验步骤 实验结果 结果分析
6. 注意事项
1．在该试验过程中，虽然将精子悬液采用离心 在该试验过程中， 等方法除去组织残渣后再制片效果会更佳， 等方法除去组织残渣后再制片效果会更佳，但这 使制片过程变得复杂化且更易造成人为误差。 使制片过程变得复杂化且更易造成人为误差。 2．在镜检时要注意鉴别制片过程中人为造成的 精子损伤。 精子损伤。特别要注意由于精子重叠和交叉所造 成的如多头、双头、双尾及多尾畸形等假象。 成的如多头、双头、双尾及多尾畸形等假象。 3．在结果判定时，要注意排除机体某些如缺血、 在结果判定时，要注意排除机体某些如缺血、 变态反应、 变态反应、感染和体温增高等可能导致精子畸形 率增高的因素，以免造成假阳性结果。 率增高的因素，以免造成假阳性结果。
C57BL／6品系小鼠精子冷冻保护剂的选择
C57BL／6品系小鼠精子冷冻保护剂的选择遗传工程技术的快速发展，遗传修饰小鼠的获得越来越容易，如何高质量保存这些小鼠资源已经成为一个重要的问题。
精子冷冻保存是指将精子保存于超低温状态下，使精子新陈代谢速度减慢或停止，一旦恢复正常生理温度又能继续发育的过程。
小鼠精子冷冻保种法由于其操作简单、经济、并且产生后代的潜在能力强，已经在国外很多实验动物中心广泛使用，但国内动物中心普遍还是采用传统的小鼠活体保种法。
由于活体保种法非常不经济，又存在种源动物易污染，珍贵品系易丢失等潜在风险。
鉴于目前遗传修饰小鼠大部分是C57BL/6品系背景的，因此，建立和健全完善的C57BL/6品系小鼠精子冻存保种系统迫在眉睫。
本文通过对比三种不同的精子冻存保护剂，找出适合C57BL/6品系小鼠的精子冻存保护剂。
标签：C57BL/6品系；精子冻存；冷冻保护剂1 遗传修饰小鼠的获得现状作为常用的模式生物之一，小鼠在现代生物医学研究中发挥着不可或缺的作用。
随着遗传工程技术的快速发展，遗传修饰小鼠的获得越来越容易，如何高质量保存这些小鼠资源已经成为一个重要的问题，建立和健全完善的小鼠保种体系是生物医学发展的迫切需求。
小鼠保种方法主要有活体保种、胚胎冷冻、卵母细胞冷冻、精子冷冻、精子冻干等。
目前国际上比较常用的是胚胎冷冻和精子冷冻[1-2]。
但由于小鼠精子有较大的镰刀状头部和较长的尾部，对冷冻造成的机械损伤非常敏感，同时小鼠精子质膜成分特殊导致其对冷冻渗透压耐受性低[3-4]，所以小鼠精子冷冻完后成活率与复苏率非常低。
直到Nakagata发明的“Nakagata冷冻法”）[5-8]。
尽管Nakagata冷冻法对于部分小鼠品系的精液的冷冻保存具有很好的效果，但对于实验室广泛使用的C57BL/6、BALB/C等近交系小鼠的精子用Nakagata冷冻法冻完后的成活率和受精率远远低于封闭群和杂交小鼠[3，9]。
C57BL/6等实验室常用近交系小鼠的精子冷冻已成为当前急剧增加的遗传工程小鼠保种的一个瓶颈，同时也是国内外研究的热点。
小鼠基因型鉴定说明书Mouse Genotyping
1.2. 在灭菌1.5 ml EP管中，添加200 μl 1×裂解液至所需裂解组织中，涡旋震荡后在55oC水浴中孵育20 min。为保证DNA 释放效率，请务必将组织全部浸没至裂解液中。孵育结束后组织块可能并未消化完全，属正常情况，不影响使用。对于常 规大小目标片段，20 min孵育已足以释放足量的DNA模板。孵育时间也可根据实际情况进行调整，下表为55oC下推荐孵育 时间：
2.2. 推荐PCR反应条件设置：
94oC 94oC 55oC* 72oC 72oC
5 min(预变性)
30 sec
30 sec
}
30 sec/k需要根据引物Tm值进行调整，一般设置成低于引物Tm值1-2℃即可。 2.3. 扩增产物直接进行琼脂糖电泳检测，无需添加DNA Loading Buffer。
to 50 μl 25 μl 2～5μl 2 μl 2 μl 10 μl
*1 Taq Plus Master Mix (Dye Plus)中预混有1.5 mM的Mg2+。在实际使用过程中，可使用试剂盒提供的25 mM MgCl2进行 调整，调整间隔为每次增加0.5 mM。 *2 裂解产物加入量不应超过PCR反应总体积的1/10。 *3 5 × PCR Enhancer可显著提高GC-rich片段的扩增效率。在初次使用某引物对进行扩增时，可设置添加/不添加两平行 对照组。如添加后扩增产量或特异性无明显提升，则无需添加。
One Step Mouse Genotyping Kit
PD101-01
Vazyme biotech co., ltd.
产品简介
本试剂盒包含整套的DNA粗提取以及PCR扩增体系，可用于小鼠基因型快速鉴定(Rapid Genotyping)。该试剂盒可用于从 小鼠尾巴、耳朵以及脚趾等组织快速提取基因组DNA，提取产物可直接进行PCR扩增，无需匀浆、破碎、过夜消化、酚氯 仿抽提、DNA沉淀或柱式纯化等操作，极大缩短了实验耗时。使用时，将组织浸泡在预添加了Proteinase K的裂解液中， 55oC孵育20 min再95oC加热5 min灭活Proteinase K。裂解产物经离心后可直接用做PCR扩增模板，经反复测试广泛适用于 2 kb以内目标片段扩增，并适用于4对引物以内的多重PCR反应。 试剂盒中配有2 × Taq Plus Master Mix(Dye Plus)(P212)，包含高性能的Taq Plus DNA Polymerase，dNTP以及优化的缓 冲体系。PCR反应时只需加入引物和模板即可进行扩增，减少了开管/移液等操作，显著降低了样品交叉污染并且提高了检 测通量和结果的重现性。独特的保护剂使得Taq Plus Master Mix经过反复冻融后仍可保持稳定的活性。体系中预混有电泳 缓冲液和染料，可在反应结束后直接进行电泳，使用方便快捷。PCR产物的3’端带A，可克隆至T载体，并适用于 ClonExpressTM快速克隆试剂盒(C112/C113)。
小鼠胚胎-精子冷冻保种申请表-清华大学试验动物中心
小鼠胚胎/精子冷冻保种申请表需要填写的资料：说明：1.*表示必须填写；2.保种方式的选择：我们采用精子冻存和胚胎冻存的方法进行保种；假如为杂合子，雄性数量≥3只并且可以和B6交配做净化，我们推荐安乐死一只雄鼠使用精子冻存的方式保种，可以有效控制保种周期，不受雌鼠排卵多少的限制。
3.保种对提供小鼠的要求：精子冻存冷冻精子需要提供的小鼠信息：阳性纯合子雄鼠，2-3只，12-18W（最佳），生育能力良好，在实验前7d内进行过成功交配，而在3d内未交配过；冻存2只/品系，20个麦管。
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）费用：IVF 500元，IVF用B6（含激素）40元/只，移植用受体单侧100元/只，双侧180元/只，试剂和人工费100元。
注意事项：1. 运输过程中：请使用专业运输工具（航空罐）进行运输，运输过程中请避免磕碰，注意液氮充足。
小鼠基因型鉴定说明书Mouse Genotyping
One Step Mouse Genotyping Kit
PD101-01
Vazyme biotech co., ltd.
产品简介
本试剂盒包含整套的DNA粗提取以及PCR扩增体系，可用于小鼠基因型快速鉴定(Rapid Genotyping)。该试剂盒可用于从 小鼠尾巴、耳朵以及脚趾等组织快速提取基因组DNA，提取产物可直接进行PCR扩增，无需匀浆、破碎、过夜消化、酚氯 仿抽提、DNA沉淀或柱式纯化等操作，极大缩短了实验耗时。使用时，将组织浸泡在预添加了Proteinase K的裂解液中， 55oC孵育20 min再95oC加热5 min灭活Proteinase K。裂解产物经离心后可直接用做PCR扩增模板，经反复测试广泛适用于 2 kb以内目标片段扩增，并适用于4对引物以内的多重PCR反应。 试剂盒中配有2 × Taq Plus Master Mix(Dye Plus)(P212)，包含高性能的Taq Plus DNA Polymerase，dNTP以及优化的缓 冲体系。PCR反应时只需加入引物和模板即可进行扩增，减少了开管/移液等操作，显著降低了样品交叉污染并且提高了检 测通量和结果的重现性。独特的保护剂使得Taq Plus Master Mix经过反复冻融后仍可保持稳定的活性。体系中预混有电泳 缓冲液和染料，可在反应结束后直接进行电泳，使用方便快捷。PCR产物的3’端带A，可克隆至T载体，并适用于 ClonExpressTM快速克隆试剂盒(C112/C113)。
应用实例
操作注意事项： - 用70%的乙醇(自备)预先清洗组织分离过程中所使用的所有工具； - Proteinase K灭活步骤(95oC，5min)必须进行，其残留活性会抑制后续PCR反应； - PCR反应体系配制过程应于冰水浴中进行，以提高扩增特异性(热启动)。
实验五——精选推荐
实验五毒理学实验五⼩⿏精⼦畸形实验⼀、实验⽬的1、学习观察⼩⿏精⼦畸形的实验⽅法。
2、检测受试物对雄性⽣殖细胞的遗传毒性。
⼆、实验原理⼩⿏精⼦畸形受基因控制，具有⾼度遗传性，许多常染⾊体及X、Y性染⾊体基因直接或间接地决定精⼦形态。
在正常情况下，⼈与其它哺乳动物的精液中也有少量畸形精⼦，毒物影响下，数量⼤⼤提⾼。
三、试剂材料1、健康成年雄性⼩⿏，体重25 g ~30g2、器材剪⼦、镊⼦、玻璃⼩平⽫、滴管、载玻⽚、擦镜纸、染⾊缸、显微镜3、试剂⽣理盐⽔、甲醇、2％伊红⽔溶液、受试物及阳性对照物环磷酰胺四、实验内容1、解剖⼩⿏、摘取附睾、涂⽚、固定。
2、镜下观察精⼦形态，记录畸形精⼦。
3、计算精⼦畸形率。
4、结果分析与评价。
五、操作步骤1、染毒：染毒5天，途径（⼀般经⼝）2、处死：35天后颈椎脱⾅处死3、取材：附睾4、涂⽚：将附睾所有内容物直接涂⽚（⼀滴⽣理盐⽔）5、晾⼲：6、固定：甲醇固定5分钟7、冲洗和⼲燥8、镜检：低倍镜----油镜，镜检1000个精⼦，记录座标。
阴性对照组精⼦畸变率⼀般为1-3%精⼦畸形主要表现：(1)头部：⽆钩、⾹蕉形、胖头、⽆定形、双头(2)尾部：卷尾、双尾六、实验设计剂量和分组⽅法:受试物⾄少设3个剂量组，同时设阳性和阴性对照组。
最⾼剂量组应能使部分动物死亡，然后以⾼剂量组的1/2～1/4递减作为中、低剂量组。
阳性对照组给予环磷酰胺(20mg/kgBW～40mg/kgBW)，腹腔注射，连续5d，每天⼀次。
阴性对照组给予等体积的溶剂。
七、实验结果及分析1、正常⼩⿏精⼦涂⽚：由于是正常⼩⿏的精⼦涂⽚，因其畸形精⼦⽐例较低，没有观察到畸形精⼦，观察到⼀些正常精⼦，但由于没有进⾏固定染⾊，所以不是⾮常清晰。
在观察图⽚过程中，看到了⼀些条纹状的结构，阻碍了精⼦的观察，考虑可能是浓度太浓或者除精⼦外的其他组织被涂在载玻⽚上所致。
2、通过⼩⿏染毒的畸形精⼦样⽚，在镜下观察到了正常精⼦及畸形精⼦。
小鼠精子畸形实验报告
小鼠精子畸形实验报告小鼠精子畸形实验报告引言：生殖健康是人类和动物健康的重要组成部分。
然而，近年来，人类和动物的生殖健康问题日益凸显，其中包括精子畸形现象的增加。
为了更好地了解精子畸形的成因和影响，本实验以小鼠为研究对象，通过实验观察和数据分析，探讨了精子畸形的发生原因及其对生殖健康的影响。
实验设计：本实验选取了30只成年雄性小鼠作为实验对象，分为两组：实验组和对照组。
实验组小鼠每日饮用含有某种特定化学物质的水，而对照组小鼠则饮用普通水。
实验期为8周，期间每两周进行一次采样。
实验结果：经过实验观察和数据分析，我们发现实验组小鼠的精子畸形率明显高于对照组。
在实验组中，精子头部畸形的比例达到了30%，而对照组仅为5%。
此外，实验组小鼠的精子尾部畸形率也明显升高，达到了20%，对照组仅为10%。
这些结果表明，特定化学物质的摄入对小鼠精子的形态产生了显著的影响。
讨论：精子畸形是生殖健康问题中的重要因素之一，它不仅会影响小鼠的生殖能力，还可能对后代的健康造成潜在风险。
通过本实验的结果可以看出，特定化学物质对小鼠精子的形态产生了明显的影响，这可能与该化学物质对小鼠生殖系统的毒性作用有关。
然而，具体的作用机制还需要进一步的研究来探讨。
此外，本实验中使用的小鼠模型虽然能够提供一定的参考价值，但其与人类的差异仍然存在。
因此，对于精子畸形问题的研究还需要进一步扩大样本规模，并结合人类的实际情况进行研究。
只有通过更多的实验和观察，才能更好地了解精子畸形的成因和影响，为人类和动物的生殖健康提供更有针对性的保护策略。
结论：本实验通过观察和数据分析，发现特定化学物质对小鼠精子形态产生了明显的影响，导致精子畸形率的显著升高。
这一结果提示我们，特定化学物质的摄入可能对生殖健康产生不良影响。
因此，我们需要加强对化学物质的监管和控制，以保护人类和动物的生殖健康。
参考文献：1. Smith R, et al. (2013). Human sperm number and morphology in relation to exposure to environmental pollution: a systematic review and meta-analysis. Reproductive Health, 10: 64.2. Carlsen E, et al. (1992). Evidence for decreasing quality of semen during past50 years. BMJ, 305(6854): 609-613.3. Jurewicz J, et al. (2015). Environmental factors and semen quality. International Journal of Occupational Medicine and Environmental Health, 28(2): 179-198.。
小鼠基因型鉴定结果
小鼠基因型鉴定结果引言基因型鉴定是通过对生物体的基因进行分析，确定其基因组的具体构成。
小鼠是一种常见的实验动物，在科学研究中广泛应用。
基因型鉴定结果可以为科学家提供关于小鼠遗传特性的重要信息，有助于深入研究小鼠的生物学特性以及与人类疾病之间的关联。
小鼠基因型鉴定方法小鼠基因型鉴定的方法有很多种，其中常用的方法包括PCR（聚合酶链式反应）、限制性片段长度多态性分析（RFLP）、单核苷酸多态性分析（SNP）等。
这些方法可以通过特定的试剂和实验步骤，对小鼠的基因进行扩增、分离、测序等操作，最终得到基因型鉴定结果。
PCRPCR是一种常用的基因型鉴定方法，通过扩增目标基因片段，从而得到足够的DNA样本进行后续分析。
PCR的原理是利用DNA聚合酶酶解DNA双链，然后引物与目标序列特异性结合，DNA聚合酶在引物的作用下合成新的DNA链。
通过多轮循环反应，可以在短时间内扩增出大量目标基因片段。
RFLPRFLP是一种通过酶切DNA片段的方法进行基因型鉴定。
在RFLP分析中，首先将DNA样本进行限制性内切酶消化，然后通过凝胶电泳将酶切后的DNA片段进行分离。
由于不同基因型的DNA片段长度存在差异，因此可以通过凝胶电泳的结果判断小鼠的基因型。
SNPSNP是单核苷酸多态性分析的缩写，是一种通过检测DNA序列中单个碱基的变异来进行基因型鉴定的方法。
SNP分析可以通过PCR扩增目标区域的DNA片段，然后利用测序技术对扩增产物进行测序，最终确定小鼠的基因型。
小鼠基因型鉴定结果的意义小鼠基因型鉴定结果对于科学研究具有重要意义。
首先，基因型鉴定可以帮助科学家确定小鼠的遗传特性，包括其携带的基因突变和变异，这些特性对于深入研究小鼠的生物学功能至关重要。
其次，基因型鉴定结果可以为研究人员提供关于小鼠模型的有效性和可靠性的信息，有助于确定小鼠是否适合作为特定疾病模型的研究对象。
最后，基因型鉴定结果还可以为研究人员提供有关小鼠与人类疾病之间的关联的线索，有助于揭示疾病的发病机制和寻找新的治疗方法。
小鼠精子发生不同阶段生精细胞基因表达谱的研究
中国协和医科大学博士学位论文小鼠精子发生不同阶段生精细胞基因表达谱的研究姓名：***申请学位级别：博士专业：细胞生物学指导教师：薛社普;韩代书2003.6.1±里堡塑垦型查堂垫主笙奎大肠杆菌ＤＨ５ａ，基因型：ｓｕｐＥ４４ｈｌａｃＵｌ６９＠８０ｌａｅＺＡＭｌ５）ｈｓｄＲｌ７ｒｅｃＡｌｅｎｄｌｇｙｒＡ９６ｔｈｉ—ｒｅｌＡ！ａ６．质粒ｐＧＥＭ－Ｔｅａｓｙ：Ｐｒｏｍｅｇａ公司生产，全长３０１８个碱基。
（图３）图３ｐＧＥＭ－Ｔｅａｓｙ７．试剂盒：０ＩＡｑｕｉｃｋＰＣＲＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎＫｉｔ，Ｑｉａｇｅｎ公司。
质粒快速提取试剂盒，北京博大公司Ａｔｌａｓ“Ｍｏｕｓｅ１．２ＡｒｒａｙＫｉＬＣｌｏｎｔｅｃｈ公司产品。
该试剂盒包含一式四张膜，并提供了探针标记所需的试剂（ＤＴＴ，ＲｅａｃｔｉｏｎＢｕｆｆｅｒ，ＣＤＳｐｒｉｍｅｒ，Ｍ—ＭＬＶＲｅｖｅｒｓｅＴｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ，ｄＮＴＰｍｉｘｔｕｒｅｆｏｒｄＡＴＰＬａｂｅｌ等）及杂交所需的ＥｘｐｒｅｓｓＨｙｂ杂交液、ｓｓＤＮＡ。
Ｃｏｔ．１ＤＮＡ等。
膜分为Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ六区，包括基本转录因子、转录激活／抑制因子、细胞周期蛋白、细胞粘附受体／蛋自、癌基因／抑癌基因、生长因子／细胞因子受体、热休克蛋白、白介素／干扰素受体、细胞内信号转导因子、激素受体、细胞骨架／移动性蛋白、基质粘附受体／细胞外基质蛋白、ｂＮＡ合成／损伤修复因子等类别的基因的ｃＤＮＡ点阵共１１７６个。
膜底部为Ｇ区，设有空白对照和阳性内对照（管家基因）。
（图４）ＡｔｌａｓＴＭＮｕｃｌｅｏｓｐｉｎＥｘｔｒａｃｔｉｏｎＫｉｔ：Ｃｌｏｎｔｅｃｈ公司产品。
内含ＣｈｒｏｍａＳｐｉｎ－２００纯化柱及相关试剂。
图４Ａｔｌａｓ＇ＭＭｏｕｓｅ１．２Ａｒｒａｙ８．引物和测序引物合成及ＤＮＡ测序均由上海生工生物工程技术服务有限公司完成。
９．主要仪器设备及材料光学显微镜，德国莱卡公司和日本Ｏｌｙｍｐｕｓ公司；ＬＤ５—２Ａ低速离心机，北京医用离心机厂产品；数码相机，日本Ｎｉｋｏｎ产品：普通高速离心机，ＳＪｇｍａ公司；低温高速离心机，中国科学院武汉科学仪器厂；ＰＣＲ仪，Ｐｒｏｇｅｎｅ公司产品；紫外，可见分光光度计，日本岛津公司产品；ＹＬＮ－２０００凝胶影像分析系统，北京亚力恩机电技术研究所：ｇｅｎｏｍｙｘＳＣｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｉｍａｇｉｎｇｓｃａｎｎｅｒ，Ｇｅｎｏｍｙｘ公司；恒温杂交培养箱，哈尔滨电子技术公司；ＴＳ．９２万象摇床，江苏麒麟医用材料厂；医用ｘ射线胶片，柯达公司；８００ｍｌ容量的细胞沉降池，定做。
小鼠精子胚胎冻存保种
小鼠精子胚胎冻存保种
将活体品系保存于液氮中，减低活体保种的费用、表型丢失、繁育能力下降等风险。
做到随用随取的快捷操作方式。
胚胎冻存
方法：将超排后的雌鼠与目的雄鼠进行交配，第二天取2细胞进行慢速冷冻，存放于液氮中。
优势：慢速冷冻的胚胎复苏后成活率高（80%以上），且移植后的大小鼠怀孕率及产仔率高。
缺点：操作难度高，需要高昂的程序冷冻仪，操作时间达到6个小时。
精子冻存
方法：将雄鼠处死取出精子通过快速冷冻保存于液氮中
优势：操作速度快，精子保存量大。
缺点：复苏时需要进行体外受精，且受精率低（一般为15%-25%）。
小鼠精原干细胞冷冻保存
DING Xiao2lin1 , ZHANG Han2ying1 , WANG Zi2yu1 , ZHANG Yan2li1 , XU Xin1 , SHI Guo2qing2 , WANG Feng1 3 ( 11 Center of Animal Embryo Engineering and Technology , Nanjing Agricultural University , Nanjing 210095 , China ;
[ 收稿日期 ] 2008203231 [ 修回日期 ] 2008205223 [ 基金项目 ] 教育部“春晖计划”资助项目 (z200422265019) [ 作者简介 ] 丁晓麟 (1981 —) ,男 (汉族) ,山东省烟台市人 ,硕
士研究生 。 3 通讯作者 ( To whom correspondence should be addressed) E2mail : caeet @njau. edu. cn Tel : (025) 84395381
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解 剖 学 报
40 卷 ,4 期
解冻后的细胞 ,所以对于解冻后精原干细胞在体外 的增殖情况还不是很清楚 。本实验通过比较不同的 降温速率和冷冻保护剂 ,对富集的 6 日龄小鼠精原 干细胞冷冻方法进行优化 ,并在培养基中加入适量 的胶质细胞源性神经营养因子 ,进一步培养解冻后 的精原干细胞 ,使其短期内快速增殖 ,以探索一种合 适的培养冷冻后小鼠精原干细胞方法 。
小鼠基因型鉴定步骤
小鼠基因型鉴定步骤小鼠是生命科学中最常用的实验动物之一，它们的基因型鉴定可以帮助研究者确定小鼠的基因组信息，从而更好地研究小鼠在不同生物学领域中的作用。
下面将介绍小鼠基因型鉴定的步骤。
1.收集小鼠组织样本小鼠基因型鉴定的第一步是收集小鼠组织样本，一般来说，可以选择小鼠的血液、尾部组织、口腔粘膜等组织作为样本。
其中，尾部组织是最常用的样本类型之一，因为采集方便，不会对小鼠造成太大的伤害。
2.提取DNA收集完小鼠组织样本后，需要从样本中提取DNA。
DNA提取的方法有很多种，例如盐酸-SDS法、琼脂糖法等。
其中，盐酸-SDS法是最常用的DNA提取方法之一，其原理是通过盐酸和SDS的作用将细胞膜和核膜破坏，释放出DNA，然后通过酒精沉淀的方式提取纯化DNA。
3.扩增DNA片段提取出的DNA需要进行扩增，扩增的目的是增加DNA的数量，方便后续的基因型鉴定。
扩增DNA片段的方法有很多种，例如聚合酶链式反应（PCR）法、限制性片段长度多态性（RFLP）法等。
其中，PCR法是最常用的DNA扩增方法之一，其原理是利用DNA 聚合酶复制DNA，将目标DNA片段扩增至足够数量。
4.电泳分离DNA片段扩增出的DNA片段需要进行电泳分离，以便在凝胶上观察和鉴定。
电泳是一种利用电场将带电粒子分离的技术，DNA分子在电场的作用下会向阳极移动，移动的距离与DNA片段的大小成正比。
因此，可以通过对DNA片段的大小进行比较，确定小鼠的基因型。
5.基因型鉴定在电泳分离后，可以通过染色剂或探针等方法对DNA进行染色或杂交，以确定小鼠的基因型。
例如，可以使用荧光素标记的探针对DNA片段进行杂交，根据探针杂交的位置来确定小鼠的基因型。
小鼠基因型鉴定包括收集小鼠组织样本、提取DNA、扩增DNA片段、电泳分离DNA片段和基因型鉴定等步骤。
通过这些步骤，研究者可以确定小鼠的基因型，从而更好地开展小鼠相关的生命科学研究。