小鼠基因型鉴定原理

竭诚为您提供优质文档/双击可除

小鼠基因型鉴定原理

篇一：小鼠表型鉴定

小鼠发育阶段特点

出生为红色（若要换窝，要带一点周围的木屑，否则鼠妈不认识）→生后4-5天开始长毛→生后7天剪脚趾和剪尾巴做基因型鉴定→生后10天开眼→生后20天断奶→生后40天可以合笼→怀孕20天后产崽。

小鼠性别判断：雌鼠的后腹部左右两侧有明显的乳头。

小鼠发情判断：雌鼠一般出生后40天开始发情，发情时肛门（或阴道口）为红色。之后一直处于可以生育阶段。

一般繁殖合笼为一雄配二三雌，一般不将两只雄鼠和一只雌鼠放在一起，因为两只雄鼠会打架。

在做完基因型鉴定之后要尽快把不需要的小鼠处死，因为小鼠太多雌鼠会奶水不足，当雌鼠奶水不足时，会吃掉鼠崽。

小鼠基因型鉴定

配方：

bufferA

0.5meDTA(ph8.0)

10mol/Lnaoh

双蒸水定容到250mL

室温储存100uL625uL

bufferb

Tribase

浓盐酸调ph到3.0

室温储存40mm

步骤：

1．小鼠出生7天后剪尾巴（一小点就行），若出生30天后剪耳朵；

2．75uLbufferA100℃煮40min，每20min摇一次；

3．225uLbufferb12000r/min3min，上清为DnA，跑pcR 鉴定。

篇二：转基因小鼠鉴定实验

转基因小鼠鉴定实验

在刚出生产出的鼠仔中，属转基因小鼠者，约占全部仔小鼠的20％-30％。因此，对转基因小鼠必须进行鉴定筛选。

1．转基因整合检测

鉴定转基因小鼠最简单的方法是从小鼠尾尖提取基因

组DnA，检测

其基因型。检测方法包括pcR和shouthern杂交。

（1）基因组DnA的提取：

1）将离乳期小鼠（>4周龄）麻醉标记。

2）用一只手抓住小鼠，另一只手持消毒剪剪下约1cm

的鼠尾。

（2）pcR检测：转基因的初始筛选通常采用pcR检测技术。该技术操作简便、快速、费用低而有效，适合大量标本的分析。由于该技术特别敏感，可能产生假阳性结果。因此，在操作过程中必须特别小心，避免质粒DnA或其它标本的基因组DnA的污染。假阳性的产生对转基因小鼠的筛选工作将是致命的。pcR实验应采用双复管，甚至三复管。阳性结果最好用southern杂交技术进一步证实。

（3）southernblot分析：该技术虽然没有pcR技术那样敏感，且费力费时，但是避免了因污染导致假阳性结果的麻烦，可以得到目的基因整合后的基因组、整合位点数目、转基因拷贝数等的确切信息。southernblot的实验操作参见第一章的第八节。

2．转基因表达检测

转基因整合检测是确定目的基因是否整合到了小鼠的

基因组中，同时可确定整合的位点和拷贝数，这在遗传学上