中华猕猴桃茎段组培快繁系列技术研究

2016年第10期菽I砷政1中华猕猴桃茎段组培快繁系列技术研究黄宝菊，王忠，林梅燕[安发（福建）生物科技有限公司352199 ]摘要：以中华弥猴桃带腋芽茎段为外植体，研究不同处理方法对外植体灭菌效果的影响，不同 激素组合培养基对外植体初代培养和组培苗生根的影响。

试验结果表明，最佳灭菌处理：先用 75%酒精灭菌30 S,再用0.1%升汞进行表面灭菌8 min,外植体成活率88%;最佳初代培养基: M S+6 - BA 1.5 mg/L + NAA 0.2 m g/L,出芽率 92% ;最佳生根培养基：1/2 M S + IBA 0• 15 mg/L+ NAA0.3 m g/L,生根率 85. 6%。

关键词：中华弥猴桃；茎段；组织培养；灭菌条件；激素配方；出芽；生根DOI: 10. 13651/ki.fjnykj.2016. 10.001Tissue culture and rapid propagation technique for Actinidia chinensisHUANG Bao-ju, WANG Zhong, LIN Mei-yan[Anfa {Fujian) Bio-technology Co., Ltd., Fujian Province 352199]A bstract：Effects of different treatments on explant sterilization, different hormone formulation on initial culture of explantand rooting of tissue culture seedling, were studied, using Actinidia chinensis stem with axillary bud as explant. The results showed that the best sterilizaiton treatment was 75% alcohol for 30 s firstly, and then 0.1% Mercury(II) chloride for 8 min, and the survival rate of explant reached 88%. The optimum initial culture medium was MS + 6 - BA 1. 5 mg/L + NAA 0. 2 m g/L, the budding rate of which was 92%. The optimum rooting culture medium was 1/2 MS + IBA 0. 15 m g/L + NAA0. 3 m g/L, with 85. 6%of the rooting rate.Key words ：Actinidia chinensis；stem ；tissue culture ；sterilization conditions ；hormone formulation ；budding ；rooting中华猕猴桃（简称：猕猴桃）属于猕猴桃科猕 猴桃属多年生藤本植物，是20世纪人工驯化栽培 的野生果树中最有成就的四大果种之一。

其果实具 有丰富的营养价值和良好的药用价值，尤其是含有 大量的维生素C，素有“V c之王”的美称。

猕猴 桃雌雄异株，倍性复杂，育种周期长。

传统的育苗 方法主要有扞插和嫁接，但成活率和繁殖效率低。

同时在生产栽培中，称猴桃经常发生溃疡病等严重 病害，导致枝条萎蔫、枯死等[1]。

目前，大量的猕 猴桃种苗生产主要来源于组织培养[2]。

要加快其种苗繁殖速度和促进健康栽培，迫切 需要建立科学合理的组培快繁生产体系。

近年来，有关称猴桃组培技术的报道颇多，前人对總猴桃组 培的研究方向各有不同。

本文以安发（福建）生物收稿日期：2016-08 -07作者简介：黄宝菊，女，1988年生，研究实习员。

科技有限公司自主选育的猕猴桃新品种——回回1号带腋芽茎段为材料，从外植体的灭菌，初代培养 诱导出芽，生根培养诱导生根三方面进行试验研究，以期为建立和完善其快繁体系提供理论依据。

1材料与方法1.1试验材料供试材料为回回1号两年生雌雄株，于2014 年8月下旬至9月下旬的晴天，取长10 ~ 15 cm的健壮新梢上的带腋芽茎段为试验材料。

1.2试验方法与处理设计1.2.1 不同消毒方法对外植体灭菌效果的试验 将带腋芽的茎段，置于自来水下冲洗30 min,再移 至超净工作台中，将无菌水倒于烧杯中搅拌清洗 6 ~ 8遍。

先用75 %酒精灭菌，再用0. 1%升汞进行 表面灭菌，然后无菌水冲洗6 ~8遍，最后用无菌 滤纸吸干茎段表面水分。

灭菌后，将茎段以腋芽为单位进行裁剪，剪成1.〇 ~ 2.0 cm带1个腋芽的茎 段，腋芽朝上竖直插人初代培养基中，每个培养瓶 中接5个茎段，5次重复。

初代培养基为1\«+6-BA 1.Omg/L+ NAA0•2 m g/L。

培养室温度为(25 ± 1)丈，空气相对湿度60%，每天光照时间14 h，光 照强度2400 lx。

初代培养7 d统计污染率、21 d统 计成活率。

设75%酒精（灭菌时间分为20 s、30 s、40 s)和0. 1%升汞（灭菌时间分为6 min、8 min、10 min)9个灭菌组合的处理（表1)，5次重复。

污染率=污染外植体数/接种外植体数X 100%成活率=成活外植体数/接种外植体数x100% 1.2.2不同培养基对初代培养的试验将已灭菌的1.0 ~2. Ocm带1个腋芽的茎段，腋芽朝上竖直 插人诱导培养基中，每个培养瓶中接5个茎段。

培 养室温度为（25 ± 1)丈，空气相对湿度80%，每 天光照时间14 h，光照强度2400 lx。

诱导培养40 d 时统计生长状况（出芽率）。

设不同激素水平组合的9个初代培养基处理：M S+ 6 - BA(1.0、1.5、2_0) mg/L + NAA (0_1、0.2、0.3) mg/L(表2)，5 次重复。

出芽率=出芽外植体数/接种外植体数x100% 1.2.3不同培养基对组培苗生根的试验将经过诱导培养的茎段转接人生根培养基，腋芽朝上竖直 插人生根培养基中，每个培养瓶中接5个茎段。

培 养室温度为（25 ± 1)丈，空气相对湿度80%，每 天光照时间14 h，光照强度2500 lx。

生根培养30 d 时统计根生长状况。

设不同激素水平组合的9个生根培养基处理: 1/2MS+ IBA (0.10、0.15、0.20) mg/L+ NAA (0_2、0.3、0.4) mg/L(表3)，5 次重复。

生根率=生根外植体数/接种外植体数x100%生根数=外植体生根总根数/接种外植体数根长=外植体根的总长度/外植体生根总根数2结果与分析2.1不同消毒方法对外植体灭菌效果的影响由表1看出，酒精或升汞对外植体灭菌的影响 是相似的，当灭菌时间不足时（处理1: 75%酒精 20s+0_l%升汞6min)，污染率高达80%;适当 延长灭菌时间，污染率显著降低，当75%酒精灭菌 40 s+0_ 1%升汞灭菌8 min时，污染率降至8%。

表1结果还表明，虽然延长灭菌时间能够达到好的灭菌效果，但外植体的成活率却随着灭菌时间的延 长呈现先升后降的趋势，这与过度灭菌对外植体细 胞产生的毒害作用有关。

从污染率和成活率两方面 考虑，以处理5的效果最理想，其污染率20%、成 活率88%，即以先用75%酒精灭菌30 S，再用 〇. 1%升汞进行表面灭菌8 min为最佳灭菌处理。

表1不同灭菌处理对猕猴桃茎段成活率的影响处理代号75%酒精(s)0. 1%升亲(min)接种数(个）污染率(%)成活率(%) 120625802022082568283201025563243062540645308252088 63010251672740625125284082582494010258242.2不同培养基对不定芽诱导培养的影响由表2看出，适宜的植物生长激素组合对外植 体不定芽的诱导具有促进作用，结合出芽率数据分 析，当植物激素浓度较低时（处理1: MS+6-BA 1.0 mg/L+ NAA0. 1m g/L)，出芽率最低；植物激 素浓度适当升高，出芽率显著提高，以处理5的出 芽率最高；但是，当植物激素浓度继续升高时，出芽率反而降低，这与高浓度的植物激素抑制了不定 芽的诱导有关。

综上所述，MS+6-BA 1.5 mg/L+ NAA0.2 mg/L为最佳初代培养基。

表2不同诱导培养基对猕猴桃茎段出芽率的影响处理代号6 -B A(mg/L)NAA(mg/L)出芽率(%)1.00.1602 1.00.2683 1.00.3724 1.50.1885 1.50.2926 1.50.3847 2.00.1768 2.00.2729 2.00.370注：基础培养基为MS 。

2.3不同培养基对组培苗生根的影响由表3看出，适宜的植物生长激素组合对外植 体不定芽生根的诱导具有促进作用，当激素浓度较 低时（处理1、处理2)，生根速度慢，根系虚弱；激素浓度适当升高（处理5)，生根速度加快，根 系较强壮；当激素浓度继续升高时，根系生长趋于 弱化，这与高浓度的植物激素抑制了对不定芽生根 的诱导作用有关。

综上所述，1/2M S + IBA 0• 15 mg/L+ NAA0.30 m g/L为最佳生根培养基。

表3不同生根培养基对猕猴桃组培苗生根的影响处理代号IBA(mg/L)NAA(mg/L)生根开始时间⑷生根率(%)生根数(条）根长(cm)10. 100.201760.0 1.72 1.3220. 100.301667.0 1.84 1.4530. 100.401573.0 1.92 1.5840. 150.201482.02.52 1.8250. 150.301385.6 2.76 2.3460. 150.401381.02.32 1.9370.200.201476.0 2.04 1.6680.200.301452.0 1.96 1.4290.200.401548.0 1.92 1.33?主：基础培养基为1/2MS。

3结论与讨论相对于不同灭菌试剂或灭菌试剂组合的效果，灭菌试剂处理时间对外植体的成活率影响很大，直 接表现为灭菌试剂处理时间短，灭菌效果差；而灭 菌试剂处理时间过长则可能对外植体的细胞和组织 造成损害[3^4]。

本试验结果表明，对猕猴桃外植体 的最适宜灭菌条件为：先用75%酒精灭菌30 s，再 用0. 1%升隶进行表面灭菌8 min。