小鼠基因型鉴定报告
PCR法鉴定RorcγtGFP突变小鼠子代基因型
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Objective Methods Results Conclusion To investigate the feasibility of PCR in the genotype identification of Rorc t mutation mouse offspring.The genome DNA was extracted from the tails of six newborn mice produced by a male Rorc t(-/-)mouse and a female Rorc t(-/+)mouse.Rorc t gene fragments were amplified by PCR and then detected by agarose gel electrophoresis.Three mice had Rorc t(-/-)genotype with 241bp gene fragment,while three mice possessed Rorc t (-/+)genotype with 174bp and 241bp gene fragments.PCR-based method is simple and feasible for the genotype identification of Rorc t mutation mouse offspring.mouse;orphan receptor;genotype;PCR???????GFP GFP PCR Rorc t 法鉴定突变小鼠子代?GFP 基因型陈嵘，阿彩岭，周英，樊翌明祎（广东医学院附属医院皮肤科，广东湛江）524001ＰＣＲ－ｂａｓｅｄｇｅｎｏｔｙｐｅｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｆｉｌｉａｌｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｉｎＲｏｒｃｔｍｕｔａｔｉｏｎｍｉｃｅ?ＧＦＰCHEN Rong-yi,E Cai-ling,ZHOU Ying,FAN Yi-ming (Department of Dermatology,Affiliated Hospital of Guangdong Medical College,Zhanjiang 524001,China)摘 要：关键词：中图分类号：文献标识码：文章编号：目的方法结果结论ＤＯＩ：PCR()Rorc t Rorc t(-/-)Rorc t(-/+)6DNA PCR PCR 3PCR 241bp Rorc t(-/-)3174bp 241bp Rorc t(-/+)PCR Rorc tR 394.1A 1005-4057(2012)05-0477-06-0603-0310.3969/j.issn.1005-4057.2012.06.003探讨聚合酶链式反应法鉴定突变小鼠子代基因型的可行性。
转基因小鼠的鉴定
转基因小鼠的鉴定一、剪鼠尾1.剪鼠尾的时间当新生的小鼠年龄达到两到三周耳朵已经长开时剪鼠尾较好,此时鼠尾剪起来比较容易且小鼠的生命力比较强;2.分辨小鼠的年龄a当小鼠整个身体较红且腹部无奶时,此小鼠当天出生或前一晚出生；b当小鼠腹部有奶腹部有一小团白色物质,此小鼠出生2~3天；c当小鼠背部长出皮毛时,此小鼠出生3~4天；d当小鼠毛长全,但眼未开时,此小鼠出生10天左右；e当小鼠眼刚开,耳未开时,此小鼠出生12天左右；f当小鼠耳刚开时,此小鼠出生14天左右;3.剪鼠尾后对小鼠的标记：打耳孔法二、从鼠尾中提取DNA采用鼠尾基因组DNA提取试剂盒康为世纪：cw2094提取DNA,操作如下：1.剪取小鼠长度为的尾巴,放入灭菌后的离心管中,加入180μL Buffer GTT;震荡混匀;2.加入20μL proteinase K,涡旋震荡,彻底混匀;3.置于56℃水浴,直到组织溶液完全清澈,一般需消化6-8h,赋予过程中涡旋震荡,使样品均匀分离;注意：1 如果赋予和涡旋震荡后仍然有胶状物质,必要时过夜消化再加入20μl proteinaseK消化,不会影响后续操作;2 如需去除RNA,可在上述步骤完成后,加入4μl浓度为100mg/μl的RNase A溶液,震荡混匀,室温放置5-10min;4.14000rpm 离心 1min,以消除未消化的类似于鼠毛等组织,将上清转移到一个新的灭过菌的离心管中;5.加入200μl Buffer GL,涡旋震荡,充分混匀,加入200μl 无水乙醇,涡旋振荡,充分混匀,短暂离心,使管壁上的溶液收集到管底;注意：1加入Buffer GL 和无水乙醇后要立即涡旋震荡混匀;2 如果多个样品一起操作,Buffer GL 和无水乙醇可以等比例混匀后一起加入样品;3加入Buffer GL 和无水乙醇后可能会产生白色沉淀,不会影响后续操作;6.将步骤5中所得到的溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱中,若以此不能加完溶液,可分多次转入;10000rpm 离心1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中;7.向吸附柱中加入500μl Buffer GW1使用前检查是否已加无水乙醇,10000 rpm 离心 1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中;8.向吸附柱中加入500μl Buffer GW2使用前检查是否已加无水乙醇,10000 rpm 离心 1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中;如需进一步提高DNA纯度,可重复步骤8;9.12000rpm 离心 2min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干;注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应酶切,PCR等;10.将吸附柱置于一个新的灭过菌的离心管中,向吸附柱的中间部位悬空加入50-200μl Buffer GE或灭菌水,室温放置2-5min,10000rpm 离心 1min,收集DNA溶液,-20℃保存DNA;注意：1如果下游实验对PH值或EDTA敏感,可以用灭菌水洗脱,洗脱液的PH值对洗脱效率有很大影响,若用水作洗脱液应保证其PH值在直接,PH值低于时洗脱效率不高;2离心前室温孵育5min可增加产量;3用另外的50-200μL Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量;4如果需要提高DNA的终浓度,可以将步骤10所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上,重复步骤10；若洗脱体积小于200μL,可以增加DNA的终浓度,但可能会减少总产量;三、PCRPCR程序设定：1＝ 94.0℃ for 5:00 2＝ 94.0℃ for 1:00 3＝ 59.0℃ for 0:50 4＝ 72.0℃ for 1:00 5＝ Goto 2 2times6＝ 94℃ for0:507＝ 58℃ for 0:508＝72℃ for 1:009＝Goto 6 2times10＝ 94.0℃ for 0:50 11＝56.0℃ for 0:50 12＝ 72.0℃ for 1:00 13＝ Goto10 32times 14＝ 72.0℃ for 10:00 15＝ 4.0℃ for 5:00 16＝END目前实验室的双转基因小鼠AD体系采用：PCR反应的体系12μl：APPPrimer APP-1 μlPrimer APP-2 μlO 2μlddH2mixCW0682 6μlDNA 1μlPCR反应的体系12μl：PS1Primer PS1-1 μlPrimer PS1-2 μl内参-1 1μl内参-2 1μlmixCW06826μlDNA 1μl先在的EP管中加入总的体系再平均分装入各个PCR管中一般多加两小管的量,将移液器调到总量的1/3到1/2体积在EP管中缓慢抽吸若干次尽量避免产生气泡以便Taq酶混合均匀,最后再在各PCR管中依次加入DNA样品;引物处理方法：引物在安基生物有限公司合成后,EP管上会有标记,一般为x nmol,使用O,涡旋振动混匀,微型离心机离心,即可得前先用12000rpm 离心 1min,加入10x μl ddH2O稀释10倍,即加入90μl,混匀后即可得到到100μM的母液,取10μl 的母液,用ddH210μM的引物工作液;四、电泳1．配胶：鉴定用的胶板有大、中、小3种,分别用的梳子为50、25、11齿;分别用的TBE的量为90ml、45ml、25ml;用%的琼脂糖凝胶;2．点样：12μl的DNA,Marker加5μl;点样时注意逐个点样,不要点错,最好把中间的那个孔留着点Marker,这样可避免点样的出错;Marker的选择依基因片段大小而定;3．跑电泳：打开电源,150v电压,30min左右即可;4．照胶：看是否有目的条带,即可判断对应小鼠是阳性、阴性或是杂合子;5．保存;。
敲基因小鼠鼠尾基因鉴定实验报告
碱法提取小鼠总DNA及基因鉴定：一、实验器材：加样枪（1ml、200ul、20ul、10ul）、枪头（大中小一套）、EP管（20ul、1.5ml、10ml）、试管架、浮标、温度计、胶布、手套、记号笔、锥形瓶、称量匙、冰盒二、实验试剂：A液、B液、引物、mix、双蒸水、三蒸水、琼脂糖、TBE（5x、1x、回收液）、核苷酸染料、Marker三、母液配置：1.10M NaOH: NaOH 40g加双蒸水至90ml，待NaOH完全溶解冷却后定容至100ml2.0.5M EDTA：EDTA.Na2盐18.61g, NaOH 1.5g, 加双蒸水至80ml,逐滴加入10M NaOH至EDTA完全溶解后加双蒸水定容至100ml3.1M TrisHCl（pH8.0）：Tris碱12.1g，加水至70ml，边搅拌边加入浓盐酸4ml，然后边逐滴加入1M HCl边测PH值，直至PH升至8.0（+\-0.05），定容至100ml（pH=8.8的TrisHCl中边加入浓盐酸边测PH值至PH=8.0（+\-0.05）为止）四、实验步骤：1.剪取鼠尾（约芝麻大小）储存于-20度冰箱（-20度冰箱，主要是防止DNA降解，4度不行）2.提取DNA：1)配置工作液——20ml体系A液：50ul 10M NaOH 加双蒸水至20ml8ul 0.5M EDTAB液：800ul 1M TrisHCl（pH8.0）加双蒸水至20ml2)加150ulA液（液体应完全浸没标本），95度水浴锅煮1.5h（将EP管插入浮标中后用胶布缠好防止EP管在加热过程中爆开）3)加150ulB液，混匀（上下颠倒3-5下）4)12000r/min 4度离心5分钟（可储存于-20度冰箱）3.PCR（冰上操作）：P1 0.5ul（P为AC3I，G为AAA）1)配置PCR体系——15ul体系P2 0.5ulMix 7.5ul三蒸水4.5ulDNA 2ul2)加2ul上述离心后的上清液至PCR体系，瞬离3)PCR仪扩增，参数设定：预变性：94度——3min变性：94度——30s退火：55度——30s 30个循环延伸：72度——24s72度——5min4度——∞4.琼脂糖凝胶电泳：1)制胶——2%琼脂糖凝胶配方：总体积（ml）20 30 40 50 60 120琼脂糖（g）0.4 0.6 0.8 1 1.2 2.4TBE 1x（ml）20 30 40 50 60 120Tris-base 13.6gTBE 5x配方：硼酸 6.56gEDTA 0.73g双蒸水up to 250mlEg：50孔大胶的配置：琼脂糖2.4g 微波炉加热5min左右冷却至适温后加染料7.5ulTBE 1x 150ml（需考虑蒸发量）2)加样——Marker 0.5ul，样品8ul（加样前吹打2次，从右向左加样）3)电泳——150V，300mA，20min（加样孔在近负极侧）5.成像分析：Image lab 新建核酸凝胶（第一项）最后一项滤光片拨至中间放置凝胶运行保存图像编辑拍照保存6.结果及分析：1)AAA分子量为700+？2)AC3I分子量为400+？3)AAA型——只出现AAA一条带AC3I型——只出现AC3I一条带双阳型——两条带都出现野生型——AAA型老鼠没出现AAA条带或AC3I型老鼠没出现AC3I条带或双阳型两条带均未出现4)出现浅带的原因？判定为阴性还是阳性？我觉得阴性更多。
小鼠基因型鉴定是什么？小鼠基因型鉴定详细操作步骤
小鼠基因型鉴定是什么？小鼠基因型鉴定详细操作步骤小鼠基因型鉴定是指通过一定的生物学检测方法确定小鼠基因型的技术。
常用的方法包括PCR，Realtime PCR，HRM以及PCR结合测序等。
操作步骤：1、样品DNA的提取（1）剪鼠尾脚趾，1mm（2）加100ul lysls buffer， 2ul protease K，55℃消化2h（3）95℃灭活protease K 5min（4）快速离心（12000rpm 5min）注：DNA产物-20℃条件下保存鼠尾是去动物房拿的，3楼，一个房间-20℃的冰箱里。
加buffer的时候先把鼠尾戳到管子底部，再把buffer打进去，保证鼠尾沉在buffer里面（不要漂浮在上面，更不要还在管壁上）高温的仪器在窗户边上，铁锅和离心机旁边。
12000rpm的离心机是右边比较小的那台2、取20ul DNA产物，配置10管20ul PCR反应体系，具体如下：样品2ul+3种引物（每种各1ul）+ mixture 10ul + 5ulH2O=20ulprimer1：OIMR4182 commonprimer2：OIMR4183 WTprimer3：OIMR7297 muT先用比较大的EP管，加3种引物各10ul，mixture100ul，H2O50ul。
这几样东西都是放在冰箱里的管子里的，以后做，还是让学姐拿一下，毕竟我不太认识。
再分别加入10个小的EP管里，再加2ul样品。
3、PCR扩增反应reaction conditionstep temp/℃ time1 95 5min2 94 30s3 62 35s4 72 45s5 72 3min6 4 Hold。
基因编辑_鼠实验报告
实验名称：基因编辑鼠模型构建及功能研究实验时间：2023年X月X日至2023年X月X日实验地点：XX大学XX实验室实验人员：XXX、XXX、XXX一、实验背景随着分子生物学和基因编辑技术的快速发展，基因编辑技术在疾病模型构建和基因功能研究中发挥着越来越重要的作用。
本实验旨在通过CRISPR/Cas9技术对小鼠进行基因编辑，构建基因敲除和基因过表达模型，研究特定基因在生理和病理过程中的功能。
二、实验目的1. 利用CRISPR/Cas9技术构建基因敲除和基因过表达小鼠模型。
2. 观察基因敲除和基因过表达小鼠的表型变化。
3. 研究特定基因在生理和病理过程中的功能。
三、实验材料1. 实验动物：SPF级C57BL/6小鼠2. 工具：CRISPR/Cas9系统、电穿孔仪、PCR仪、实时荧光定量PCR仪、Western blot试剂盒等3. 试剂：DNA提取试剂盒、PCR引物、荧光染料、限制性内切酶、T4 DNA连接酶、DNA聚合酶等4. 仪器：生物安全柜、离心机、凝胶成像系统、显微镜等四、实验方法1. 基因编辑载体构建（1）设计特异性引物，针对目标基因设计CRISPR/Cas9系统所需的sgRNA。
（2）合成sgRNA和Cas9模板DNA，构建CRISPR/Cas9系统。
（3）将sgRNA和Cas9模板DNA连接到载体上，构建基因编辑载体。
2. 基因编辑小鼠模型构建（1）将基因编辑载体电穿孔转染到小鼠受精卵中。
（2）将转染后的受精卵移植到假孕母鼠体内。
（3）观察出生小鼠的表型，筛选基因敲除和基因过表达小鼠。
3. 基因敲除和基因过表达小鼠表型观察（1）观察基因敲除和基因过表达小鼠的生长发育、行为、生理指标等。
（2）通过组织学、病理学等方法观察基因敲除和基因过表达小鼠的组织结构变化。
4. 基因功能研究（1）通过实时荧光定量PCR、Western blot等方法检测基因敲除和基因过表达小鼠的基因表达水平。
（2）通过细胞培养、动物模型等方法研究基因敲除和基因过表达小鼠的生理和病理过程。
全基因敲除小鼠基因型鉴定原理及方法
全基因敲除小鼠基因型鉴定原理及方法下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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小鼠转基因实验报告(3篇)
第1篇一、实验背景随着生物技术的飞速发展，转基因技术在医学、农业等领域发挥着越来越重要的作用。
小鼠作为生物医学研究中常用的实验动物，其基因编辑技术的应用为疾病模型构建、药物筛选和基因功能研究提供了有力工具。
本实验旨在通过基因编辑技术构建转基因小鼠模型，研究特定基因在小鼠体内的表达和功能。
二、实验材料1. 实验动物：C57BL/6小鼠，雄性，8周龄。
2. 基因构建材料：目的基因（GFP基因）、启动子（CMV启动子）、荧光素酶报告基因（Luc基因）、pEGFP-C1质粒载体、pGL3-Basic质粒载体。
3. 实验试剂：限制性内切酶、DNA连接酶、T4 DNA连接酶、DNA聚合酶、PCR引物、Trizol试剂、RNA提取试剂盒、反转录试剂盒、荧光定量PCR试剂盒、细胞培养试剂等。
4. 仪器设备：PCR仪、凝胶成像系统、实时荧光定量PCR仪、细胞培养箱、显微镜等。
三、实验方法1. 目的基因构建：将GFP基因和Luc基因分别插入到pEGFP-C1和pGL3-Basic质粒载体中，构建重组质粒。
2. 重组质粒转染：将构建好的重组质粒通过脂质体转染法转染C57BL/6小鼠胚胎干细胞（ES细胞）。
3. 转基因小鼠胚胎细胞筛选：通过GFP荧光筛选，得到阳性细胞克隆。
4. 胚胎细胞传代培养：将阳性细胞克隆进行传代培养，筛选出稳定表达的细胞系。
5. 胚胎细胞冻存：将稳定表达的细胞系进行冻存，以备后续实验使用。
6. 胚胎移植：将冻存后的胚胎细胞进行移植，获得转基因小鼠。
7. 转基因小鼠表型鉴定：通过GFP荧光显微镜观察转基因小鼠体内GFP表达情况，并通过实时荧光定量PCR检测GFP基因在转基因小鼠体内的表达水平。
四、实验结果1. 重组质粒构建：成功构建了含有GFP基因和Luc基因的重组质粒。
2. 转基因小鼠胚胎细胞筛选：通过GFP荧光筛选，得到阳性细胞克隆。
3. 胚胎细胞传代培养：成功传代培养出稳定表达的细胞系。
4. 胚胎移植：成功获得转基因小鼠。
基因型鉴定心得
Cre
一种重组酶，可由噬菌体转染到细胞，催化Loxp位点间的 DNA进行特异性重组。
Loxp
34bp序列，两端是13bp的反向重复序列，中间是其定向作 用的8bp间隔区。
重组产物
根据loxp位点的位置和相对方向而不同，在一条链上单 loxp位点的DNA将被融合。
Loxp
Loxp Cre
Flp-Frt system:主要用来去除Neo
PCR鉴定
引物设计
设计原则
①引物长度一般为20~24bp
②引物碱基尽可能随机分布：GC含量约60%
③引物不应有发夹结构：即不能有4bp以上的回文序列
④引物的3‘端为关键碱基：两引物间不应有大于4bp以上的 互补序列或同源序列
⑤在3’端不应有任何互补碱基 ⑥产物大小：约200~300bp ⑦Tm值：60℃左右 ⑧特异性：即无目的条带之外的多余条带 ⑨最理想的鉴定引物，一对引物即可以区分两种基因型
模板在加入MIX之前要测定浓度 OD:260/280 纯DNA浓度OD值大约在1.8
假阳性
现象：空白对照出现目的扩增产物（水对照，阴性对照）。
原 因
被污染 了！！！
1.操作时动作要轻柔 2.器材要高温高压消毒 3.各种试剂事先分装，低温贮存
PCR中对照组的设立
Cre-loxp system Flp-Frt system 基因敲进—Rosa 26 工具鼠查找使用
基因型鉴定心得
取样时间
10d-14d 鼠小，尾尖部DNA充足，出血少，毛少，易操作。
取样过程
器械：眼科剪，小镊子，酒精棉，基因型检测记录表，记 号笔，1.5ml EP管（消毒） 减尾长度：1cm左右 小贴士：双人操作，一剪一消毒，两剪同时进行，三序核 对，稳准狠
小鼠基因筛选实验报告(3篇)
第1篇一、实验背景基因是生物体内控制遗传信息传递的基本单位，基因突变是生物进化的重要驱动力。
为了研究特定基因的功能，我们采用小鼠作为模型生物，通过基因筛选实验，旨在鉴定和验证与特定表型相关的基因。
二、实验目的1. 构建小鼠基因文库。
2. 通过分子生物学技术筛选与特定表型相关的基因。
3. 验证筛选得到的基因的功能。
三、实验材料1. 实验动物：C57BL/6小鼠。
2. 工具酶：限制性内切酶、DNA连接酶、Taq DNA聚合酶等。
3. 试剂：PCR引物、DNA标记物、DNA探针、克隆载体等。
4. 仪器：PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统、显微镜等。
四、实验方法1. 构建小鼠基因文库（1）提取小鼠基因组DNA。
（2）使用限制性内切酶切割基因组DNA，获得特定长度的DNA片段。
（3）将切割后的DNA片段连接到克隆载体上，构建小鼠基因文库。
2. 基因筛选（1）根据已知表型，设计特异性引物，用于PCR扩增目的基因。
（2）对小鼠基因文库进行PCR扩增，筛选出与特定表型相关的基因片段。
（3）将筛选得到的基因片段进行测序，确定其序列。
3. 基因功能验证（1）将筛选得到的基因片段克隆到表达载体中，构建重组表达载体。
（2）将重组表达载体转化大肠杆菌，获得表达目的蛋白的菌株。
（3）通过免疫印迹、免疫荧光等技术检测目的蛋白的表达和活性。
五、实验结果1. 成功构建了小鼠基因文库，文库容量达到预期目标。
2. 通过PCR扩增，成功筛选出与特定表型相关的基因片段。
3. 对筛选得到的基因片段进行测序，确定其序列。
4. 通过基因功能验证，成功表达了目的蛋白，并验证了其功能。
六、实验讨论1. 基因筛选实验中，PCR扩增和DNA测序是关键步骤，需要严格控制实验条件，确保结果的准确性。
2. 在基因功能验证过程中，需要选择合适的表达系统和检测方法，以确保目的蛋白的正确表达和活性。
3. 本研究筛选得到的基因可能与特定表型相关，但其具体功能还需进一步研究。
基因敲除小鼠鉴定 解读
基因敲除小鼠鉴定解读基因敲除小鼠鉴定解读，这事儿就像一场神秘的探索之旅。
咱们先得知道啥是基因敲除小鼠。
简单来说，就好比是在小鼠这个小世界里，我们用特殊的手段把某个基因像拆除小零件一样给去掉了。
这时候的小鼠就成了研究这个基因功能的绝佳模型。
那怎么知道这个基因是不是真的被敲除了呢？这就需要鉴定啦。
鉴定基因敲除小鼠，就像检查一件精心打造的艺术品有没有瑕疵。
一种常见的方法是通过基因测序。
这就像是给小鼠的基因密码本进行逐字逐句的校对。
测序的结果就像是一把钥匙，如果发现原本应该存在的基因片段不见了，那很可能这个基因就被成功敲除了。
不过，这可不是唯一的办法哦。
还有一种办法叫PCR检测。
这PCR检测呀，就像是一场基因的放大镜游戏。
我们通过特定的引物，就像是专门寻找特定宝藏的小钩子，去钓出我们感兴趣的基因片段。
如果在基因敲除小鼠里钓不到这个片段，而在正常小鼠里能钓到，那这也是基因敲除成功的一个标志。
这感觉是不是有点像寻宝呢？那鉴定出来之后，又怎么解读这些结果呢？这可就更有趣了。
如果确定基因敲除成功了，就像是我们找到了打开一扇神秘大门的钥匙。
这个时候，我们就能观察小鼠的各种表现了。
比如说，要是敲除的是一个和毛发颜色有关的基因，那小鼠的毛发颜色可能就会变得很奇怪。
这就像一幅画里原本该是红色的花朵，我们把负责红色的颜料给拿走了，那花朵就不是红色的了。
从行为上也能看出很多东西。
假如敲除的基因和小鼠的运动能力有关，那这只基因敲除小鼠可能就会比正常小鼠跑得慢或者动作不协调。
这就好比一辆汽车，如果我们拆掉了发动机里的某个关键零件，汽车肯定就跑不起来或者跑得歪歪扭扭的。
但是呢，解读结果也不是那么简单的事儿。
有时候可能会出现一些假象。
就像我们在雾里看花一样，看起来好像基因被敲除了，但实际上可能还有一些残留的基因功能在悄悄发挥作用。
这时候就需要我们更加仔细地去分析。
比如说，小鼠的某个表型变化可能不仅仅是因为这个基因被敲除了，还可能受到其他因素的影响。
小鼠基因型鉴定条带
小鼠基因型鉴定条带
小鼠基因型鉴定条带是指在基因鉴定过程中，通过特定的检测方法观察到的条带状图谱。
这些条带代表了小鼠基因组中特定位置上的DNA片段，可以通过其大小和数量来判断小鼠的基因型。
在小鼠基因型鉴定中，常见的条带类型包括野生型条带和突变型条带。
野生型条带代表小鼠基因组中未发生突变的DNA片段，而突变型条带则代表发生了基因突变。
根据条带的特征，可以判断小鼠是否携带某种突变基因。
除了野生型和突变型条带外，还可能出现杂合子条带。
杂合子条带代表小鼠基因组中同时存在野生型和突变型DNA片段的情况，即小鼠为杂合子。
在进行小鼠基因型鉴定时，通常会进行一系列的检测步骤，包括DNA提取、PCR扩增、电泳等。
这些步骤的目的是为了获得清晰的条带，以便准确判断小鼠的基因型。
总之，小鼠基因型鉴定条带是小鼠基因型鉴定的关键指标之一，通过观察条带的特征可以判断小鼠是否携带某种突变基因，以及小鼠的基因型是纯合子、杂合子还是野生型。
基因敲除小鼠的PCR鉴定
基因敲除小鼠的PCR鉴定一、实验目的：通过PCR扩增程序及琼脂糖凝胶电泳方法鉴定凝血因子IX基因敲除小鼠的基因型。
二、实验原理：真核生物的一切有核细胞（包括培养细胞）都能用来制备基因DNA。
真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内，因此，制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，又要保持DNA分子的完整。
提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。
1.PCR原理：PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。
PCR由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成：1) 模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；2) 模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；3) 引物的延伸：DNA模板-引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链重复循环变性-退火-延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。
每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍2.琼脂糖凝胶电泳原理：在pH8.0~8.3的缓冲液中，核酸分子带负电荷，向正极移动。
由于不同大小和构象的核酸分子电荷密度大致相同，因此在自由泳动时，各种核酸分子的迁移率相似，无法分开。
然而，在浓度适当的凝胶中，由于分子筛效应，使大小和构象不同的核酸迁移率出现差异，从而把它们分开。
核酸在凝胶中的迁移率取决于其分子大小、高级结构、胶浓度和电场强度，与分子的碱基组成及电泳温度（4~30℃之间）无明显关系。
小鼠大脑基因实验报告(3篇)
第1篇一、实验背景随着神经科学研究的深入，理解大脑的基因调控机制对于揭示神经疾病的发生机理和开发新的治疗方法具有重要意义。
本研究旨在通过基因编辑技术，探究特定基因在小鼠大脑发育和功能中的作用，为相关疾病的预防和治疗提供新的思路。
二、实验目的1. 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除小鼠大脑中特定基因。
2. 观察基因敲除对小鼠大脑发育、行为和认知功能的影响。
3. 分析敲除基因对小鼠大脑中相关通路和基因表达的影响。
三、实验材料与方法1. 实验材料- 小鼠胚胎干细胞（ES细胞）- CRISPR/Cas9系统- 实验小鼠（C57BL/6小鼠）- 实验试剂：DNA聚合酶、限制性内切酶、DNA连接酶、PCR引物等2. 实验方法（1）基因编辑1. 设计靶向特定基因的CRISPR/Cas9系统，包括sgRNA和Cas9蛋白。
2. 将sgRNA和Cas9蛋白导入小鼠ES细胞，进行基因编辑。
3. 对编辑后的ES细胞进行筛选，获得基因敲除的细胞系。
4. 将基因敲除的细胞系注射到C57BL/6小鼠的受精卵中，获得基因敲除的小鼠。
（2）小鼠行为和认知功能测试1. 观察基因敲除小鼠的生长发育、行为和运动能力。
2. 对小鼠进行认知功能测试，包括Morris水迷宫实验、Y迷宫实验等。
（3）基因表达分析1. 提取小鼠大脑样本，进行RNA提取和cDNA合成。
2. 利用PCR、RT-qPCR等方法检测敲除基因的表达水平。
3. 对小鼠大脑样本进行蛋白质组学分析，检测相关蛋白的表达水平。
四、实验结果1. 基因敲除成功敲除了小鼠大脑中特定基因，并通过PCR、RT-qPCR等方法验证了基因敲除的效果。
2. 小鼠行为和认知功能与野生型小鼠相比，基因敲除小鼠在Morris水迷宫实验中表现出明显的空间学习障碍，提示该基因可能参与小鼠的认知功能。
3. 基因表达分析敲除基因后，小鼠大脑中相关通路和基因表达发生了显著变化。
具体表现为：1. 神经递质合成酶的表达水平降低。
小鼠基因型鉴定说明书Mouse Genotyping
1.2. 在灭菌1.5 ml EP管中，添加200 μl 1×裂解液至所需裂解组织中，涡旋震荡后在55oC水浴中孵育20 min。为保证DNA 释放效率，请务必将组织全部浸没至裂解液中。孵育结束后组织块可能并未消化完全，属正常情况，不影响使用。对于常 规大小目标片段，20 min孵育已足以释放足量的DNA模板。孵育时间也可根据实际情况进行调整，下表为55oC下推荐孵育 时间：
2.2. 推荐PCR反应条件设置：
94oC 94oC 55oC* 72oC 72oC
5 min(预变性)
30 sec
30 sec
}
30 sec/k需要根据引物Tm值进行调整，一般设置成低于引物Tm值1-2℃即可。 2.3. 扩增产物直接进行琼脂糖电泳检测，无需添加DNA Loading Buffer。
to 50 μl 25 μl 2～5μl 2 μl 2 μl 10 μl
*1 Taq Plus Master Mix (Dye Plus)中预混有1.5 mM的Mg2+。在实际使用过程中，可使用试剂盒提供的25 mM MgCl2进行 调整，调整间隔为每次增加0.5 mM。 *2 裂解产物加入量不应超过PCR反应总体积的1/10。 *3 5 × PCR Enhancer可显著提高GC-rich片段的扩增效率。在初次使用某引物对进行扩增时，可设置添加/不添加两平行 对照组。如添加后扩增产量或特异性无明显提升，则无需添加。
One Step Mouse Genotyping Kit
PD101-01
Vazyme biotech co., ltd.
产品简介
本试剂盒包含整套的DNA粗提取以及PCR扩增体系，可用于小鼠基因型快速鉴定(Rapid Genotyping)。该试剂盒可用于从 小鼠尾巴、耳朵以及脚趾等组织快速提取基因组DNA，提取产物可直接进行PCR扩增，无需匀浆、破碎、过夜消化、酚氯 仿抽提、DNA沉淀或柱式纯化等操作，极大缩短了实验耗时。使用时，将组织浸泡在预添加了Proteinase K的裂解液中， 55oC孵育20 min再95oC加热5 min灭活Proteinase K。裂解产物经离心后可直接用做PCR扩增模板，经反复测试广泛适用于 2 kb以内目标片段扩增，并适用于4对引物以内的多重PCR反应。 试剂盒中配有2 × Taq Plus Master Mix(Dye Plus)(P212)，包含高性能的Taq Plus DNA Polymerase，dNTP以及优化的缓 冲体系。PCR反应时只需加入引物和模板即可进行扩增，减少了开管/移液等操作，显著降低了样品交叉污染并且提高了检 测通量和结果的重现性。独特的保护剂使得Taq Plus Master Mix经过反复冻融后仍可保持稳定的活性。体系中预混有电泳 缓冲液和染料，可在反应结束后直接进行电泳，使用方便快捷。PCR产物的3’端带A，可克隆至T载体，并适用于 ClonExpressTM快速克隆试剂盒(C112/C113)。
小鼠脚趾DNA提取以及基因型鉴定
小鼠脚趾DNA提取以及Macf1fl/flC57BL/6-Prrx1-Cre小鼠基因型鉴定张茹2016年3月15日一．小鼠脚趾DNA提取【原理】1.提取过程真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内，因此，制备DNA的原则是即要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，又要保持DNA分子的完整。
提取DNA的过程是将动物组织在含SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K的消化液中消化分解蛋白质，再用酚抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA析出来。
2.裂解液各成分作用在匀浆后提取DNA的反应体系中，SDS可使蛋白变性并溶解细胞膜中的脂质，从而使细胞裂解，并使组织蛋白与DNA分离。
EDTA可以整合镁离子，这样将会抑制细胞中Dnase的活性；因为该酶必须在有镁离子存在下才会起作用。
蛋白酶K的重要特性是能在SDS和EDTA（乙二胺四乙酸二钠）存在下保持很高的活性。
并且可将蛋白质降解成小肽或氨基酸，使DNA分子完整地分离出来。
3.Tris苯酚作用酚是非极性分子，水是极性分子，当蛋白水溶液与酚混合时，蛋白质分子之间的水分子就被酚挤去，使蛋白失去水合状态而变性。
经过离心，变性蛋白质的密度比水的密度为大，因而与水相分离，沉淀在水相下面，从而与溶解在水相中的DNA分开。
而酚作为有机溶剂比重更大，保留在最下层。
【实验材料】1.耗材1.5ml离心管，水浴锅，高速冷冻离心机，1ml移液枪，200ul移液枪，通风橱，1ml移液枪枪头，200ul移液枪枪头。
2.试剂Tris-HCl，EDTA，NaCl，SDS，灭菌水，Tris苯酚，无水乙醇，75％乙醇，1倍TE缓冲液【实验步骤】1.SNET裂解液（50ml）：100mM Tris-HCl（10ml，PH8.0），200mM EDTA（1.25ml PH8.0），1M NaCl（20ml），10% SDS（5ml），水（13.75ml）。
（裂解液在常温下结晶，使用之前在55℃水浴锅中预热）蛋白酶K（PK）：储存浓度：10mg/ml；终浓度：100ug/ml2、操作步骤：1)小鼠标记编号，并收集小鼠脚趾样品于1.5mlEP管中（提前高压灭菌）。
基因荧光小鼠实验报告(3篇)
第1篇一、实验背景基因荧光小鼠是一种重要的实验动物模型，通过基因工程技术将荧光蛋白基因导入小鼠基因组中，使小鼠体内特定细胞或组织表达荧光蛋白，从而在活体状态下观察细胞或组织的形态、分布、功能等。
基因荧光小鼠在生物医学研究、疾病模型构建、药物筛选等领域具有广泛的应用价值。
本实验旨在通过基因工程技术构建基因荧光小鼠模型，并对其表达特性、组织分布、体内功能等方面进行研究。
二、实验材料与方法1. 实验材料（1）小鼠：C57BL/6小鼠，雌雄各10只，体重20-25g。
（2）荧光蛋白基因（GFP）：克隆自绿色荧光蛋白（GFP）基因，包含启动子、编码序列和终止子。
（3）载体：pEGFP-N1质粒，含有GFP基因。
（4）试剂：DNA限制性内切酶、DNA连接酶、T4 DNA连接酶、DNA聚合酶、PCR试剂盒、细胞培养试剂等。
2. 实验方法（1）荧光蛋白基因克隆采用PCR技术从GFP基因克隆片段中扩增目的基因，并通过限制性内切酶进行酶切，与载体pEGFP-N1进行连接，构建重组质粒pEGFP-N1-GFP。
（2）重组质粒鉴定对重组质粒进行PCR扩增，电泳检测目的基因条带，并进行测序验证。
（3）基因转移采用显微注射技术将重组质粒pEGFP-N1-GFP注入小鼠受精卵，构建基因荧光小鼠。
（4）基因荧光小鼠培育将注射重组质粒的受精卵移植到雌鼠体内，进行胚胎培养和胚胎移植，获得基因荧光小鼠。
（5）基因荧光小鼠表型观察观察基因荧光小鼠的体貌特征、生长发育、组织分布、荧光表达等。
三、实验结果1. 重组质粒构建通过PCR扩增和酶切连接，成功构建了重组质粒pEGFP-N1-GFP，经测序验证，目的基因序列与预期一致。
2. 基因荧光小鼠表型观察（1）体貌特征：基因荧光小鼠外观与普通小鼠无异。
（2）生长发育：基因荧光小鼠生长发育正常，体重增长符合预期。
（3）组织分布：荧光蛋白基因在基因荧光小鼠体内表达，主要分布在肝脏、肾脏、心脏、肺脏等器官。
小鼠基因型鉴定结果
小鼠基因型鉴定结果引言基因型鉴定是通过对生物体的基因进行分析，确定其基因组的具体构成。
小鼠是一种常见的实验动物，在科学研究中广泛应用。
基因型鉴定结果可以为科学家提供关于小鼠遗传特性的重要信息，有助于深入研究小鼠的生物学特性以及与人类疾病之间的关联。
小鼠基因型鉴定方法小鼠基因型鉴定的方法有很多种，其中常用的方法包括PCR（聚合酶链式反应）、限制性片段长度多态性分析（RFLP）、单核苷酸多态性分析（SNP）等。
这些方法可以通过特定的试剂和实验步骤，对小鼠的基因进行扩增、分离、测序等操作，最终得到基因型鉴定结果。
PCRPCR是一种常用的基因型鉴定方法，通过扩增目标基因片段，从而得到足够的DNA样本进行后续分析。
PCR的原理是利用DNA聚合酶酶解DNA双链，然后引物与目标序列特异性结合，DNA聚合酶在引物的作用下合成新的DNA链。
通过多轮循环反应，可以在短时间内扩增出大量目标基因片段。
RFLPRFLP是一种通过酶切DNA片段的方法进行基因型鉴定。
在RFLP分析中，首先将DNA样本进行限制性内切酶消化，然后通过凝胶电泳将酶切后的DNA片段进行分离。
由于不同基因型的DNA片段长度存在差异，因此可以通过凝胶电泳的结果判断小鼠的基因型。
SNPSNP是单核苷酸多态性分析的缩写，是一种通过检测DNA序列中单个碱基的变异来进行基因型鉴定的方法。
SNP分析可以通过PCR扩增目标区域的DNA片段，然后利用测序技术对扩增产物进行测序，最终确定小鼠的基因型。
小鼠基因型鉴定结果的意义小鼠基因型鉴定结果对于科学研究具有重要意义。
首先，基因型鉴定可以帮助科学家确定小鼠的遗传特性，包括其携带的基因突变和变异，这些特性对于深入研究小鼠的生物学功能至关重要。
其次，基因型鉴定结果可以为研究人员提供关于小鼠模型的有效性和可靠性的信息，有助于确定小鼠是否适合作为特定疾病模型的研究对象。
最后，基因型鉴定结果还可以为研究人员提供有关小鼠与人类疾病之间的关联的线索，有助于揭示疾病的发病机制和寻找新的治疗方法。
基因敲除小鼠的PCR鉴定
基因敲除⼩⿏的PCR鉴定基因敲除⼩⿏的PCR鉴定⼀、实验⽬的,通过PCR扩增程序及琼脂糖凝胶电泳⽅法鉴定凝⾎因⼦IX基因敲除⼩⿏的基因型。
⼆、实验原理,真核⽣物的⼀切有核细胞,包括培养细胞,都能⽤来制备基因DNA。
真核⽣物的DNA是以染⾊体的形式存在于细胞核内,因此,制备DNA的原则是既要将DNA与蛋⽩质、脂类和糖类等分离,⼜要保持DNA分⼦的完整。
提取DNA的⼀般过程是将分散好的组织细胞在含SDS,⼗⼆烷基硫酸钠,和蛋⽩酶K的溶液中消化分解蛋⽩质,再⽤酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋⽩质,得到的DNA溶液经⼄醇沉淀使DNA从溶液中析出。
1.PCR原理,PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。
PCR由变性-退⽕-延伸三个基本反应步骤构成, 1) 模板DNA 的变性,模板DNA经加热⾄93?左右⼀定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备,2) 模板DNA与引物的退⽕(复性),模板DNA经加热变性成单链后,温度降⾄55?左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合,3) 引物的延伸,DNA模板-引物结合物在TaqDNA聚合酶的作⽤下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成⼀条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链重复循环变性-退⽕-延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,⽽且这种新链⼜可成为下次循环的模板。
每完成⼀个循环需2,4分钟,2,3⼩时就能将待扩⽬的基因扩增放⼤⼏百万倍2.琼脂糖凝胶电泳原理,在pH8.0~8.3的缓冲液中,核酸分⼦带负电荷,向正极移动。
由于不同⼤⼩和构象的核酸分⼦电荷密度⼤致相同,因此在⾃由泳动时,各种核酸分⼦的迁移率相似,⽆法分开。
然⽽,在浓度适当的凝胶中,由于分⼦筛效应,使⼤⼩和构象不同的核酸迁移率出现差异,从⽽把它们分开。