免疫印迹法检测在自身免疫性疾病 ENA 多肽抗体谱及 临床意义

2. 表 2 显示 6 种自身免疫病均存在多种自身抗体 ,SL E 患 者两种以上 (包括两种) 自身抗体 检 出 率 为 17. 8 % ( 8/ 45) 、 MCTD 患者检出率为 40 % (8/ 20) 、SS 患者检出率为 40 % (4/ 10) 、PSS 患者检出率为 16. 7 % (1/ 6) 、PM/ DM 患者检出率为 26. 3 %(5/ 19) 、RA 患者检出率为 10 %(4/ 40) 。
2. 方法 :抗 ENA 多肽抗体谱试剂盒购自广州万孚生物技 术有限公司 ,严格按照说明书操作 ,可一次性同时检测抗 Sm 、 抗 U1 RN P 、抗 SSA 、抗 SSB 、抗 Scl270 、抗 J O21 、抗 rRN P 、抗 DM253 、抗 RA254 、抗 D′E 等 10 种自身抗体 。
阳性例数 自身抗体
MC TD
阳性例数
SS 自身抗体
4
抗 U1 RN P + 抗 D′E
5
2
抗 U 1 RN P + 抗 SSA
2
2
抗 D′E + 抗 SSB
1
14
抗 U1RNP
9
8
抗 D′E
1
抗 SSA + 抗 SSB 抗 SSA
4
阳性例数 4 3
PSS 自身抗体 抗 Scl270 + 抗 SSA + 抗 SSB 抗 Scl270
表 1 各类自身免疫病患者和健康人 ENA 多肽抗体检测结果
SL E ( n = 45) MC TD ( n = 20) SS( n = 10)
PSS( n = 6) PM/ DM( n = 19)
RA ( n = 40)
对照组 ( n = 40)
34
18
7
3
8
10
0
20
0
0
0
0
0
0
12
16
0
0
0
表 2 各类自身免疫病抗 ENA 单项或多项阳性自身抗体分布 (续)
PM/ DM
RA
阳性例数 1 2
自身抗体
抗 J O21 + 抗 SSA 抗 J O21 + 抗 SSA + 抗 SSB
抗 J O21 + 抗 SSB 抗 J O21 抗 DM253
阳性例数 3 1 1 1 2
自身抗体
抗 RA254 + 抗 SSA + 抗 SSB 抗 RA254 + 抗 SSA 抗 SSA + 抗 SSB 抗 RA254 抗 SSA
阳性例数 1 1 2 5 1
3. Sm 抗体被认为是 SL E 的标志抗体 ,且与病程无关 ,对 早期 、不典型的 SL E 或经治疗后回顾性诊断有较大的帮助 ,但 有报道[2] 曾根据膜上 3 个区带 (28 ×103 、29 ×103 、13. 5 ×103 ) 同时出现与否来判断阳性或阴性 ,这样检出率偏低 。刘华平等 报道只要 3 个区带出现任何一条即可判为阳性 ,这样大大提高 了 SL E 的检出率 。
国际检验医学杂志 2006 年 7 月第 27 卷第 7 期 Int J Lab Med ,July 2006 ,Vol. 27 ,No. 7
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·经验交流 ·
免疫印迹法检测在自身免疫性疾病 ENA 多肽抗体谱及 临床意义
刘军锋 贾克刚 刘运德
【摘要】 目的 探讨免疫印迹法检测自身免疫性疾病 ENA 多肽抗体谱的临床应用价值 。方法 应用免疫印迹法对系统性红斑狼疮 ( SL E) 、混合性结缔组织病 ( MCTD) 、干燥综合征 ( SS) 、弥漫性硬 皮病 ( PSS) 、多发性肌炎/ 皮肌炎 ( PM/ DM) 、类风湿关节炎 ( RA) 等 140 例自身免疫病患者进行可提 取性核抗原 ( ENA) 多肽抗体谱检测 。一次性同时检测抗 Sm 、抗 U1 RN P 、抗 SSA 、抗 SSB 、抗 Scl270 、 抗 J O21 、抗 rRN P 、抗 DM253 、抗 RA254 、抗 D′E 等 10 种自身抗体 。结果 6 种疾病抗 ENA 谱阳性率 依次为 75. 6 %、90 %、70 %、50 %、42. 1 %、25 % ,除出现单项自身抗体阳性外 ,均出现了两种或两种以 上阳性结果 ,说明患者血清中含有多种自身抗体 , ENA 系列抗体有相应的疾病抗体谱 。结论 免疫 印迹法检测 ENA 自身抗体操作简便 、省时 、特异性好 、重复性好 、用血量少 、不需特殊设备 ,可同时完 成对 10 种自身抗体的识别和过筛 ,对提高自身免疫性疾病的诊断水平有很大的帮助 。
3 许玲玲 ,刘敏 ,俞纯山. 系统性红斑狼疮患者 4 种抗体检测的临床意 义. 江西医学检验 ,1999 ,17 (2) :98299.
(收稿日期 :2006203204)
5. 本组 6 种自身免疫性疾病 ,因发病原因至今未明 ,临床 表现变化多端 ,不易被早期诊断 。而免疫印迹法检测 ENA 自
身抗体操作简便 、省时 、特异性好 、用血量少 、无需特殊设备 、重 复性好 (经多次反复冻融的标本检测结果完全一致) ,可同时完 成对 10 种自身抗体的识别和过筛 ,对提高自身免疫性疾病的 诊断水平有很大的帮助 。
参 考 文 献
1 刘敏 ,冯柏庄 ,俞纯山. 系统性红斑狼疮患者自身抗体检测方法的 应用与评价. 陕西医学检验 ,1997 ,12 (1) :324.
2 林宝顺 ,徐元斌 ,陈之航 ,等. ANA 、抗 ds2DNA 、抗 ENA 谱联合检测 在诊断 SL E 病人中的应用. 陕西医学检验 ,1999 ,14 (4) :627.
讨 论
1. 免疫印迹法是在抗原不同表位 ,从分子水平识别各种抗 体所作用的抗原在蛋白多肽分子量上的差别 、从抗原的蛋白多 肽水平上识别不同抗核抗体的一项新技术[1] 。在抗体检测的 特异性和敏感性上不仅比琼脂双向免疫扩散和对流免疫电泳 方法高 ,而且能在一次检测中 ,可同时完成对多种抗体的识别 和过筛 ,为临床能正确诊断与鉴别多种易混淆的自身免疫性疾 病提供重要的实验室依据 。本组采用广州万孚生物技术公司 生产的免疫印迹法检测 ENA 自身抗体试剂盒可同时筛查 、鉴 别抗 Sm 、抗 U1 RN P 、抗 SSA 、抗 SSB 、抗 Scl270 、抗 J O21 、抗 rRN P 、抗 DM253 、抗 RA254 、抗 D′E 等 10 种自身抗体 。
结 果
140 例病例组患者和 40 例健康对照组 ENA 多肽抗体谱 见表 1 ,抗 ENA 单项或多项阳性自身抗体分布见表 2 。
1. 表 1 显 示 SL E 患 者 , 抗 ENA 谱 阳 性 34 例 , 阳 性 率 75. 6 %(34/ 45) ,其中抗 Sm 阳性率 44. 4 %(20/ 45) 、抗 U1 RN P 阳性率 26. 7 %(12/ 45) 、抗 rRN P 阳性率 8. 9 % (4/ 45) ; MCTD 患者 , 抗 ENA 谱 阳 性 18 例 , 阳 性 率 90 % ( 18/ 20) , 其 中 抗 U1 RN P 阳性率 80 % (16/ 20) 、抗 D′E 阳性率 35 % (7/ 20) ; SS
4. 多数学者建议 ,对一个测定结果的解释要从两方面考 虑 :一是抗体效价 ,二是抗体的型别[3] 。在抗 ENA 检测中出 现单项 SSA 抗体 、SSB 抗体 、U1 RN P 抗体阳性 ,其临床意义广 泛 , SSA 抗 体 、SSB 抗 体 阳 性 可 见 于 SS、SL E、MCTD 、PM/ DM 、RA 、PSS 等患者 ; U1 RN P 抗体阳性可见于 MCTD 、SL E、 PSS、RA 、SS 等患者 ,因此应结合其他自身抗体和临床加以综 合分析 ,得出正确诊断 。
作者单位 :300457 天津泰达国际心血管病医院检验科 (刘军锋 、贾 克刚) ;300070 天津医科大学医学检验学系 (刘运德)
患者 ,抗 ENA 谱阳性 7 例 ,阳性率 70 %(7/ 10) ,其中抗 SSA 阳 性率 70 % ( 7/ 10) 、抗 SSB 阳 性 率 40 % ( 4/ 10) ; PSS 患 者 , 抗 ENA 谱阳性 3 例 ,阳性率 50 % ( 3/ 6) ,其中抗 Scl270 阳性率 50 %(3/ 6) ; PM/ DM 患者 ,抗 ENA 谱阳性 8 例 ,阳性率42. 1 % (8/ 19) ,其中抗 J O21 阳性率 31. 6 % (6/ 19) 、抗 DM253 阳性率 10. 5 %(2/ 19) ; RA 患者 ,抗 ENA 谱阳性 10 例 ,阳性率 25 % (10/ 40) ,其中抗 RA254 阳性率 17. 5 %(7/ 40) 。健康对照组未 检出自身抗体 。
资料与方法
1. 材料 : (1) 病例组 :来自门诊与住院 、经临床确诊的 140 例自身免疫病 (均符合国内或国际各类有关风湿病诊断标准) 患者 ,其中女 100 例 ,男 40 例 ,年龄 16～70 岁 。包括系统性红 斑狼疮 ( systemic lup us eryt hemato sus , SL E) 患者 45 例 ; 混合 型结缔组织病 (mixed co nnective tissue disease ,MCTD) 患者 20 例 ;干燥综合征 (Sfogren’s syndro me , SS) 患者 10 例 ;弥漫性硬 皮病 (penet rated sclero sis ,PSS) 患者 6 例 ;多发性肌炎/ 皮肌炎 (polymyo sitis/ dermatomyo sitis , PM/ DM) 患 者 19 例 ; 类 风 湿 关节炎 (rheumatoid art hritis , RA) 患者 40 例 。(2) 对照组 : 40 例健康体检者 ,其中女 28 例 ,男 12 例 ,年龄 14～68 岁 。