Hepa 1-6小鼠肝癌细胞株使用说明
藤茶复方对肝癌Hepa1-6的实验研究
藤茶复方对肝癌Hepa1-6的实验研究摘要】目的：观察藤茶复方在体内外对肝癌Hepa1-6的影响作用。
方法：采用皮下接种肝癌HEPA1-6实体瘤模型观察藤茶复方体内的抑瘤作用；应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法研究藤茶复方对肝癌HEPA1-6细胞体外增殖的影响。
结果：藤茶复方对肝癌HEPA1-6有较强的体外增殖抑制作用，且剂量依赖性明显，抑制率随着药物浓度增大而增大，72h半数抑制浓度IC50为49.34μg/ml；藤茶复方能抑制肝癌HEPA1-6实体瘤小鼠的肿瘤生长，高、中剂量组抑制率分别为54.3%和48.8%。
与模型对照组相比均有显著差异（P<0.01）。
结论：藤茶复方在体外对肝癌HEPA1-6细胞有明显的抑制作用；在体内对肝癌HEPA1-6肿瘤的生长有明显的抑制作用。
【关键词】藤茶复方；抗肿瘤；HEPA1-6；四甲基偶氮唑蓝【中图分类号】R73-3 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）26-0195-02藤茶复方主要是由藤茶提取物和肿节风提取物组成，藤茶提取物是从葡萄科蛇葡萄属的显齿蛇葡萄(Ampelopsis grossedentata(Hand-Mazz)W.T.Wang)中提取得到，本实验室经超声波提取后其蛇葡萄素含量达80.2%[1]，肿节风提取物是从金粟兰科植物草珊瑚（Sarcandra glabra(Thunb．)Nakai）的干燥全株提取得到，这两种药材均广泛分布于我国长江流域以南的省区，我省有丰富的植物资源[2]。
为了更好的利用和开发我省的药物资源，本研究选用藤茶和肿节风的提取物组成复方，在前期的抗肿瘤研究基础上，我们又进行了藤茶复方在体内外对肝癌HEPA1-6抗肿瘤作用的实验研究。
现报道如下：1.材料与方法1.1 试验药物藤茶复方：由本实验室分别从藤茶和肿节风药材中超声提取得到提取物，藤茶提取物用高效液相色谱法测定其蛇葡萄素含量达80.2%，肿节风提取物用高效液相色谱法测定其迷迭香酸含量为0.0754%[3]，然后按一定比例混合组成。
染料木黄酮对小鼠肝癌高淋巴转移细胞株HepA-H的抑制作用
染料木黄酮对小鼠肝癌高淋巴转移细胞株HepA-H的抑制作用阮姝琴;李继承【期刊名称】《营养学报》【年(卷),期】2006(28)1【摘要】目的:研究染料木黄酮(genistein,Gen)对腹水型小鼠肝癌高淋巴转移细胞株HepA-H的抑制作用及其机制。
方法:MTT法检测Gen对HepA-H的增殖抑制作用。
应用电镜、琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术检测Gen诱导的HepA-H细胞凋亡。
同时,将HepA-H皮下接种于NIH小鼠的足垫,Gen混悬于2%的卵磷脂中,从细胞接种的D2起,每日以100或200mg/(kgbw.d)腹腔给药,D15取淋巴结观察,并计算转移率。
TUNEL法检测淋巴结内凋亡的HepA-H细胞,并计算凋亡指数。
结果:Gen在体外对HepA-H细胞具有良好的增殖抑制作用,呈量效、时效关系,并能诱导HepA-H细胞凋亡;在体内能减少荷瘤动物肿瘤体积和抑制肿瘤淋巴转移,给药组凋亡指数明显高于对照组(P<0.01)。
结论:Gen能明显抑制HepA-H肝癌细胞增殖和淋巴转移,其作用机制可能与诱导细胞凋亡有关。
【总页数】5页(P66-70)【关键词】染料木黄酮;凋亡;肿瘤;淋巴转移【作者】阮姝琴;李继承【作者单位】浙江大学细胞生物学研究所【正文语种】中文【中图分类】R151.44【相关文献】1.凝溶胶蛋白表达稳定下调的小鼠肝癌高淋巴道转移力Hca-F细胞株的构建 [J], 王绍清;唐建武;孙明忠;刘淑清;王波2.以凝溶胶蛋白为靶点的超声造影剂对小鼠腹水型肝癌高淋巴转移细胞株摄取的影响 [J], 何垚; 杨龙; 袁建军; 朱好辉; 邵黎阳3.高、低淋巴道转移能力小鼠肝癌细胞株抑制性消减杂交文库的构建 [J], 崔晓楠;唐建武;侯力;宋波;班丽英4.金雀异黄素对不同淋巴转移能力的小鼠肝癌细胞株的抑制作用 [J], 阮姝琴;李继承5.染料木黄酮对致敏小鼠引流淋巴结细胞因子的抑制作用 [J], 丛林;曾耀英;蔡小嫦;杨蓉娅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
CpG-ODN对荷瘤鼠的治疗作用
CpG-ODN对荷瘤鼠的治疗作用朱林波;傅庆国【摘要】目的探讨含CpG序列的寡脱氧核糖核苷酸(CpG-ODN)对小鼠肝癌移植瘤的治疗作用.方法体外培养小鼠肝癌细胞Hepa 1-6,建立小鼠肝癌移植瘤模型,分为生理盐水对照组和CpG-ODN治疗组,瘤旁皮下分别给予0.9%NaCl注射液、CpG-ODN治疗,测量移植瘤的大小,死亡后剥离瘤体称重并解剖观察肿瘤转移情况及生存情况.ELISA法测免疫小鼠血清中的细胞因子IFN-γ、趋化性细胞因子CXCL-9、CXCL-10的水平.结果 8次治疗后,CpG-ODN治疗组瘤重抑制率和体积抑制率分别为69.5%和75.8%,肿瘤重量及体积均显著小于生理盐水对照组(P<0.01).CpG-ODN治疗组小鼠的生存时间显著长于对照组小鼠(P<0.01),其中两只获得长期无瘤生存.CpG-ODN治疗组血清IFN-γ、CXCL-9、CXCL-10水平均显著高于生理盐水对照组(P<0.01).结论 CpG-ODN对肝癌移植瘤小鼠显示出良好的抑瘤效应,荷瘤小鼠生存期得到显著延长,血清中的细胞因子IFN-γ、趋化性细胞因子CXCL-9、CXCL-10的水平显著升高与其诱导的抗肿瘤免疫相关.【期刊名称】《江西医药》【年(卷),期】2011(046)007【总页数】3页(P602-604)【关键词】CpG-ODN;肿瘤;免疫治疗【作者】朱林波;傅庆国【作者单位】315211,宁波,浙江省宁波大学医学院;浙江省宁波市第二医院肿瘤外科【正文语种】中文【中图分类】R-332CpG-ODN（oligodeoxynucleotide containing CpG motifs），是一类以非甲基化胞嘧啶和鸟嘌呤核苷酸（CpG）为核心的寡聚脱氧核苷酸，能非特异性地激活机体的免疫功能，尤其是细胞免疫功能，其作为免疫调节剂和免疫佐剂正成为当前研究的一大热点[1，2]。
本实验运用对小鼠免疫功能具有刺激作用的CpG-ODN，对接种了小鼠肝癌细胞Hepa 1-6的荷瘤小鼠进行治疗，观察肿瘤的生长情况，以探讨CpG-ODN对小鼠肝癌的免疫治疗效果，检测实验小鼠血清中细胞因子IFN-γ、趋化因子CXCL-9和CXCL-10的水平，进一步证实CpG-ODN发挥作用可能涉及的机制。
四正柏生物 小鼠IL-6 ELISA试剂盒说明书
REV20190712仅供研究，不用于临床诊断。
客服热线: 400-7060-959﹡技术支持邮箱: **************公司官网: 目录简介 ........................................................................................................................................................... - 3 -检测原理 ................................................................................................................................................... - 3 -试剂盒组分 ............................................................................................................................................... - 4 -储存条件 ................................................................................................................................................... - 5 -其他实验材料(不提供，但可协助购买) : ............................................................................................. - 5 -注意事项 ................................................................................................................................................... - 5 -样本收集处理及保存方法 ....................................................................................................................... - 6 -试剂准备 ................................................................................................................................................... - 6 -操作步骤 ................................................................................................................................................... - 8 -操作流程图 ............................................................................................................................................... - 8 -操作要点提示 ........................................................................................................................................... - 9 -结果判断 ................................................................................................................................................... - 9 -结果重复性 ............................................................................................................................................. - 10 -灵敏度 ..................................................................................................................................................... - 10 -特异性 ..................................................................................................................................................... - 10 -参考文献 ................................................................................................................................................. - 10 -该产品由北京四正柏生物科技有限公司研制。
丹皮酚对HepA荷瘤小鼠免疫调节和抑瘤作用研究
丹皮酚对HepA荷瘤小鼠免疫调节和抑瘤作用研究孙国平;沈玉先;张玲玲;周爱武;魏伟;徐叔云【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2003(019)002【摘要】目的研究丹皮酚(paeonol)的抗肿瘤作用及其机制.方法建立小鼠移植性肝癌HepA肿瘤模型,观察丹皮酚对肿瘤生长的影响.应用放射免疫法检测小鼠血清中IL-2及TNF-α含量,同时观察丹皮酚对小鼠脾细胞产生IL-2及腹腔巨噬细胞产生TNF-α的影响.结果丹皮酚对小鼠HepA肿瘤的生长有抑制作用,对IL-2及TNF-α的生成有促进作用.结论丹皮酚可能通过促进IL-2及TNF-α的生成而发挥抗肿瘤作用.【总页数】3页(P160-162)【作者】孙国平;沈玉先;张玲玲;周爱武;魏伟;徐叔云【作者单位】现在安徽医科大学第一附属医院肿瘤科,合肥,230032;安徽医科大学临床药理研究所,合肥,230022;安徽医科大学临床药理研究所,合肥,230022;安徽医科大学临床药理研究所,合肥,230022;安徽医科大学临床药理研究所,合肥,230022;安徽医科大学临床药理研究所,合肥,230022【正文语种】中文【中图分类】R284.1;R392.11;R73-354;R735.705【相关文献】1.半边旗提取物对HepA荷瘤小鼠的抑瘤作用及对免疫功能的影响 [J], 戴滨;崔燎;吴铁;邓亦峰;吴科锋2.补肾化瘀药对S180荷瘤小鼠抑瘤作用及免疫调节作用 [J], 王蓉蓉3.玉屏风散对Hepa1-6肝癌荷瘤小鼠免疫调节的影响 [J], 张露蓉;姚霏;江国荣4.桦褐孔菌醇提物对MFC胃癌荷瘤小鼠抑瘤作用及免疫调节的初步探讨 [J], 宋磊;姜波;周忠光5.双歧杆菌及其WPG对S_(180)荷瘤小鼠免疫调节和抑瘤作用研究 [J], 张宝元;马晓红;刘震;鲁杰;赵小元;郭良娟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
小鼠 IL-6 Elisa试剂盒
2.血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂；
Beijing BLKW Biotechnology Co., Ltd. Tel:010-57158602/52872342 blkwbio@
3.标本应清澈透明，检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除；
4.请勿使用溶血，高血脂或污染的标本检测，否则结果将不准确。
Hirano, T. et al. (1986) Nature 324:73.
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ELISA Kit for the Quantitative Analysis of Mouse IL-6
Introduction
Interleukin 6 (IL-6) is a multifunctional protein that plays important roles in host defense, acute phase reactions, immune responses, hematopoiesis and differentiation of nervous system. The IL-6 gene product is a single chain protein with a molecular mass ranging from 21 to 28 kDa, depending on the cellular source.IL-6 proteins are expressed by variety of cells, such as T cells, macrophages, fibroblasts, hepatocytes, vascular endothelial cells. Since IL-6 plays a wide variety of biological functions, it is also known as interferonβ2 (IFN-β2), B cell stimulating factor-2 (BSF-2), hybridoma growth factor, hepatocyte stimulating factor, cytotoxic T-cell differentiation factor, or macrophage & granulocyte inducer (MGI-2A).
湖南省长望浏宁四市县区2012届高三年级联考
湖南省长望浏宁四市县区2012届高三年级联考理科综合能力试题时量:150分钟总分:300分考试范围：高考范围；本卷分第Ⅰ卷（选择题）和第Ⅱ卷（非选择题）两部分。
本试卷共21小题，每小题6分，共126分。
合题目要求的以下数据可供解题时参考：可能用到的相对原子质量： H－1 C－12 N－14 O－16 Zn－65 S－32 Fe－56Ⅰ卷（选择题共126分）一、选择题（本大题共13小题，每小题6分。
在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的。
）1．预防传染病的疫苗家族中增加的第三代疫苗——DNA疫苗，它们是由病原微生物中的一段表达抗原的基因制成，这段基因编码的产物仅仅引起机体的免疫反应。
关于DNA疫苗的叙述不正确的是A．DNA疫苗导入人体能够产生特异性免疫B．导入人体的DNA疫苗在体内直接产生抗体，起到免疫作用C．DNA疫苗的接种可以达到预防特定微生物感染的目的D．DNA疫苗接种后引起人体产生的抗体是由浆细胞合成的2．下表是实际测得的某运动员在训练过程中的三项生理指标的数据，下列分析错误的是A．三项生理指标中，实测数据基本正常的有甲、乙、丙B．胰岛素在血糖调节过程中发挥着比较关键的作用C．三项生理指标的调节过程中，下丘脑直接参与的是甲、乙、丙D．缓冲物质NaH2PO4/Na2HPO4对维持血液pH的稳定有重要作用3．下列关于科学实验叙述正确的是：A．通过不同体积的琼脂块模拟实验证明了琼脂块体积的大小与物质运输速率成正比B．用猪血红细胞提取制备细胞膜，采集血液时须加入生理盐水避免血液凝固C．用鸡血细胞提取DNA，加蒸馏水有利于细胞快速破裂，加2mol/L的NaCl溶液有利于DNA溶解D．用人口腔上皮细胞做“观察DNA和RNA在细胞中的分布”实验时，需先对细胞进行盐酸水解，然后用甲基绿、吡罗红染色剂分别给涂片进行染色4．研究不同的光强、温度对植物光合作用和呼吸作用的影响，实验结果如图所示。
下列有关分析正确的是A．光强小于1时，温度是光合作用的主要限制因素B．光强大于7时，35℃条件下有氧呼吸酶的活性最低C．光强大于7时，25℃条件下植物合成有机物的速率最大D．光强小于7时，15℃条件下植物产生氧气的速率最大5．在某岛屿上相互隔绝的甲、乙两个水潭中，都生活着小型淡水鱼——虹鳉。
小鼠肝窦内皮细胞使用说明
小鼠肝窦内皮细胞小鼠肝窦内皮细胞产品说明：为使客户能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。
派瑞金提供的小鼠肝窦内皮细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。
研发的小鼠肝窦内皮细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。
同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。
小鼠肝窦内皮细胞注意事项：1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。
3. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。
培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。
4. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。
5. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。
小鼠肝窦内皮细胞产品简介：产品名称：小鼠肝窦内皮细胞（Mouse liver sinusoidal endothelial cells, LSEC）组织来源：小鼠肝组织产品规格：5×105cells / 25cm2培养瓶小鼠肝窦内皮细胞细胞简介：小鼠肝窦内皮细胞细胞分离自正常小鼠肝组织，肝窦内皮细胞是肝非实质细胞的主要细胞群，具有物质转运、吞噬、抗原提呈、免疫耐受等功能。
肝在遭到多种病原侵袭时，肝窦内皮细胞窗孔逐渐减少或消失，内皮下基膜形成，产生类似于连续型毛细血管的结构，这一过程称为肝窦毛细血管化。
它由多种因素引起，其过程极复杂，在多种肝病的发病前期阶段均有出现，近年来受到广泛关注。
两种方法建立小鼠原位肝癌模型的比较
两种方法建立小鼠原位肝癌模型的比较摘要】目的比较建立小鼠原位肝癌模型的两种方法的优劣。
方法分别采用肝脏原位注射细胞法和尾静脉高压水流动力学注射法建立小鼠原位肝癌模型，对两组小鼠肝脏的成瘤情况进行比较。
结果两组小鼠均能在短期内成瘤，且成瘤率高。
结论尾静脉高压水流动力学注射法比原位注射细胞法更容易操作，小鼠存活率高，肝脏成瘤更均匀。
【关键词】原位肝癌模型高压水流动力学注射【中图分类号】R73-3 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）14-0382-02原发性肝细胞肝癌是我国乃至全球范围内的研究热点，而原位肝癌小鼠模型是进行原发性肝细胞肝癌基础研究和临床研究的重要工具。
目前原位肝癌模型主要采用化学诱导法（DEN），但是该方法建立模型成瘤的时间比较长，大概需要6-8个月，导致研究的周期很长。
本文尝试了两种比较快速地建立小鼠原位肝癌模型的方法--肝脏原位注射细胞法和尾静脉高压水流动力学注射法，并对这两种方法建立的小鼠模型进行了比较。
1 实验材料及方法1.1 实验动物与试剂C57BL/6小鼠7-8周，雄性，20只,购自上海斯莱克实验动物有限公司。
Hepa1-6细胞株购自中科院上海细胞库。
DMEM高糖培养基，胎牛血清，购自上海英潍捷基公司。
水合氯醛、碘伏购自国药集团。
注射器，手术器械、缝合线、针领自苏州大学材料供应中心。
1.2 方法1.2.1 细胞悬液制备 Hepa 1-6在37℃、5 % CO2 的细胞培养箱中培养，取对数生长期细胞,0.25%胰蛋白酶消化后,收集于15mL离心管中，用PBS调整细胞悬液浓度至5×107/mL用于原位注射细胞法,每只小鼠注射20uL。
用PBS调整细胞悬液浓度至5×105/mL 用于尾静脉高压水流动力学注射法每只小鼠注射2mL。
1.2.2 小鼠分组 20只7-8周龄的C57BL/6雄性小鼠分为2组，第1组10只进行肝脏原位注射细胞建立模型，第2组10只采用尾静脉高压水流动力学注射的方法建立模型。
《Hepal-6肝癌细胞系所致肌肉减少症小鼠动物模型的建立及早期切除肿瘤对肌肉减少症模型的影响》
《Hepal-6肝癌细胞系所致肌肉减少症小鼠动物模型的建立及早期切除肿瘤对肌肉减少症模型的影响》一、引言随着癌症的日益普遍，研究癌症及其并发症的治疗方法已成为当前重要的科学问题。
肝癌是一种常见且危害极大的癌症，而其导致的肌肉减少症（Cachexia）更是对患者的生命质量造成严重影响。
为了更好地研究肝癌及其并发症，建立一种可靠的动物模型显得尤为重要。
本文旨在探讨Hepal-6肝癌细胞系所致肌肉减少症小鼠动物模型的建立方法，并分析早期切除肿瘤对肌肉减少症模型的影响。
二、Hepal-6肝癌细胞系所致肌肉减少症小鼠动物模型的建立1. 实验材料与方法（1）实验材料：Hepal-6肝癌细胞系、小鼠、实验所需试剂等。
（2）模型建立方法：通过注射Hepal-6肝癌细胞至小鼠体内，诱导小鼠发生肝癌，进而观察小鼠体重、肌肉质量等指标的变化，以建立肌肉减少症小鼠模型。
2. 实验结果（1）Hepal-6肝癌细胞系在小鼠体内成功种植，形成肝癌。
（2）随着肝癌的发展，小鼠体重和肌肉质量逐渐下降，符合肌肉减少症的特征。
（3）成功建立了Hepal-6肝癌细胞系所致肌肉减少症小鼠动物模型。
三、早期切除肿瘤对肌肉减少症模型的影响1. 实验设计（1）分组：将小鼠分为两组，一组为肝癌发展组（对照组），另一组为早期切除肿瘤组（实验组）。
（2）实验方法：对照组小鼠任其肝癌自然发展，实验组小鼠在肝癌早期进行肿瘤切除手术。
（3）观察指标：比较两组小鼠的生存期、体重、肌肉质量等指标的变化。
2. 实验结果与分析（1）早期切除肿瘤的小鼠在生存期上明显优于对照组，表明早期干预可有效延长小鼠生存期。
（2）实验组小鼠的体重和肌肉质量在术后逐渐恢复，而对照组小鼠的体重和肌肉质量持续下降。
这表明早期切除肿瘤可有效改善肌肉减少症的症状。
（3）通过对两组小鼠的病理学检查，发现实验组小鼠的肝癌细胞增殖速度减缓，肿瘤复发率降低。
这进一步证实了早期切除肿瘤对改善肌肉减少症模型的重要性。
Hepa1-6 细胞使用说明书
Hepa1-6细胞使用说明书细胞基本信息产品货号YC-A005细胞名称Hepa1-6中文名称小鼠肝癌细胞细胞形态上皮样，贴壁细胞传代比例1:3~1:6培养体系90%DMEM+10%FBS源井细胞培养未加双抗，客户可视实际情况选择添加。
冻存液体系50%DMEM+40%FBS+10%DMSO特殊备注无细胞接收1)冻存细胞：如果是干冰运输的冻存细胞，收到后请立即转入液氮储存或短暂（24H)放至-80℃冰箱保存，或直接进行细胞复苏。
2)活细胞：如果是T25瓶活细胞运输，收到后用75%的酒精对T25瓶外表面进行消毒，之后放在5%CO2、37℃的细胞培养箱静置2h，静置后取出细胞瓶在显微镜下观察细胞贴壁情况和细胞汇合度，分别在200X和40X下各拍2个不同视野的细胞拍照记录。
如果汇合度达到80%以上的传代密度，可以进行传代操作，如果细胞汇合度没有达80%以上不够传代，可以将细胞瓶内的培养基吸出在50ml离心管中并标记该细胞专用培养基后备用，保留8-10ml继续培养至可传代。
注意：收到细胞后，活细胞首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否漏液、浑浊等现象。
冻存细胞若发现干冰已挥发完、冻存管瓶盖脱落、破损等异常情况，请务必拍照保留，并于收货24h内与我们联系（电话：400-688-9033；https://）。
细胞复苏1)准备工作：将完全培养液置37℃水浴锅预热30分钟，随后将冻存的细胞从液氮中取出，转移到-80℃冰箱，放置数分钟让残余液氮挥发；2)在超净台内用吸管吸取6-7mL完全培养液至15mL离心管中；3)将细胞从-80℃冰箱取出暂时放置于干冰里，复苏时稍稍甩动，去除残留的干冰和液氮，再迅速用镊子夹住盖子放入37℃水浴中快速晃动（注意：水不能没过盖子），使其在1分钟左右完全融化；4)在超净台内，用酒精棉球擦拭冻存管外壁消毒，稍稍晾干。
用单道移液器将所有融化的细胞悬液转至提前准备好的完全培养液中，盖上盖子，1100rpm室温离心4分钟收集细胞；5)超净台内小心吸弃上清，用单道移液器吸取1mL新鲜完全培养液重悬细胞至单细胞悬液，再转移至装有4mL完全培养液的T25cm2培养瓶中，写上细胞名称、复苏日期、代次，放置37℃、5%CO2饱和湿度培养箱内培养。
金线莲多糖对Hep1-6细胞活性的影响
金线莲多糖对Hep1-6细胞活性的影响陆婷婷;潘裕添【摘要】通过采用MTS法、流式细胞术法以及构建RAW264.7/Hep1-6细胞共培养模型检测经不同浓度(0、125、250、500、1000、2000μg/mL)金线莲多糖(Anoectochilus roxburghii Polysaccharides,APS)处理的RAW264.7细胞和Hep1-6细胞的增殖及周期情况,研究APS对Hep1-6细胞生长的影响.直接使用APS处理Hep1-6细胞,发现不同浓度APS对Hep1-6细胞增殖无抑制作用,且对其周期无影响.由共培养模型可知,不同浓度APS先作用于RAW264.7细胞24 h后,将RAW264.7细胞及其培养液与Hep1-6细胞共培养24 h后,0、125、500μg/mL试验组与不加药无RAW264.7空白对照组相比,Hep1-6细胞受到一定抑制作用,细胞毒性为1级.125、500μg/mL试验组与不加药含RAW264.7对照组相比,Hep1-6细胞具有显著抑制(P<0.01),但2000μg/mL试验组中Hep1-6细胞生长率高于对照组.APS直接作用于Hep1-6对其活性无影响,而RAW264.7与Hepl-6共培养后,RAW264.7可以抑制Hepl-6的生长,加APS处理RAW264.7后再与Hepl-6共培养,一定浓度范围内可以进一步抑制Hepl-6的生长,但过高浓度的APS反而对共培养的Hepl-6生长有一定促进作用.【期刊名称】《宜宾学院学报》【年(卷),期】2019(019)006【总页数】5页(P112-115,120)【关键词】金线莲多糖;Hep1-6;细胞活性;MTS;流式细胞术;细胞共培养【作者】陆婷婷;潘裕添【作者单位】闽南师范大学菌物产业工程技术中心,福建漳州363000;闽南师范大学菌物产业工程技术中心,福建漳州363000【正文语种】中文【中图分类】Q813.1+1肝癌是我国常见恶性肿瘤之一，现已经成为我国主要的公共卫生问题，随着人口老龄化加速，同时伴随着环境和生活方式的转变，预计在未来几十年内，我国肝癌的发病和死亡人数将继续呈上升趋势[1-2].金线莲（Anoectochilusroxburghii(Wall.)Lindl）常用于治疗糖尿病、高尿酸等，素有“药王”之称[3]，其主要化学成分包括金线莲多糖（APS）、黄酮、氨基酸及矿物质元素等[4].APS作为金线莲的主要活性物质，具有抗肿瘤、抗氧化、提高人体免疫力等药理作用.但目前对于APS研究多在其提取工艺优化、抗糖尿病及抗氧化活性研究，且临床用于治疗疾病的金线莲药物大多为金线莲复合物[5].国内外有关APS在肝癌治疗方面的研究较少，暂未见相关文献报道.本实验通过培养巨噬细胞（RAW264.7）和小鼠肝癌细胞（Hep1-6），将不同浓度APS分别作用于RAW264.7、Hep1-6，并使用MTS法、流式细胞术以及建立RAW264.7/Hep1-6细胞共培养模型探究APS对Hep1-6活性的影响，为今后扩大金线莲资源利用及肝癌治疗提供实验依据.1 材料与方法1.1 实验材料RAW264.7及Hep1-6：购于中国科学院上海生命科学研究所细胞资源中心. APS：实验室自主提取、分离，经菌物产业工程技术中心鉴定.1.2 实验仪器与试剂AUY120型电子分析天平（SHIMADZU公司）；CO 2培养箱（ESCO公司）；倒置显微镜（OLYMPUS公司）；HF safe生物安全柜（Heal Force公司）；Infinite M200 PRO全波长酶标仪（TECAN公司）；Flow Sight量化成像分析流式细胞仪（Merck Millipore公司）；Centrifuge 5810R（eppendorf公司）. RPMI Medium 1640、胎牛血清（FBS）；胰蛋白酶；CellTiter 96 Aqueous One Solution Cell Proliferation Assay（Nalgene）；DPBS（博士德生物）；其他生物试剂均为常规试剂.1.3 实验方法1.3.1 MTS法检测APS对细胞增殖的影响10%RPMI-1640培养基制备：90%RPMI-1640基础培养基+10%FBS+100单位链霉素+100单位青霉素.10%RPMI-1640培养基培养细胞至对数生长期，收集细胞，调整细胞浓度为7×104个/mL，以100 μL/孔接种于96孔培养板，平行接种6组，每组8个重复(A试)，37 °C、5%CO 2条件下培养24 h后，吸弃培养基，每孔加入100μL含不同浓度梯度APS的新鲜培养基，作用浓度分别为0、125、250、500、1 000、2 000μg/mL，其中0μg/mL组为不加药对照组(A 0).同时做相同浓度梯度无细胞空白对照组(A空)，其中0μg/mL组为不加药无细胞对照组(A'0)，分别培养8 h、24 h、48 h后，避光每孔加入10 μL MTS，37°C孵育2 h，酶标仪490 nm波长下分别检测各组细胞的吸光度值，并计算细胞相对生长率：按上述实验方法处理RAW264.7及Hep1-6.1.3.2 流式细胞术对细胞周期的检测（1）细胞培养与收集10%RPMI-1640培养基培养细胞至对数生长期，选取长势良好细胞接种于60mm培养皿中继续培养24 h，待细胞贴壁吸弃培养基，按8 mL/皿加入含不同浓度APS的新培养基培养24 h，作用浓度为0、125、500、2 000 μg/mL(A试)，其中0 μg/mL为空白对照组(A 0)，收集细胞，调整细胞浓度为6×106个/mL，冰浴无菌PBS清洗，2 000 r/min离心2 min，吸弃上清，加入1 mL 70%冷冻乙醇吹匀，-20°C固定24 h.（2）细胞周期分析取固定细胞1 000 r/min离心5 min，吸弃上清，冰浴PBS清洗，再离心，每管加入100μL碘化吡啶染液并缓慢吹匀细胞，37°C避光孵育15 min，染色结束后立即在流式细胞仪488 nm激发光处检测红色荧光，软件分析数据并输出细胞周期结构图.按上述实验方法处理RAW264.7及Hep1-6.1.3.3 MTS法检测APS对RAW264.7/Hep1-6共培养细胞生长的影响（1）接种RAW264.7 10%RPMI-1640培养基传代培养RAW264.7，按5×104个/mL细胞、60μL/孔接种于E-Plate Insert 16中，平行接种4组，每组4个重复；在Receiver Plate 16中每孔加入130μL培养基；再将E-Plate insert放入Receiver Plate 16中，培养24 h.（2）加药培养时间到后，吸弃Receiver Plate 16中的培养基，按130μL/孔加入含不同浓度APS的新鲜培养基，作用浓度为0、125、500、2 000 μg/mL，每组4个重复.保留E-Plate Insert 16中的旧培养基，再加入含不同浓度APS的新鲜培养基，使E-Plate Insert 16终体积为90 μL/孔，终浓度分别为0、125、500、2 000μg/mL，4个重复，继续培养24 h.（3）接种Hepa1-610%RPMI-1640培养基传代培养Hepa1-6，按8×104个/mL细胞，100μL/孔接种于96孔板中，接种32孔，孔板周边孔按200μL/孔加入PBS，培养24 h. （4）共培养培养时间到后，将96孔板中的Hepa1-6细胞培养基全部吸弃，其中16个孔作为无RAW264.7对照组(A对)，按200 μL/孔加入含不同浓度APS（0、125、500、2 000 μg/mL）的新鲜培养基，各4个重复，其中0μg/mL组为不加药空白组(A 0)；其余16孔作为RAW264.7试验组(A试)，将Receiver Plate 16中的培养基按110μL/孔依次转移到各孔中，再将整个EPlate Insert 16（含孔中的培养基）直接放入对应孔中，同时，用Receiver Plate 16中每孔对应的剩余培养基将E-Plate Insert 16各孔补满至90μL/孔，继续培养24 h.（5）MTS检测取出96孔板，将E-Plate Insert 16移走，吸弃96孔板中的培养基，每孔加入200μL新鲜培养基，拍照（200×），按20μL/孔避光加入MTS，37°C孵育2 h，酶标仪490 nm波长下测吸光度值，并计算相对生长率RGR：2 实验结果2.1 APS对RAW264.7增殖的影响MTS法可以检测APS对RAW264.7正常增殖的影响，从而初步判断APS对RAW264.7是否具有抑制作用.由表1可知，APS作用8 h时，随APS浓度的增加，A试1、A试2、A试3、A试4、A试5组细胞RGR值较不加药空白对照组(A 0)均有所下降，细胞毒性为1级；作用24 h及48 h时，A试1、A试2、A试3、A试4、A试5组细胞RGR值较对照组均增加，细胞毒性为0级.2.2 APS对Hep1-6增殖的影响由表2可知，APS分别作用Hep1-6 8 h、24 h、48 h后，随着APS浓度的增加，A试1、A试2、A试3、A试4、A试5组细胞RGR值较不加药空白对照(A 0)组均增加，细胞毒性为0级.表1 APS对RAW264.7相对生长率的影响注：同组中不同浓度与空白对照组之间的显著性：★P＜0.05，★★P＜0.01；细胞相对生长率RGR≥100%时细胞毒性定为0级，≥80%定为1级，≥50%定为2级，≥30%定为3级，≥0定为4级；后表的注释相同.相对生长率/%t/h 8 24 48 A试1A试2A试3A试4A试595.6±3.2★104.5±6.2 107.8±5.2★A 0 100 100 100 98.2±4.2102.3±5.3★105.6±3.8 99.5±2.1 101.6±3.9 105.6±2.4 98.3±3.6★★105.6±2.9 108.3±2.9★★96.4±4.1 101.6±3.6 106.6±3.8表2 APS对Hep1-6相对生长率的影响114.3±7.8★115.6±3.3★106.4±3.9★t/h 8 24 48相对生长率/%A 0 100 100 100 A试1A试2A试3A试4A试5109.1±7.9★106.5±3.1 100.2±2.9 103.3±6.9108.0±2.6★102.7±3.2★105.4±7.7 111.9±3.7★103.4±2.8★★103.7±5.8113.8±5.7★★105.2±4.5★2.3 流式细胞术对RAW264.7周期的检测细胞周期的检测可以反映细胞生长情况.不同浓度APS作用于RAW264.7 24 h后，由表3可知A试1、A试2、A试3组细胞G0/G1、S、G2/M比例与空白对照组相比无明显变化，说明APS作用24 h后对RAW264.7周期无影响.2.4 流式细胞术对Hep1-6周期的检测表3 流式细胞术检测APS对RAW264.7周期影响数据表试验组细胞周期/%S A0 A试1 A试2 A试3 G0/G1 57.8 63.2 59.2 58.7 10.0 10.3 9.93 10.1 G2/M 20.7 17.5 18.7 18.5不同浓度APS作用于Hep1-6 24h后，由表4可知A试1、A试2、A试3组细胞G0/G1、S、G2/M比例与空白对照组相比无明显变化，说明APS作用24 h后对Hep1-6周期无影响.表4 流式细胞术检测APS对Hep1-6周期影响数据表细胞周期/%试验组S 13.4 13.6 11.2 12.1 A 0 A试1 A试2 A试3 G0/G1 9.2 47.8 46.8 52.1 G2/M 18.5 19.1 20.5 16.52.5 MTS法检测RAW264.7对Hep1-6生长的影响由表5可知，在无RAW264.7细胞对照组（A对）中，不同浓度APS直接作用于Hep1-6后细胞正常生长，且生长率均大于不加药对照组（A 0）；用不同浓度APS先作用于RAW264.7 24 h，再将RAW264.7（含培养液）与Hep1-6共培养（A试），与不加药无RAW264.7对照组A 0组相比较，试验组A 0、A 1、A 2中Hep1-6生长受到一定的抑制作用，细胞毒性为1级；在试验组中，A 1、A2与对照组A 0相比较，Hep1-6生长率受到显著抑制（P＜0.01），A 3组细胞生长率反而高于对照组A 0组.表5 MTS法检测RAW264.7对Hep1-6生长的影响相对生长率/%A对A试A 0A 1 A 2 A 3 100.00±0.00 101.91±3.11 110.00±2.09 102.85±2.06 88.32±1.9785.59±1.32★★84.56±1.52★★95.69±2.733 结语人们在20世纪50年代发现真菌多糖在免疫调节方面的作用，之后随着对多糖结构和功能的深入研究，发现植物多糖也具有免疫调节作用，可以激活淋巴细胞、巨噬细胞、NK细胞等免疫细胞，促进多种细胞因子释放，在抗肿瘤方面也取得了不错的进展.Yonas等[6]研究发现，黄芪多糖能够促进肺癌患者体内CD3、CD4、CD8以及CD4/CD8高表达，并且可以刺激巨噬细胞释放TNF-α、IFN-γ等细胞因子，从而起抗肿瘤作用.张多强等[7]研究发现枸杞多糖抑制Hep1-6细胞增殖，并诱导细胞发生自噬和凋亡.巨噬细胞是人体免疫调节的一道重要屏障[8]，在外界刺激下会产生NO、TNF-α、IL-1β等促炎因子[9]且发生表型的改变[10]，从而影响巨噬细胞的免疫调节能力.本实验利用MTS法及细胞流式法检测APS对RAW264.7活性的影响，结果表明不同浓度APS对细胞活性无显著影响，初步判断APS对RAW264.7免疫调节能力无影响.本实验采用相同实验方法处理Hep1-6，结果表明APS对细胞活性无影响.本实验进一步设计共培养实验检测RAW264.7对Hep1-6生长影响，与不加药无RAW264.7细胞对照组相比较发现先用不同浓度APS处理RAW264.7后再与Hep1-6共培养，中低浓度试验组以及零浓度组中Hep1-6生长受到一定抑制.与不加药但加RAW264.7对照组相比，中低浓度试验组细胞具有显著抑制（P＜0.01），高浓度试验组细胞反而高于对照组.可初步判断RAW264.7与Hepl-6共培养后，RAW264.7可以抑制Hepl-6的生长，加APS处理RAW264.7后再与Hepl-6共培养，一定浓度范围内可以进一步抑制Hepl-6的生长，过高浓度的APS反而对共培养的Hepl-6生长有一定促进作用.机体中出现肿瘤细胞后，自身免疫细胞会将其视为“异己”成分并清除，但仍有肿瘤细胞能通过改变自身表面抗原修饰并改变肿瘤微环境来逃避机体的免疫作用，继而分裂生长，在机体内不断增殖[11]，这表明肿瘤细胞具有免疫逃逸机制.在APS 作用下，Hep1-6可能改变其表面相关抗原及主要组织相容性抗原系统（MHC）的表达，从而躲避APS作用.目前，共培养体系常用于模拟体内微环境，便于更好的观察细胞之间相互作用以及探讨药物的作用机制[12].傅修涛[13]发现巨噬细胞与人肝癌细胞共培养后，细胞形态发生改变，运动迁移及侵袭能力加强.张驰[14]建立巨噬细胞与胃癌干细胞共培养体系，结果发现胃癌干细胞受到巨噬细胞的抑制出现数量减少和克隆能力降低.建立RAW264.7与Hep1-6共培养体系，能够对探索APS对Hep1-6活性影响及其机制提供一定的帮助.综上所述，Hep1-6生长所受到的影响是由APS和RAW264.7共同引起还是单由RAW264.7引起还有待通过分子水平实验进一步研究.参考文献：【相关文献】[1]TORRE L A,BRAY F,SIEGEL R L,et al.Global cancer statistic,2012[J].CA CancerJClin,2015,65(2):87-108.[2]CHEN W,ZHENG R,BAADE P D,et al.Cancer statistics in China,2015[J].CA Cancer JClin,2016,66(2):115-132.[3] 洪琳,邵清松,周爱存,等.金线莲产业现状及可持续发展对策[J].中国中药杂志,2016,41(3):553-558.[4] 郭慧慧,蒋元斌,林丛发,等.金线莲研究进展[J].福建农业科技,2016(03):55-59.[5] 吴丽丽,梁燕,许光辉.金线莲化学成分、药理作用及临床应用研究概述[J].海峡药学,2014(10):34-37.[6]GETACHEW Y,CUSIMANO F A,JAMESL P,et al.The role of intrahepatic CD3+/CD4-/CD8-double negative T(DN T)cellsin enhanced acetaminophen toxicity[J].Toxicology&Applied Pharmacology,2014,280(2):264-271.[7] 张多强,辛国军,丁洋,等.枸杞多糖对HepG2肝癌细胞自噬与细胞凋亡的影响[J].中成药,2017(12):2600-2602.[8] 刘栩岑,李玉洁,王娅杰,等.参莲提取物对PM(2.5)染毒RAW264.7细胞损伤的保护作用[J].中国中药杂志,2015,40(10):1977-1983.[9] 代艳文,袁丁,万静枝,等.竹节参总皂苷通过NF-κB通路对LPS致RAW264.7细胞炎症的保护作用研究[J].中国中药杂志,2014,39(11):2076.[10]李康,郭强,王翠妮,等.M1和M2型巨噬细胞表型的比较分析[J].现代免疫学,2008,28(3):177-183.[11]阎永贞,那可,魏晓东,等.肿瘤免疫逃逸机制的研究进展[J].复旦学报(医学版),2013,40(5):619-624.[12]常艳,魏伟.细胞共培养及其应用的研究进展[J].中国临床药理学与治疗学,2009,14(7):827-832.[13]傅修涛.巨噬细胞在肝癌细胞上皮—间质样表型转化中的作用及其机制的研究[D].上海:复旦大学,2012.[14]张驰.共培养体系下巨噬细胞对胃癌干细胞影响的研究[D].大连:大连医科大学,2016.。
hepa1-6细胞
hepa1-6细胞
Hepa1-6，小鼠肝癌细胞，是C57/L小鼠中产生的BW7756小鼠肝癌细胞的衍生株，鼠痘病毒（ectromelia virus，ECTV）阴性，常用于小鼠肝癌动物模型的建立。
该细胞通过几种肝脏特异表达因子筛选（例如白蛋白、α1抗胰蛋白酶、α甲胎蛋白、淀粉酶），确认能在补充地塞米松和硒的无血清培养基中生长。
Hepa1-6是一种上皮样单层生长的贴壁细胞，高浓度可致动物成瘤，推荐配合基质胶注射。
该细胞与ExPASy中Hepa 1-6细胞的STR数据匹配率为96.15%，经本库种属鉴定结果无误，且支原体检测阴性。
Hepa1-6细推荐使用DMEM培养基（1.5g/L NaHCO3），含10%胎牛血清，推荐添加1%丙酮酸钠，建议每周2-3次更换新鲜培养基，按1:3至1:4进行传代，室温胰酶消化2-3分钟，传代周期通常为2-3天。
总结：
1. 贴壁生长，上皮细胞样，
2. 可致动物成瘤，推荐配合基质胶注射
3.推荐采用DMEM培养基（1.5g/L NaHCO3），添加1%丙酮酸钠
4. 传代比例1:3至1:4，每2-3天传代一次。
肝癌细胞来源细胞外囊泡通过诱导外周血单个核细胞分泌IL-6抑制T细胞功能
陈永强等肝癌细胞来源细胞外囊泡通过诱导外周血单个核细胞分泌IL-6抑制T细胞功能第23期肝癌细胞来源细胞外囊泡通过诱导外周血单个核细胞分泌IL-6抑制T细胞功能①陈永强②郑璐王鹏王露张玥陈艳红周娟牛国平（徐州市中心医院检验科，徐州221009）中图分类号R392.12R735.7文献标志码A文章编号1000-484X（2021）23-2871-05［摘要］目的：探讨肝癌细胞来源的细胞外囊泡（EVs）体外对外周血单个核细胞（PBMCs）中T细胞功能的影响。
方法：采用淋巴细胞分离液从C57BL/6小鼠和健康人外周血中分离PBMCs，在体外含IL-2、抗CD3和抗CD28抗体的完全培养基培养条件下加入不同浓度的EVs或联合IL-6中和抗体进行诱导培养72h。
流式细胞仪和ELISA分别检测IFN-γ+T细胞的比例及上清中IL-6和IFN-γ的浓度。
结果：肝癌细胞来源的EVs直径主要分布于150~1000nm之间，体外可以显著促进野生型小鼠和健康人PBMCs分泌IL-6，并显著抑制T细胞分泌IFN-γ。
然而，在IL-6缺陷小鼠PBMCs或加入IL-6中和抗体时，小鼠和人肝癌细胞来源的EVs对T细胞分泌IFN-γ无抑制作用。
结论：肝癌细胞来源的EVs通过诱导PBMCs分泌IL-6发挥抑制T细胞功能。
［关键词］肝癌；细胞外囊泡；T细胞；IL-6Hepatocellular carcinoma cell-derived extracellular vesicles induced IL-6 attenuate T cell responseCHEN Yong-Qiang，ZHENG Lu，WANG Peng，WANG Lu，ZHANG Yue，CHEN Yan-Hong，ZHOU Juan，NIU Guo-Ping.Department of Clinical Laboratory，Xuzhou Central Hospital，Xuzhou221009，China ［Abstract］Objective：To explore the effects of hepatocellular carcinoma cell-derived extracellular vesicles（EVs）on T cells function in vitro.Methods：Peripheral blood mononuclear cells（PBMCs）were isolated from C57BL/6mice or human peripheral blood using Ficoll-Hypaque gradient centrifugation.The PBMCs cultivated in T cells complete medium containing IL-2and anti-CD3/CD28 monoclonal antibody and treated with different concentration of EVs or IL-6neutralizing antibody for72h in vitro.The ratio of IFN-γ+T cells and cytokine secretion were determined by flow cytometry and ELISA.Results：The diameter of EVs derived from hepa‐tocellular carcinoma cells was mainly distributed about150~1000nm，which can significantly promote the secretion of IL-6by wild-type mice and healthy human PBMCs and inhibit the secretion of IFN-γby T cells in vitro.However，EVs have no effect on the secre‐tion of IFN-γby T cells in IL-6-deficient mouse PBMCs or combined with IL-6neutralizing antibody group.Conclusion：Hepatocellu‐lar carcinoma cell-derived EVs can effectively inhibit the function of T cells via IL-6secreted by PBMCs.［Key words］Hepatocellular carcinoma；Extracellular vesicles；T cells；IL-6肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）在消化系统肿瘤中较为常见，其发生机制与病毒感染或慢性炎症等密切相关，特别是炎症因子IL-6与肝癌的发生、发展及患者预后关系密切［1］。
小鼠骨髓源肥大细胞外泌体对肝癌Hepa1-6细胞增殖、迁移和侵袭的影响
网络出版时间：2020 -8 -21 15 ：48 网络出版地址：htt p s ://k/s . c/ki. /et/kcms/deUi/34. 1065. R. 20200820. 1450. 015. html小鼠骨髓源肥大细胞外泌体对肝癌Hera1F 细胞增殖、迁移和侵袭的影响王小冬1>2，杨木清*2，刘 斌1>2，邓现语2，刘颖2，音洋洋2，李济宇1>22020 -04 -22 接收基金项目：国家自然科学基金（编号：31741087）;上海浦江人才计划项目（编号:18PJ1409300）作者单位:1安徽医科大学上海临床学院，上海2000722上海市第十人民医院普外科，上海200072作者简介:王小冬，男，硕士研究生；李济宇，博士，主任医师，博士生导师，责任作者,E-mail ：leejiyu@ sina. com摘要目的探讨小鼠骨髓源肥大细胞外泌体对肝癌He-pa1B 细胞增殖、迁移和侵袭的影响。
方法 使用IP-C 和 SCF 细胞因子体外培养小鼠骨髓源肥大细胞,通过甲苯胺蓝染色、免疫荧光和流式细胞检测鉴定。
超速离心法提取肥大 细胞外泌体,通过透射电镜、粒径分析和Western blot 检测外泌体的形态、直径和标志蛋白。
用不同浓度的外泌体（5、10、20 #y/ml ）处理肝癌Hepa1-6细胞，采用CCK-8实验、Edu 实 验、划痕实验和Tm/sweU 实验分析其对肝癌细胞增殖、迁移 和侵袭的影响。
结果骨髓源肥大细胞外泌体呈圆形或椭圆形，粒径大多在30 -150 nm ,表达外泌体标志蛋白CD63、A/n 和TSG101。
CCK-C 和Edu 实验结果示肥大细胞外泌体能够促进Hepa1B 细胞的增殖,且其促进作用具有浓度依赖 性;划痕实验结果示肥大细胞外泌体可增强Hepa1E 细胞的迁移能力；Tm/sweU 实验结果示肥大细胞外泌体能够提高Hepa1E 细胞的侵袭能力。
《Hepal-6肝癌细胞系所致肌肉减少症小鼠动物模型的建立及早期切除肿瘤对肌肉减少症模型的影响》
《Hepal-6肝癌细胞系所致肌肉减少症小鼠动物模型的建立及早期切除肿瘤对肌肉减少症模型的影响》一、引言肝癌是一种常见的恶性肿瘤，其病程中常常伴随着肌肉质量的减少和肌肉功能的下降，这一现象被称为肌肉减少症。
为了更好地研究肝癌与肌肉减少症之间的关系，以及评估早期肿瘤切除对肌肉减少症的影响，我们建立了Hepal-6肝癌细胞系所致的肌肉减少症小鼠动物模型。
本文将详细介绍该模型的建立过程及其早期切除肿瘤对肌肉减少症模型的影响。
二、Hepal-6肝癌细胞系所致肌肉减少症小鼠动物模型的建立1. 材料与方法（1）实验材料：Hepal-6肝癌细胞系、小鼠、培养基、手术器械等。
（2）实验方法：将Hepal-6肝癌细胞系注射至小鼠体内，模拟肝癌发生过程。
通过定期观察和检测，建立肌肉减少症模型。
2. 实验过程与结果（1）细胞培养与注射：在体外培养Hepal-6细胞，当细胞生长至一定数量时，将其注射至小鼠体内。
（2）模型建立：注射后的小鼠经过一段时间的生长和发育，形成肝癌并伴随肌肉质量的减少。
（3）模型评估：通过体重、肌肉质量、肝功能等指标评估模型的成功率。
三、早期切除肿瘤对肌肉减少症模型的影响1. 实验设计为了研究早期切除肿瘤对肌肉减少症模型的影响，我们将小鼠随机分为两组，一组在肝癌形成早期进行肿瘤切除，另一组作为对照组，不进行肿瘤切除。
2. 实验过程与结果（1）手术过程：对实验组小鼠进行肿瘤切除手术，对照组小鼠不进行手术。
（2）观察与检测：定期观察两组小鼠的体重、肌肉质量、肝功能等指标，评估肿瘤切除对肌肉减少症的影响。
（3）结果分析：通过统计分析发现，早期切除肿瘤的小鼠在术后恢复期间，肌肉质量得到一定程度的恢复，且肝功能有所改善。
这表明早期切除肿瘤对缓解肌肉减少症具有积极的影响。
四、讨论本研究成功建立了Hepal-6肝癌细胞系所致的肌肉减少症小鼠动物模型，并研究了早期切除肿瘤对肌肉减少症模型的影响。
实验结果表明，早期切除肿瘤有助于缓解肌肉质量的减少和改善肝功能。
Hepa1-6细胞的最佳培养条件研究
Hepa1-6细胞的最佳培养条件研究杨慈清;李小英【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2010(038)028【摘要】[目的]探索Hepa1-6细胞的最佳培养条件. [方法]以小鼠Hepa1-6肝癌细胞为材料,采用正交试验设计研究RPMI1640和DMEM 2种不同培养基及细胞接种密度、血清浓度、双抗浓度、D-Hanks漂洗次数、胰蛋白酶浓度和消化时间6个不同因素对Hepa1-6传代培养的影响;根据细胞在6个时间点的生长状况评分,筛选出Hepa1-6细胞的最佳培养条件.[结果]Hepa 1-6细胞在含有20%血清的RPMI-1640培养基,接种密度为4×104个/cm2,100 U/ml的双抗浓度,贴壁率在90%以上时,D-Hanks漂洗1次,0.5%胰蛋白酶消化2 min,传代效果最好.[结论]通过正交设计筛选,为Hepa1-6细胞体外培养探索出最佳培养条件.【总页数】3页(P15507-15509)【作者】杨慈清;李小英【作者单位】新乡医学院生命科学技术系,河南新乡,453003;新乡医学院生命科学技术系,河南新乡,453003【正文语种】中文【中图分类】S188【相关文献】1.乳酸菌发酵剂中的细胞高密度培养条件及最佳离心条件探索 [J], 任亚妮;车振明;黄莉2.以干细胞特异性转录因子诱导小鼠肝癌细胞Hepa1-6重新编程的研究 [J], 宋波;彭新荣;刘韬;周秀梅;瞿存业;钱其军3.小鼠成体肝脏前体细胞最佳培养条件探索 [J], 王飞;董凌月;安威4.口蹄疫悬浮细胞最佳培养条件的研究 [J], 脱浩亮;马志强;马爱荣;王珍5.四逆汤对hepa1-6肝癌细胞的抑瘤作用和细胞周期影响的体内外实验研究 [J], 陈嘉璐;李湧健因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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Hepa1-6小鼠肝癌细胞株使用说明
细胞名称：Hepa1-6
中文名称：小鼠肝癌细胞
动物种别：小鼠
组织来源：肝癌
细胞形态：上皮样
生长特性：贴壁
传代方式：0.25%胰酶消化（可以含EDTA）
冻存方法：常规培养基+20%FBS+5%DMSO
供应限制：仅供研究之用。
细胞特性：
Hepa1-6小鼠肝癌细胞株源自C57/L小鼠中引发的BW7756肝癌。
Hepa1-6小鼠肝癌细胞株可以在无血清的培养基中繁殖，培养基成分是：DMEM,75%;Waymouth’s MAB87/3培养基，25%。
添加3x10-8M硒。
测试发现肢骨发育畸形畸形病毒(鼠痘)阴性。
培养条件：
DMEM培养基，90%；胎牛血清，10%。
气相：空气，95%；二氧化碳，5%。
温度：37摄氏度。
运输方法：
常温发货，收到细胞后，将瓶身消毒，弃掉旧培养基，添加新鲜培养基，确认细胞无异后，80-100%汇合度传代培养。
REFERENCE
Darlington GJ.Liver cell lines.Methods Enzymol.151:19-38,1987.PubMed:3431441 Darlington GJ,et al.Expression of liver phenotypes in cultured mouse hepatoma cells.J.Natl.Cancer Inst.64:809-819,1980.PubMed:6102619。