壳聚糖对肝癌和肺癌细胞株糖基化作用的影响

应用。方法 ：以浓度为 ５ １０和 ２ ０ｍ ０，０ ０ ＃Ｌ的壳聚糖 分别作 用于肝 癌 细胞株 Ｓ ＭＣ７２ Ｍ －７ １和 肺癌 细胞 株 Ａ ４ 采 用 ５９， Ｒ —Ｃ ＴＰ Ｒ方法检测多肽 ： 一 Ｎ 乙酰氨基半乳糖转移酶 ２ ｐ Ｇ ｌ Ａ Ｔ ） ［ Ｇ Ｉ－ （ ｐ ａＮ ｃ ２ 和 ３ Ａ ／的表达 水平 。结 果 ： ３ Ｔ 肝癌 细胞 株 中 ｐ — ｐ
ｃ ｌ ｌ ｎｄ ｌ ｎｇ ｃ ｎ ｅ ｅｌｌ ｅｌ ｉ ａ ｕ ａ ｃ ｒ ｃ ｌ ｉ ｎｅ ｎｅ
Ｓ Ｅ ｉ Ａ ｈ ， Ｈ Ｎ Ｌ ，Ｙ Ｎ Ｓ ｉ Ｑ — ｅｇ，删 Ｓ ｉ ｉｎ ｉ ｈｎ ｓ ｈ—ａ ｇ ｌ
（ ｅａｔｅ ｔ ｆ ｉ ｈｍｉｒ ｎ ｌｃｌ ｉｏｙ ｅ ｉ ｌＣ ｌ ｇ ｆ ｏｃ ｏ ｎｖｒｔ，Ｓｚｏ ｉ ｇｕ２ ５ ２ ，Ｃ ｉａ Ｄ ｐｒ ｎ ｏ ｅ ｓｙａｄＭｏ ｕａ Ｂｏ ｇ ，Ｍ ｄｃ ｏｅｅｏ ｏｈｗ Ｕ ｉ ｓｙ ｕｈ ｕＪａ ｓ １ １３ ｈｎ ） ｍ ｏＢ ｃ ｔ ｅ ｒ ｌ ａ ｌ Ｓ ｅｉ ｎ
虽然肝癌 细 胞 的 Ｂａｔ ． ｉ ｃｎ有所 表 达 ， 检 测 不 到 但
ｐＧ ｌＡ Ｔ 和 １ Ｇ ｌ ｐ ａ ｃ２ ３ ａ ７表达， Ｎ ３ Ｔ 在加入不 同浓度 的壳 聚糖之后 ， 未见到 ｐ Ｇ ｌ Ａ Ｔ 仍 ｐ ａ ｃ２和 １ Ｇ ｌ７的表达 ， Ｎ ３ ａ ３ Ｔ
可见 壳 聚 糖 对 两者 的表 达 没有 促 进 或 者增 强 作 用 。
１２ 细胞 培 养及 分组 ．
肝癌 细 胞株 Ｓ ＭＭＣ７ ２ － １和肺 癌细 胞株 Ａ ４ ７ ５ ９均
为本 室保 存 。壳 聚糖 胶囊 由中科 院大 连化 学物 理研 究 所 提 供 ， 于 无 血 清 的 Ｒ ＭＩ ６０ 培 养 基 ， 溶 Ｐ 一４ １ ０２ ｍ孔 径 的滤膜 过 滤除菌 ，℃放 置备 用 。 ．２ｍ ４
ｅ ｖ ｔｏ ｎ ｒ ａｍｅ ｔｏ ｕ ｇ ｔ ｍｏ ． ｒ ａ ｉｎ ａ ｄ ｔｅ ｔ ｎ ｆｌ ｎ ｕ ｒ
［ ｙｗ ｒｓ ｃｉｓｎｌ ｅ ｃｎｅ；ｕｇｃｎｅ；ｌ ｏｙｔｎｆｒｓ Ｋｅ ｏｄ ］ ｈｔ ａ ；ｖｒ ａｃｒ ｌｎ ａｃｒｇ ｅｓｌａｓ ａｅ ｏ ｉ ｙ ｒ ｅ
Ｓ ｐ ．２ ０ ｅｔ ０８
壳 聚 糖 对 肝 癌 和肺 癌 细 胞 株 糖 基 化 作 用 的影 响
沈 力 ，闫 石 ，吴 祁 生 ，吴 士 良
（ 苏州大学医学部生物化学与分子生物学教研室 ， 江苏 苏 州 ２ ５２ ） １ １３
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［ 摘
要 ］ 目的 ： 观察 中药壳 聚糖对肝癌 和肺癌 细胞 株糖基转移酶表达 的影 响， 探讨 中药多糖 在肿瘤预 防和治疗 的
Ｓ ＭＭＣ７ ２ ｅ ｎ ｎ ｅａｔ ｎｗ ｓｎ ｔ ｂ ｉ ｓＴ ｅｍ Ｎ ｘ ｒｓｉ ｆ ｐ ａＮ ｃ ２ ａ ｄ１ Ｇ ｌ７ －７ １ｃｌ ｌ ｅａ ｄｔ ｃ ｏ ａ ｏ ｏｖｏ ． ｈ Ｒ Ａ ｅｐｅｓ ｎｏ Ｇ ｌＡ Ｔ ｎ ３ ａ ｌｉ ｈ ｉ ｕ ｏ ｐ ３ Ｔ
ａ ｄ Ａ５ ９ ｃ ｌ ｌ ｅ ｂ — ＣＲ ａｔｒ ｃ ｉ ｓ ｎ ａ ｄ ｄ ｔ ｈ ｕｔ ｒ ｄ ｕ Ｔ ｅ ｃ ｎ ｅ ｔａｉｎ ｏ ｈ ｔｓ ｎ ｎ ４ ｅｌ ｉ ｙ ＲＴ Ｐ ｆ ｈ ｔ ａ ｄ ｅ ｏ ｔ ｅ ｃ ｌ ｅ ｍｅ ｉ ｍ． ｈ ｏ ｃ ｎ ｒ ｔ ｆｃ ｉ ａ ｎ ｅ ｏ ｕ ｏ ｏ
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第 ５期
沈
力 ， ．壳聚糖对肝癌 和肺 癌细胞株糖基化作用 的影 响 等
４１ ０
及 壳 聚糖在 肿 瘤治 疗 和预 防 中的作 用 。
１ 材 料和 方法
１１ 试 ． 剂
ｐＧ ｌＡ Ｔ ｐ ａ ｃ ２和 １ Ｇ ｌ７表 达 的影 响 Ｎ ３ ａ ３ Ｔ
ｉ ５４９ ｃ ｌ ｌｎ ｓ ｄ ｃ ｅ ｓ ｄ ａ ｔｒｅ ｉ ｓ ｎ ａ ｄｅ ｏ ｔ ｅ ｃ ｌｕ ｅ ｍｅ ｉ ｍ． ｈ ｎ ｒ ａ ｅ ｆｅ ｎ ｅ ｔａ ｎＡ ｅｌ ｉ ｅ ｗａ ｅ ｒ ａ ｅ ｆ ｈ ｔ ａ ｄ ｄ ｔ ｈ ｕ ｔ ｒ ｄ ｕ Ａｓ ｔ ｅ ｉ ｃ ｅ ｓ ｄ ｏ ｏ ｃ ｎ ｒ ． ｅ ｏ ｔｏ ｉｎ，ｔ ｅ ｉｈｉ ｔｏ ｓｓｒ ｎ ｅ ． Ｃｏｎ ｌ ｓｏ ｈ ｎ ｂｉ ｎ ｗａ ｔｏ ｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｉ ｎ：Ｔｈ ｓ ｓｕ ｙ ｓ ｏ ｄ ｔ ａ ｈｅ ｅ ｐ ｅ ｓｏ ｆｐ ｉ ｔ ｄ ｈ ｗｅ ｈ ｔｔ ｘ ｒ ｓｉ ｎ ｏ ｐＧａ ＮＡｃ ２ ａ ｌ Ｔ ｎｄ
ｔ ａ ｎ ｆ ｕ ｒ ｒ ｔ ｔ ｍｏ．Ｍｅｈ ｄ ： ｅｅｔｈ ｘｒｓ ｏ ｆ ｐ ａＮ ｃ２ ａｄ１ Ｇ ｌ７ｉ ＭＭＣ ７ ２ ｅ ｎ ｅ ｍｅ ｏ ｔ ｔｏ ｓ Ｄ ｔ ｅｅｐｅｓ ｎｏ Ｇ ｌ Ａ Ｔ ｎ ３ ａ Ｓ ｃｔ ｉ ｐ ３ Ｔ ｎ ： ７ １ｃｌｌ ｅ － ｌｉ
ｗ ｓ５ １ ０，０ ／ ．Ｒｅ ｕｔ ：Ｔ ｅ ｍＲＮＡ ｅｐ ｅ ｓ ｎ ｏ ｐ ａＮ Ｔ ｎ ３ ｌ ７ ｗ ｓｉ ｏ ｅ ｅ ｎ ａ ０， ０ ２ ０ ｍｇ Ｌ ｓｌ ｓ ｈ ｘ ｒｓｉ ｆｐ Ｇ ｌ Ａｃ ２ ａ ｄ １ ＧａＴ ａ ｎ ｌｗ ｌｖ ｒｉ ｏ ３
Ｓ ＭＭＣ７ ２ 和 Ａ ４ －７ １ ５ ９用 含 ｌ ％ 小 牛 血 清 的 Ｒ — ０ Ｐ
１０ｍ／ ； ： ｇＬ ３ １０ｍ ／ ； ： ０ｍ ／ ； 标准参 照物 ： ｒＬ ２ ５ ｍ ／ ； ： ｇ Ｌ ４ ２ ｇＬ Ｍ： ０ ０ ０
图 １ Ｓ Ｍ Ｃ７ ２ Ｍ 一７ １细胞 株 ￣ａ ｔ ｃｉ ｍＲ Ａ 的 表达 ｎ的 Ｎ Ｆｇ１ Ｔ ｅｍＲ ｘ ｒｓｉｎｏ ｉ ｈ ＮＡ ｅｐ ｅｓ ｆ￣ａｔ ｏ ｅｉ ｉ ｎｎ
中药多糖 广泛存在 于植 物、 微生 物 （ 菌和真 细 菌） 和海藻 中 ， 具有极 大 的 医学 应用 价 值 。壳 聚糖 是 采用甲壳素作为原料 ， 通过脱乙酰后制成 的一种天 然生物 高分子 ， 是生物界 大量存 在 的线 性氨 基多 糖 ，
肿 瘤细胞 糖 蛋 白糖链 结构 异 常与 肿瘤 的生 物学 行为 ， 如恶性 转 化 、 移 与 浸 润 等密 切 相 关 ， 转 而其 基 础是 糖基 转 移 酶 的变 化 。 因此 ， 研究 肿 瘤 细胞 的糖 基转 移 酶变 化 ， 有助 于 了解肿 瘤 的生物 学行 为 机制 ，
［ 关键词 ］ 壳聚糖 ； 肝癌 ； 肺癌 ； 糖基转 移酶 ［ 中图分类号 ］ Ｒ ４ ３ ［ 文献标志码 ］ Ａ ［ 文章编 号］ １７ ７ ８ （０ ８ ０ ６ １— ７ ３ ２０ ）５—０ ０ ０ ４ ０— ３
Ｅｆｅ ｔ ｏ ｈｉｏ ａ ｏ ｔ ｅ ｇ ｙ ｏ ｙ ａ ｉ ｎ ｉ ｉ ｅ ａ ｃ ｒ ｆ ｃ ｆ ｃ ｔ ｓ ｎ ｔ ｈ ｌ ｃ ｓ ｌ ｔｏ ｎ ｌ ｒ ｃ ｎ ｅ ｖ
具有广泛的药理作用 ， 譬如抑菌作用 ， 调脂及调节血 糖作用 ， 血作用 等等 。近年来 有文 献报 道壳 聚糖 抗凝 具有极佳 的抗肿瘤作 用 ， 并且无毒 副作用 Ｊ 。
利于肿瘤 的治疗和预防。本文观察 了不同浓度壳聚 糖对 肝 癌和 肺癌 细 胞 株糖 基 转 移 酶表 达 差 异 ， 以探
［ ｂｔａｔ ０ｂｅｔ ｅ Ｔ ｂｅｖ ｅｅｅｔ ｆ ｈｏａ ｅｅｐｅｓ ｎｏ ｉｅｅｔ ｌｃｓｈａｓ ｒｓｓ Ａ ｓｒｃ］ ｊｃｉ ： ｏｏｓｒｅｔ ｆ ｃｏ ｉｓｎｔ ｔ ｘｒｓｉ ｆ ｆｒｎ ｙｏｙ ｒｎｆ ａｅ ｖ ｈ ｆ ｃｔ ｏｈ ｏ ｄｆ ｇ ｅ
ｉ ｉｅ ａ ｅ ｅｌｌｎ ｎ ｕ ａ ｃ ｒｃ ｌ ｌ ｅ ａ ｄ ｔ ｔ ｄ ｈ ｐ ｌｃ ｔｏ ｆｃ ｉｏ ａ ｎ ｐ ｅ ｅ ｖ ｔｏ ｎｄ ｎ ｌ ｒｃ ｎｃ ｒｃ ｌ ｉ ｅ ａ ｄ ｌ ｎｇｃ ｎ ｅ ｅｌ ｉ ｎ ｏｓｕ ｙ ｔ ｅ ａ ｐ ｉａ ｉｎ ｏ ｈ ｔｓ ｎ ｉ ｒ ｓ ｒ ａｉｎ ａ ｖ ｎ
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第 ｌ ８卷第 ５期 ２０ ０ ８年 ９月
江 苏 大 学 学 报（ 学 版） 医 Ｊｕｎ ｌｏ ｉｎｓ ｎｖｒ ｔ（ ｅ ｉｎ ｄｔ ｎ ｏｒａ ｆＪ ｇｕ Ｕ ｉ ｓｙ Ｍ ｄｃ ｅＥ ｉｏ ） ａ ｅｉ ｉ ｉ
Ｖ０ ． ８ Ｎｏ． １１ ５
Ｓ Ｍ Ｃ－ ７ １ ｃ ｌ ｌｎ Ｍ ７ ２ ｅｌ ｉ ｅ
ＭＩ ６０培养基 ， ３℃ ，％Ｃ 一４ １ 置 ７ ５ Ｏ 培养箱 内培养 ， 长 生 至对数 生长期 时进行 细胞 分组 。细胞分 成 ４组 ， １ 第 组， 即对 照组 ， 加入 １ｍ 的培养 基 ； ２组 ， ｌ 第 加人 等 体 积 ５ ｇＬ的壳聚糖 ； ３ ， ０ｍ ／ 第 组 加入等 体积 的 １０ｍｇ ０ ／
讨糖 基 转移 酶 与肿 瘤 细胞 浸 润转 移 能 力 的关 系 ， 以
［ 基金项 目］国家 自然科 学基金 资助项 目（０ ７ ４ ２ ３６ ０ ６ ） ［ 作者简 介】沈 力（ ９ ４ ） 男 ， １ ８ ～ ， 硕士研 究生 ； 吴士 良（ 通讯作者 ） 教授 ， 士生导师 ， － ａ ： ｉ ｎｗ ＠ｈｔ ａ ． ｏ ， 博 Ｅ ｍ ｉ ｓ ｌ ｇ ｕ ｏ ｉ ｃｉ ｌｈｉ ａ ｍ ｌ ｎ
［ Ｇ ｌ－ｉ ＭＭＣ ７ ２ ｅ ｎ ｎ ５ ９ｃｌｌ ｅｗ ｓ ｉｅｅｔＴ ｅｇ ｃｓｌ ｉ ５ ９ｃｌ ａ — ３ ａ ／ ｎＳ ３ Ｔ －７ １ｃｌ ｌ ｅａ ｄＡ ４ ｅｌｉ ａ ｆ ｒｎ． ｈ ｌ ｏｙ ｔ ｎｉ Ａ ４ ｅｌ ｗ ｓｉ ｌｉ ｎ ｄｆ ｙ ａｏ ｎ ｓ ｎ ｈｂｔ ｙｔｅｃ ｉ ｓｎｔｒ ｇ ｈｂｔ ｇ ｈ ｘ ｒｓｉ ｆ ｐ ａ Ａ Ｔ ｎ ３ ａ ７ Ｉ ｗ ｓ ｏｄｆｒ ｒｓ ｉｉ ｄｂ ｈｔ ａ ｏ ｈｉ ｉｉｎ ｅｅｐｅｓ ｎｏ Ｇ ｌ ｅ ２ａｄ［ Ｇ ｌ ．ｔ ａ ｇｏ ｅ— ｅ ｈ ｏ ｈｕ ｎ ｉ ｔ ｏ ｐ Ｎ ３ Ｔ ｏｐ
见 图 １ 。
Ｔ ｉ ｌＭ— Ｖ 逆 转 录 酶 ， Ｎ Ｐ Ｍ Ｘ，５ ×Ｍ— ｒ ｏ ， ＭＬ ｚ ｄＴ Ｉ
ＭＬ 缓 冲液 ，０×Ｐ Ｒ 缓 冲液 ， Ｃ 等均 购 自 Ｉ— Ｖ １ Ｃ Ｍｇ １ ｎ ｖｔ ｇｎ公 司 ， 碱 基 随机 引物 购 自 Ｔ Ｋ Ｒ ｉｏｅ ｒ 六 ａ ａ ａ公 司 ， Ｔｑ Ｎ 酶购 自上 海捷 瑞生 物 科技 有 限公 司 。 ａＤ Ａ
ＧｌＡＴ ａ ｃ２和 １ Ｇ ｌ７仅微弱表达 ， Ｎ ３ ａ ３ Ｔ 加药后作用不 明显 ； 肺癌细 胞株 中 ｐ Ｇ ｌＡ Ｔ ｐ ａ ｃ ２和 ［ Ｇ ｌ７均有所 表达 ， Ｎ ３ ａ ３ Ｔ 加入不 同
浓度 的壳 聚糖之后 ，ｐ ａ Ａ Ｔ ｐ Ｇ ｌ ｃ２和 ［ Ｇ ｌ７的表达均受到抑制 ， 随着壳 聚糖浓度 的增 加 ， 制作 用越 明显。结论 ： Ｎ ３ ａＴ ３ 且 抑 肝癌细胞株 Ｓ ＭＭＣ７ ２ －７ １和肺 癌细胞株 Ａ ４ ｐ ａ Ａ Ｔ ５９ｐ Ｇ ｌ ｃ２和 ［ Ｇ Ｉ－ Ｎ ３ Ａ ／的表达 不 同， 聚糖能够 抑制 肺癌细 胞株 Ａ ４ ３ Ｔ 壳 ５９ 中的糖基转移酶 ｐ Ｇ ｌＡ Ｔ ｐ ａ ｃ２和 １ Ｇ ｌ７的表达 ， Ｎ ３ ａ ３ Ｔ 从而抑制 了糖基化 作用 ， 对肺癌 的预防和治疗具有一定 的价值 。