ATP生物发光法检测拭子的研究进展
ATP生物荧光检测技术在特定快速微生物检测中的新应用
ATP生物荧光检测技术在特定快速微生物检测中的新应用作者：海净纳来源：《食品安全导刊》2012年第11期Micro-Snap是一项采用改良ATP生物荧光反应的快速检测系统，能够用来检测不同种类样本中的特定细菌。
这种新的生物荧光拭子（MicroSnap）通过配套使用一种新的低成本高灵敏光度计（Hygiena公司Ensure多功能监控系统），可检测出各种类型样品中的低水平特定细菌，最长7小时就能得到结果。
这项具有诸多优势的实用技术首批推出的是大肠菌群、肠杆菌和大肠杆菌检测拭子。
该技术后续将会用于更多其他指示菌和病原菌的快速检测。
一、背景ATP生物荧光技术在不同行业的成功应用已有30年历史。
它作为一种非特异性生物量监控系统已经成功用于各类食品、化妆品和医药品行业，而其中应用最广泛的就是卫生检测。
ATP生物荧光法的最主要应用就是通过对非特异性有机残留物的测定来对清洁和卫生状况做出快速、直接和客观的评价。
ATP检测在医疗卫生机构中感染的控制方面的应用新近得到了英国健康保护署（Health Protection Agency）的推荐。
它也被执法和稽查审计人员作为一种干预工具来评价卫生状况和查明问题所在区域。
二、技术Micro-Snap技术将新的试剂配方和ATP生物荧光反应与特异性酶底物偶联在一起，从而在保留高灵敏度的同时，第一次将ATP检测用于特定细菌测定。
特定细菌所具有的酶（如β-半乳糖苷酶和β-葡糖醛酸酶）在催化这些底物的过程中发出光子，这些光子能被一种新的高灵敏手持式光度计（Ensure多功能监控系统）检测到。
Micro-Snap检测拭子独特的配方和包装使得其操作简便易用，既可以在实验室使用，也可以在偏远地区或现场使用。
Micro-Snap拭子反应过程：ATP+特异性底物+荧光素酶—特异性诊断酶→光三、性能与传统方法相比，Micro-Snap生物荧光检测技术具有高特异性和灵敏度（见表1）。
样本中细菌数量越高检测时间越短，低数量的细菌（1～5个菌）检测时间也只需7小时左右（见表2）。
ATP荧光仪快速解决清洁度检测——访上海美全生物科技有限公司执行副总经理彭志刚
I 6,N FOO D S F TYGUID 5品或形象检测、不同类异物检测、异物大小测量、脱漏检测、图像重检、保全周期管理、图像自动保存、产品缩放、调整传送带速度等多种功能，最多允许记录10000个产品。
当然，照必斯也可根据企业的具体情况提供相匹配的解决方案。
X-ray 异物检测，安全设计很关键对于X-ray 异物检测设备来说，产品研发之初最需要考虑的就是设备的安全性能，这需要制造商考虑包括相关法规和标准、设备本身的性能、检测物品的特性等等。
针对这些问题，照必斯的产品完全参照美国FD A 和欧盟CE 相关标准和要求设计产品的基本规格，设备的漏流线量可达到1uSv/h 以下；另外，为保证检测机的安全，还配备了其它安全措施，比如X 射线指示灯、通道的开闭、应急停止设置、防止操作者将手伸进设备的传感器等等。
照必斯的X -ray 异物检测机的X 射线量值在0.001G y 以下，相对于WHO 规定的10K G y 以下的安全值小很多，因此，食品几乎不会受到X 射线的辐射，能够充分保证食品的安全性和品质，而其检测系统的流线量在1uSv/H r 以下，对人体的辐射非常之小。
因此，照必斯的检测机不但能够保障食品的安全，还可保障工作人员少受辐射之苦。
X-ray 异物检测，容易操作很重要对于异物检测来说，除了具有强大的功能、安全的设置外，还应该易于操作。
复杂的操作不但不能给企业带来成本的节约，还会增加企业人员培训的相关费用，给企业带来一定的负担，所以评价设备优劣或先进与否的一个重要标准就是设备的易操作性。
照必斯生产的X -ray 异物检测机基于半导体精密技术，采用优质材料及配件，能够保证设备的持续运转，并且可根据企业的要求，实现完全自动化检测，检测系统在设定相关参数之后便可自动运行，并且能够保证极小的故障率，为企业省去了很多人力的投入。
随着消费者对食品安全重视程度的不断提高，X-ray 异物检测在食品行业将大有作为。
三磷酸腺苷生物发光法
三磷酸腺苷生物发光法摘要：一、引言二、三磷酸腺苷（ATP）的作用与意义1.生物学功能2.在生物发光中的应用三、生物发光法的原理1.发光生物分子的合成2.发光反应的触发与调控四、三磷酸腺苷生物发光法的实验操作步骤1.制备发光生物分子2.添加三磷酸腺苷3.激发发光反应4.检测与分析发光信号五、应用领域与前景六、总结与展望正文：一、引言三磷酸腺苷（ATP）作为生物体内能量的主要载体，其含量和分布对生物体的生理功能具有重要意义。
近年来，随着生物发光技术的发展，三磷酸腺苷生物发光法在生物学、医学等领域的研究中得到了广泛应用。
本文将对三磷酸腺苷生物发光法的原理、实验操作步骤及其应用领域进行详细介绍。
二、三磷酸腺苷（ATP）的作用与意义1.生物学功能ATP是生物体内能量的主要来源，通过其磷酸键的水解，释放出大量的能量，供给细胞进行各种生物活动。
ATP在细胞内的浓度梯度对于许多生物学过程，如细胞内物质的运输、生物大分子的合成与降解等，具有调控作用。
2.在生物发光中的应用ATP在生物发光过程中的作用主要体现在两个方面：一是作为能量源，为发光生物分子提供能量；二是作为发光反应的底物，参与发光过程。
在生物发光法中，ATP的浓度与发光强度成正比，从而可以间接反映生物体内能量代谢的水平。
三、生物发光法的原理1.发光生物分子的合成生物发光是由生物体内某些特定分子在受到激发后，通过发光反应产生的。
常见的发光生物分子有荧光素、荧光蛋白等。
在实验室中，可以通过基因重组技术或化学合成方法制备这些发光生物分子。
2.发光反应的触发与调控生物发光反应通常在特定条件下进行，如温度、pH值、酶的催化等。
在反应过程中，发光生物分子受到激活，产生发光现象。
ATP作为能量源，在反应中被消耗，使发光强度与ATP浓度呈动态平衡。
通过调控ATP的浓度，可以实现对发光强度的调节。
四、三磷酸腺苷生物发光法的实验操作步骤1.制备发光生物分子根据研究需要，通过基因重组技术或化学合成方法制备发光生物分子。
荧光免疫层析技术原理进展
手持式
台式
使用方法
第一步——涂抹【SWAB】
1
球管 吸阀 棉拭棒
棉拭子 检测管
拭抹表面以获取标本,如需获得 清洗水溶液标本，则将棉拭子浸入水
中3到4秒钟。
使用方法
第二步——折断和挤压 【 SNAP AND SQUEEZE 】
将拭子插入检测管，用拇指和 中指捏住球管，从吸阀处折断；轻
挤球管两次，挤出球管内液体。
ATP快检系统的组成
2．试剂系统 具体包括体细胞裂解试剂组、细菌细胞裂解试剂组和荧光反应 试剂组。 ●体细胞裂解试剂组：可以专一有效地裂解样品中的非细菌细 胞（体细胞）并释放出ATP，然后通过过滤比色杯底部的滤膜 将其排除。 ●细菌细胞裂解试剂组：主要作用是，有效地裂解细菌细胞并 释放出ATP以便检测。同时，为了避免ATP降解而影响检测结果 的真实性，细菌细胞裂解试剂应能使ATP降解的酶迅速失活。 ●荧光反应试剂组：则包括能与样品中细菌ATP相互作用并发 出荧光的虫萤光素和虫光素酶。
基本原理
D-虫荧光素 ATP
荧光素酶 O2+Mg2+
氧化荧光素 PPi+AMP
光（RLU）
植物 微生物
细胞 数量
ATP + Luciferin & Luciferase
荧 光 光 度 计 测 量
AMP + PPi + 冷光
ATP概述
ATP，三磷酸腺苷整体可以看成是含有 三个磷酸根的腺嘌呤核苷酸，结构式如右图 ◆特点是：在该分子中具有两种不同的化学键， 这两种不同的化学键即是A与P之间的普通化学 键以及P与P之间的高能磷酸键。这两种化学键 具有本质的区别，其不同之处在于两者的结构不 同，前者较为牢固，后者则相对不稳定，这导致 了在水解时两者释放的能量有所区别。三磷酸腺 苷分子结构中的两个化学键可以依次发生水解而 生成二磷酸腺苷（ADP）和一磷酸腺苷（AMP） 因为AMP，ADP和ATP的分子结构相当类似， 而且三者具有相似的理化性质，因此在对ATP进 行检测时，使用的方法能否对三者进行识别，并 将其进行分离选择性检出是方法是否合适的关键
atp荧光检测仪用于消毒效果评价的原理
在论述ATP荧光检测仪用于消毒效果评价的原理之前，我们首先要了解ATP荧光检测仪的基本原理和原理。
ATP荧光检测仪是一种快速、准确检测生物污染的仪器，它利用了生物学中著名的“三磷酸腺苷”（ATP）分子的荧光特性，从而实现了对生物活性的直接测定。
在消毒效果评价方面，ATP荧光检测仪通过检测样品表面上的微生物生物质，从而可以快速判断消毒的效果。
简单来说，ATP荧光检测仪通过检测样品表面上的ATP含量，从而评价消毒效果的好坏。
当我们使用ATP荧光检测仪进行消毒效果评价时，首先需要采集样品表面的微生物生物质。
这一步通常会通过样品表面的拭子采样来完成。
之后，将采集得到的样品放入ATP荧光检测仪中，仪器会自动进行ATP的提取和检测。
ATP荧光检测仪会将ATP分子与荧光素结合，产生荧光信号，并通过光电探测器进行检测和记录。
ATP含量的高低将直接反映出样品表面上的生物活性，从而评价消毒效果。
当然，ATP荧光检测仪用于消毒效果评价还需要考虑其他因素。
在进行检测时需要注意消毒剂的残留情况，因为残留消毒剂可能会对ATP的检测结果产生干扰。
温度和湿度等环境因素也会对ATP的稳定性产生影响，因此在使用ATP荧光检测仪进行消毒效果评价时，需要对这些因素进行控制和调整，以确保测试结果的准确性和可靠性。
从个人观点上来看，ATP荧光检测仪作为一种快速、准确的生物污染检测手段，在消毒效果评价领域具有重要的应用价值。
它不仅可以帮助我们实时监测和评价消毒效果，还可以为我们提供科学依据，指导我们对消毒工作的进行和改进。
当然，需要注意的是，在使用ATP荧光检测仪进行消毒效果评价时，需要严格按照操作规程进行操作，以确保测试结果的准确性和可靠性。
ATP荧光检测仪用于消毒效果评价的原理是基于其对ATP含量的检测和评价。
它的快速、准确的特点使其在消毒效果评价中具有重要应用价值，为我们提供了一种科学、高效的生物污染检测手段。
希望在未来的工作中，我们能够进一步挖掘ATP荧光检测仪的潜力，为消毒效果评价提供更多更好的技术支持。
生物学发光检测法(ATP)
目
CONTENCT
录
• 引言 • ATP发光检测法的基本原理 • ATP发光检测法在生物学研究中的
应用 • ATP发光检测法的实验方法与技术 • ATP发光检测法的数据分析与解读 • ATP发光检测法的发展趋势与挑战
01
引言
目的和背景
研究目的
通过生物学发光检测法（ATP）快速、准确地检测和评估生物样本中 的活性细胞数量及其代谢状态。
ATP纯化
通过离心、过滤或层析等方法 去除提取液中的杂质和干扰物 质，以获得纯净的ATP溶液。
ATP定量
利用标准曲线法或比色法等方 法对提取的ATP进行定量，以 确定其浓度。
发光反应条件优化与信号检测
发光反应条件
优化反应体系中各组分的浓度和比例， 如荧光素、荧光素酶和ATP等，以获 得最佳的发光效果。
• 高通量筛选
适用于高通量药物筛选和细胞毒性评价，提高研究效率。
• 临床应用
可用于评估肿瘤细胞对药物的敏感性、预测疾病预后等， 为个性化医疗提供依据。
• 环境监测
可用于检测水体、土壤等环境中的微生物活性，评估环境 质量及生态毒性。
02
ATP发光检测法的基本原理
ATP与生物发光的关系
ATP（腺苷三磷酸）是生物体内能量传递的重要分子， 广泛存在于所有活细胞中。
生物发光现象与ATP水平密切相关，ATP浓度越高， 发光强度越大。
通过测量生物体内的发光强度，可以间接反映ATP含 量，从而评估细胞的活性、微生物污染程度等。
ATP发光检测法的反应机制
ATP与荧光素酶（Luciferase） 反应，生成氧化荧光素 （Oxyluciferin）并释放能量。
释放的能量激发荧光素 （Luciferin），使其从基态跃 迁到激发态。
atp生物荧光检测法用于消毒供应中心的原理
atp生物荧光检测法用于消毒供应中心的原理ATP生物荧光检测法是一种用于检测细胞内ATP含量的生物技术，其原理基于荧光光度计或发光光度计的测量系统。
ATP 是细胞内的重要能量物质，其含量可以反映细胞的生命活力和代谢状态。
在消毒供应中心，ATP生物荧光检测法可以用于检测清洗和消毒效果，以确保医疗器械的安全和有效性。
在ATP生物荧光检测法中，荧光素酶（luciferase）是一种关键的酶，它可以将ATP水解为AMP并产生能量，从而驱动荧光产生。
当ATP存在时，荧光素酶能够催化ATP水解并产生荧光。
通过测量荧光强度，可以推算出样品中ATP的含量，进而推断出样品中微生物的数量和活性。
在消毒供应中心的实际应用中，ATP生物荧光检测法可以用于以下方面：1.清洗效果检测：医疗器械使用后，表面会残留一些有机物和微生物。
通过ATP生物荧光检测法可以检测出清洗后器械表面残留的微生物数量，从而判断清洗效果。
如果ATP含量过高，说明清洗不够彻底，需要改进清洗流程或更换清洗剂。
2.消毒效果检测：在医疗器械清洗后，通常需要进行消毒处理以杀灭残留的微生物。
通过ATP生物荧光检测法可以检测出消毒后器械表面残留的微生物数量，从而判断消毒效果。
如果ATP含量过高，说明消毒不够充分，需要调整消毒时间和消毒剂浓度。
3.操作人员手卫生检测：操作人员在处理医疗器械时，手部容易成为微生物传播的途径。
通过使用ATP生物荧光检测法检测操作人员手部微生物的数量和活性，可以评估手卫生习惯的执行情况和手部清洁剂的效果。
如果ATP含量过高，说明操作人员需要加强手卫生习惯的培养和手部清洁剂的使用。
4.环境卫生检测：在消毒供应中心内，环境卫生情况也会影响医疗器械的安全和质量。
通过使用ATP生物荧光检测法检测室内空气和物体表面的微生物数量和活性，可以评估环境卫生状况并采取相应的清洁和消毒措施。
总之，ATP生物荧光检测法在消毒供应中心的应用具有许多优点。
它具有快速、灵敏、简便和可重复性好等优点，能够为消毒供应中心提供可靠的检测结果，从而确保医疗器械的安全和有效性。
生物学发光检测法(ATP)
———
———
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使用方法----第一步
【SWAB】
1
球管 吸阀 棉拭棒
拭抹表面以获取标本,如需获 得清洗水溶液标本，则将棉拭 子浸入水中3到4秒钟。
棉拭子 检测管
———
使用方法----第二步
[SNAP AND SQUEEZE]
将拭子插入检测管，用拇 指和中指捏住球管，轻挤球管 两次，挤出球管内液体。
2
———
ATP检测技术实验结果准确可靠，值得信赖。美国多个专业 权威机构研究了1000个以上的样品，这种只需十几秒就能完 成检测的快速检测法所得实验结果90%以上与24-48小时标 准细菌培养法/平皿法所得结果一致
使细菌检查的工作量大幅度减轻，实现卫生监控的简捷化、 效率化，但只能用于细菌的定量分析，定性分析可用常规方 法进行培养检测。
通过检测ATP ，可以间接地 证明生物体的存在
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生物学发光检测法（ATP）
• 原理：ATP荧光检测仪基于萤火虫发光原理，利 用“荧光素酶—荧光素体系”快速检测三磷酸腺 苷（ATP）。由于所有生物活细胞中含有恒量的 ATP，细菌细胞裂解时会释放出ATP，ATP自细 菌细胞释放出来后，使用荧光虫素和荧光虫素酶 可使之释放出能量，这些能量产生莹光，光的强 度就代表ATP的量。ATP含量可以清晰地表明样 品中微生物与其他生物残余的多少，用于判断卫 生状况
食品快速检测
生物学发光检测法（ATP）
———
ATP检测技术应用（国外）
20世纪80年代，英国首先研制出便携式ATP检测仪 随后在欧洲、美国、日本展开应用 应用范围涉及食品加工、超市、饮食、医药等行业 检测内容包括微生物和食品残渣
atp荧光检测仪原理及应用
atp荧光检测仪原理及应用ATP荧光检测仪原理及应用ATP荧光检测仪是一种用于快速检测生物体内三磷酸腺苷（ATP）含量的仪器。
ATP是生物体内重要的能量分子，其含量可以反映出生物体的活力和细胞的活动状态。
ATP荧光检测仪通过测量样品中的荧光强度来间接检测ATP的含量，具有快速、灵敏和准确的特点。
本文将介绍ATP荧光检测仪的原理及其在不同领域的应用。
ATP荧光检测仪的原理主要基于两个关键步骤：样品处理和荧光检测。
首先，样品处理步骤用于释放样品中的ATP。
ATP荧光检测仪通常使用一种特殊的试剂，该试剂可以破坏细胞膜并释放出ATP。
这一步骤可以通过简单的离心或加热来完成。
然后，荧光检测步骤通过测量ATP与荧光染料的结合来检测ATP的含量。
荧光染料会与ATP结合形成复合物，这种复合物的荧光强度与ATP的含量成正比。
ATP荧光检测仪会发射一束特定波长的激发光，然后测量样品中的荧光信号，并将其转化为ATP的含量。
ATP荧光检测仪在生物学、医学、食品安全等领域有广泛的应用。
在生物学研究中，ATP荧光检测仪可以用于测量细胞的新陈代谢活力。
通过检测不同样品中的ATP含量，研究人员可以评估细胞的生长状态、代谢水平以及对外界刺激的响应能力。
在医学领域，ATP 荧光检测仪可以用于快速检测细菌和真菌的存在。
细菌和真菌通常会释放出大量的ATP，通过测量样品中的ATP含量，医生可以快速判断感染是否存在。
此外，ATP荧光检测仪还可以应用于食品安全领域。
食品中存在的微生物通常会导致食品变质和污染，通过测量食品样品中的ATP含量，可以快速评估食品的卫生状况。
总结起来，ATP荧光检测仪通过测量样品中的荧光强度来间接检测ATP的含量，具有快速、灵敏和准确的特点。
它在生物学、医学和食品安全等领域的应用广泛，可以用于评估细胞的活力、检测微生物感染以及评估食品的卫生状况。
ATP荧光检测仪的发展将为相关领域的研究和实践提供更加方便和高效的工具，促进生命科学的发展。
生物学发光检测法(ATP)
生物学发光检测法（ATP）
ATP检测技术应用（国外）
20世纪80年代，英国首先研制出便携式ATP检测仪 随后在欧洲、美国、日本展开应用 应用范围涉及食品加工、超市、饮食、医药等行业 检测内容包括微生物和食品残渣
检测技术应用（国内）
20世纪末，ATP检测技术被引进我国
当时，除个别省级卫生监督单位装备，主要在一些外资、
合资企业用于自检
2002年我国卫生部颁发了食品加工企业的HACCP实施指南， 鼓励食品加工企业引入ATP检测技术
2005年3月卫生部新出台《卫生监督机构建设指导意见》， 要求省、市、地配置
什么是ATP
ATP——三磷酸腺苷 【adenosine triphosphate， C10H16N5P3O13】存在于所有生物 体中，在细胞内主要作用是提 供能量 通过检测ATP ，可以间接地证 明生物体的存在
生物学发光检测法（ATP）
• 原理：ATP荧光检测仪基于萤火虫发光原理，利 用“荧光素酶—荧光素体系”快速检测三磷酸腺 苷（ATP）。由于所有生物活细胞中含有恒量的 ATP，细菌细胞裂解时会释放出ATP，ATP自细 菌细胞释放出来后，使用荧光虫素和荧光虫素酶 可使之释放出能量，这些能量产生莹光，光的强 度就代表ATP的量。ATP含量可以清晰地表明样 品中微生物与其他生物残余的多少，用于判断卫 生状况
[INSERT AND DETECT]
将检测管放入ATP荧光 检测仪中，盖上盖子，倒 计 时开始并检测。
ATP检பைடு நூலகம்反应原理
D-虫荧光素 荧光素酶 O2+Mg2+
氧化荧光素 PPi+AMP
ATP
光（RLU）
植物 微生物
atp化学发光法
atp化学发光法ATP化学发光法是一种常用的生物化学分析方法，用于检测和定量测量细胞内的ATP含量。
ATP（adenosine triphosphate）是生物体内的能量储存分子，广泛存在于细胞内。
测量细胞内的ATP含量可以评估细胞的能量代谢状态，对于细胞功能和生理活动的研究具有重要意义。
ATP化学发光法的原理是基于ATP与荧光素酶的催化反应。
荧光素酶是一种特殊的酶，它能够将ATP与荧光素催化反应，产生可见光。
该反应的产物是光子，其能量可以被光电倍增管或光电二极管检测到，并转化为电信号。
根据电信号的强度，可以间接地推断细胞内ATP的含量。
ATP化学发光法的操作过程相对简单。
首先，将待测样品与荧光素酶和底物（荧光素）混合，形成反应体系。
然后，通过荧光素酶的催化作用，ATP与荧光素发生反应，产生可见光。
最后，通过光电倍增管或光电二极管检测光信号的强度，并与标准曲线进行比较，从而确定样品中ATP的浓度。
ATP化学发光法具有许多优点。
首先，该方法对ATP的测量灵敏度高，可以检测到极低浓度的ATP。
其次，该方法具有较高的选择性和特异性，能够准确地测量细胞内的ATP含量，而不受其他物质的干扰。
此外，该方法操作简便，快速高效，适用于大规模样品的测量。
因此，ATP化学发光法广泛应用于细胞生物学、生物化学、医学等领域的研究中。
ATP化学发光法在生命科学研究中具有广泛的应用价值。
首先，通过测量细胞内ATP含量，可以评估细胞的能量代谢状态。
ATP是细胞内的主要能量储存分子，维持细胞正常的能量供应对于细胞的正常功能和生理活动至关重要。
因此，通过ATP化学发光法可以评估细胞能量代谢的异常，从而揭示细胞的功能和生理状态。
ATP化学发光法还可以用于药物筛选和药效评价。
许多药物对细胞内ATP的生成和利用有不同程度的影响。
通过测量细胞内ATP含量的变化，可以评估药物对细胞能量代谢的影响，进而评估药物的疗效和毒性。
这对于药物研发和临床应用具有重要意义。
ATP生物发光技术在微生物检测中的应用[1]
![ATP生物发光技术在微生物检测中的应用[1]](https://img.taocdn.com/s3/m/68d9fca7dd3383c4bb4cd2c0.png)
作者简介：尹子波（1986—），男（汉)，在读研究生，研究方向：食品分析。
*通信作者：尹建军（1966—），男，高级工程师，长期从事食品质量安全技术研发管理工作。
微生物污染严重威胁着人类的身体健康与生命安全，目前国际上检测微生物的标准方法是营养琼脂平板计数法（PCA ），但PCA 法需37℃下培养48h ，操作繁琐，不能做到快速检测。
现在国内外开始广泛的研究与应用各种微生物快速检测技术，如免疫学方法（ELISA [1-2]）、电阻抗测量法[3]、快速纸片法[4]、核酸法[5]、微菌落技术[6]等。
ATP 生物发光法具有简便、快速、灵敏度高的优点，适合对微生物污染进行实时监控，符合食品加工企业的需求。
目前，国内外对该方法进行了大量的研究与应用。
1ATP 生物发光法的发展历史、原理及检测步骤1.1ATP 生物发光法的发展历史ATP 的生物发光机理最早在1949年由McEIroy 和Strehler 提出[7]。
1983年，James D.Moyer 和J.FrankHenderson [8]提出细胞内源性ATP 的含量可以反映细胞的活性和活细胞的数量。
1985年，de Wet ，J .R 等[9]首次克隆了北美荧火虫（P.Pyralis ）的萤火虫荧光素酶（Firefly luciferase ）基因，并在大肠杆菌（E.coli ）中表达，从中得到具有活性的虫荧光素酶。
该酶分子量为62ku ，与荧光素反应能够产生波长为560nm 的荧光。
20世纪80年代，英国人首先研制出ATP 检测仪，随后发展到欧洲、美国和日本。
2002年，我国卫生部颁发了食品加工企业HACCP （Hazard Analysis and Critical Control Point ）实施指南，鼓励食品企业引入ATP 生物发光快速检测系统。
目前，在餐饮服务食品安全现场快速检测设备配备基本标准中，ATP 生物发光快速检测系统被应用于环境洁净度的评估检测。
atp生物发光法的应用
atp生物发光法的应用
ATP生物发光法是一种用于检测生物体内ATP含量的技术，其应用广泛，包括但不限于以下几个方面：
1. 微生物检测：ATP生物发光法可以用于检测食品、医疗和废水处理等行业的微生物数量。
其原理是在有氧环境中，荧光素在荧光素酶催化和ATP作用下生成氧化荧光素，氧化荧光素发出光子，光子数量可换算成ATP的量。
2. 食品工业：ATP生物发光法可被用于检测肉类食品中细菌污染情况。
研究表明，这种方法与标准的细菌培养菌落计数法相比，具有良好的相关性。
此外，ATP生物发光法还可用于乳制品中乳酸菌的测定、啤酒中菌落总数测定、调味品及脱水蔬菜的细菌学测定等。
3. 环保行业：ATP生物发光法也可被用于废水处理过程中的微生物检测，以监测和优化废水处理的效果。
4. 医疗领域：ATP生物发光法可以用于检测和监测医疗环境中的微生物，如手术室、ICU病房等，以确保患者安全。
总的来说，ATP生物发光法是一种快速、准确、非破坏性的检测方法，可用于各种需要检测微生物含量的场合。
1。
ATP
共检测 了 ５ ５根洗 消后 的消化 内镜 ， 采样 １ ６ ５ 份， 在使用微生物检测的同时进行 Ａ Ｔ Ｐ生物荧光法 检测 。采取 综合 干预措 施 后 ， 消化 内镜 Ａ Ｔ Ｐ生物 荧
光检测 和 微 生物 检 测 合 格 率 分别 由 ６ ２ ． ２ ２ ％ 和 ７ ７ ． ７ ８ ％上 升到 ８ ８ ． ０ ０ ％和 ９ ７ ． ３ ３ ％（ 表１ ） 。干 预前
生标准》 ， 消毒后的内镜细菌总数 ＜ ２ ０ ｃ ｆ ｕ ／ 件， 且未 检 出致病菌为合格 。Ａ Ｔ Ｐ 生物荧光法检测根据厂家 提供 的合格标 准 ， 参照 国 内相关研 究 ， 采 用 台式荧 光 检测仪 Ｒ Ｌ Ｕ ≤２ ０ ０ ０作为医疗器械合格标准¨ 进行
评价 ， 并用 Ｓ Ｐ Ｓ Ｓ １ ３ ． ０统计 软件进 行分 析 。
中国消毒 学杂志 ２ ０ １ ５年第 ３ ２卷 第 ９期
・ ９ ２ ３・
采用 Ａ Ｔ Ｐ生 物 荧 光 法 对 洗 消前 后 消 化 内镜 进
镜检 出 Ｒ Ｌ Ｕ平 均值 为 １ ７ ９ ９ （ 表２ ） 。
行检测 ， 干预前 内镜检 出平均值 为 ４ ８ ０ ５ ， 干预后 内
院感染 管理 专职 人员完 成 。 １ ． ２ ． ２ 综 合干 预方 法 根 据现 场调 查和 前期 检测 结 果 总 结影 响消化 内镜 洗 消 质 量 的 因 素 ， 制定 综 合 干 预措 施 ， 包 括配 备足够 的 清洗设 施 和人员 ； 对消化 内 镜室 管理 人员 和清 洗 人员 进 行 洗 消 知识 培 训 考 核 ； 感染 管理 专职人 员不定 期 到 现场 进 行 Ａ Ｔ Ｐ检 测 ， 并 反馈 结果 ， 进行 持续 质量 改进 直至 检测合 格 。
生物发光技术在医学检测中的应用
生物发光技术在医学检测中的应用生物发光技术，是指利用生物体内的发光物质，在光辐射的作用下发出光信号。
生物发光信号的检测可以应用于许多领域中的生物学和医学研究，常常用来检测蛋白质、核苷酸、酶活性等。
在医学检测方面，生物发光技术非常有用，因为它以其高灵敏度、高通量和易操作等特点，成为了一种有效的检测方法。
一、生物发光技术的原理生物发光技术主要利用生物发光物质——荧光素、琥珀酸酯和ATP等，这些物质可以被加入细胞培养基中。
当这些物质受到激发，它们会发出光信号，这个信号可以通过检测仪器检测到，从而用来定量分析生物体内的物质。
其次，生物发光技术还可以通过酶介导的化学反应来实现。
常用的系统包括荧光素酶（Luciferase）和过氧化物酶（Horse radish peroxidase, HRP）。
对于荧光素酶系统，荧光素酶能将荧光素和ATP反应生成荧光素腺苷酸（L-AMP），L-AMP经过一系列反应，使氧气和荧光素反应，在光子的作用下产生强烈的荧光信号。
而对于过氧化物酶系统，金标法就是利用过氧化物酶催化产生的生物发光信号。
二、生物发光技术在医学领域中的应用生物发光技术在医学检测中已经被广泛应用，其中最重要的应用就是实时定量PCR（qPCR）。
qPCR就是通过荧光素酶或其他发光物质对PCR过程中生成的产品进行定量分析，以便确定模板中具体的基因组或RNA分子的数量。
生物发光技术作为PCR技术中的一个致命环节，其高灵敏度和高通量检测能力已经被普遍认可。
在临床检测中，生物发光技术也得到了广泛的应用。
例如，通过检测某些抗体来确定某些疾病的关联性。
同时，酶标法等技术已经成为最广泛使用的生物发光技术之一，在检测蛋白质、核酸和抗体等时起到了积极的作用。
除此之外，生物发光技术在药物筛选、基因功能研究等领域也有较广泛的应用。
因为药物对于特定目标蛋白的影响可以通过检测药物对该蛋白的影响而得到，而某些基因的活性与荧光素酶活性有关，因此可以通过检测荧光素酶活性来检测基因的表达与活性变化。
ATP荧光检测拭子操作说明
ATP荧光检测拭子操作说明ATP (Adenosine Triphosphate)是一种存在于所有活细胞中的分子，它是细胞内能量储存和转移的主要形式。
ATP荧光检测拭子是一种快速检测环境中微生物污染的方法，通过测量样品中ATP含量来评估细菌、霉菌和其他微生物的水平。
以下是ATP荧光检测拭子的操作说明:1.预处理工作：a.首先，确保所有操作台面和仪器表面都是干净的，使用无菌消毒溶液擦拭。
b.使用无菌手套和无菌拭子，避免污染样品。
2.样品采集：a.选择要检测的样品表面，例如工作台、生产设备或其他物体表面。
b.用无菌拭子轻轻擦拭样品表面，确保尽可能地覆盖整个区域。
避免过度压力，以免污染拭子。
c.使用无菌拭子，采集多个样品，以获得更准确的结果。
d.确保采集到的样品不受其他环境因素的干扰，如水、化学药剂等。
e.确保所有样品在采集后尽快送到实验室进行测试，以防止样品中ATP降解。
3.ATP提取：a.使用ATP提取试剂盒，根据厂家提供的说明进行操作。
通常，需要添加提取缓冲液到拭子管中，然后将拭子管放入震荡器中进行震荡。
b.震荡时间和速度根据试剂盒的说明进行调整。
c.确保所有拭子都被充分提取，以获得准确的ATP含量。
4.ATP荧光测量：a.使用ATP荧光检测仪器，根据厂家提供的操作说明进行设置。
b.将提取液转移到ATP检测仪器的相应孔板或试管中。
c.启动检测仪器，等待程序运行完毕。
d.记录ATP测量结果，根据标准曲线或参考值进行数据分析。
5.结果解读：a.根据ATP测量结果，比较不同样品之间的ATP含量，评估微生物污染水平。
通常，ATP含量越高，说明微生物污染越严重。
b.根据实际需要，设置不同的阈值来确定是否需要采取清洁措施或其他紧急处理措施。
c.分析结果时，应将ATP含量与其他环境因素（如温度、湿度等）结合考虑，以获得更准确的评估。
总结：ATP荧光检测拭子是一种快速、简便的微生物污染检测方法，但使用时应注意保持采样和测试过程的无菌性，并按照厂家提供的操作说明进行操作。
atp生物荧光测定法
atp生物荧光测定法ATP生物荧光测定法是一种常用的生化分析方法，用于测定生物体内的ATP含量。
ATP（腺苷三磷酸）是细胞中的重要能量分子，参与细胞代谢和能量传递过程。
通过测定ATP的含量，可以了解细胞的能量状态和活性程度，对生物学研究和医学诊断具有重要意义。
ATP生物荧光测定法基于ATP的特异性反应性，利用荧光信号的强度来间接测定ATP的含量。
这种方法的原理是利用一种特殊的荧光探针，例如luciferin/luciferase体系，通过ATP与荧光探针反应产生荧光信号。
荧光信号的强度与ATP的含量成正比，通过测量荧光信号的强度，可以确定样品中ATP的浓度。
ATP生物荧光测定法的步骤通常包括以下几个关键步骤：1. 提取样品中的ATP：将待测样品进行预处理，提取样品中的ATP。
提取方法可以根据具体实验需求选择，常用的方法包括热提取法、酸性提取法等。
2. 反应体系的制备：根据实验需求，选择合适的反应体系，例如luciferin/luciferase体系。
将荧光探针与提取得到的样品中的ATP进行反应，产生荧光信号。
3. 荧光信号的检测：利用荧光探测仪器对反应产生的荧光信号进行检测。
荧光信号的强度与ATP的含量成正比，可以通过荧光强度的测量来确定样品中的ATP浓度。
4. 数据分析和结果解读：根据荧光信号的强度和标准曲线等数据，进行数据分析和结果解读。
通过与标准曲线的比对，可以确定样品中ATP的浓度。
同时，可以对不同样品进行比较分析，了解不同样品中ATP含量的差异。
ATP生物荧光测定法具有许多优点。
首先，该方法灵敏度高，可以检测到非常低浓度的ATP。
其次，该方法具有较高的特异性，可以准确测定样品中的ATP含量，避免其他物质的干扰。
此外，该方法操作简便，结果可靠，适用于大规模样品的测定。
ATP生物荧光测定法在生物学研究和医学诊断中有广泛应用。
在生物学研究中，可以通过测定不同细胞或组织中的ATP含量，了解其能量代谢状态和活性程度。
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生 物 体 中 ． 有 相 当恒 定 的 含 量 。 目前 ， 明 确 证 实 了 微 具 已 生 物 浓 度 和 Ａ Ｐ浓 度 之 间 的 相 互 关 系 ， 以 通 过 Ａ Ｐ浓 Ｔ 可 Ｔ
最 近 几 年 来 ，一 些 方 法 已用 于 微 生 物 总 数 的 快 速 检
测 ， 括核 酸检 测 、 Ｔ （ 磷 酸腺 苷 ） 光法 、 胞 培养 、 包 Ａ Ｐｉ 荧 细
自动 化 的 免 疫 测 定 。 这 些 方 法 中 ， Ｔ 在 Ａ Ｐ生 物 发 光 法 由 于
高、 可行 有效 。现 今 已出现 Ａ Ｐ生 物 发光 法 与其 他 快速 Ｔ
随 着 国 内市场 和进 出 口贸 易对 食 品 安 全 的重 视 ， 食 品微 生 物 检 测 技 术 也 面 临 着 更 大 的 压 力 。微 生 物 数 量 检 测 是 食 品 制 造 及 流 通 过 程 中 卫 生 学 检 验 和 质 量 管 理 的 重
一
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。
奶 制 品 工 业 也 迅 速 采 用 了 这 一 新 技 术 ： 评 估 奶 制 从
检 测 方 法 并 用 的 情 况 ． Ａ Ｐ生 物 发 光 法 与 Ｐ Ａ探 针 技 如 Ｔ Ｎ
不需 要培 养过 程 ， 用 一体化 标 准 试剂 和 Ａ Ｐ荧 光仪 即 利 Ｔ 可快 速完 成 检测 ， 因此 ， 非 常适 合 于 ＨＡ Ｃ 它 Ｃ Ｐ体 系 中微
生 物 污 染 的 在 线 监 测 ［。 ２ ３
品 工 厂 的 卫 生 状 况 到 预 估 牛 奶 及 其 他 奶 制 品 的 上 市 时 间 ， 采 用 了 该 技 术 ］ 作 为 卫 生 方 面 的 检 测 器 ， Ｔ 均 。 Ａ Ｐ生 物 发 光 法 在 食 品 工 业 中 的 应 用 己为 很 多 学 者 研究 调查 过 。 此 之 外 ， 技 术 还 可 广 泛 用 于 检 测 样 品 中 的微 生 物 除 该 量。 目前 ， Ｔ Ａ Ｐ生 物 发 光 法 已 成 功 应 用 于 检 测 食 品 生 产 线 及 厨 房 、 箱 、 品 操 纵 台 、 路 站 车 食 品 器 具 等 处 的 清 冰 食 铁 洁 度 ［１。 许 多 研 究 表 明 ， 种 方 法 与 琼 脂 培 养 法 相 关 性 ８０ －］ 这
［ 摘要 ］ Ｔ （ Ａ Ｐ 三磷 酸腺 苷 ） 生物发 光 法是 一种 快速 的微 生 物检 测方 法 ， 有 简便 、 具 灵敏度 高 、 实 时检 可
测 等优 点 。就 Ａ Ｐ生 物发 光法 的发 展概 况 、 测原 理 、 子 的操 作方 法 、 势 与劣 势进 行 了综 述 ， Ｔ 检 拭 优 并提 出 了Ａ Ｐ生 物发光 检测 拭子 的相 关研 究 思路。 Ｔ ［ 键词 ］Ｔ 关 Ａ Ｐ生物 发光 法 ； 取 剂 ； 提 检测拭 子
２ Ａ Ｐ生 物 发 光 法 检 测 的 原 理 及 拭 子 的操 Ｔ
作 方 法
２ １ Ａ Ｐ 生 物 发 光 法 原 理 ． Ｔ Ａ Ｐ是 主 要 的 生 物 能 量 来 源 ．普 遍 存 在 于 所 有 活 的 Ｔ
度高 的确 定细胞 活性 度 的检 测方 法 。由于 Ａ Ｐ普遍 存在 Ｔ
要项 目。通 常 ， 生物 总数 用培养 法 检测 ， 法 虽然 非常 微 该
有 效 ， 由 于 操 作 复 杂 、 养 时 间 长 而 不 能 满 足 ＨＡ Ｃ 但 培 ＣＰ 管 理 体 系 的 要 求 ， 此 ． 切 需 要 一 种 快 速 检 测 微 生 物 数 因 迫
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第 ３５ 卷 第 ５ 期 ２０１ 年 ９ 月 Ｏ
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Ａ Ｐ生物 发 光 法检 测 拭 子 的研 究进 展 Ｔ
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术合 用 等 。国外 已将 这种 方法 广 泛用 于 ＨＡ Ｃ Ｃ Ｐ系 统 ，
因 此 ， 场 上 出 现 了 大 量 Ａ Ｐ检 测 仪 ． 全 自 动 仪 器 到 市 Ｔ 从 小 型 、 携 式 仪 器 都 有 。 本 课 题 旨 在 研 究 操 作 简 便 、 定 便 稳 性 好 、 复 性 佳 、 格 便 宜 的 Ａ Ｐ检 测 拭 子 ， 其 可 通 用 重 价 Ｔ 使 于 现 有 不 同 品 牌 的 Ａ Ｐ检 测 仪 。 Ｔ
ｌ Ａ Ｐ生 物 发 光 法 发 展 概 况 Ｔ
Ａ Ｐ生 物 发 光 法 检 测 Ａ Ｐ含 量 最 初 在 １ ４ Ｔ Ｔ ９ ９年 被 阐
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火 虫 荧 光 素 酶 的 催 化 作 用 下 ， 微 生 物 细 胞 内 释 放 出 的 Ａ Ｐ与 荧 光 素 反 应 产 生 荧 光 ， 光 强 度 与 Ａ Ｐ含 量 成 正 Ｔ 荧 Ｔ 比 ， Ａ Ｐ含 量 与 活 的 微 生 物 数 量 直 接 相 关 。 因此 ， 而 Ｔ 可 以 通 过 用 荧 光 分 光 光 度 计 测 定 生 物 荧 光 反 应 的 发 光 强 度