方法验证和杂质研究讲解

1. 方法验证的主要内容
➢ 专属性——方法不受杂质、降解物、辅料的影响，可正确鉴定被分析物
▪ 鉴别反应：仅被分析物呈正反应，阴性对照呈负反应，结构相似及组分中 的有关化合物也呈负反应。
▪ 杂质检查：加入的杂质可与共存物质分离并被检出 与原理不同的可信方法比较；强制降解
▪ 含量测定：比较加入杂质或辅料前后的测定结果 与可信方法比较测定结果（强制降解样品）
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1. 方法验证的主要内容
➢ 范围——能达到一定准确度、精密度和线性的浓度区间，
为规定值 ▪ 半成品或成品含量测试：80%-100%或更宽 ▪ 含量均匀度：70%-130%，据剂型特点有差异 ▪ 溶出度：限度的±20%，或下限的-20%至上限的+20% ▪ 定量杂质：规定限度的±20%，或采用峰面积归一化法与
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1. 方法验证的主要内容 ❖ 验证内容：
➢ 专属性 ➢ 线性
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中国药典2010年版二部附录ⅪⅩ A 药品质量标准分析方法验证指
导原则
➢ 范围
➢ 准确度
➢ 精密度（重复性、中间精密度和重现性）、
➢ 检测限和定量限
➢ 耐用性
➢ 系统适用性
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中间精密度：同实验室的不同人员、时间和设备测定结果的精密度 含量测定RSD ≤2.0%，杂质定量RSD ≤20%
▪ 含量测定：在80%-120%浓度范围内配制样品。（考虑含量浓度、含 量均匀度浓度及溶出的浓度，实际操作采用20%-200%）
相关系数R≥0.998，Y轴截距在100%响应值的2%以内，RSD≤2.0% ▪ 杂质定量测定：在定量限至一定浓度范围内配制样品。（考虑实测
该杂质的值） 相关系数R≥0.990，Y轴截距在100%响应值的25%以内, RSD≤10%
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1. 方法验证的主要内容
➢ 精密度——多次取样测定同一均质供试品所得结果间的接近程度
▪ 使用偏差d、标准偏差SD和相对标准偏差RSD表示
▪ 偏差 ▪ 标准偏差
d=xi-x 测量值与平均值之差
SD
n
(xi x)2
i 1
n 1
▪ 相对标准偏差
RSD SD 100% x
被测物进行测定（加样回收试验法） 3. 用本法所得结果与已建立准确度的另一方法测定的结果
进行比较
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1. 方法验证的主要内容
➢ 准确度
▪ 杂质 ：
1. 往样品中加入已知量的杂质进行测定； 2. 若不可能得到某种杂质或降解产物，可把此方法的分析
结果与另一已验证的或药典的分析方法获得的结果进行 比较 。
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1. 方法验证的主要内容 ➢ 范围——能达到一定准确度、精密度和线性的浓度区间，为规定值
▪ 涉及到定量测定的检测项目均需要对范围进行验证，如含量测 定、含量均匀度、溶出度或释放度、杂质定量试验等。
▪ 分析方法的范围应根据具体分析方法以及对线性、准确度、精 密度的结果和要求确定，无特殊要求时，通常采用以下标准：
化药质控分析方法验证和杂质研究
质控分析方法验证
1. 方法验证的主要内容 2. 含量方法验证可接受标准 3. 有关物质方法验证可接受标准 4. 溶出方法验证可接受标准
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质控分析方法验证
1. 方法验证的主要内容 2. 含量方法验证 3. 有关物质方法验证 4. 溶出方法验证
▪ 含量测定：配制80%、100%和120%三个浓度。回收率在98.0%-102.0%之 间，RSD ≤2.0%
▪ 定量杂质：配制浓度根据有关物质定量限和该杂限度。回收率在80%120%之间（杂质浓度为定量限时放宽至70%-130%），RSD ≤10%
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1. 方法验证的主要内容 ➢ 准确度
含量同测时，为杂质限度的-20%至含量上限的+20%
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1. 方法验证的主要内容 ➢ 准确度——方法测定结果与真实值或参考值的接近程度，用回收率表示
▪ 准确度是定量测定的必要条件，涉及到定量测定的检测项目均需 要验证其准确度，如杂质定量测定、含量和溶出方法。
▪ 分析方法的准确度能够确保： 1. 样品中的待测物全部溶解 2. 待测物全部从检测器中检出
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1. 方法验证的主要内容
➢ 准确度——方法测定结果与真实值或参考值的接近程度，用回收率表示
▪ 配制三个浓度下各三个样品，共九个样品平行两次测定
回收率：辅料+对照品 加样回收率：样品+对照品（扣除本底值）
能否得到制剂 的全部组分？
Q：制剂中某已知杂质的回收率如何测定？(含已知量被测物的各组分混合物)
➢ 线性——在设计的测定范围内，样品浓度与响应值呈线性关系
▪ 线性是定量测定的基础，设计定量测定的项目，如 杂质定量检查、含量和溶出方法均需要验证其线性
▪ 可用同一贮备液精密稀释后配制，或分别精密称样 配制。
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1. 方法验证的主要内容
➢ 线性——在设计的测定范围内，样品浓度与响应值呈线性关系
▪ 原料药：
1. 可用已知纯度的对照品或符合要求的原料药进行测定； 2. 用本法所得结果与已建立准确度的另一方法测定的结果
进行比较
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1. 方法验证的主要内容
➢ 准确度
▪ 制剂：
1. 用含已知量被测物的各组分混合物进行测定； 2. 如不能得到制剂的全部组分，可向制剂中加入已知量的
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1. 方法验证的主要内容
➢ 精密度——多次取样测定同一均质供试品所得结果间的接近程度
▪ 使用SD和RSD表示时取样测定次数应至少6次。
重复性：同一分析人员在相同条件下测定结果的精密度； 可采用3样各测3次或1样测6次 含量测定RSD ≤2.0%，杂质定量RSD ≤15%
空白对照应无干扰，主成分与各杂质峰 （该杂质峰与其他峰）R≥2
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1. 方法验证的主要内容
➢ 专属性试验中需要注意的问题
▪ 波长的选择； ▪ 每次试验时必须运行空白样品； ▪ 试剂、玻璃容器、流动相和过滤介质可能会影响方法的
专属性。
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1. 方法验证的主要内容