临床基因扩增检验培训班PCR污染与预防

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临床基因扩增检验技术人员上岗培训

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01
培训背景和目的
02
培训背景
临床基因扩增检验技术的快
速发展
检验技术人员能力不足的问
题
提高检验技术人员的专业水平和技术能力
保证临床基因扩增检验技术的质量和安全
性
培训目的
提高临床基因扩增检验技术人员的专业水平确保临床基因扩增检验结果的准确性和可靠性规范临床基因扩增检验技术人员的操作流程促进临床基因扩增检验技术的发展和应用
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临床基因扩增检验技术人员上岗培训
汇报人：XXX
汇报时间：20XX/01/01
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01.
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02.
培训背景和目的
03.
培训内容和方法
04.
培训师资和设施
05.
培训效果和评价
06.
培训证书和管理
培训效果和评价
05
培训效果
提高技术水平：通过培训，技术人员能够熟练掌握基因扩增检验技术，提高实验准确性和可靠性。
规范操作流程：培训使技术人员了解并掌握标准的操作流程，减少实验误差和操作失误。
增强安全意识：培训强调实验安全和防护措施，提高技术人员的安全意识和自我保护能力。
提升服务质量：培训有助于提高技术人员的综合素质和服务水平，为临床医生和患者提供更好的服务。
考核评估
理论考试：检验技术人员对理论知识的掌握程度实操考核：检验技术人员对实验操作的熟练程度综合评估：结合理论考试和实操考核，对检验技术人员的整体能力进行评估反馈与改进：根据评估结果，对检验技术人员进行反馈和指导，促进其技能提升

PCR实验室主要污染源与防污染措施

PCR实验室主要污染源与防污染措施1. PCR实验室主要污染源（1）临床样本中存在的⼤量待测微⽣物；（2）科研中得到的质粒克隆；（3）以前分析研究的特定微⽣物；（4）⼤量存在于实验环境中的特定微⽣物；（5）以前扩增产物的残留污染。

这也是PCR实验室最容易产⽣的将造成假阳性的污染。

PCR扩增可以引起实验室中扩增产物的积累，通常，⼀次典型的PCR扩增可以产⽣10^9拷贝的靶序列，如果⽓溶胶化，甚⾄最⼩的⽓溶胶都会含有10^6拷贝的扩增产物。

如果不加以控制，在短期内累积的⽓溶胶化的扩增产物即会污染实验室中的试剂、仪器设备和通风系统，从⽽造成严重的实验室污染，出现⼤量的假阳性结果。

⼀些RNA扩增技术如基于核酸序列的扩增（NASBA）、转录介导的扩增（TMA）和Qbeta复制酶等不易产⽣扩增产物的污染，这是由于它们的扩增产物为RNA，可以被环境中的RNA酶迅速地降解。

2. 防污染措施（1）严格分区实验室及严格遵守⼯作程序基因扩增实验室分为试剂准备区、样本准备区、PCR扩增区、产物分析区等，必需备有各⾃必需的仪器设、⼯作服、⼿套、加样器和通风系统。

在每个区使⽤的试剂和废物，必需直接在其各⾃的区域内分装或包装。

操作⼈员必需注意防⽌通过他们的头发、眼睛和⾐服将扩增产物从污染区携带⾄清洁区的可能性。

（2）化学清污实验台⾯可使⽤10%的次氯酸钠（漂⽩剂）清洗，然后再⽤70%⼄醇或清⽔洗去次氯酸钠。

次氯酸钠具有氧化损伤核酸的作⽤，从⽽使可能留在实验台⾯的扩增产物被破坏掉。

要注意的是，次氯酸钠不能区分提取的DNA和PCR扩增产物，⽤次氯酸钠处理的样本不能⽤于核酸扩增检测。

在实际⼯作中，有些物品⽐如放置扩增反应管的盘必需从污染区转回清洁区时，在转回之前，应将其置于2-10%的次氯酸钠溶液中过夜，并充分冲洗。

（3）扩增产物的修饰临床PCR检测通常由3或4个步骤组成：核酸提取和扩增检测试剂的配制。

使⽤商品试剂盒时，试剂的配制量可⼤⼤减少；样本的处理即靶核酸的提取；PCR扩增；扩增产物的分析。

医院核酸检测实验室(PCR)消毒规范

PCR 实验污染来源PCR 实验室空气流向管理与环境消毒PCR 实验，即临床基因扩增实验，是专门用来检验艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病的一种检测手段。

它可以通过将病毒体内所含的基因进行扩增的方法，测出一些病毒含量不高的感染者体内是否含有特定的病毒。

就新冠病毒核酸检测来说， RT-PCR 是目前使用最广泛和较准确的筛选和确认方法，大规模核酸检测，必然会引起相关机构单位着力建设规范的临床 PCR 实验室。

但是，建立一个 PCR 实验室，其实就是在建设一个平台，考验的不仅仅是一个医疗机构的实验能力，也考验着整个医疗机构的整体能力。

实验室的平面布局、空调通风系统设计、气流控制等都是环绕同一个核心问题进行——“避免污染”，任何级别的医院在建设 PCR 实验室时，均需要提前考量各个因素，以保证标本的全环节质量及实验室的生物安全。

PCR 实验室的建设需要设置标准的“四区”：试剂准备区、标本制备区、 PCR 扩增检测区和扩增产物检测区。

每一个独立实验区设置有缓冲区，各区通过气压调节，使整个 PCR 实验过程中试剂和标本免受气溶胶的污染，并降低扩增产物对人员和环境的污染。

PCR 实验室，需要经过从基础理论、实验原理、规范操作、质量保证到注意事项等规范的培训，并获取 PCR 上岗证。

的震荡、离心都有可能产生气溶胶，有感染的风险。

4、防护要求。

必须按照生物安全三级实验室的个人防护要求进行。

PCR 实验污染来源1、样本间交叉污染：采集样本的容器被污染或者样本密封不严导致外溢；不同样本移液时忘记更换枪尖或者未使用带滤芯枪尖；移液器等实验器具及耗材未及时消毒灭菌；不同样本同时开盖或者样本剧烈震荡、反复吹吸导致气溶胶形成扩散，相互交叉污染。

2、实验试剂污染：主要是在 PCR 组分试剂加样过程中，由于移液器、容器、阴性对照及其它试剂被核酸模板或者阳性对照污染。

加样过程中，因为 PCR 试剂对温度十分敏感，需要通过冰浴使得 PCR 试剂和PCR 板/管处于 02，但这个过程也充满污染风险。

基因扩增检验人员培训计划

基因扩增检验人员培训计划一、培训目标本培训计划的培训目标是培养能够独立使用基因扩增技术进行检验的人员，包括以下内容：1. 掌握基因扩增技术的基本原理和操作流程；2. 能够进行PCR反应的设计、优化和操作；3. 熟练掌握基因扩增实验中的一般操作技能；4. 能够对基因扩增实验结果进行分析和解读；5. 具备独立开展基因扩增实验的能力；6. 熟悉基因扩增技术在生物医学领域的应用。

二、培训内容1. 基因扩增技术的基本原理和操作流程（1）PCR技术的原理和流程（2）PCR反应的优化和设计（3）电泳实验的原理和操作2. 基因扩增实验中的一般操作技能（1）DNA提取和净化技术（2）PCR反应的组装和操作（3）PCR产物的电泳检测和分析（4）PCR产物的测序分析3. 基因扩增实验结果的分析和解读（1）PCR产物的检测和定量分析（2）PCR产物的测序结果分析（3）PCR实验结果的解读及报告编写4. 基因扩增技术在生物医学领域的应用（1）基因扩增技术在疾病检测中的应用（2）基因扩增技术在基因功能研究中的应用（3）基因扩增技术在新药开发中的应用三、培训形式和周期1. 培训形式本培训采用理论与实践相结合的培训形式。

在课堂教学中结合实验操作，让学员深入了解基因扩增技术的理论知识，并通过实际操作掌握基本操作技能。

课堂教学中设置案例分析、小组讨论等环节，提高学员的学习兴趣和培训效果。

2. 培训周期本培训计划为期3个月，其中包括2个月的理论学习和实验操作课程以及1个月的实习实践。

理论学习和实验操作课程占据大部分时间，实习实践主要是为了让学员在真实的实验环境中独立完成一定数量的基因扩增实验，提高实际操作能力和解决问题的能力。

四、培训师资本培训将邀请具有丰富基因扩增实验经验的专业人员来担任培训讲师，以保证培训内容的质量和培训效果。

五、培训评估和考核1. 培训评估培训结束后将对学员进行综合评估，包括理论知识的掌握情况、技能操作的熟练程度、实验结果的分析和解读能力等方面。

临床分子生物实验假阳性的预防对策程序

临床分子生物实验假阳性的预防对策程序一、目的：规范实验检测操作，严格按照各项实验的条件及操作要求进行，预防出现假阳性的结果。

二、适用范围：临床基因扩增检验实验室。

三、职责：由临床基因扩增检验实验室专业技术人员制定程序文件，实验室负责人审核，科室主任批准实施。

四、预防程序：1、对产物污染的预防在经常进行PCR检测的实验室要采用至少一种针对产物污染的方法：1）、尿苷酶(UNG)消解：（Pre-PCR decontamination）:扩增中以脱氧尿苷(dUTP)取代脱氧胸苷(dTTP)，此种含尿苷产物可被尿苷酶消解，再经加热或加碱处理，即在脱氧尿苷处断裂，不再能作为模板扩增。

在后续扩增之前在PCR反应体系中加入尿苷酶处理，可能的产物污染被消除。

2）、补骨脂素加合：PCR反应体系中加补骨脂素，扩增后以紫外线照射反应体系，补骨脂素加合到核酸上，加合了补骨脂素的DNA不能再作为模板，但仍能用于杂交。

3）、3´次黄苷引物：引物合成时在3´端引入黄苷，PCR之后加入氢氧化钠，热处理后，含引物的序列被破坏。

2、对于交叉污染、培养物及其它污染的预防应采用综合性防范措施1）、实验人员岗前培训及一年一度定期考核；2）、实验设备及试剂的规范化和标准化；3）、设严格的阴性对照；4）、器械专用；5）、消耗品一次性专用；6）、严格规范的操作程序。

3、出现污染现象后的处理措施1）、发现污染现象的标本必须重新检测，对由于产物污染所致的假阳性最好使用抗污染的检测方法；2）、查找污染源；3）、对于试剂有污染者，更换试剂；4）、环境被污染，清洁工作环境、仪器等。

PCR实验室的污染与对策

（五）体会
PCR检测过程中，防止污染是很重要的一项工作。只需几个DNA分子作模板就可大量扩增，应特别注意反应体系被痕量DNA模板污染，这是造成假阳性最大的可能。
通常我们对PCR实验室污染的预防是采取不同操作分区进行、分装试剂、改进实验操作等规则，对污染的处理是用稀盐酸擦拭或浸泡、紫外线照射等。而对于实验室的通风方面没有给予足够的重视，
PCR实验室的污染与对策
河北医科大学第三医院冯忠军
PCR技术是一种体外核酸扩增技术，模拟自然DNA复制过程，通过重复高温变性、低温退火、中温延伸等简单的3 个温度循环，将靶DNA扩增数百万倍，显示极高的敏感性。
30次循环后靶序列扩增的数量
1 cycle = 2 Amplicon
2 cycle = 4 Amplicon
将两种批号的HBV试剂拿到其他规范的PCR实验室检测，也显示试剂没有问题。
该实验室用消毒液擦拭工作台面后，打开所有的紫外灯照射一天，将所使用加样器、离心管、Tip头、手套、记号笔、记录本等都更换掉，再将标本进行检测，结果全部标本仍然为“阳性”。
第二天，仍然用消毒液擦拭工作台面后，再打开所有的紫外灯照射一天，将HBV 标本重新检测，同时设臵了两个阴性对照 (A和B)，
据计算，一个气溶胶颗粒可含48000拷贝，由其造成的污染是一个值得特别重视的问题.
三、PCR实验室污染的监测
一个好的实验室，要时刻注意污染的监测，考虑有无污染、什么原因造成的污染，以便采取措施，防止和消除污染.
PCR实验，不在于能否扩增出目的片段（阳性结果）来，而是在于是不是有重复性以及有没有设臵对照。
仅含扩增反应混合液的对照管的功能：
☻监测扩增试剂是否发生污染，具有较强的污染鉴别性。

pcr实验室学习培训计划

pcr实验室学习培训计划通过本次培训，学员将能够掌握PCR实验室的基本操作技能，了解PCR实验原理及其应用，并能够独立进行PCR实验操作。

二、培训内容：1. PCR实验原理：介绍PCR技术的原理和应用，包括DNA复制、扩增和检测。

2. PCR实验操作技能：讲解PCR实验室的基本操作技能，包括样品处理、试剂添加、反应管设置等。

3. 质控及数据分析：介绍PCR实验室的质控流程和数据分析方法，包括结果解读、数据处理及实验报告撰写。

4. 安全意识培训：讲解PCR实验室的安全操作规程和应急处理措施，确保实验操作安全。

5. 实践操作：进行PCR实验室的实践操作，包括DNA提取、PCR扩增、凝胶电泳分析等步骤。

三、培训计划：1. 培训时间：共计3天，每天8小时，共24小时的培训时间。

2. 培训安排：第一天：上午9:00-12:001） PCR原理和应用介绍2） PCR实验室操作流程讲解下午1:00-5:003）安全意识培训4）质控及数据分析训练第二天：上午9:00-12:001）实验室操作演示2）实验样品处理演示下午1:00-5:003） PCR实验实践操作（DNA提取）第三天：上午9:00-12:001） PCR扩增操作演示2）凝胶电泳分析训练下午1:00-5:003）实验操作把关4）实验报告撰写指导四、培训资料：1. 课件资料：提供PCR实验原理、实验操作技巧等相关课件资料。

2. 实验操作手册：提供PCR实验室的操作手册，包括实验步骤、质控要求等内容。

3. 示范视频：提供PCR操作操作的示范视频，帮助学员更直观地了解实验操作流程。

五、培训效果考核：1. 知识检测：进行PCR实验相关知识的考核，包括实验原理、实验操作流程、质控要求等。

2. 实验操作能力考核：对学员进行PCR实验室的实际操作考核，包括样品处理、试剂添加、反应管设置等。

3. 报告撰写考核：要求学员根据实验结果，撰写实验报告，对学员的数据处理和结果解读能力进行考核。

PCR实验室的清洁制度

PCR实验室的清洁制度一、目的：为有效避免污染出现，制定防污染的措施，预防污染的发生。

二、适用范围：主要用于防止实验室扩增前、后的产物造成的污染。

三、相关性文件：《临床基因扩增检验实验室工作规范》《全国临床检验操作规程》《安普利仪器使用说明书》福建省临床基因扩增检验实验室技术人员培训班《培训教材》一、具体操作：1、明确主要污染源：PCR片段污染；天然基因组DNA污染；试剂污染；以及交叉污染，其中唯有试剂污染与实验室环境无关，其他均与实验室环境有密切相关。

2、范围：要做好实验室的清洁，须从实验室布局、实验室人员、实验室清理等方面综合考虑。

3、实验室布局：1）、实验室的设置必须考虑空气的流向和人员行走的路线，PCR实验流程是单一方向的，不能反向行走，且进入下一个操作区应更换工作服和一次性手套。

2）各实验区的仪器设备要各区专用，不能公用，尤其是加样器。

4、实验室清理：1）实验前，使用移动紫外灯调至60-90cm内照射30分钟.如有需要可延长照射时间。

各实验区物品必须在使用前高温高压灭菌，不能受高温高压的用弱酸弱碱浸泡。

2）实验后，由相关人员分别在试剂准备区、标本处理区、扩增区用各区专用工具以10%次氯酸钠擦洗地面和工作台面及加样枪.每区均有专用拖把和抹布。

实验台面日常清洁时使用75%的酒精擦拭。

地板：第一遍由外往里拖，第二遍由里往外拖，用拖把浸泡10%次氯酸钠溶液后将各工作区域拖擦干净。

特殊处理：若某区域被明显污染如标本打翻、泼溅于表面，应立即用10%次氯酸钠溶液浸过污染物表面，消毒1小时后，再擦干净。

4）将废液缸内倒入10%次氯酸钠。

5）待实验结束后将浸泡在废液缸内的离心管、吸头放入专用黄色塑料袋，统一交焚烧炉焚烧,打开紫外灯照射过夜。

6）基因扩增实验室所用的实验消耗品均经过高压灭菌处理。

7）所有扩增后反应管就地封存，严禁破碎造成产物污染，每星期将所有工作衣送洗衣房统一高压灭菌处理。

5、仪器清洁：1）扩增仪：扩增仪的样品槽是金属的，不宜采用有腐蚀性的消毒液清洗，但应经常使用70%乙醇，清洗样品槽，以免有灰尘或其他残留物影响扩增管与金属模块充分接触，从而影响扩增效果。

PCR实验室的污染及其防范措施

2021年第3期（总第284期）卫生检疫35PCR 实验室的污染及其防范措施陈永1，杨莲辞2，常定发1（1.云南省泸西县动物疫病预防控制中心，云南泸西 652400；2.云南省泸西县动物卫生监督所，云南泸西）中图分类号：S851.2+1 文献标识码：C 文章编号：1007-1733（2021）03-0035-02 随着动物疫病检测需求增加，PCR 基因扩增实验室业务量有所加大。

开展PCR 检测，很可能会出现实验室污染，影响实验质量和效果，造成假阳性，同时也会给实验人员健康造成损害。

1 PCR 实验室污染检测评估（1）因PCR 检测的样品及其产物污染无色无味，主观很难判断，应定期对实验室操作台、地板、设备、器具等采集棉拭子样进行检测，评估是否存在污染。

样品要规范编号记录，以便追溯。

（2）查看实验室最近疑似污染实验检测报告，看阴性对照（水）Ct 值（反应管内营光信号达到设定的值时所经过的循环数）。

阴性对照（水）Ct ＞38，轻微污染；35＜Ct ＜38，中等污染；Ct ＜35，严重污染。

如只是阴性对照污染，样品中仍有阴性，则可能是样品交叉污染或操作不当，通过规范仔细的重复操作以避免污染。

如所有的曲线都呈阳性，而且阴性对照和许多标本的线性相似，则考虑是系统污染，如检测试剂污染或气溶胶污染。

（3）试剂对照:在PCR 试剂中不加模板DNA 或RNA ，进行PCR 扩增，以监测试剂是否污染。

2 污染的来源2.1 阳性样本或阳性样本核酸的污染此类污染多发生于样品处理间，造成样品间的污染。

在采集的样品中，如存在阳性样品，在样品的采集、放置、运输的过程中，由于封装不严溢出于容器外，导致污染容器、样品的交叉污染等；实验过程中，移液器使用不当，吸液时回枪手速过快导致的移液器枪头部分被阳性样本污染；样品加热裂解核酸后，立即打开仪器热盖，反应管突然遇冷导致崩开，溅出核酸；核酸释放后，未离心，管盖上有液体，溅出导致的污染；吸取阳性对照的枪头，处理不当造成的污染；由于通风不良，病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致交叉污染。

上海市临床检验中心举办2019年PCR系列培训班

·379·检验医学2019年4月第34卷第4期Laboratory Medicine，April 2019，V ol. 34，No. 4迟发型溶血性输血反应[4]。

本病例有输血史，极有可能输注了含JK b抗原的血液，从而刺激机体产生抗-JK b IgG抗体。

在Kidd血型系统抗体的检测中，抗球蛋白法、微柱凝集卡的敏感性较高，凝聚胺法敏感性较低[5-6]。

但抗球蛋白法显示本病例的血清抗体效价均<1∶1，微柱凝集卡仅检出抗-Ec抗体，未检出抗-JK b抗体，而凝聚胺法则检出了抗-Ec抗体及抗-JK b抗体。

由此可见，Kidd血型系统抗体应采用多种方法检测，避免漏检。

本病例抗体效价均<1，原因与Kidd血型抗体在体内或体外凝集效价均较低有关。

该抗体属于补体依赖性抗体，必要时可加入新鲜AB型血清提供补体，或用PEG处理来提高检出率。

本病例采用PEG处理的微柱凝集卡检测，结果显示抗-JK b抗体具有剂量效应。

选取A+CCee JK （b-）的悬浮红细胞进行配合性输注，患者输血效果良好。

综上所述，由于kidd血型系统抗体具有回忆反应，因此应对存在kidd血型系统抗体且有输血史的患者做好记录，再次输血时应选择相应抗原阴性的悬浮红细胞，避免发生迟发型溶血性输血反应。

对于临床上出现的疑难病例，若抗体效价低，应采用多种方法进行输血前检测，提高抗体检出率，防止抗体漏检。

同时还应进行严格的交叉配血，保证临床输血安全、有效。

（致谢：感谢上海市血液中心参比室向东、姜跃琴、沈伟等老师在本研究试剂及实验操作方面给予的帮助）参考文献[1] ALLEN JUN F H，DIAMOND L K，NIEDZIELA B. Anew blood-group antigen[J]. Nature，1951，167：482. [2] PLAUT G，IKIN E W，MOURANT A E，et al. A newblood-group antibody，anti JKb[J]. Nature，1953，171（4349）：431.[3] 胡丽华. 临床输血学检验[M]. 3版. 北京：中国医药科技出版社，2015：28-29.[4] 张虹，刘敬闪，赵倩，等. 抗-JKb引起溶血性输血反应1例[J]. 中国输血杂志，2013，26（11）：1143-1144. [5] LANGE J，SELLENG K，HEDDLE N M，et al. Coombs'crossmatch after negative antibody screening-a retrospectiveobservational study comparing the tube test and themicrocolumn technology[J]．Vox Sang，2010，98（3 Pt1）：e269-e275．[6] 肖瑞卿，杨民，林武存. 不同方法鉴定Kidd血型系统抗-JKa 、抗-JKb抗体效价比较[J]. 西南国防医药，2011，21（10）：1102-1103.（收稿日期：2018-08-08）（本文编辑：龚晓霖）上海市临床检验中心举办2019年PCR系列培训班2019年3月21—24日，世界顶级学术期刊《Nature》杂志与全国卫生产业企业管理协会实验医学专业委员会在南昌国际博览城绿地铂瑞酒店会议中心联合举办了“自然学术会议-体外诊断国际学术大会/‘创之声’第四届中国实验医学大会”。

基因扩增培训计划2024年

基因扩增培训计划2024年引言随着生物技术的迅猛发展，基因扩增技术已经成为了生物领域中一个重要的研究方向。

基因扩增技术的突破性进展已经引起了人们对其发展和应用的广泛关注。

为了满足生物领域对于基因扩增技术人才的需求，我们设计了一个基因扩增培训计划，旨在为学习者提供基因扩增领域的专业知识和实践技能。

一、培训目标1. 培养具有基因扩增实验设计、操作和数据处理能力的专业人才；2. 掌握基因扩增技术的原理和应用，提高实验操作技能；3. 增强学员对于基因扩增概念的理解和应用能力；4. 培养学员对于实验数据的分析和解释能力。

二、培训内容1. 基因扩增技术原理和应用：学习生物学、分子生物学原理，了解基因扩增技术的工作原理和应用；2. 基因扩增实验操作：掌握基因扩增实验的操作流程和技术要领；3. 基因扩增数据处理和分析：学习基因扩增数据的处理和分析方法，培养学员对实验数据的理解和解释能力；4. 实践课程：开展基因扩增实验操作、数据处理和分析，并结合实际案例进行讨论和总结。

三、培训对象1. 生物学、分子生物学、遗传学等相关专业的本科生、研究生和博士生；2. 从事相关研究工作或有志于从事基因扩增领域的科研工作者；3. 公司企业从事生物技术领域工作的人员；4. 对于基因扩增技术感兴趣并有一定基础的人员。

四、培训安排培训计划涵盖基因扩增技术的理论教学、实验操作和数据分析等内容。

培训时间灵活可调，根据学员的实际需求和时间安排，分为短期培训和长期培训。

为了保证培训效果，培训期间设置了系统化的考核，包括理论考试和实验操作的评估。

五、培训师资1. 知名专家学者：邀请具有丰富研究和教学经验的知名专家学者担任理论课程的授课教师；2. 实验技术专家：邀请具有丰富实验操作和数据处理经验的技术专家担任实验课程的授课教师；3. 行业从业人员：邀请生物技术领域的从业人员分享实践经验和案例分析。

六、培训方式1. 理论课程：采用面对面授课、讲座和分组讨论等形式进行教学；2. 实验操作：学员参与实验操作，掌握基因扩增实验的操作技能；3. 实践演练：以真实案例为基础进行实践演练和讨论，培养学员的应用能力。

PCR实验中的污染预防及处理

PCR实验中的污染预防及处理一．污染的预防进行PCR 操作时，操作人员应该严格遵守一些操作规程，最大程度地降低可能出现的PCR 污染或杜绝污染的出现。

（一）划分操作区：目前，普通PCR 尚不能做到单人单管，实现完全闭管操作，但无论是否能够达到单人单管，均要求实验操作在三个不同的区域内进行，PCR 的前处理和后处理要在不同的隔离区内进行：1. 标本处理区，包括扩增摸板的制备；2. PCR 扩增区，包括反应液的配制和PCR 扩增；3. 产物分析区，凝胶电泳分析，产物拍照及重组克隆的制备。

各工作区要有一定的隔离，操作器材专用，要有一定的方向性。

如：标本制备→PCR扩增→产物分析→产物处理。

切记：产物分析区的产物及器材不要拿到其他两个工作区。

（二）分装试剂：PCR 扩增所需要的试剂均应在装有紫外灯的超净工作台或负压工作台配制和分装。

所有的加样器和吸头需固定放于其中，不能用来吸取扩增后的DNA 和其他来源的DNA：1．PCR 用水应为高压的双蒸水；2．引物和dNTP 用高压的双蒸水在无PCR 扩增产物区配制；3．引物和dNTP 应分装储存，分装时应标明时间，以备发生污染时查找原因。

（三）实验操作注意事项尽管扩增序列的残留污染大部分是假阳性反应的原因，样品间的交叉污染也是原因之一。

因此，不仅要在进行扩增反应是谨慎认真，在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应该注意：1. 戴一次性手套，若不小心溅上反应液，立即更换手套；2. 使用一次性吸头，严禁与PCR 产物分析室的吸头混用，吸头不要长时间暴露于空气中，避免气溶胶的污染；3. 避免反应液飞溅，打开反应管时为避免此种情况，开盖前稍离心收集液体于管底。

若不小心溅到手套或桌面上，应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面；4. 操作多份样品时，制备反应混合液，先将dNTP、缓冲液、引物和酶混合好，然后分装，这样即可以减少操作，避免污染，又可以增加反应的精确度；5. 最后加入反应模板，加入后盖紧反应管；6. 操作时设立阴阳性对照和空白对照，即可验证PCR 反应的可靠性，又可以协助判断扩增系统的可信性；7. 尽可能用可替换或可高压处理的加样器，由于加样器最容易受产物气溶胶或标本DNA 的污染，最好使用可替换或高压处理的加样器。

医疗机构临床基因扩增检验工作导则

医疗机构临床基因扩增检验工作导则一、概述临床基因扩增检验是一种常见的分子生物学技术，用于检测个体的基因型和基因表达水平，为临床诊断和治疗提供重要依据。

医疗机构开展临床基因扩增检验工作，需要建立科学规范的操作流程和质量控制体系，以确保结果的准确性和可靠性。

二、工作流程1.采样：根据具体疾病特点和检测要求，选择合适的采样方法和标本类型，并确保采样过程符合标准操作规程，避免污染和损伤。

2.样本处理：对于血液等液体样本，需进行细胞分离、DNA提取等步骤。

对于组织、细胞等固体样本，需进行组织切片、DNA提取等步骤。

在样本处理过程中，严格控制污染风险，避免外源性DNA污染。

3.扩增反应：根据实验要求和检测目的，选择合适的扩增方法：PCR、RT-PCR等。

在反应体系中加入模板DNA、引物、酶和缓冲液等物质，进行适当的温度循环，使目标序列得到扩增。

4.产品检测：对扩增产物进行凝胶电泳、定量PCR、测序等技术，判断扩增反应的成功与否，避免假阳性和假阴性结果的发生。

5.结果分析：依据扩增产物的检测结果，结合病例信息和数据库查询，进行基因型分析、突变检测、表达水平分析等，提供临床诊断和治疗建议。

三、质量控制1.标本质量控制：确保采样过程中样本的完整性和稳定性，避免血液凝块、组织坏死等问题。

采用标准操作规程进行样本处理，保证样本的一致性和可靠性。

2.试剂质量控制：使用符合质量要求的试剂，检验其有效期和保存条件，并建立试剂库存管理制度，确保试剂的稳定性和可靠性。

3.实验操作质量控制：建立标准操作规程，对实验人员进行培训，确保操作的规范性和一致性。

进行实验过程中的质量控制，包括负对照的引物、样本的扩增效果等。

4.质量评估体系：建立质量控制指标，对样本质量、试剂质量、实验操作等进行定期评估，及时发现和解决问题，确保检测结果的可靠性。

四、质量保证1.设备维护：定期对实验设备进行维护和检查，保证设备的正常运行和准确性，及时更换损坏的设备和附件。

07吕火祥-临床基因扩增实验室的污染来源监测及防治

理想状态：各个区域实验用品及移液器专用，实验前应将该区域用紫外线消毒，破坏残留的DNA或RNA。
防止PCR污染
操作
• 一旦进入吸加PCR试剂的专用场所并开始工作，就应戴上一副新手套，并应勤于更换。
• 准备专供自己使用的PCR试剂，分装为小份。不要与样品存放在一起。
• 选择质量好的Eppendorf管--密封性好且开管不需要太大力气
般为 0.001μm~1000μm的固体、液体微小粒子形成的胶
溶状态散体系。 • 来源：空气与液体面摩擦。
离心机离心剧烈地摇动反应管开盖吸样时及移液器的反复吸样污染物的外泄
离心机
1.普通离心机：用于血清或血浆分离污染原因：离心管盖松落或离心管破碎，产生气溶胶或
溢出，污染同批样本，快速开盖后可污染实验环境
• 打开离心管前应先离心，将管壁及管盖上的液体甩至管底部。开管动作要轻，以防管内液体溅出。
• 实验结束后及时清理台面
防止PCR污染
移液器操作由于操作时不慎将模板吸入枪内或粘上枪头是一个严重的污染源，因而加样时要十分小心。
1）准备PCR的移液器专用
2）吸样要慢，吸样时尽量一次性完成，忌多次抽吸，切勿形成喷雾，以免交叉污染或产生气溶胶污染。
移液枪污染的处理
1.可高压灭菌移液枪：洗净后整只高压灭菌，有些可以半只灭，有些可以紫外消毒。
2.不可高压的移液枪：最好更换新的移液枪。可以用消毒水浸泡枪头部分，但一定要洗干净，盐溶液干后的结晶会损伤活塞。可以用纯酒精及浸泡，但可能损伤枪内的胶垫
临床基因扩增实验室的污染来源、监测及防治
检验中心
吕火烊
基因扩增（PCR）实验室污染的来源
• 1.实验环境与实验用品

临床基因扩增检验操作规范

玻璃器皿在使用前应高压处理，250°烘烤4小时以上可使RNA酶永久性失活。
临床用于RNA（如HCV RNA）扩增检测的血标本应尽快（3小时以内）分离血浆，以避免RNA的降解。
精选课件
（二）标本的稳定化处理
DNA：不需特殊稳定化处理。 RNA：异硫氰酸胍盐（GITC）可使
DNA酶和RNA酶失活。
精选课件
追踪可疑的环境污染源
① 用去离子浸湿的灭菌棉签擦试可疑部分 ② 在0.1ml 去离子水中浸泡； ③ 取5μl 作PCR反应； ④ 电泳检查结果。
精选课件
（三）污染源的处理
精选课件
1. 环境污染处理法
（1）稀酸处理法。对擦试实验阳性部位或器件可用
1mol/LHCl擦洗或浸泡残留DNA。（2）紫外法：
及操作仪器。
精选课件
（六）靶核酸的逆转录（RT）和扩增
有多种因素可引起核酸扩增检测假阴性结果，如扩增靶核酸中抑制剂存在、 Taq 酶失活、退火温度不对、 Mg++浓度不佳、患者标本或试剂受污染等。
扩增仪孔中热传导的均一性极为重要。
精选课件
RT-PCR操作注意：
①标本必须新鲜； ②做RNA标本的枪头离心管必须无菌； ③冰上操作； ④处理完后须立即上机，不能放置； ⑤注意左右手分开。
精选课件
（四）扩增产物分析区
功能：扩增片段的测定。
精选件
膜上微孔板上探针杂交方法、 Southern 转移、琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、核酸测序方法等。
本区是最主要的扩增产物污染来源。溴化乙锭、丙烯酰胺、甲醛或同位素等有毒或致癌物质，注意实验人员的安全防护。

临床基因扩增实验室技术人员培训合格证

临床基因扩增实验室技术人员培训合格证
（最新版）
目录
1.临床基因扩增实验室技术人员培训合格证的概述
2.培训课程内容
3.培训合格后的证书和资格
4.培训的组织和参与机构
5.培训的时间和地点
正文
一、临床基因扩增实验室技术人员培训合格证的概述
临床基因扩增实验室技术人员培训合格证是一种针对从事临床基因
扩增检验技术人员的专业培训证书。

持有这个证书的人员需要具备相关的专业知识和技能，以保证临床基因扩增试验的质量和准确性。

二、培训课程内容
培训课程主要包括临床基因扩增的基本原理、相关检测技术及进展、临床基因扩增试验的质量保证、临床 PCR 标本的处理、模板制备和保存、PCR 检测结果及常见问题分析、临床基因扩增实验室的生物安全和污染防治措施等方面的内容。

三、培训合格后的证书和资格
培训合格后，学员可以获得临床基因扩增检验技术人员上岗证。

这个证书是检验人员从事临床基因扩增检验工作的必备证书，也是评价检验人员专业素质的重要依据。

四、培训的组织和参与机构
培训由山东省立医院临床医学检验部、山东省临床检验中心和山东省
医院协会临床检验专业委员会共同主办。

此外，还有一些其他机构也参与组织和举办此类培训，如海尔施生物医药股份有限公司等。

五、培训的时间和地点
培训的时间通常会提前公告，方便学员提前安排学习计划。

PCR质量控制2012.3

维护保养：75%乙醇擦拭校准：转速、温度
耗材、试剂
耗材带滤芯吸头、离心管爆管和抑制物质检试剂盒的质检包括外观质检和性能质检选择或更换试剂品牌：试剂性能评估更换试剂批号：评价核酸提取效率和扩增效率
更换试剂批号质检
设置空白对照、阴性对照、低值阳性对照试剂不合格 1)低值阳性对照和标准品均未检出，或低值阳性对照未检出而标准品检出率大幅下降，表示试剂失效或检测灵敏度大幅下降。 2)低值阳性对照未检出，标准品检测正常，提示样品提取液存在问题。重复新旧提取液阳性对照实验，确定提取液失效问题。 3) 阴性对照有扩增，排除其他污染可能性后，提取液存在污染可能。 4)低值阳性对照检出，标准品未检出或扩增曲线明显系统性CT值偏大5个循环以上，提示阳性标准品存在问题。
使用玻璃器皿，必须为密闭的、必须经高压灭菌，以使可能存在的RNase永久性失活。
标本验收、拒收
血液标本：溶血、严重脂血等应拒收泌尿生殖道分泌物：镜下观察到上皮细胞存在。痰液：镜下观察上皮细胞很少，一般<10个，白细胞一般>25个。
标本运送
实验室应根据待测靶核酸的特性，对各种临床标本的运送条件（温度、时间）作出相应规定。靶核酸为DNA的标本，如在无菌条件下，则可以在室温下运送，建议采集后8h之内送至实验室；靶核酸为RNA的标本，如在无菌条件下，可在室温下运送，如为较长时间，则应在加冰条件下运送，建议采集后4h之内送至实验室；所有标本采集后送至实验室之前，所有临床标本在采集后送至实验室前，均应放2－8℃临时保存。淋病奈瑟菌有自溶的特性，标本采集后应立即送检。
-2S
-3S
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
4） R4S 在同一批中两个控制结果差超出4S范围，其中有一个超出了+2S限值，另一个超出了2S 限值。或其中一个超出了＋1.5S，另一个超出了－2.5S限值属随机误差过大，为失控。