结肠癌 COLO 耐药株的构建及其与肿瘤干细胞的关系重点
肿瘤干细胞与耐药
肿瘤干细胞与耐药本综述由解螺旋学员Dr.Feng负责整理（2017年12月）肿瘤的耐药与肿瘤干细胞（Cancer Stem Cells, CSCs）密切相关，CSCs主要通过以下几个手段实现抵抗肿瘤药物治疗。
1.肿瘤干细胞亚群的休眠CSCs休眠指的是细胞保持重新进入活跃的增殖状态的能力，但处于非分裂状态。
化疗药物主要通过靶向活跃分裂的细胞来起作用。
因此，CSCs的休眠是避免癌症治疗并赋予肿瘤细胞治疗抗性的有效手段。
休眠状态下CSCs的激活驱动了抗癌治疗后肿瘤的复发。
Touil 等人在结肠直肠癌的研究中发现了肿瘤耐药的特性可从休眠的CSCs获得。
在这项研究中，抗5-氟尿嘧啶的癌细胞显示了和休眠CSCs的类似的表型，这样的表型是基于标记物，自我更新和肿瘤传播潜能来鉴定的，明确观察到了部分肿瘤干细胞在肿瘤细胞暴露于化疗药物时进入休眠状态。
这一过程先涉及到c-Yes酪氨酸激酶的活化及其与c-Yes / YAP复合物的分离，进而导致相关蛋白（YAP）的核表达水平降低。
这项研究指出作为转录协同激活因子的核YAP参与干细胞自我更新，阻止细胞处于非分裂休眠状态。
1因此，YAP核水平的下降可能是CSCs休眠的表现，CSCs通过转录共激活、侵袭细胞周期和凋亡途径等诱导休眠。
最近在胶质母细胞瘤中的一项研究进一步支持了这一假说，Campos等人将化学疗法中含有休眠细胞和非休眠细胞的肿瘤细胞暴露于化学治疗后，发现休眠细胞的活化频率更高2。
2.药物外排转运导致癌症患者抗药性的重要因素归因于药物外排转运蛋白在耐药性CSCs中的表达增加。
这些药物外排转运蛋白主要位于细胞质膜中，正常情况下它们的作用是保护细胞免受有害细胞毒性剂的侵害。
药物外排转运蛋白可有效防止细胞毒素和代谢废物产物堆积，特别是在血脑屏障，肝，肾和肠组织中3。
在癌症中，CSC对治疗的抵抗力部分地来自转运蛋白的上调表达，因为跨越质膜的药物流出增加，相应地就降低了细胞内药物浓度4。
肿瘤干细胞与肿瘤多药耐药的关系_朱言亮
肿瘤干细胞与肿瘤多药耐药的关系朱言亮综述 陈龙邦审校作者单位:210002南京军区总医院肿瘤内科 关键词:肿瘤干细胞;多药耐药;靶向治疗 中图分类号:R 730.2 文献标识码:B 文章编号:1001-5930(2009)02-0218-03近来,越来越多的研究结果表明肿瘤干细胞是肿瘤发生的始动细胞,并且可能是肿瘤耐药的主要原因。
有关肿瘤干细胞的研究已经取得了很大的进展,目前已在白血病及实体肿瘤如:乳腺、大脑、肺、前列腺及肝脏中分离出肿瘤干细胞。
这些研究表明,肿瘤干细胞与正常干细胞类似,数目极少,通常处于静止状态,具有异质性及自我更新能力,对肿瘤的进展起重要作用;肿瘤的复发和转移是肿瘤干细胞逃脱药物杀伤作用的结果,肿瘤的多药耐药性可能是干细胞赋予肿瘤的能力。
而现有治疗肿瘤的方法主要是针对肿瘤组织内的大多数细胞,而不是肿瘤干细胞,从而使肿瘤治疗的生存率得不到显著的提高。
本文就肿瘤的多药耐药性和肿瘤干细胞之间的关系作一综述。
1 干细胞与肿瘤干细胞1.1 干细胞与肿瘤干细胞的概念干细胞是指具有自我更新能力和多向分化潜能的一类未分化的细胞群体。
Bonnet 等[1]在研究白血病时发现,象正常造血系统一样,在白血病细胞内也存在着分化等级不同的细胞,而仅有一小部分细胞保留着克隆形成的能力。
实体肿瘤与白血病类似,是个由多种类型的细胞构成的异质性的混合体。
若不加以干预的话,这个混合体可以进一步生长并在远处部位形成与原发肿瘤类似的继发性肿瘤。
这一特性提示在白血病和实体肿瘤内存在着具有干细胞性质的细胞群,是肿瘤生长和转移的原动力,因此把这群细胞命名为肿瘤干细胞。
1.2 肿瘤干细胞存在的证据1997年Bonne t 等首先从急性髓性白血病(acu te m ye l o i d leuke m i a ,AM L)细胞中分离出肿瘤干细胞。
他们在研究中发现,从急性髓性白血病患者血液中分离出不同类型的白血病细胞,然后移植到NOD /SCID 小鼠,只有表面标记为CD 34+、CD38-、T hy+的瘤细胞(占AM L 细胞的0.2%,被认为是白血病干细胞)具有致瘤性,能使小鼠生长出肿瘤,而缺乏这种表型的肿瘤细胞即使以千倍以上的数目接种于NOD /SCID 小鼠也不能形成肿瘤。
耐药细胞株构建
耐药细胞株构建实验
实验目的：采用体外低浓度梯度递增联合大剂量间断冲击方法诱导肿瘤细胞对药物产生耐药性实验材料：
试剂：培养基（GIBCO），血清（CIBCO）
仪器：超净工作台、CO2培养箱、生物倒置显微镜{晶莱生物}
实验内容与方法：
1.体外低浓度梯度递增联合大剂量间断冲击方法诱导细胞的耐药性
2.MTT法测定药物对亲本细胞和耐药细胞的IC50，计算耐药指数
实验信息：
1．生长状况良好的亲本细胞株，并提供细胞特性，培养条件及相关注意事项。
2．诱导剂
服务周期：6个月
结果提交：提交实验报告书（耐药指数、实验试剂与设备、实验过程、结果分析、原始数据、细胞图片等）、耐药细胞株、亲本细胞株。
肿瘤干细胞在人结肠癌细胞株HT29耐奥沙利铂中的作用探讨
１ ． Ｄａ ｐ ａ ｒ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｇｅ ｎ ｅ ｒ ａ ｌ Ｓ ｕ ｅ 珂 ，Ａｒ ｍｅ ｄ Ｐｏ ｌ ｉ ｃ ｅ Ｃｏ ｒ ｐ ｓ Ｈｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ ｏ ｆ Ｈｅ ＇ ｎ ａ ｎ ，Ｈｅ ｎ ａ ｎ Ｐ ｒ ｏ ｖ ｉ ｎ ｃ ｅ ，Ｚ ｈ ｅ ｎ ｇ ｚ ｈ ｏ ｕ ４ ５ ０ ０ ５ ２ ，
（ １ ２ Ｉ ｚ ｍｏ ｌ ／ Ｌ ）的作用 下 ， ＨＴ ２ ９ ／ Ｌ — Ｏ ＨＰ的增 殖能 力显 著 高 于 ＨＴ ２ ９（ Ｐ＜０ ． ０ １ ） ，但 是 同未 经 Ｌ — Ｏ ＨＰ作 用 的 Ｈ Ｔ ２ ９
相 比差异 无 统计 学 意 义 （ Ｐ＞０ 。 ０ ５ ） 。Ｈ Ｔ ２ ９和 Ｈ Ｔ ２ ９ 几一 ＯＨ Ｐ对 Ｌ 一 ０ ＨＰ的 Ｉ Ｃ ５ ０ 分别为 １ ２ ． １ ｌ ￣ ｍｏ ｌ ／ Ｌ和 １ ３ ８ ． ４ ｐ ， ｍ ｏ １ ］
药 的机 制 之一 。 【 关键 词】结肠 癌 ； 耐药； 奥 沙利 铂 ； 肿 瘤 干细胞
【 中图分 类号］ Ｒ ７ ３ ５ ． ３ ５
【 文 献标 识 码】 Ａ
【 文章 编 号】 １ ６ ７ ３ — ７ ２ １ ０ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ７ （ ｂ ） 一 ０ ０ ０ ７ — ０ ４
２ ０ １ ３ 年 ７ 月 第 １ ０ 人结肠癌细胞株 ＨＴ ２ ９ 耐奥沙利铂 中的作 用探讨
王怀志 １ 赵 国强 石 献洲 汪 海 张 建 李 怀洲 。 ▲
肿瘤干细胞学说与结直肠癌的形成和多药耐药
一
、
肿 瘤 干细 胞 学说
瘤， 示Ｓ 提 Ｐ细 胞 口能 具 有 某 些肿 瘤 ｆ 细 胞样 特 性 ． 由于其 丁 且 具 有较 明确 的表型 标记 和分 离方 法 ，因 此 可为肿 瘤 干细 胞 的 识 别和 分离 提 供途 径 。对 推 动肿 瘤 干细胞 的研究 和 发展 具有 重要 意 义 ， 同时 为肿 瘤 治疗 提 供 了新 思路
Ｍｅｉｉ ｈ ｇ ａ Ｉｓｔｔ ｏ ｉｅｔｅＤｓａｅ Ｓ ａｇａ （ｏｏ ： ｄｃ ｅ Ｓ ａ ｈ ｔｕ ｇｓ ｖ ｉ ｓ， ｈ ｎｈ ２ ｏ ｏ） ｎ ｎ ｉ ｎ ｉ ｅ ｆＤ ｉ ｅ ｉ
Ｃｏ ｒ ｓ ｏ ｄ ｎ ｅｔ ：Ｒ ｈｈ ａ Ｅｍａｌ ｚｒ ｎ ｎ ｉｅ ｓ ． ｒ ｅ ｐ ｎ ｅ ｃ ｏ ＡＮ Ｚ ｉ ｕ ． ｉ —ａ ＠ｏ ｌ ． ｅ ： ｎ ｈ ｎ
ｃ ｌ ｅ ｒ ｒ ｖｄ ｓＵ ｅ ａｈ ａ ｅｒ ｃ ｇ ｉｅｔ ｅ ｍｅ ｈ ｎ ｓ ｏ ｈ ｍｏｅ ｉ ａ ｃ ． Ｉ ｅ ｅ ｔ ｅ ｍ， ｍａ ｙ ｓ ｉｎ ｉ ｓ ｅｌ ｔ ｏ ｙ ｐ ｏ ｉ ｅ Ｓａｎ ｗ ｐ ｔ ｗ ｙ ｔ ｒ — ｏ ｎｚ ｃ ａ ｉｍ ｆ ｅ ｒ ｓｓ ｎ ｅ ｎ ｒ ｃ ｎ ａ ｓｈ ｏ ｅ ｈ ｃ ｔ ｙ ｎ ｃｅ ｔ ｔ ｓ ｈ ｖ ｏ ａｅ ａ ｃ ｒ ｔ ｍ ｅ ｌ ｆ ｍ ｏｏ ｅ ｔｌ ｕ ｒ ｉ ｕ ｓａ ｄ ｈ ｖ ｒｐ ｓ ｄ ｔ ｅｃ ｎ ｅ ｔｍ ｅｌ ｅ ｒ ｎ ｔ ｍｏ ｇ ｎ ｓｓ ａ ｅ ｉ ｌ ｔｄ ｃ ｎ ｅ ｅ ｃ ｌ ｏ ｃ ｌ ｒ ｃａ ｍｏ ｓ ｅ ｎ ａ ｅｐ ｏ ｏ ｅ ａ ｃ ｒｓ ｓ ｓ ｓｒ ｔ ｔｓ ｈ ｅ ｃ ｌ ｔ ｏ ｙ ｉ ｓｈ ｕ ｒ ｅ ｅ ｉ ｉ ａ ｄ ｃ ｅ ｒ ｓｓａ ｃ ， ｗｈｃ ｏ ｌ ｘ ｌ ｉ ｈ ｕ ｄ ｍｅ ｔ ｌ ａ ｓ ｓ ｏ ｍｏ ｅ ｕ ｒｎ ｅ ａｔ ｒｃ ｅ ｔ ｅ ａ ｙ Ｔ ｉ ｒｖ ｅ ｎ ｈ ｍｏ ｅ ｉ ｎ ｅ ｔ ｉｈ ｃ ｕｄ ｅ ｐ ａｎ ｔ ｅ ｆ ｎ ａ ｎ ａ ｕ ｅ ｆｔ ｃ ｕ ｒ ｒｃ ｒ ｃ ｆ ｈ ｍｏ ｈ ｒ ｐ ． ｈ ｓ ｅ ｉ ｗ ｅ ｅ ｄ ａ ｅ ｉ ｈ ｅａ ｉｎ ｈ ｐ ｂ ｔ ｅ ｎ ｃ ｎ ｅ ｔｍ ｅ ｌ ａ ｄ ｄ ｖ ｌ ｐ ｎ ｆ ｃ ｌｒ ｃａ ａ ｃ ｒ ａ ｄ ｍｕ ｉ ｒ ｇ ｒ ｓ ｔｎ ｅ ｅ ｌ ｄ ｗ ｔ ｔ ｅ ｒ ｌｔ ｓ ｉ ｅ ｗ ｅ ａ ｃ ｒ ｓｅ ｃ ｌ ｎ ｅ ｅｏ ｍｅ ｔ ｏ ｏｏ ｅ ｔｌ ｃ ｎ ｅ ｎ ｔ ｕ ｅ ｉ ａ ｃ ， ｈ ｏ ｓ ｄ ｓ
人结肠癌紫杉醇耐药细胞株的建立及耐药相关基因mRNA表达的研究
人结肠癌紫杉醇耐药细胞株的建立及耐药相关基因mRNA表达的研究陈一帆;张燕;王强;黄卫东;郭嘉义【摘要】目的建立紫杉醇耐药细胞株LoVo/Taxol,探讨结肠癌细胞紫杉醇获得性耐药的可能机制.方法反复用紫杉醇处理结肠癌LoVo细胞,诱导建立结肠癌紫杉醇耐药细胞株LoVo/Taxol;通过MTT法检测细胞药物敏感性,光学显微镜和透射电镜观察细胞形态学变化,流式细胞术检测细胞周期分布及细胞凋亡水平,实时荧光定量PCR法测定细胞中多药耐药基因MDR1、MRP1、LRP、GST-π和TopoⅡ的表达.结果建立的紫杉醇耐药细胞株LoVo/Taxol对紫杉醇的耐药指数为42,为高度耐药;对阿霉素及5-氟脲嘧啶也产生强烈的交叉耐药,耐药指数分别为796和187.相较于亲本细胞LoVo,LoVo/Taxol细胞形态发生明显的变化,G2/M期阻滞和细胞凋亡率明显降低(P<0.05).在五种经典的耐药相关蛋白中MRP1、MDR1基因mRNA的转录水平分别提高了37倍和2倍,LRP、GST-π基因mRNA的转录水平分别下降了11倍和3倍(P均<0.05),ToPo II基因转录水平无明显变化.结论成功建立的人结肠癌紫杉醇耐药细胞株LoVo/Taxol为典型的多药耐药细胞模型,其耐药机制可能与MRP1基因的过表达有关.%Objective To establish a paclitaxel resistant cell line LoVo/Taxol and to investigate the mechanisms of Taxol resistance in colon cancer cells.MethodsDrug-resistant cell line LoVo/Taxol was induced by exposing LoVo parent cells to moderate concentration of Taxol. The IC50 and resistant index(RI)to Taxol was determined by MTT assay.The morphological changes of LoVo and LoVo/Taxol was observed by fluorescence microscope and transmission electron microscopy,cell cycle distribution and apoptosis of cell lines were examined by flowcytometry while the mRNA expressions of mdr1,mrp1,lrp1,GST-πand TopoⅡgenes was detected by qRT-PCR.ResultsA paclitaxel-resistant human colon cancer cell line,LoVo/Taxol,was successfully established. Compared with the parent cell line LoVo,it was 42-fold resistant to paclitaxel,and 696 and 187-fold resistant to Doxorubicin and 5-fluorouracil,respectively(P<0.05). Moreover,the proportion of G2/M phase decreased significantly(P<0.05),meanwhile,the apoptosis rate ofLoVo/Taxol cells was also decreased significantly(P<0.01)than that of LoVo cells after treated with 1.5μmol·L-1 Taxol for 24h. Over-expression of MRP1 was associated with the development of drug resistance in LoVo/Taxol. ConclusionA stable and paclitaxel-resistant human colon cancer cell line LoVo/Taxol was successfully established and the mechanisms of its drug resistance might be related to the overexpression of the multidrug resistance-associated protein MRP1.【期刊名称】《宁夏医科大学学报》【年(卷),期】2017(039)005【总页数】6页(P545-549,封2)【关键词】紫杉醇;多药耐药;结肠癌;LoVo/Taxol细胞株;MRP1【作者】陈一帆;张燕;王强;黄卫东;郭嘉义【作者单位】宁夏医科大学基础医学院,银川 750004;宁夏医科大学基础医学院,银川 750004;宁夏医学科学技术研究所,银川 750004;宁夏医科大学基础医学院,银川750004;宁夏医学科学技术研究所,银川 750004【正文语种】中文【中图分类】R735.35紫杉醇（Paclitaxel，Taxol）是从短叶红豆杉（Taxus brevifolia）的树皮中提取得到的一种具有广谱抗癌作用的新型抗微管药物[1]，临床上主要用于治疗卵巢癌、乳腺癌，其对结肠癌[2-3]、子宫颈癌、肺癌和白血病等恶性肿瘤也有一定疗效。
肿瘤干细胞与肿瘤耐药机制
肿瘤干细胞与肿瘤耐药机制肿瘤干细胞，即是细胞在体内重塑过程当中，构成某自然精髓规律下生存的，胚胎发育及细胞再生方面起到关键作用的一类细胞。
也是形成肿瘤原初和转移部位的主要细胞。
肿瘤干细胞的存在，不仅对于肿瘤的形成和发展至关重要，还与肿瘤的耐药性直接相关。
为什么肿瘤干细胞是如此的重要？肿瘤干细胞可以自我更新，转化成其他肿瘤细胞，并且能够进行自我差异化，逐渐形成功能成熟的肿瘤细胞；在各种疾病状态下，都有着特殊的维持能力。
对于肿瘤的治疗，由于肿瘤干细胞自身的强大维持能力，使其在肿瘤治疗过程中能够长时间地存活下来，产生抗药性，因此很多肿瘤细胞往往难以被治疗。
因此，我们研究肿瘤干细胞能够为我们探讨更好的肿瘤治疗策略带来更多机遇。
肿瘤干细胞与肿瘤耐药机制对于肿瘤，在肿瘤治疗过程中出现的耐药现象是一个重要问题。
当前，治疗肿瘤的基本方法是手术、化学治疗和放射治疗。
与此同时，出现的耐药现象也在逐渐增多。
经过多年的实验研究，研究者们发现，肿瘤干细胞是导致肿瘤耐药的主要机制之一。
一方面，肿瘤干细胞会保持原来的抗药能力，不受化疗或放疗的影响，从而达到在治疗下死亡率较低的目的。
另一方面，肿瘤干细胞的代谢机制不同于常规肿瘤细胞，恶性肿瘤细胞的代谢物不仅具有维持了肿瘤干细胞生存的保护性功效，而且还起到肿瘤防御的作用。
更甚者，其微环境维持也可调节时间长短、伴随时间变化的基因表达，令其避免挑战的复杂途径，可以使耐药现象的发生更为常见。
治疗肿瘤耐药的措施对于肿瘤细胞的耐药性，我们可以从以下几方面的细节加以控制：一、提高化疗药物误杀肿瘤干细胞能力。
获得耐药基因的干扰，可用基于 CRISPR/Cas9 或 RNAi 的有效干预技术进行干扰，从而消除肿瘤干细胞的耐药机制。
二、通过基因编辑技术对肿瘤干细胞进行改造。
通过针对肿瘤干细胞基因编辑，如用工程 CRISPR 编辑技术来破坏肿瘤干细胞在难弥补基因和规律上的缺陷，从而提高化疗和放疗的效应。
结肠癌干细胞的筛选及其耐药性研究
结肠癌干细胞的筛选及其耐药性研究结肠癌干细胞是一小部分存在于结肠癌中具有自我更新、无限增殖和多项分化潜能的肿瘤干细胞。
许多研究已证实在包括结肠癌在内的多种实体瘤中存在肿瘤干细胞，它與结肠癌的复发、转移和治疗耐受有着密切的联系。
虽然癌干细胞在肿瘤细胞总数中只占很小比例，但是在肿瘤的起源、发展、转移以及复发等方面均有重要的作用。
本研究对结肠肿瘤干细胞的筛选及耐药性进行了探讨。
标签：肿瘤干细胞；筛选；耐药性1结肠癌干细胞的筛选1.1筛选方法肿瘤干细胞是肿瘤研究中的一大难题，其中最困难的是如何从肿瘤组织中分离出肿瘤干细胞。
目前，分离和纯化肿瘤干细胞的方法主要有三种，但各有各的优缺点。
一是无血清培养形成细胞球，亦是富集肿瘤干细胞的方荧；二是荧光染料法，但此种方法有一定的局限性；三是表面标志分子筛选法，又可分为流式细胞仪分选法和免疫磁珠分选法。
这两种方法均利用肿瘤干细胞表面特异的标志分子与带有标志的抗体结合，从而使其与非肿瘤干细胞分离。
1.2筛选过程采用干细胞球培养法筛选结肠癌干细胞时，要取生长状态良好的结肠癌细胞制成单细胞悬液并计数，取单个细胞放入肿瘤干细胞培养基中悬浮培养，每天晃动几次，防止细胞贴壁，待细胞球变大，亮度降低，结构变松散时用酶消化传代，取亲本及传代后细胞放入孔板中培养后，计算成球率。
取生长状态良好的结肠癌干细胞球置于含有牛血清的中培养，观察细胞贴壁分化情况进行磁珠分选。
磁珠分选后，采用流式细胞术检测分选后细胞中含有表面抗原分子细胞含量。
为了检测结肠癌细胞形成的癌细胞克隆球的抗原分子蛋白表达情况，接种后第6天克隆细胞球被采用免疫荧光检测。
将分选后的细胞分别接种于无血清培养基中，检测标记细胞的体外增殖能力。
1.3标志分子的功能及其在结肠癌干细胞筛选中的应用筛选结肠癌干细胞的标志分子大部分根据其表达水平而定，但标志分子在肿瘤干细胞中的功能尚不清楚。
尽管结肠癌一直被认为起源于肿瘤干细胞，但因缺乏可靠的生物学标记，直到最近这个假说才得以证实。
肿瘤干细胞的耐药机制研究进展
山东医药2019年第59卷第36期肿瘤干细胞的耐药机制研究进展王露瑶，吕娟，阮红杰(南京医科大学附属妇产医院/南京市妇幼保健院，南京210004)摘要:肿瘤干细胞(CSCs)理论认为肿瘤是异质性细胞群体，存在着一小部分类似于胚胎干细胞,具有无限自我更新和分裂能力的类干细胞，即CSCs,可以调控肿瘤的发生发展,通过自身的生物学特性和肿瘤微环境的保护作用而在肿瘤耐药中发挥作用。
细胞周期阻滞、DNA损伤耐受及DNA损伤修复、药物外排、上皮间质转化(EMT)等CSCs的生物学特性，低氧环境、肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)、慢性炎症等肿瘤微环境的特点，共同维持CSCs的干性特征，抑制化疗药物对CSCs的刺激作用,加大了肿瘤治疗的困难性。
由于其自身的生物学特性和肿瘤微环境保护作用，对常规的放化疗并不敏感，常常导致肿瘤治疗后的耐药及复发。
关键词：干细胞;肿瘤干细胞;肿瘤细胞;细胞周期;DNA损伤；DNA修复；上皮间质转化;肿瘤微环境;肿瘤相关doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2019.36.030中图分类号:R730.22文献标志码:A文章编号:1002-266X(2019)36-0111-04尽管目前的手术和放化疗能够减小肿瘤的体积和延长患者的生命，但肿瘤复发和多药耐药的发生仍是目前肿瘤治疗的两大障碍。
肿瘤干细胞(CSCs)理论认为,肿瘤是异质性细胞群体,存在着一小部分类似于胚胎干细胞、具有无限自我更新和分裂能力的类干细胞，调控肿瘤的发生发展［-3］。
常规的放化疗主要是针对普通的肿瘤细胞，而CSCs 对此并不敏感。
同时，随着放化疗的刺激作用及普通肿瘤细胞的清除,改变了CSCs的微环境,CSCs得到富集，增殖侵袭转移的能力进一步增强，并且对化疗药物表现出更强的耐药性,对药物的敏感性降低,甚至无反应，导致肿瘤的复发，说明CSCs在肿瘤耐药中发挥了重要作用。
对CSCs耐药机制的研究将有助于肿瘤治疗新思路的开拓。
耐药株构建问题回答
耐药株构建
耐药株构建是一种常见的实验方法，它可以用于研究细菌的耐药性和
抗菌药物的作用机制。
在构建耐药株的过程中，研究人员通常会利用
基因工程技术或者化学物质来改变细菌的基因组或者代谢途径，从而
使其对抗菌药物产生耐药性。
构建耐药株的方法有很多种，其中最常见的方法是利用基因工程技术。
这种方法通常需要先将目标基因克隆到一个载体中，然后将载体导入
到细菌中。
在细菌中，目标基因会被表达出来，并且对细菌的代谢途
径或者细胞壁结构产生影响，从而使细菌对抗菌药物产生耐药性。
除了基因工程技术，化学物质也可以用于构建耐药株。
例如，一些化
学物质可以抑制细菌的代谢途径或者细胞壁合成，从而使细菌对抗菌
药物产生耐药性。
这种方法通常比基因工程技术更简单，但是也更加
不可控，因为化学物质可能会对细菌产生不良影响，导致细菌的生长
受到抑制。
构建耐药株的应用非常广泛，它可以用于研究抗菌药物的作用机制，
评估新型抗菌药物的疗效，以及探究细菌的耐药性机制。
例如，研究
人员可以利用构建耐药株的方法来研究青霉素对链球菌的作用机制，
或者评估新型抗菌药物对金黄色葡萄球菌的疗效。
总之，构建耐药株是一种非常有用的实验方法，它可以用于研究细菌的耐药性和抗菌药物的作用机制。
在构建耐药株的过程中，研究人员需要注意安全问题，并且选择合适的方法和实验条件，以确保实验结果的准确性和可靠性。
肿瘤耐药机制经典实用
肺耐药蛋白（LRP）影响药物分布机制：
• 阻止某些以细胞核为效应点的药物通过核膜孔进入细胞核，并将进入细胞核
的药物转运到细胞质中。
• 进入细胞质中的药物可被转运到运输囊泡中，从而隔绝药物作用，并以胞吐
的方式排到细胞外。
• 并非只存在于肺部肿瘤中，广泛分布于正常组织，具有组织特异性，在直肠
（2） DNA损伤修复能力增强
肿瘤耐药机制
5、凋亡通路阻滞：内源性途径、外源性途径 6、肿瘤微环境介导的肿瘤耐药：黏附分子介导的 7、肿瘤干细胞 8、促生存信号被激活：表皮成长因子受体（EGFR）家族中HER2过表达——乳 腺癌预后不佳——靶向治疗药：曲妥珠单抗（赫赛汀） ……
肿瘤耐药机制
延缓多药耐药的途径
肿瘤耐药机制
4、发生在细胞核水平的耐药
（1）药物靶点的改变 ➢ 主要指拓扑异构酶Ⅱ（topoⅡ），是多种药物的靶酶，蒽环类药物、喜树 碱、鬼臼毒类等药物都以共价复合物形式稳定地与topoⅡ结合并抑制其活性,使 DNA断裂而致细胞凋亡。 ➢ 当肿瘤细胞内topoⅡ活性降低或含量减少时，减弱了以topoⅡ为靶点的药 物的细胞毒性，细胞对该类化疗药物产生耐药性。
要因素） P糖蛋白 （P-gP）
MDR相关蛋白 （MRP）
乳腺癌耐药蛋白 （BCRP）
❖P-gP是最早被发现的ABC转运蛋白，P-gP的高度表达也是最经典的耐药 机制。
MDR有 关的药物 转运泵
ABC转运体家族
肿瘤耐药机制
• 蒽环类抗生素，激酶抑制剂，植物碱，紫 杉烷类等是临床上常用的抗肿瘤药物，这些 都是P-gP的底物，而肿瘤细胞中P-gP的表达 往往受药物诱导，当肿瘤细胞受到化疗药物 的细胞毒作用的时候，作为一种保护性机制 能使P-gP高表达，因此这些化疗药物的失效 问题尤为突出。
肿瘤干细胞在人结肠癌细胞株HT29耐奥沙利铂中的作用探讨
肿瘤干细胞在人结肠癌细胞株HT29耐奥沙利铂中的作用探讨王怀志;赵国强;石献洲;汪海;张建;李怀洲【摘要】Objective To investigate the role of cancer stem cells(CSC)in the acquired resistance to Oxaliplatin (L-OHP)of human colon cancer cell line HT29.Methods L-OHP-resistant human colon cancer cell line HT29(HT29/L-OHP)was established in vitro by exposure to increased L-OHP concentration in cell culture medium.As2O3 was used to reverse the resistance of HT29/L-OHP.The proliferation and sensitivity to L-OHP ofHT29/L-OHP before and after treatment of As2O3 were tested using MTT assay.Real-time PCR was used to determine the expression of Sox-2,miR-200c and let-7 in HT29/L-OHP before and after treatment of As2O3.Results ①In the effects of L-OHP (12μmol/L),the growth rate of HT29/L-OHP was higher than that of HT29(P＜0.01).It was also indicated that HT29/L-OHP treated by L-OHP expressed similar proliferation to that of HT29 in the absence of L-OHP(P＞0.05).The IC50 of HT29 and HT29/L-OHP to L-OHP was 12.1μmol/L and 138.4μmol/L,the resistance index was11.44.②As2O3(0.20 mg/L)decreased the resistance of HT29/L-OHP to L-OHP,with reversed multiples and relative reversed eFFciency of 3.76 and 80.4％respectively.③Compared with HT29,HT29/L-OHP showed increased expression of Sox-2 [(0.072±0.038)vs(0.019±0.010)](P＜0.01)and decreased expression of miR-200c and let-7[(0.262±0.136)vs(0.726±0.289),(0.213±0.145)vs(0.642±0.268)respectively](P＜0.05).④Compared with HT29/L-OHP without treatment of As2O3,after treatment of As2O3,the expression of Sox-2 decreased[(0.032±0.012)vs(0.072±0.038)](P＜0.05)and the expression of miR-200c and let-7 increased [(0.367±0.256)vs (0.262±0.136),(0.3869±0.253)vs (0.213±0.145)respectively](P＜0.05).Conclusion CSC is a possible mechanism responsible for the acquired resistance of HT29/L-OHP to L-OHP.%目的探讨肿瘤干细胞(cancer stem cell,CSC)在人结肠癌细胞株HT29对奥沙利铂(L-OHP)产生获得性耐药中的作用.方法采用浓度递增法诱导产生人结肠癌耐奥沙利铂细胞株HT29/L-OHP.采用As2O3逆转HT29/L-OHP的耐药性.采用MTT法检测As2O3逆转前后HT29/L-OHP的增殖能力和对L-OHP的敏感性.采用实时荧光定量PCR检测As2O3逆转前后HT29/L-OHP中Sox-2、miR-200c和let-7的表达.结果①在L-OHP(12μmol/L)的作用下,HT29/L-OHP的增殖能力显著高于HT29(P＜0.01),但是同未经L-OHP作用的HT29相比差异无统计学意义(P＞0.05).HT29和HT29/L-OHP对L-OHP的IC50分别为12.1μmol/L和138.4 μmol/L,耐药指数为11.44.②0.20 mg/L的As2O3预处理后,降低了HT29/L-OHP对L-OHP的耐药性,逆转倍数为3.76,相对逆转效率为80.4％.③相对于HT29,HT29/L-OHP中Sox-2的表达显著增加[(0.072±0.038)比(0.019±0.010)](P＜0.01),而miR-200c和let-7的表达显著下降[(0.262±0.136)比(0.726±0.289),(0.213±0.145)比(0.642±0.268)](P＜0.05).④As2O3处理后,相对于未处理前,HT29/L-OHP中Sox-2的表达显著降低[(0.032±0.012)比(0.072±0.038)](P＜0.05),而miR-200c和let-7的表达显著升高[分别为(0.367±0.256)比(0.262±0.136),(0.3869±0.253)比(0.213±0.145)](P＜0.05).结论 CSC有可能是人结肠癌细胞株HT29产生L-OHP耐药的机制之一.【期刊名称】《中国医药导报》【年(卷),期】2013(010)020【总页数】4页(P7-9,13)【关键词】结肠癌;耐药;奥沙利铂;肿瘤干细胞【作者】王怀志;赵国强;石献洲;汪海;张建;李怀洲【作者单位】武警河南省总队医院普通外科,河南郑州450052;武警河南省总队医院普通外科,河南郑州450052;武警河南省总队医院普通外科,河南郑州450052;武警河南省总队医院普通外科,河南郑州450052;武警河南省总队医院普通外科,河南郑州450052;郑州大学基础医学院,河南郑州450052【正文语种】中文【中图分类】R735.35在我国，结肠癌的发病率和死亡率均较高[1－2]，因此，结肠癌的治疗对于民生具有重要的意义。
解读肿瘤耐药细胞株
解读肿瘤耐药细胞株肿瘤细胞对化疗药物产生耐药性是肿瘤治疗失败的重要因素之一。
迄今，人们主要利用体外建立MDR细胞模型来研究肿瘤产生耐药性的生物学及分子生物学变化。
耐药株机理肿瘤细胞对多种药物产生耐药的原因相当复杂。
肿瘤细胞的耐药可通过很多机制来实现，如细胞膜上的转运蛋白（如ABC转运蛋白和 P-gp 蛋白），以及高表达耐药基因（如MDR1 基因与 MRP 基因），或通过 DNA 损伤修复及抑制细胞凋亡等途径。
由多药耐药基因引起的耐药只是其中一种，这种基因产物是一种膜糖蛋白，它一旦与抗肿瘤药物结合，通过ATP提供能量，可以将药物泵出胞外，使细胞内药物浓度下降，从而表现出耐药现象。
目前发现许多肿瘤耐药细胞具有肿瘤干细胞特性，如人结肠癌 HT29 耐药株、卵巢癌 OVCAR-3、乳腺癌MCF-7、肺癌 H460 等。
肿瘤干细胞学说认为，肿瘤细胞起源于肿瘤干细胞，肿瘤干细胞具有自我更新、多向分化、恶性程度高等特点，肿瘤干细胞是肿瘤耐药的主要原因。
肿瘤细胞对化疗药物产生耐药是目前导致临床化疗失败的主要原因，成为目前阻碍肿瘤治疗的绊脚石。
因此，探索肿瘤细胞产生耐药的原因以及如何改善肿瘤细胞对化疗药物耐药仍是目前研究的热点和难点。
肿瘤细胞耐药的产生是一个复杂的过程，它的机制广泛牵涉到药物代谢学、病理学、生理学等多个学科，这就决定了肿瘤细胞对化疗药物产生耐药的机制是复杂的，因此体外建立化疗药物耐药细胞株仍然是研究肿瘤细胞耐药机制的重要方法。
耐药株建立方法体外建立肿瘤细胞耐药模型是研究肿瘤多药耐药（MDR）的重要手段。
目前已知的体外建立耐药细胞株主要有以下几种方式：大剂量药物冲击法、药物浓度递增法、药物浓度递增与大剂量药物冲击相结合法、转基因结合药物筛选法，也有人采用逆转录病毒转染法。
目前已经在多种肿瘤中建立了耐药模型，如肝癌、结肠癌、乳腺癌等。
其中药物浓度递增法和大剂量药物冲击法成为临床建立肿瘤细胞化疗耐药模型的常用方法。
肿瘤干细胞与肿瘤耐药性形成关联机制探索
肿瘤干细胞与肿瘤耐药性形成关联机制探索肿瘤耐药性一直是肿瘤治疗的主要难题之一。
传统的肿瘤治疗方法，如化疗和放疗，常常不能有效地根除肿瘤，因为肿瘤细胞存在一种耐药性，使得它们对治疗药物具有一定的抵抗能力。
而肿瘤干细胞的存在被认为是导致肿瘤耐药性的一个重要原因。
本文将探索肿瘤干细胞与肿瘤耐药性之间的关联机制。
首先，我们需要了解肿瘤干细胞的特点以及其在肿瘤发展中的作用。
肿瘤干细胞是一小部分存在于肿瘤组织中的细胞群体，它们具有自我更新和多向分化的能力，能够不断产生新的肿瘤细胞并维持肿瘤的生长。
与普通肿瘤细胞相比，肿瘤干细胞具有较强的增殖能力和生存能力，因此更难被现有的治疗手段消灭。
其次，肿瘤干细胞与肿瘤耐药性的关系需要进一步探索。
研究表明，肿瘤干细胞在肿瘤耐药性的形成中起着重要的作用。
首先，肿瘤干细胞具有较高的抗氧化能力，能够通过清除自由基来保护自身免受治疗药物的损伤。
其次，肿瘤干细胞可以通过调节细胞周期和DNA修复机制来降低药物对其的杀伤作用。
此外，肿瘤干细胞还能通过改变细胞外基质组成和细胞附着力来逃避治疗药物对其的影响。
所有这些因素共同作用，使得肿瘤干细胞能够在治疗药物的压力下存活和繁殖，从而导致肿瘤的耐药性。
进一步了解肿瘤干细胞形成肿瘤耐药性的机制，有助于开发新的治疗策略。
目前，一些研究已经表明，针对肿瘤干细胞的治疗可能是解决肿瘤耐药性问题的有效途径。
例如，通过干细胞特异性基因的靶向治疗，可以选择性地杀死肿瘤干细胞，从而减少肿瘤的复发和耐药性的产生。
此外，还可以利用肿瘤干细胞的特性来设计新的药物传递系统，将药物直接送达到肿瘤干细胞周围区域，提高治疗的效果。
然而，要实现针对肿瘤干细胞的治疗，仍然面临许多挑战。
首先，肿瘤干细胞的特征和功能仍然不完全清楚，进一步的研究需要从肿瘤样本中更好地分离和鉴定肿瘤干细胞。
其次，由于肿瘤干细胞的存在和多样性，针对不同类型和不同阶段的肿瘤干细胞的治疗策略也需要个体化和精准化。
人结肠癌耐药细胞系的建立及其耐药相关基因的研究的开题报告
人结肠癌耐药细胞系的建立及其耐药相关基因的研究的开题报告一、选题背景和意义结肠癌是一种高发的消化系统恶性肿瘤，其发病率和死亡率在全球居高不下。
目前，结肠癌治疗的效果受到多种因素的影响，其中最重要的是药物抗性。
由于肿瘤细胞的异质性和遗传变异性，使得药物治疗失效的情况比较普遍。
因此，研究结肠癌的耐药机制以及发现针对这些耐药机制的药物成为当前结肠癌治疗研究的重要方向。
二、研究内容和目标为了研究结肠癌的耐药机制，本项目旨在建立一个结肠癌耐药细胞系，并筛选出与其耐药相关的基因。
鉴定这些基因有助于提高预测药物治疗效果的准确性，并为开发新的治疗方案提供有力的理论支持。
具体研究内容包括：1. 筛选结肠癌耐药细胞系：通过药物筛选，从结肠癌细胞中筛选出耐药的细胞，并进行形态学和功能上的鉴定。
2. 检测耐药细胞系的基因表达谱：使用转录组技术对耐药细胞系和敏感细胞系的基因表达谱进行比较，鉴定与耐药相关的基因。
3. 确定耐药基因的功能：从耐药基因中选取几个重要的基因进行功能研究，包括基因敲除和表达增强实验。
4. 研究耐药基因的调控机制：通过分析耐药基因的调控机制，找到介导耐药的信号通路，并寻找可能的干预剂。
三、研究方法1. 筛选结肠癌耐药细胞系：构建不同药物浓度的药物库进行细胞筛选，筛选出最终耐药细胞系。
2. 检测耐药细胞系的基因表达谱：共提取耐药细胞系和敏感细胞系的RNA并建库，采用Illumina HiSeq高通量测序。
3. 确定耐药基因的功能：通过基因敲除和表达增强实验，研究耐药基因对细胞增殖、凋亡和迁移的影响。
4. 研究耐药基因的调控机制：通过Western blot、CHIP、Luciferase reporter等技术方法，找到介导耐药的信号通路，并寻找可能的干预剂。
四、预期成果1. 建立结肠癌耐药细胞系，并鉴定其耐药性。
2. 鉴定与结肠癌耐药相关的基因，并对这些基因进行生物学功能研究。
3. 分析与耐药基因相关的信号通路，找到可能的干预剂。
肿瘤干细胞的耐药性与耐药机制
肿瘤干细胞的耐药性与耐药机制保秋萍;李惠民【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2011(015)001【摘要】背景:肿瘤干细胞不仅与肿瘤的多药耐药性有密切的关系,而且有着复杂的多药耐药机制.目的:对肿瘤干细胞及其耐药性和耐药机制的关系进行总结,为肿瘤的临床治疗提供新的思路.方法:应用计算机检索FMJS和Pubmed西文数据库检索(2003/2010),以"cancer stem cell,multiple drug resistance,apoptosis,cell cycle"为检索词;用计算机检索万方数据库(2000/2010),CNKI数据库(2000-2010)以"肿瘤;肿瘤干细胞;多药耐药性"为关键词.共收集到中文文献56篇,外文文献372篇.排除发表时间早、重复及类似研究,纳入29篇符合标准的文献.结果与结论:对干细胞的研究帮助人们加深对肿瘤的发生、发展及转移的认识.肿瘤组织中可能存在一小部分肿瘤细胞,与正常干细胞一样具有自我更新和无限增殖的能力,但具有特殊的耐药机制.肿瘤干细胞与肿瘤的发生及治疗关系密切.但针对肿瘤干细胞复杂的多药耐药机制尚有待进一步研究.%BACKGROUND: Tumor stem cells not only associate with multidrug resistance in cancer, and have a complex multi-drug resistance OBJECTIVE: To review correlation of cancer stem cells to drug resistance and resistance mechanisms, and to provide new ideas for clinical therapy of tumor.METHODS: We searched PubMed Western database and FMJS database (2003-2010) with the key words of "cancer stem cell,multiple drug resistance, apoptosis, cell cycle". Wanfang database (2000-2010) and CNKI database (2000-2010) were searched bycomputer with the key words of "tumor, cancer stem cells, multidrug resistance". A total of 56 Chinese literatures, 372 foreign languages literatures were collected. Published earlier, repeated and similar studies were excluded and 29 literatures were included.RESULTS AND CONCLUSION: Stem cell research helps people deepen their knowledge of tumor occurrence, development and transfer. Tumor tissues have a small part of tumor cells that have self-renewal and unlimited proliferation ability as normal stem cells, but have a special mechanism of resistance. Tumor stem cells are closely related to tumor occurrence and treatment.However, complex multi-drug resistance of cancer stem cells requires further studies.【总页数】4页(P116-119)【作者】保秋萍;李惠民【作者单位】昆明医学院第一附属医院血液科,云南省昆明市,650032;昆明医学院第一附属医院血液科,云南省昆明市,650032【正文语种】中文【中图分类】R318【相关文献】1.人鼻咽癌细胞株中肿瘤干细胞分离鉴定方法及肿瘤多药耐药机制 [J], 刘超群2.肺癌肿瘤干细胞耐药机制的研究进展 [J], 李彤;董明;陈军3.肿瘤干细胞在化疗耐药机制中的研究进展 [J], 郭海啸;栾婷;王海峰;王剑松4.肿瘤干细胞的耐药机制研究进展 [J], 王露瑶; 吕娟; 阮红杰5.肿瘤干细胞与肺腺癌EGFR-TKI获得性耐药机制的研究进展 [J], 陈雨;陈杰;李亚军因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
人结肠癌组织中肿瘤耐药相关基因的表达及其临床意义
人结肠癌组织中肿瘤耐药相关基因的表达及其临床意义黄美兰;冉志华;萧树东【期刊名称】《胃肠病学》【年(卷),期】2006(11)5【摘要】背景:人结肠癌对化疗药物的耐药是其化疗失败的主要原因,一些与肿瘤耐药相关的基因从中起着一定作用,有关耐药相关基因在人结肠癌中表达水平的联合检测报道较少.目的:探讨人结肠癌组织中耐药相关基因p21(WAF1/CIP1)、MRP2、BRCA2、CYP3A5、BCRP和ELK-1转录水平的表达及其临床意义.方法:对30例结肠癌手术标本的癌组织、癌旁组织和正常组织分别以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肿瘤耐药相关基因p21(WAF1/CIP1)、MRP2、BRCA2、CYP3A5、BCRP和ELK-1转录水平的表达,比较它们在不同组织中表达的差异及其与肿瘤临床特点之间的关系.结果:结肠癌组织中,MRP2转录表达水平显著高于正常组织(P=0.037);CYP3A5转录表达水平显著低于正常组织(P=0.042);ELK-1转录表达水平显著高于癌旁组织和正常组织(P=0.016和P=0.022).在结肠癌组织和正常组织中,肿瘤耐药相关基因转录水平表达两两之间相关性有不同.结肠癌组织中,肿瘤耐药相关基因与结肠癌临床特点之间均无相关性.结论:在结肠癌的发生和耐药过程中,肿瘤耐药相关基因MRP2、CYP3A5和ELK-1起了一定作用,而p21(WAF1/CIP1)、BRCA2和BCRP基因的作用可能不明显.【总页数】5页(P263-267)【作者】黄美兰;冉志华;萧树东【作者单位】上海交通大学医学院附属仁济医院,上海市消化疾病研究所,200001;上海交通大学医学院附属仁济医院,上海市消化疾病研究所,200001;上海交通大学医学院附属仁济医院,上海市消化疾病研究所,200001【正文语种】中文【中图分类】R73【相关文献】1.结肠癌转移相关基因1在结肠癌组织中的表达及其临床意义 [J], 王珂;蒋谦;俞军2.肺癌组织中耐药相关基因的表达及其临床意义 [J], 吕梅君;周彩存;易祥华;李德仁;张容轩;孔洁3.肺癌组织中耐药相关基因的表达水平及其临床意义 [J], 李国仁;戴建华;王燕青;陈光辉;刘晓峰;苗福禄;白玲;陈玉林4.耐药相关基因在胃癌组织中的表达及其临床意义 [J], 李劲节;王宗敏;谢丽微5.肿瘤相关基因FRAT1在结肠癌组织中的表达及临床意义 [J], 于庆功;乔素仿;常慧丽;吕梅;王飞;王媛媛;舒敏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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国际肿瘤学杂志 ２０１ ６ 年 ９ 月第 ４３ 卷第 ９ 期
Ｊ Ｉｎｔ Ｏｎｃｏｌ，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２０１ ６ ，Ｖｏｌ． ４３ ，ｏ． ９
·论著·
结肠癌 ＣＯＬＯ 耐药株的构建及其与肿瘤 干细胞的关系
甘亚平 郭晓花 张君 许晴晴 吴疆 王任勇 邱敏 蒋汝刚 刘复兴 宁志丰
通
ＤＯＩ ： １ ０． ３７６０ ／ ｃｍａ． ｊ． ｉｓｓｎ． １ ６７３４２２Ｘ． ２０１ ６． ０９． ００２ 作者单位： ４３７１ ００ 咸宁， 湖北科技学院基础医学院病理学教研室（ 甘亚平、 邱敏、 刘复兴） ， 基础医学院（ 郭晓花、 张君、 许晴晴、 吴疆、 王任 勇） ， 预防医学教研室（ 蒋汝刚） ， 解剖学教研室（ 宁志丰） Ｅｍａｉｌ：ｎｉｎｇｚｈｉｆｅｎｇ１ ９７６＠１ ６３． ｃｏｍ 通信作者： 宁志丰，
【 摘要】 目的
构建结肠癌 ＣＯＬＯ 耐药株， 探索其功能特性及其与肿瘤干细胞的关系。 方法
过逐渐递增化疗药 ５ 氟尿嘧啶（ ５ＦＵ ） 浓度的方法， 构建了耐 ０． １０ μ ｍｏｌ ／ ｍｌ 和 ０． ２０ μ ｍｏｌ ／ ｍｌ ５ ＦＵ 的结 肠癌 ＣＯＬＯ 耐药株各 １ 株， 分别命名为 ＣＯＬＯ ／ ５ＦＵ１、 ＣＯＬＯ ／ ５ＦＵ２ 。从增殖能力、 克隆形成能力、 迁移 和侵袭能力、 微球体形成能力、 干性基因的表达、 交叉耐药等方面与亲本结肠癌细胞株 ＣＯＬＯ 进行对比。 结果 在存活检测中， 常规培养后第 ４ 天， 结肠癌耐药株 ＣＯＬＯ ／ ５ＦＵ２、 ＣＯＬＯ ／ ５ＦＵ１、 亲本 ＣＯＬＯ 细胞 的 Ａ 值分别为 ０． ６１ ± ０． １ ３、 ０． ５４ ± ０． ０７ 、 ０． ４１ ± ０． ０９ ， 差异有统计学意义（ Ｆ＝ ６３． ４３ ， Ｐ＝ ０． ０３３ ） 。 随着耐 ５ＦＵ 药物浓度的增加， ＣＯＬＯ 耐药株的克隆形成率逐渐增强， ＣＯＬＯ ／ ５ＦＵ２、 ＣＯＬＯ ／ ５ＦＵ１、 亲本 ＣＯＬＯ 的克隆形成率依次为（ ８７． ６± １ ２． ７） ％、 （ ６５ ． ３± ９． ７） ％、 （ ３８． ５± ７． ６） ％， 差异有统计学意义（ Ｆ＝ ３３． ６４ ， Ｐ＝ ０． ０１ ７ ） 。ＣＯＬＯ ／ ５ＦＵ２、 ＣＯＬＯ ／ ５ＦＵ１、 亲本 ＣＯＬＯ 每高倍视野中迁移穿过基底膜的细胞数分别为 （ ４８２ ± ３９ ） 个、 （ ４３４ ± ４５ ） 个、 （ ３７３ ± ３８ ） 个， 侵袭穿过基底膜的细胞数分别为（ １ ７４ ± ４２ ） 个、 （ １１２ ± ３１ ） 个、 （ ８７ ± ２９ ） 个， 差异均有统计学意义（ Ｆ＝ １ ０９． ６１ ， Ｐ＝ ０． ００９ ； Ｆ＝ ６７． ３１ ， Ｐ＝ ０． ０３２ ） 。 与亲本结肠癌细胞株 ＣＯＬＯ 比较， 耐药株表达更高的干性基因， 差异有统计学意义（ Ｆ＝ ４７． ３１ ， Ｐ＝ ０． ０４２ ） ； 且耐药株对其他化 米拖蒽醌对亲本 ＣＯＬＯ 的抑 制 率 高 于 ＣＯＬＯ ／ ５ＦＵ１、 疗药如米托蒽醌存在交叉耐药 ［ 如给药 ９６ ｈ， ＣＯＬＯ ／ ５ＦＵ２ （ ０． ７４９ ± ０． ０４２ 、 ０． ４２３ ±０． ０２４ 、 ０． ３４２ ±０． ０１ ８ ） ， 差异有统计学意义 （ Ｆ ＝１ ２． ６１ ，Ｐ ＝ ０． ０２８ ） ］ 。 ＣＯＬＯ ／ ５ＦＵ２、 ＣＯＬＯ ／ ５ＦＵ１、 亲 本 ＣＯＬＯ 细 胞 的 微 球 体 形 成 率 依 次 为 （ ８． ９０ ±０． ９７ ） ％、 （ ６． ２０ ± ０． ７５ ） ％、 （ ３． ９０ ± ０． ３２ ） ％， 差异有统计学意义（ Ｆ＝ １ ６４． ３２ ， Ｐ＝ ０． ００６ ） 。 结论 耐药株有肿瘤干细胞样细胞的特点， 是富集了的肿瘤干细胞。 【 关键词】 结肠肿瘤；抗药性， 肿瘤；肿瘤干细胞；耐药株 基金项目：国家级大学生创新创业项目（ ２０１ ３１ ０９２７００１ ） ； 湖北省自然科学基金（ ２０１ ５ ＣＦＢ４７０ ） Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｌｏｎｉｃ ｃａｎｃｅｒ ｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ＣＯＬＯ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｗｉｔｈ ｔｕｍｏｒ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ Ｇａｎ Ｙａｐｉｎｇ* ，Ｇｕｏ Ｘｉａｏｈｕａ，Ｚｈａｎｇ Ｊｕｎｙｕ ，Ｘｕ Ｑｉｎｇｑｉｎｇ，Ｗ ｕ Ｊｉａｎｇ，Ｗ ａｎｇ Ｒｅｎｙｏｎｇ，Ｑｉｕ Ｍ ｉｎ，Ｊｉａｎｇ Ｒｕｇａｎｇ，Ｌｉｕ Ｆｕｘｉｎｇ，Ｎ ｉｎｇ Ｚｈｉｆ ｅｎｇ．* Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＰａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｂａｓｉｃ Ｍ ｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆＨｕｂｅｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆＳｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｘｉａｎｎｉｎｇ ４３７１００ ，Ｃｈｉｎａ Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：Ｎ ｉｎｇ Ｚｈｉｆ ｅｎｇ，Ｅｍａｉｌ：ｎｉｎｇｚｈｉｆ ｅｎｇ１９７６＠１６３． ｃｏｍ 【 Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ ａ ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ＣＯＬＯ，ａｎｄ ｓｔｕｄｙ Ｗｅ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ ｔｗｏ ５ ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉ ｉｔｓ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｗｉｔｈ ｔｕｍｏｒ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ 结肠癌 ＣＯＬＯ
国际肿瘤学杂志 ２０１ ６ 年 ９ 月第 ４３ 卷第 ９ 期
Ｊ Ｉｎｔ Ｏｎｃｏｌ，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２０１ ６ ，Ｖｏｌ． ４３ ，Ｎｏ． ９
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Ｔｈｅ ｃｌｏｎｉｎｇ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｏｆ ＣＯＬＯ ／ ５ＦＵ２ ， ＣＯＬＯ ／ ５ＦＵ１ ａｎｄ ｐａｒｅｎｔａｌ ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ＣＯＬＯ ｗｅｒｅ （ ８７． ６± １ ２． ７） ％， （ ６５ ． ３± ９． ７） ％ ａｎｄ （ ３８． ５± ７． ６） ％ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ， ｗｉｔｈ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ （ Ｆ＝ ３３． ６４ ， Ｐ＝ ０． ０１ ７ ） ．Ｉｎ ｅａｃｈ ｈｉｇｈ ｐｏｗｅｒ ｆｉｅｌｄ ｏｆ ｖｉｓｉｏｎ，ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｎｕｍｂｅｒｓ ｏｆ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｂａｓｅｍｅｎｔ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｏｆ ＣＯＬＯ ／ ５ＦＵ２ ，ＣＯＬＯ ／ ５ＦＵ１ ａｎｄ ｐａｒｅｎｔａｌ ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ＣＯＬＯ ｗｅｒｅ ４８２ ±３９ ，４３４ ±４５ ａｎｄ ３７３ ± ３８ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ；ａｎｄ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｎｕｍｂｅｒｓ ｏｆ ｉｎｖａｓｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｂａｓｅｍｅｎｔ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｗｅｒｅ １ ７４ ± ４２ ， １１２ ± Ｆ＝ １ ０９． ６１ ，Ｐ ＝ ０． ００９ ；Ｆ ＝ ６７． ３１ ，Ｐ ＝ ０． ０３２ ） ． ３１ ａｎｄ ８７ ± ２９ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｗｉｔｈ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ （ Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｐａｒｅｎｔａｌ ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ＣＯＬＯ，５ ＦＵｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｈａｄ ｈｉｇｈｅｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｓｔｅｍｎｅｓｓ ｇｅｎｅｓ （ Ｆ＝ ４７． ３１ ，Ｐ ＝ ０． ０４２ ） ．５ ＦＵｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｗｅｒｅ ｃｒｏｓｓｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｔｏ ｏｔｈｅｒ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｄｒｕｇｓ ｓｕｃｈ ａｓ ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ．Ｆｏｒ ｅｘａｍｐｌｅ ，ａｆｔｅｒ ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ ｆｏｒ ９６ ｈｏｕｒｓ，ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ ｔｏ ０． ７４９ ± ｐａｒｅｎｔ ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ＣＯＬＯ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｒ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｔｈａｎ ＣＯＬＯ ／ ５ＦＵ１ ａｎｄ ＣＯＬＯ ／ ５ＦＵ２ （ ０． ０４２ ， ０． ４２３ ± ０． ０２４ ，０． ３４２ ± ０． ０１ ８ ） ，ｗｉｔｈ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ （ Ｆ＝ １ ２． ６１ ，Ｐ ＝ ０． ０２８ ） ．Ｔｈｅ ｍｉｃｒｏ５ＦＵ１ ａｎｄ ｐａｒｅｎｔａｌ ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ＣＯＬＯ ｗｅｒｅ （ ８． ９０ ± ｓｐｈｅｒｅ ｆｏｒｍｉｎｇ ｒａｔｅｓ ｏｆ ＣＯＬＯ ／ ５ＦＵ２ ，ＣＯＬＯ ／ ０． ９７ ） ％，（ ６． ２０ ± ０． ７５ ） ％ ａｎｄ （ ３． ９０ ± ０． ３２ ） ％ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｗｉｔｈ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ （ Ｆ＝ １ ６４． ３２ ，Ｐ ＝ ０． ００６ ） ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ ｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ＣＯＬＯ ｐｏｓｓｅｓｓ ｔｕｍｏｒ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｌｉｋｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ， ｗｈｉｃｈ ａｒｅ ｅｎｒｉｃｈｅｄ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ． 【 Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ 】 Ｃｏｌｏｎｉｃ ｎｅｏｐｌａｓｍｓ；Ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ，ｎｅｏｐｌａｓｍｓ；Ｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ；Ｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ Ｆｕｎｄ ｐｒｏｇｒａｍ： Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｕｎｄｅｒｇｒａｄｕａｔｅ Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ ａｎｄ Ｂｕｓｉｎｅｓｓ Ｐｒｏｇｒａｍ （ ２０１ ３１ ０９２７００１ ） ； Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｕｂｅｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ ｏｆ Ｃｈｉｎａ （ ２０１ ５ ＣＦＢ４７０ ）
（ ５ＦＵ ） ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ＣＯＬＯ ／ ５ＦＵ１ ａｎｄ ＣＯＬＯ ／ ５ＦＵ２ ， ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｔｏ ０． １０ μ ｍｏｌ ／ ｍｌ ａｎｄ ０． ２０ μ ｍｏｌ ／ ｍｌ ５ ＦＵ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ ｔｈｒｏｕｇｈ ｇｒａｄｉｅｎｔｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｄｒｕｇ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ５ ＦＵｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｗｅｒｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｐａｒｅｎｔａｌ ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ＣＯＬＯ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ｃｏｌｏｎｙ ｆｏｒｍｉｎｇ ａｂｉｌｉｔｙ，ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｖａｓｉｏｎ，ｓｐｈｅｒｅ ｆｏｒｍｉｎｇ ａｂｉｌｉｔｙ，ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｓｔｅｍｎｅｓｓ ｇｅｎｅｓ ａｎｄ ｃｒｏｓｓ ｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｉｎ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ａｓｓａｙ， ４ ｄａｙｓ ａｆｔｅｒ ｒｅｇｕｌａｒ ｔｒａｉｎｉｎｇ，ｔｈｅ ａｂｓｏｒｂａｎｃｙ ｏｆ ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ ５ ＦＵｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ＣＯＬＯ ／ ５ＦＵ２ ，ＣＯＬＯ ／ ５ＦＵ１ ａｎｄ ｐａｒｅｎｔａｌ ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ＣＯＬＯ ｗｅｒｅ ０． ６１ ± ０． １ ３， ０． ５４ ± ０． ０７ ａｎｄ ０． ４１ ± ０． ０９ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｗｉｔｈ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ （ Ｆ＝ ６３． ４３ ，Ｐ ＝ ０． ０３３ ） ．Ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ５ ＦＵ ，５ ＦＵｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ ｃｌｏｎａｌｉｔｙ．