实验八 高效液相色谱柱效能的测定
高效液相色谱法的实验操作指南
高效液相色谱法的实验操作指南高效液相色谱法是一种广泛应用于各个领域的分析技术。
它通过将溶液在高压下通过固定好的柱子进行分离，可以快速、准确地测定样品中的成分。
本文将介绍高效液相色谱法的实验操作指南，包括仪器和试剂准备、样品制备、色谱条件设定等。
首先，进行高效液相色谱实验前，准备好所需的仪器和试剂是必不可少的。
一般情况下，实验使用的仪器包括高效液相色谱仪、进样器、柱温箱等。
在使用前需要进行仪器的检查和校准，确保各项参数正常。
此外，还需要准备好色谱柱、移液管、吸管、试剂瓶等实验所需的小工具。
对于试剂的选择，需要根据实验的目的和需要选择适当的溶剂和试剂浓度。
其次，样品的制备是高效液相色谱实验中的重要一步。
样品的制备需要根据实验的具体要求进行。
一般情况下，可将样品溶解于适当的溶剂中，并进行必要的稀释。
在样品制备过程中，需要注意样品的溶解度、稳定性以及是否需要进行预处理等因素。
在进行实验时，色谱条件的设定是至关重要的。
首先，选择合适的柱子和移液管进行分离，根据需要设定流速和柱温。
其次，根据实验目的和需要，选择适当的流动相。
流动相的选择基于试剂的性质、溶解度以及对样品成分的分离效果等因素。
在色谱条件的设定过程中，需要进行系统的优化，比如调整流动相组分和浓度、柱温等参数来提高分离效果。
在进行实验时，操作的细节也需要特别关注。
首先，在进行进样时，需要控制好样品的体积和进样速度，以免影响实验结果。
另外，在进行分离时，需要注意观察波峰的形态和峰面积，以判断分离效果的好坏。
最后，在实验结束后，需要及时清洗仪器和柱子，并妥善保存。
高效液相色谱法的实验操作指南不仅涵盖了仪器和试剂的准备，还包括了样品制备和色谱条件设定等方面的内容。
在进行实验时，需要注意细节，并进行适当的优化和调整，以保证实验结果的准确性和可靠性。
通过遵循实验操作指南，我们可以更好地掌握高效液相色谱法的实验技巧，为科研工作提供有力的支持。
希望本文的介绍能够对读者有所帮助，促进高效液相色谱法的应用和发展。
高效液相色谱分析实验
高效液相色谱分析实验高效液相色谱(HPLC)是一种用于分离、检测和定量分析化学样品的分析技术，具有高分辨率、高灵敏度和高选择性。
在实验室中，HPLC广泛应用于药物分析、环境监测、食品安全等领域。
本文将介绍HPLC的实验原理、步骤及关键技术。
一、实验原理HPLC的原理是将混合物通过高压注射，经过固定相柱进行分离。
在HPLC中，固定相柱是最重要的组成部分之一，它可以根据样品之间的化学性质选择不同的固定相柱，如反相柱、离子交换柱、手性柱等。
在HPLC实验中，样品可以通过两种方式进样，一种是自动进样器，另一种是手动进样。
进样器将样品注入进样站点后，通过高压泵将样品推入柱子中，样品在柱子中分离后，被通过光学检测器检测，进而得到分离的结果。
二、实验步骤1.样品准备：根据实验要求，准备需要进行分析的物质样品，将其溶解或稀释到适当的浓度。
2.选择柱子：根据样品的性质选择适当的固定相柱。
例如，如果样品是极性的，则选择反相柱。
3.设定实验条件：根据样品的特征和实验需求，设置高压泵的流速、检测器、柱温等参数。
4.样品进样：将样品使用自动进样器或手动进样器进行进样。
5.柱子分离：开启高压泵，将样品推入柱子中。
样品将在柱子中根据化学性质进行分离。
6.数据检测和记录：通过光学检测器检测样品的峰值，并记录分离结果。
可以使用计算机软件进行数据分析。
7.清洗和重用：实验完成后，需要对HPLC仪器进行清洗和重置，以便下次使用。
三、关键技术1.换柱：为了保证实验结果的准确性和可靠性，柱子需要定期更换。
柱子的寿命取决于样品的特性和使用情况。
2.校准标准品：在实验中使用标准品校准HPLC仪器，以确保仪器的准确性和灵敏度。
3.优化实验条件：通过改变流速、温度、柱子等实验条件，可以优化分离效果。
4.检测器选择：根据样品的性质选择合适的检测器，例如紫外检测器、荧光检测器等。
5.数据分析：使用HPLC软件对数据进行分析，生成和保存分析报告。
四、实验安全1.注意个人防护：在操作HPLC仪器时，应佩戴安全防护眼镜和手套，避免接触有害物质。
液相色谱柱柱效的提高和测算
液相⾊谱柱柱效的提⾼和测算液相⾊谱柱柱效的提⾼和测算叶农摘要本⽂通过对如何提⾼液相⾊谱柱柱效的阐述,介绍了⼏种国际上流⾏的测量和计算柱效值的⽅法。
关键词液相⾊谱柱谱峰扩宽柱效值理论塔板数⼀、提⾼液相⾊谱柱柱效的⽅法我们知道⾊谱峰的扩宽与移动相在热⼒学的分配过程、移动相和固定相中传质阻⼒所引起的不平衡有关,谱峰扩宽(⾮平衡)的程度是流速对传质速率的直接函数。
要提⾼液相⾊谱的效率可从以下⼏⽅⾯⼊⼿。
(1)降低移动相的流速,但会使分析时间延长。
(2)减少固定相的量,但⾊谱柱中样品的负载量也随之减⼩。
(3)减⼩固定相的颗粒度,但不能过分,过分后⾊谱柱的渗透率也会减⼩。
(4)选⽤低粘度的移动相,以利于快速传质,但却不利于多组份分析。
(5)适当提⾼柱温,可降低移动相的粘度,但柱效和分离度也随之降低。
(6)尽量减⼩停滞移动相的体积,但却加快了移动相的流速。
从以上介绍可看出,在⾊谱分析过程中,各种因素是互相联系和制约的。
只有通过对柱效值的跟踪测算,对⾃⼰分析⽅法不断的研究和实践,才能找到最佳的⼯作条件。
⼆、对柱效值进⾏跟踪测算应注意的问题我们也应记住柱效值即塔板数只表⽰该⾊谱柱装填的好坏,只⽤柱效值并不⾜以预测在所有条件下的柱性能,因为在这些条件下,柱性能主要表⽰动⼒学过程对⾊谱柱谱带加宽的量。
其他⼀些影响峰宽的因素,如柱外效应和热⼒学因素(通常表现为峰拖尾),在理想情况下对于确定柱效值并不起重要作⽤。
因为任何⼀个柱性能的定义都必然与⽤此⾊谱柱所做的分离相联系,所以依据⼀个单独的数字来评定柱性能是不切实际的。
对⼤多数⾊谱⼯作者来说,柱性能指的是⾊谱柱⽤于特定分离的能⼒,⽽仅仅有⾼柱效并不能保证这种分离能⼒。
不管⽤什么特定的测试⽅法,都会有⼏个参数影响柱效的测定。
这些参数包括:洗脱液的成分和粘度及其线流速,测定塔板数所⽤的溶质,温度,柱长,填料装填⽅式,颗粒度,还有所选⽤的测量和计算⽅法。
尽管⼤多数柱效测算没有设法消除液相⾊谱仪器系统各部件对表观峰宽的影响,但只要仪器是正常使⽤的,这些影响是次要的。
高效液相色谱法实验报告
高效液相色谱法实验报告高效液相色谱法实验报告导言：高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）是一种重要的分析技术，广泛应用于化学、生物、医药等领域。
本实验旨在通过HPLC技术对某种药物样品进行分析，并探讨其应用的可行性和优势。
实验方法：1. 仪器设备：HPLC仪、色谱柱、样品溶液、流动相、检测器等。
2. 实验步骤：a. 样品制备：将药物样品粉末溶解于适当的溶剂中，制备成一定浓度的样品溶液。
b. 色谱柱准备：根据样品特性选择合适的色谱柱，并进行柱平衡处理。
c. 流动相制备：根据样品特性选择合适的流动相组成，并进行气泡排除和气体除湿处理。
d. 参数设置：根据样品特性和实验要求，设置适当的流速、温度、检测波长等参数。
e. 样品注射：使用自动进样器或手动注射器将样品溶液注入色谱柱。
f. 数据采集：通过检测器采集样品在色谱柱中的峰值信号，并记录相关数据。
g. 数据处理：利用计算机软件对采集的数据进行峰面积计算、峰高度计算等处理。
实验结果：通过HPLC技术对药物样品进行分析，得到了以下结果：1. 样品在色谱柱中产生了明确的峰值信号，峰形对称且峰高度适中。
2. 根据峰面积计算，得到了样品的浓度为X mg/mL。
3. 通过与标准品的比对，确认了样品的成分和含量。
讨论：1. HPLC技术在药物分析中的应用优势：a. 高灵敏度：HPLC技术能够检测到极低浓度的物质，对于药物分析中微量成分的检测非常重要。
b. 高选择性：通过调整流动相的组成和色谱柱的特性，可以实现对复杂样品中不同成分的分离和检测。
c. 高分辨率：HPLC技术能够有效地分离样品中的各个成分，提供准确的分析结果。
d. 自动化程度高：HPLC仪器配备了自动进样器和数据采集系统，能够实现实验过程的自动化操作和数据处理，提高了实验效率和准确性。
2. 实验中可能存在的误差和改进方法：a. 样品制备过程中的误差：药物样品的溶解度、稳定性等因素可能会对实验结果产生影响。
高效液相色谱实验报告
高效液相色谱实验报告引言：高效液相色谱(HPLC)是一种基于溶液动力学的分析方法，广泛应用于药学、化学、生物学等领域。
本实验旨在通过HPLC技术，分离和鉴定复杂混合物中的化合物，并探究其分离机制。
实验方法：1. 样品制备：取一定比例的复杂混合物样品，将其溶解于合适的溶剂中，得到均匀的样品溶液。
2. 色谱柱选择：根据样品性质和分离目标，选择合适的色谱柱和填料。
3. 流动相选择：根据样品溶解度和分离效果，选择合适的流动相组成和pH值。
4. 色谱条件设置：设置适当的进样量、流速和温度等参数，优化分析条件。
5. 样品进样：通过自动进样器将样品溶液注入色谱柱。
6. 梯度洗脱：通过调节流动相组成或浓度梯度，实现目标化合物的分离。
7. 检测器选择：根据样品性质和目标化合物的特征，选择合适的检测器。
8. 数据分析：利用色谱软件分析检测到的信号，得到峰面积和保留时间等参数。
实验结果：本实验以植物提取物为样品，以色谱柱A为分离柱，以甲醇-水（70:30）为流动相，在室温下进行HPLC分析。
优化的分析条件为：进样量为10 μL、流速为1 mL/min、检测波长为254 nm。
在色谱图中，观察到多个峰出现，对比标准品峰的保留时间和UV-Vis吸收谱与该峰相似度，结合质谱分析，成功鉴定了4种化合物：峰1为黄酮类化合物，峰2为苯丙素类化合物，峰3为生物碱类化合物，峰4为酚类化合物。
讨论：通过本实验，我们可以看到HPLC技术的优势和应用价值。
首先，HPLC可以对复杂混合物进行高效、准确的分离和定量分析，为后续鉴定提供了重要数据。
其次，HPLC操作简便，结果可靠，且可适用于不同种类的样品。
此外，优化实验条件对提高分析效果至关重要，需要通过不断试验和调整，找到最佳条件。
然而，HPLC仍存在一些局限性。
首先，HPLC分析所需的仪器设备和耗材相对昂贵，需要较高的投资成本。
其次，样品制备和前处理过程可能引入误差，影响分析结果的准确性。
高效液相色谱柱效能的测定
1.检测器：紫外光度检测器，测试波长254nm 2.流动相：甲醇：水(83：17)，流量0.8 ml/min 3.色谱柱：长250mm，内径4.6mm，装填C-18烷基键合
相(粒度5μm) 4.进样量：20 μL
五、实验步骤：
1. 根据实验条件，将仪器调至可进样状态，待基线平 稳后，即可进样。 2. 吸取标准使用液（含甲苯、萘、联苯各10ug/ml的 正己烷溶液）20μL，注入高效液相色谱仪。 3. 记录下色谱图。 4. 从色谱图中测得甲苯、萘、联苯的保留时间tR，半 峰宽Y1/2，计算对应的理论塔板数n及分离度R。
敏度10-11g。
二、 高效液相色谱法主要类型及分离原理
根据分离原理，高效液相色谱法分为： 液-液色谱及化学键合相法 液-固色谱法 离子对色谱法 离子交换色谱法 空间排阻色谱法
反相键合相色谱法
固定相：极性较小的键合固定相，如硅胶一C18H37、 硅胶一苯基等；
流动相：极性较强的溶剂，如甲醇、乙睛、水和无机 盐的缓冲溶液等。
高效液相色谱图：
数据处理：
甲苯
萘
tR /min
Y1/2 /min
n/
块·m-1
R
n 5.54( tR )2
Y1/ 2
R
tR2 tR1
2 2.35
(Y1/ 2(1)
Y1/
2(2)
)
联苯
天美LC2130 HPLC操作规程
一、开机准备 1.实验室温度应保持在25～30℃之间，湿度小于65%。 2. 根据实验要求，选择合适的色谱柱并安装，准备相
标，混合物能否在色谱柱中得到分离，除取决于选择 合适的固定相外，还与色谱操作条件及色谱柱的装填 状况等因素有关。
高效液相色谱实验
高效液相色谱实验The document was prepared on January 2, 2021高效液相色谱实验I. 色谱柱的评价请在实验前预习基础分析化学实验第二版137－140页.目的(1)了解高效液相色谱仪的工作原理；(2)学习评价液相色谱反相柱的方法.原理高效液相色谱是色谱法的一个重要分支.它采用高压输液泵和小颗粒的填料,与经典的液相色谱相比,具有很高的柱效和分离能力.色谱柱是色谱仪的心脏,也是需要经常更换和选用的部件,因此,评价色谱柱是十分重要的.而且对色谱柱的评价也可以检查整个色谱仪的工作状况是否正常.评价色谱柱的性能参数主要有：（1） 柱效理论塔板数n式中t r 为测试物的保留时间,W 1/2为色谱峰的半峰宽.（2） 容量因子k’式中t 0为死时间,通常用已知在色谱柱上不保留的物质的出峰时间作死时间.(3)相对保留值选择因子α式中k 1’和k 2’分别为相邻两峰的容量因子,而且规定峰1的保留时间小于峰2的.(4)分离度R s式中t r1、t r2分别为相邻两峰的保留时间,W b1、W b2分别为两峰的底宽.对于高斯峰来讲,W b =2.为达到好的分离,我们希望n 、α和R s 值尽可能大.一般的分离如α=,R s =,需n 达到2000.柱压一般为104 kPa 或更小一些.本实验采用多核芳烃作测试物,尿嘧啶为死时间标记物,评价反相色谱柱.仪器和试剂Waters 510高效液相色谱仪由Waters 510高压输液泵,Rheodyne 7725i 进样器,440检测器和记录仪组成色谱柱：5 cm × mm ., YWG-C 18H 37 ODS,10 μm流动相：甲醇－水80+20样品I ： 含尿嘧啶 mg ·mL －1、萘 mg ·mL －1、联苯 mg ·mL －1、菲 mg ·mL －1的甲醇混合溶液；样品I I ：尿嘧啶的甲醇溶液；萘的甲醇溶液；联苯的甲醇溶液；菲的甲醇溶液.溶液浓度约为·mL －1；实验内容（1） 准备流动相.将色谱纯甲醇和色谱纯水按比例配制200mL 溶液,混合均匀并经超声波脱气后加入到仪器储液瓶中.（2） 检查电路连接和液路连接正确以后,接通高压泵、检测器和记录仪的电源.设定操作条件为：流速 mL ·min －1,压力上限2′104 kPa 约3000 psi,检22/1r )/(54.5W t n =00r /)('t t t k -=12'/'αk k ＝)/()(2b2b1r1r2s W W t t R +-=测波长254 nm 该仪器检测波长已固定,灵敏度 AUFS,记录仪走纸速度 cm ·min －1,记录灵敏度为5 mV.开启记录仪走纸开关记录基线.并调节基线到合适位置一般为距右10%处.（3） 待基线平稳后建议观察检测器的读数显示,将进样阀手柄拨到“Load ”的位置,使用专用的液相色谱微量注射器取5μL 样品注入色谱仪进样口,然后将手柄拨到“Inject ”位置,同时按一下检测器的标记按钮,同时计时,记录色谱图.（4） 重复3的实验两次.（5） 用同样方法进纯样品的甲醇溶液,确定出峰顺序.（6） 根据三次实验所得结果计算色谱峰的保留时间、半峰宽,然后计算色谱柱参数n 、k’,以及相邻两峰的α、R s（7） 将流速降为0,待压力降为0后关机.思考题1. 高效液相色谱与气相色谱相比有什么相同点和不同点2. 如何保护色谱柱延长使用寿命高效液相色谱实验II固相萃取水样中的多核芳烃并以内标法测定其含量目的（1） 学习固相萃取法处理样品；（2） 用内标法定量.原理固相萃取法是色谱法的一个重要的应用.在此方法中,使一定体积的样品溶液通过装有固体吸附剂的小柱,样品中与吸附剂有强作用的组分被完全吸附；然后,用强洗脱溶剂将被吸附的组分洗脱出来,定容成小体积被测样品溶液.使用固相萃取法,可以使样品中的组分得到浓缩,同时可初步除去对感兴趣组分有干扰的成分,从而提高了分析的灵敏度.固相萃取不仅可用于色谱分析中的样品预处理,而且可用于红外光谱、质谱、核磁共振、紫外和原子吸收等各种分析方法的样品预处理.C18固相萃取小柱具有疏水作用,对非极性的组分有吸附作用,因此可以从水中将多核芳烃萃取出来,完成浓缩样品的作用.固相萃取小柱还有其他类型,如极性、离子交换等.内标法的原理是,设在V mL 样品中含有W i g 待测组分i,加入W S g 内标物S,混匀后进样,得组分i 及内标物S 的峰面积分别为A i 及A S .由于峰面积正比于通过检测器的物质量,所以有：W i =f i A iW S =f S A S式中f i 、f S 分别为组分i 和内标S 的校正因子.两式相除,得所以,组分i 的体积浓度为：S Si S i i W A A f f W ⋅⋅=V W A A f V W A A f f VW SS i i S S i S i i '⋅⋅=⋅⋅=fi’可用已知被测物i和内标物浓度的样品进样分析得到.内标法是一种相对测量方法,因此,进样量不必准确,操作条件稍有变化对结果没有什么影响.仪器和试剂Waters 510高效液相色谱仪由Waters 510高压输液泵,Rheodyne 7725i进样器和440检测器组成色谱柱：5 cm× mm ., YWG-C18H37ODS,10 μm流动相：甲醇－水80+20 流速： mL·min－1检测波长：254 nmC18固相萃取小柱：2支25 mL移液管：1支50 mL医用注射器：1支10 mL医用注射器：2支2 mL容量瓶：2个样品I：内标标准样,含萘 mg·mL－1、联苯 mg·mL－1、菲 mg·mL－1的甲醇溶液.样品II：内标物溶液.含联苯 mg·mL－1的甲醇溶液.样品III：含萘、菲的被测水样.实验内容（1）固相萃取小柱预处理：用10 mL注射器将2 mL甲醇压过小柱,再将2 mL 纯水压过小柱.（2）用移液管取25 mL水样,用50 mL注射器压过小柱,这时水样中的萘和菲被吸附在小柱上.在小柱下端承接一2 mL的容量瓶,将约 mL甲醇用10 mL 注射器压过小柱到容量瓶中,加入一定量内标联苯溶液,定容摇匀,得到浓缩的样品.（3）按“实验I”中的步骤,进样分析内标标准样和浓缩样品各三次.（4）取平均结果,计算峰面积A s和A i；根据内标标准样的浓度计算f i’,再计算出浓缩样品中的萘和菲的浓度,进而计算出原水样中的浓度mg·mL－1.思考题1.内标法与外标法各有哪些特点本实验为什么采用内标法为好2.为什么要对色谱分析中的样品进行预处理简单列出三个以上的原因.。
高效液相色谱(HPLC)柱效测定
实验六高效液相色谱(HPLC)柱效测定093858 张亚辉一. 实验目的1、学习高效液相色谱仪的基本操作方法。
2、了解高效液相色谱仪原理和条件设定方法。
3、了解高效液相色谱法在日常分析中的应用。
二. 实验原理高效液相色谱法是以液体作为流动相，借助于高压输液泵获得相对较高流速的液流以提高分离速度、并采用颗粒极细的高效固定相制成的色谱柱进行分离和分析的一种色谱方法。
在高效液相色谱中，若采用非极性固定相，如十八烷基键合相，极性流动相，即构成反相色谱分离系统。
反之，则称为正相色谱分离系统。
反相色谱系统所使用的流动相成本较低，应用也更为广泛。
定量分析时，为便于准确测量，要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。
分离度（R）的计算公式为：R＝ 2[t(R2)-t(R1)] /1.7*(W1＋W2)式中 t(R2)为相邻两峰中后一峰的保留时间； t(R1)为相邻两峰中前一峰的保留时间； W1及W2为此相邻两峰的半峰宽。
除另外有规定外，分离度应大于1.5。
本实验对象为邻苯二甲酸酯，又称酞酸酯，缩写PAE，常被用作塑料增塑剂。
它被普遍应用于玩具、食品包装材料、医用血袋和胶管、乙烯地板和壁纸、清洁剂、润滑油、个人护理用品，如指甲油、头发喷雾剂、香皂和洗发液等数百种产品中。
但研究表明，邻苯二甲酸酯在人体和动物体内发挥着类似雌性激素的作用，是一类内分泌干扰物。
待测物性质见表1。
表1色谱柱测试条件如果要检测不同条件对谱图分离的影响，可按表1配制几种物质的混合溶液，在不同条件下进行HPLC分离检测。
三.仪器与试剂1、仪器Agilent 1100高效液相色谱仪，50ul微量注射器。
2、试剂甲醇（色谱专用），高纯水四. 实验步骤1、色谱条件色谱柱：辛烷基硅烷键合硅胶（C8）柱温：室温流动相：初始为高纯水：20％，甲醇：80％检测器：DAD检测器;检测波长：220nm；进样体积：20µl定量环，实际注射每次可控制在40µl。
实验-高效液相色谱柱效能的测定
实验:高效液相色谱柱效能的测定一、实验目的1.了解高效液相色谱仪基本结构和工作原理2.学习高效液相色谱柱效能的测定方法二、实验原理高效液相色谱是色谱法的一个重要分支。
与气相色谱相比较，高效液相色谱同样具有高灵敏、高效能和高速度的特点，但它的应用范围更广泛。
据估计在自然界数百万有机化合物中，仅有20%可以不经过化学预处理，直接采用气相色谱分析，而对于总数的75-80%，则可采用高效液相色谱进行分离分析。
特别是许多高沸点、难挥发、热稳定性差的物质，如生物化学制剂、金属有机配合物等物质的分离分析，需要借助于高效液相色谱方法。
液相色谱柱是整个高效液相色谱分离系统的核心。
气相色谱中评价色谱柱柱效的方法及计算理论塔板数的公式，同样适用于高效液相色谱：n = 5.54 (t R/Y1/2)2R s=2(t R2-t R1)/(Y1+Y2)式中：n—理论塔板数，t R—保留时间Y1/2—半峰宽三、仪器和试剂Agilent-1100高效液相色谱仪（由高压输液泵，高压六通进样阀和UV-Vis检测器组成，）超声波发生器色谱柱：15cm⨯4.6mm I.D.，ODS，5μm流动相：甲醇-水（3+1）样品1：内标标准样。
由下列三种溶液等体积混合：尿嘧啶的甲醇溶液（0.12mg•mL-1），苯的甲醇溶液（0.7mg•mL-1），萘、联苯、菲的甲醇溶液（0.1mg•mL-1、0.1mg•mL-1和0.06mg•mL-1）。
样品2：混合试样：一定量的尿嘧啶、苯、萘、菲溶于甲醇，其中加入内标物联苯（浓度为0.1mg•mL-1）。
、四、实验内容1.准备流动相。
用液相色谱级无水甲醇和二次去离子重蒸水配制流动相1000mL，混合均匀后经0.45μm膜过滤，再用超声波脱气10min。
2.检查色谱各部件的连接是否正确，液路有无泄露。
如一切正常，则可将准备好的流动相加到仪器储液瓶中，并将检测器后面的液路出口置于废液瓶中。
3.接通高压泵和检测器的电源，排除掉液路中的所有气泡。
高效液相色谱柱效的测定
实验一 高效液相色谱柱效的测定目的要求：（1） 学习高效也向色谱柱效的测定方法（2） 了解高效液相色谱仪器基本结构和工作原理，初步掌握其操作技能基本原理：n=5.54(R 12t Y )2=16(R t Y )2 一、仪器1、 ThermoFinnigan 高效液相色谱仪，配有P2000二元泵、SCM1000真空脱气机、UV6000紫外检测器2、 高压六通进样阀3、 微量进样器 25μL4、 超声波清洗器二、试剂1、 苯、萘、甲醇和正乙烷等均为分析纯2、 由Millipore 超纯水发生器制得18.2m Ω 超纯水3、 标准溶液配制（1） 标准储备液：配制含苯、萘各1000μg/mL 的正乙烷溶液，混匀备用。
（2） 标准使用液：用上述储备液配制含苯、萘各10μg/mL 正乙烷溶液，混匀备用三、实验条件1、 色谱柱：4.6⨯250 mm C 18 柱，键合相粒度为5 μm2、 流动相：甲醇：水＝4:1；流速：0.5 mL/min 、1mL/min3、 柱温：室温4、 紫外检测器：检测波长254 nm5、 进样量： 5μL四、实验步骤1、 添加流动相2、 根据实验条件，按照仪器的操作步骤调节至进样状态（流速0.5 mL/min ），待仪器液路和电路系统达到平衡，基线平直时即可进样。
3、 吸取5μL 标准使用液进样记录色谱图，重复进样2次4、 将流动相流速改为1mL/min ，稳定后吸取5μL 标准使用液进样记录色谱图，重复进样2次五、数据及处理1、记录实验条件（1） 色谱柱与固定相（2） 流动相及其流量（3） 柱温（4） 进样量2、测量各色谱图中苯、萘的保留时间t R 及相应色谱峰的半峰宽Y 1/2，计算各理论塔板数n思考题1、由本实验计算得到的各组分理论塔板数说明什么？2、高效液相色谱采用5~10 m粒度的固定相有什么优缺点，同时它又给实验带来什么问题，如何克服？3、紫外检测器是否适用于所有的有机化合物，为什么？若实验获得的色谱峰太小，你应该如何改善实验条件？。
实验一 高效液相色谱柱效能的评价
高效液相色谱柱效能的评定1. 实验目的和要求1.1了解高效液相色谱仪的基本结构。
1.2初步掌握高效液相色谱仪的基本操作方法。
1.3学习高效液相色谱柱效能的评定及分离度的测定方法。
2. 实验原理苯、萘、联苯分子非极性部分的总表面积不同，缔合能力不同，其保留时间也不同。
通过计算色谱峰的理论塔板数以及各个化学物质间的分离度评价色谱柱的效能。
3. 实验仪器与试剂3.1 仪器高效液相色谱仪（带自动进样器，或配置微量进样器）分析天平3.2 试剂苯、萘、联苯（均为分析纯）甲醇（色谱纯）纯净水4. 实验步骤4.1 色谱条件色谱柱：C18，4.6×150mm，5μm流动相：甲醇-水（80：20，v/v）流速：1mL·min-1检测波长：254nm柱温：30℃进样量：10μL4.2 操作步骤分别精密配制含苯、萘、联苯浓度均为约1mg·mL-1的3份对照品溶液各10mL。
● 分别精密吸取上述对照品溶液各2mL 置于10mL 容量瓶中，加流动相稀释，并定容至刻度，摇匀，得到含苯、萘、联苯的混合对照品溶液。
● 按照上述色谱条件操作，进样，记录色谱图。
● 计算各色谱峰的理论塔板数及各峰间分离度。
4.3 实验数据处理● 记录实验条件，测试各试样后记录苯、萘、联苯的保留时间、峰宽、半峰宽，计算出各物质对应的理论塔板数。
根据保留时间与峰宽信息，计算相邻物质对间的分离度。
● 柱效计算式中：t R 为峰值保留时间（min ），W 1/2为半峰宽（min ），W 为峰宽（min ）●式中：t R1和t R2分别为相邻两组分的峰值保留时间（min ）W 1和W 2分别为相邻两组分色谱峰的峰宽（min ）5. 问题与讨论2212)(54.5)(16W t W t n R R ==5.1 如何用实验方法判别色谱图上苯、萘、联苯的色谱峰归属？5.2 如何改变色谱条件，可以减小苯、萘、联苯的保留时间？5.3若实验中的色谱峰无法完全分离，应如何改变实验条件以获得改善？。
实验八 高效液相色谱柱效能的测定
实验八 高效液相色谱柱效能的测定一、目的要求（1）学习高效液相色谱柱效能的的测定方法；（2）了解高效液相色谱仪基本结构和工作原理，初步学习操作方法。
二、实验原理对色谱体系，色谱柱的柱效能，可以定量地用理论塔板数N 来表示：222/1)(16)(54.5Yt Y t N R R == 速率理论及范弟姆特方程式对于研究影响HPLC 柱效的各种因素，同样具有指导意义：Cu uBA H ++= 由于组分在液体中的扩散系数很小，纵向扩散项（uB）对色谱峰扩展的影响可以忽略，而传质阻力项Cu 则成为影响柱效的主要因素。
因此，提高柱内填料装的均匀性和减小粒度，以加快传质速率，可以提高柱效能。
除上述因素以外，还应考虑一些柱外展宽的因素，其中包括进样器的死体积和进样技术等所引起的柱前展宽，以及由柱后联结管、检测器流通池体积所引起的柱后展宽。
三、仪器与试剂1.仪器 岛津LC-10A ( Shimadzu, Japan)高效液相色谱仪，SPD-10A 紫外可见波长检测器和SCL-10ASP 色谱数据处理器(日本岛津公司)。
超声波清洗器2.试剂 甲苯、萘、联苯、甲醇（色谱醇）、正已烷 （A.R ）. 标准溶液配制（1）甲苯标准储备液(1.0000 g ⋅L -1) 准确称取0.0100ｇ甲苯,在10mL 容量瓶中用正己烷定容。
（2）萘标准储备液(1.0000 g ⋅L -1) 准确称取0.0100ｇ萘，溶于正己烷中，在10mL 容量瓶中用正己烷定容。
（3）联苯标准储备液(1.0000 g ⋅L -1) 准确称取0.0100ｇ联苯，溶于正己烷中，在10mL 容量瓶中用正己烷定容。
（4）甲苯标准使用液，吸取上述甲苯标准储备液0.3 mL 、0.6 mL 、0.9 mL 、1.2 mL 、1.5 mL ，于10mL 容量瓶中用正己烷定容。
（5）萘标准使用液，吸取上述萘标准储备液0.3 mL 、0.6 mL 、0.9 mL 、1.2 mL 、1.5 mL ，于10mL 容量瓶中用正己烷定容。
分析实验报告高效液相色谱
分析实验报告高效液相色谱引言：高效液相色谱（High performance liquid chromatography, HPLC）是一种广泛应用于生物化学、药物分析、环境检测等领域中的分析技术。
其原理是利用固定相和液相之间的相互作用进行化合物的分离与定量分析。
本实验旨在通过操作高效液相色谱仪，掌握HPLC的基本原理、操作方法和数据处理技巧。
实验方法：实验所使用的仪器为Agilent 1260 Infinity II高效液相色谱仪，柱为C18柱，以甲醇-水为流动相进行分离。
首先，使用样品溶液（如药物或化合物混合物）进行系统性能调试，包括柱温、流速、梯度洗脱程序等参数的优化。
根据实验要求，确定分离柱和流量。
然后，按照仪器操作手册的指导，进行初始条件设置、进样及洗脱等步骤。
最后，通过检测器检测到的信号，确定各组分的峰面积或峰高，以定量分析目标化合物的含量。
实验结果及分析：在实验中，我们以对硝基苯酚为目标化合物，进行了HPLC分离与定量。
首先，通过系统性能调试，确定了优化的柱温、流速和梯度洗脱程序等参数。
然后，按照仪器操作手册的指导，进行了初始条件设置、进样及洗脱等步骤。
最后，通过检测器检测到的信号，确定了各组分的峰面积。
在HPLC色谱图中，我们观察到了目标化合物对硝基苯酚的峰。
通过计算该峰面积，并与一系列标准溶液峰面积进行比较，可以确定目标化合物的含量。
分析实验结果，我们发现目标化合物对硝基苯酚在该条件下呈良好的分离，并且峰形较好。
根据峰面积的大小，可以定量分析目标化合物的含量。
而对于其他组分的峰，也可以据此进行进一步的鉴别和分析。
讨论：在本实验中，我们成功地运用了高效液相色谱进行化合物的分离和定量分析。
HPLC作为一种高效、灵敏的分析方法，广泛应用于生物化学、药物分析等领域。
然而，在实际应用中，仍存在一些问题需要解决。
例如，在一些情况下，可能会出现柱堵塞、峰形畸变等问题，影响分离效果和数据准确性。
16高效液相色谱柱柱效测定
高效液相色谱柱柱效测定一、实验目的1．了解高效液相色谱仪的基本结构和工作原理2．学习高效液相色谱仪的使用3．学习、掌握液相色谱柱柱效测定方法二、基本原理高效液相色谱法是以液体作为流动相的一种色谱分析法，它亦是根据不同组分在流动相和固定相之间的分配系数的差异来对混合物进行分离的。
气相色谱中评价色谱柱柱效的方法及计算理论塔板数的公式同样适合于高效液相色谱，即：式中：t R为组分的保留时间Y1/2为色谱峰的半峰宽度Y为色谱峰的峰底宽度三、仪器和试剂1．仪器1：KLC321型高效液相色谱仪（紫外检测器）2．仪器2：Agilent 1200 高效液相色谱仪（紫外检测器）3．50μl微量进样器4．试剂：苯、萘、联苯、甲醇均为分析纯；纯水为重蒸的去离子水。
配制成含苯、萘、联苯各30μl/ml 的甲醇溶液。
四、实验条件1．色谱柱1 长15cm，内径 4.6mm，装填10mm的C-18烷基键合固定相2．色谱柱2.. 长15cm，内径 4.6mm，装填5mm的C-18烷基键合固定相3．流动相甲醇:水（85:15），流量0.8ml/min4．紫外光度检测器波长254nm，灵敏度0.085．进样量 5μl五、实验步骤1．根据实验条件和实验录像指导，按KLC321仪器操作步骤将仪器调节至进样状态，待仪器流路及电路系统达到平衡，色谱工作站之“采样系统”基线平直时，即可进样。
2．吸取5μl苯、萘、联苯的甲醇溶液进样，并用色谱工作站记录色谱数据，同时记录色谱数据文件名。
3．用色谱工作站之“数据处理”系统处理数据文件并记录所需数据。
4. 在Agilent 1200仪器上测定色谱柱2的塔板数，打印色谱图并比较色谱柱柱效差异。
六、数据记录及处理1．记录实验条件。
（1）色谱柱与固定相（2）流动相及其流量、柱前压（3）检测器及其灵敏度（4）进样量2．记录色谱峰的保留时间t R和相应色谱峰的半峰宽Y1/2。
3．分别计算苯、萘、联苯在该色谱柱上的理论塔板数n和理论塔板高度。
高效液相色谱实验报告
高效液相色谱实验报告
实验目的：
通过高效液相色谱仪分离和测定混合物中的化合物。
实验原理：
高效液相色谱（HPLC）是一种利用高压将样品中的化合物推
动通过填充在柱中的固相材料的分离技术。
在HPLC中，样
品溶液通过溶剂泵被推入柱中，然后溶剂流经柱床，在样品中的化合物与柱床中的固体相互作用，导致化合物被分离。
随后，溶剂中的化合物传送到检测器中进行检测。
实验步骤：
1. 准备样品溶液：将待测混合物溶解在适当的溶剂中。
2. 准备色谱柱：安装和预平衡色谱柱，选择适当的柱材、填料和流动相。
3. 设置色谱仪参数：设置流动相的流速、温度和检测器等参数。
4. 注入样品：使用自动进样器或手动注射器，将样品溶液注入进样器中，并注入色谱柱。
5. 进行分离：根据样品的特性和需要，使用适当的温度和梯度程序，进行分离。
6. 检测：将溶剂与样品中的化合物一起传送到检测器中，并记录峰高、峰宽和保留时间等数据。
7. 数据分析：通过对峰的分析，确定混合物中各成分的相对含量。
8. 清洗和保养设备：完成实验后，清洗和保养色谱柱和色谱仪
设备。
实验结果：
根据分离得到的色谱图，通过分析峰的保留时间和峰面积，确定混合物中各成分的相对含量。
实验结论：
高效液相色谱是一种有效的分离方法，能够对混合物中的化合物进行准确的分离和测定。
根据实验结果，我们可以得到混合物中各组分的含量信息，并进一步进行结构解析和质量控制等工作。
液相色谱柱测试流程
液相色谱柱测试流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!液相色谱柱测试流程如下：1. 准备工作。
检查液相色谱仪是否正常运行，包括泵、检测器、进样器等部件。
高效液相色谱仪的性能检查和色谱参数测定
K2 k2 K1 k1
分离度： R 2(tR2 tR1 ) 1.177(tR2 tR1 )
W1 W2
W W 1(1/2)
2(1/2)
上述各式中为保留时间，W（1/2）为半峰宽，L为柱长，tR′为调整保留时 间，t0为死时间，K为分配系数，Vs为柱内固定相体积，Vm为柱内流动相体积，W为峰宽。
第1章 绪 论
课程的性质和所研究的对象及课程任务 无线电通信发展概述 无线电通信系统 无线电波的工作波段和传输方式 无线电发送设备的组成 无线电接收设备的组成 本课程的主要内容及特点
“高频电子线路”是通信工程、电子信息
工程等电子信息类专业重要的专业基础课程 ，
有很强的理论性、工程性和实践性，在电子
实验一 高效液相色谱仪的性能检查和色谱参数测定
【实验目的】
1. 掌握柱效的测定原理和方法。 2. 掌握高效液相色谱仪的使用方法。 3. 熟悉高效液相色谱仪性能检查和色谱参数测定的方法。
【实验原理】
高效液相色谱仪的主要性能指标包括： （1） 流量精度：色谱仪流量的重复性，用多次测定的流量值的相对标准偏差表示。 （2） 噪声：由于仪器本身和工作条件等的偶然因素引起的基线起伏称为噪声。噪声的大小用基线 波动的最大带宽来衡量，通常以毫伏或安培为单位。 （3） 漂移：基线在单位时间内单方向缓慢变化的幅度。单位为mV/h。 （4） 定性重复性：在同一实验条件下，组分保留时间的重复性。通常以被分离组分的保留时间之 差（a）的相对标准偏差来表示，RSD≤1%认为合格。 （5） 定量重复性：在同一实验条件下，被测组分峰面积的重复性。通常用峰面积的相对标准偏差 表示。 （6） 定量重复性：在同一实验条件下，色谱峰面积（或峰高）的重复性。通常以被分离组分的峰 面积比的相对标准差来表示，RSD≤2%认为合格。
高效液相色谱法相关参数测定
R 2 R 1
(2)
1/2
波长设定键 流动相：MeOH-H2O（80∶20）
(AR)，甲醇（色谱纯），重蒸馏 设定流速及压力上/下限 试剂：苯（AR)，萘(AR)，苯磺酸钠 设定流速及压力上/下限 了解仪器的一般使用方法 设定流速及压力上/下限 流动相：MeOH-H2O（80∶20） 检测器：UV 254nm
6) 设定波长; 流动相：MeOH-H2O（80∶20）
tR(苯) tR(萘） △tR A苯 A萘 A苯/A萘 W1/2(苯)
W1/2(萘）
数据处理
➢H计Rαn＝ ===算52 Ln.公W KK(5t4式+ (-tW kkt )WW )1.177(t+W -t ) R 12 2 5高液了检容5检(了 了检7仪(检5试仪4流设设检1流液容设检 高设了(检(检 仪试5试49检 仪高了设熟液设(57试5试4高9检了检设流流水试9(水检熟 试4高检9流色 液设仪5设AAAAAA))))0))))))))))))将记将记记记效相解测量测解解测器测剂器动定定测)动相量定测效定解测测器剂剂测器效解定悉相定剂剂效测解测定动动等剂等测悉剂效测动谱相定器定RRRRRR设设设设设设设设设设分))))))进录进录录录液 色 仪 器 瓶 器 仪仪 器 ： 器 ： ： 相 流 流 器 相 色 瓶 流 器液 流 仪 器 器： 器： 液 仪 流 高 色 流 ： ： 液 器 仪 器 流 相 相 ： 器 高： 液 器 相 柱色 流 ： 流，，，，，，定定定 定定定定定定定析样数样数数数相谱器：等：器 器：高：苯高：速速：：谱等速： 相速器：： 高苯苯： 高相器速效谱速苯苯相：器：速：：苯：效 苯相：谱速高速甲甲甲甲甲甲分分分 压分压分分压压分结阀据阀据据据色仪的UU的 的U效U（效M及及UM仪及U色及的UU效（（U效色的及液仪及（（色U的U及MM（U液 （色UMO仪及效及醇醇醇醇醇醇析析析 力析力析析力力析束VVVDVVVVVVVVVV手与手与与与eeeee谱主一一 一液A液压压主压谱压一液AA液谱一压相主压AA谱一压A相 A谱主压液压（（（（（（流流流 上流上流流上上流O后OOOOS2222222222222RRRRRRR柄数柄数数数法要般般 般相相力力要力法力般相相法般力色要力法般力色 法要力相力色色色色色色HHHHH速速速 、速、速速、、速5555555555555柱停)))))))4444444444444，，，，，，，-----上据上据据据分性使使 使色色上上性上分上使色色分使上谱性上分使上谱 分性上色上谱谱谱谱谱谱及及及 下及下及及下下及HHHHHnnnnnnnnnnnnn(泵1mmmmmmmmmmmmm萘萘萘萘萘萘萘22222下处下处处处离能用用 用谱谱能离用谱谱离用仪能离用仪 离能谱/////////纯纯纯纯纯纯5压压压 限压限压压限限压下下下下下下下下下OOOOO，c(((((((扳理扳理理理过指方方 方仪仪指过方仪仪过方性指过方性 过指仪m（（（（（））））））AAAAAAA力力力 力力力力;;;;限限限限限限限限限将RRRRRRR×动动;;;;程标法法法，，标程法，，程法能标程法能程标，88888， ， ， ， ，上上上 上上上上进)))))))00000，，，，，，，4几几检检OOOOO∶∶∶∶∶重重重重重重下下下 下下下下.样DDDDD苯苯苯苯苯苯苯次次查查22222蒸蒸蒸蒸蒸蒸限限限 限限限限阀SSSSS00000磺磺磺磺磺磺磺，，及及色色色色色）））））馏馏馏馏馏馏；；； ；；；；手酸酸酸酸酸酸酸最最色色谱谱谱谱谱柄钠钠钠钠钠钠钠后后谱谱柱柱柱柱柱置21R 停停1 柱柱，，，，，L2 在在O参参AII数数NNDJJ测测位EER 21CC定定置1 2 TT的的；((采采方方样样法法))位位。。置置；；1/2(1)
高效液相色谱柱标准操作程序
高效液相色谱柱标准操作程序1目的规定高效液相色谱柱使用时的标准操作程序。
2适用范围适用于化验室所使用的高效液相色谱柱。
3职责3.1化验室负责制定本SOP。
3.2经过相应培训的检验员方可使用高效液相色谱柱。
4文件内容4.1购买(1) 化验室提出购买申请。
(2) 供应部负责购买。
4.2验收(1) 高效液相色谱柱购入后，保管员应检查其外观、标签是否完好无损，印刷是否清晰；测试报告中所提到的柱效是否符合需要，保存厂家色谱柱评价报告。
（2）对新购入色谱柱进行柱效测试，并填写《高效液相色谱柱柱效测试记录》。
(3) 在每根色谱柱进行唯一性编号（即柱子编号），分别标记在柱盒和柱子上，编号由7位阿拉伯数字和连字符“-”组成，首4位数字代表购买的年份，后三位数字代表流水号，年份和流水号之间用连字符“-”连接，例如2010-001代表2010年购买的第一根。
(4) 确认无误后，应填写《高效液相色谱柱台帐》上相关内容。
4.3 使用(1) 实验前，选择所要使用的色谱柱，填写《高效液相色谱柱使用记录》。
一般一个品种一个检验项目固定一根色谱柱。
实验前先将反相色谱柱用纯化水：有机相（甲醇或乙腈）为9：1冲洗20~30分钟后换上流动相；正相色谱柱用异丙醇冲洗20~30分钟，换上纯化水：有机相（甲醇或乙腈）为9：1冲洗20~30分钟后换上流动相。
(2) 实验开始前先进行系统适用性试验，确定色谱柱的峰形、重复性、理论板数、分离度、拖尾因子等参数是否符合实验要求。
如因色谱柱原因无法达到系统适用性试验要求，可更换合适色谱柱,。
更换的色谱柱必须要通过系统适用性试验要求才能用于实验。
原色谱柱需进行柱效测试，评估可用性，并填写《高效液相色谱柱柱效测试报告》。
4.4 实验结束后冲洗色谱系统。
(1) 反相色谱柱：如流动相含磷酸盐缓冲液，先用流速为1.0ml/min的纯化水冲洗色谱系统10分钟后再用流速为1.0ml/min的纯化水：有机相（甲醇或乙腈）为9：1冲洗60分钟后再用流速为1.0ml/min 的有机相（甲醇或乙腈）冲洗30分钟；如流动相不含磷酸盐缓冲液，色谱系统先用流速为1.0ml/min 的纯化水-有机相（甲醇或乙腈）为9：1冲洗60分钟后再用流速为1.0ml/min的有机相（甲醇或乙腈）冲洗30分钟。
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实验八 高效液相色谱柱效能的测定
一、目的要求
（1）学习高效液相色谱柱效能的的测定方法；
（2）了解高效液相色谱仪基本结构和工作原理，初步学习操作方法。
二、实验原理
对色谱体系，色谱柱的柱效能，可以定量地用理论塔板数N 来表示：
222/1)(16)(
54.5Y
t Y t N R R == 速率理论及范弟姆特方程式对于研究影响HPLC 柱效的各种因素，同样具有指导意义：
Cu u
B
A H ++
= 由于组分在液体中的扩散系数很小，纵向扩散项（
u
B
）对色谱峰扩展的影响可以忽略，而传质阻力项Cu 则成为影响柱效的主要因素。
因此，提高柱内填料装的均匀性和减小粒度，以加快传质速率，可以提高柱效能。
除上述因素以外，还应考虑一些柱外展宽的因素，其中包括进样器的死体积和进样技术等所引起的柱前展宽，以及由柱后联结管、检测器流通池体积所引起的柱后展宽。
三、仪器与试剂
1.仪器 岛津LC-10A ( Shimadzu, Japan)高效液相色谱仪，SPD-10A 紫外可见波长检测器和SCL-10ASP 色谱数据处理器(日本岛津公司)。
超声波清洗器
2.试剂 甲苯、萘、联苯、甲醇（色谱醇）、正已烷 （A.R ）. 标准溶液配制
（1）甲苯标准储备液(1.0000 g ⋅L -1) 准确称取0.0100ｇ甲苯,在10mL 容量瓶中用正己烷定容。
（2）萘标准储备液(1.0000 g ⋅L -1) 准确称取0.0100ｇ萘，溶于正己烷中，在10mL 容量瓶中用正己烷定容。
（3）联苯标准储备液(1.0000 g ⋅L -1) 准确称取0.0100ｇ联苯，溶于正己烷中，在10mL 容量瓶中用正己烷定容。
（4）甲苯标准使用液，吸取上述甲苯标准储备液0.3 mL 、0.6 mL 、0.9 mL 、1.2 mL 、1.5 mL ，于10mL 容量瓶中用正己烷定容。
（5）萘标准使用液，吸取上述萘标准储备液0.3 mL 、0.6 mL 、0.9 mL 、1.2 mL 、1.5 mL ，于10mL 容量瓶中用正己烷定容。
（6）联苯标准使用液，吸取上述联苯标准储备液0.3 mL 、0.6 mL 、0.9 mL 、1.2 mL 、
1.5 mL，于10mL容量瓶中用正己烷定容。
（7）配制未知浓度的甲苯、萘、联苯混合溶液。
四、实验步骤
1、色谱操作条件
（1）色谱柱C-18 250mm×4.6mm i.d；硅胶粒径5μm。
（2）流动相甲醇：水（95:5），流量0.5mL/min。
（3）紫外检测器测定波长λ=254nm
（4）进样量20μL
2、色谱测定
（1）将流动相于超声波清洗器上，脱气15min；
（2）按仪器操作步骤调节仪器至进样状态，待仪器液路和电路系统达到平衡，仪器基线噪音最小时，即可进样。
（3）吸取20μL标准使用液进样，记录色谱图，重复进样两次。
3、标准曲线的测标准工作曲线的测定定
（1）甲苯标准工作曲线的测定
五、数据处理
1、记录实验条件
（１）色谱柱
（２）流动相及流量
（３）检测器
（４）进样量
2、测量各色谱图中甲苯、萘、联苯等的保留时间t R及色谱峰的半峰宽Y1/2，计算各对应理论塔板数N。
3、根据标准工作曲线测定未知浓度的甲苯、萘、联苯的浓度
六、思考题：
（1）、由本实验计算所得的各组分理论塔板数说明什么？
（2）、紫外光度检测器是否使用于检测所有的有机化合物，为什么？
（3）、若实验获得的色谱峰无法完全分离，应如何改善实验条件？。