pH缓冲液的配制
常见pH值的磷酸盐缓冲液的配制

常见pH值的磷酸盐缓冲液的配制1、磷酸盐缓冲液取磷酸二氢钠38.Og,与磷酸氢二钠5.04g,加水使成1000m1,即得。
2、磷酸盐缓冲液(pH2.0)甲液:取磷酸16.6m1,加水至IooOm1,摇匀。
乙液:取磷酸氢二钠71.63g,加水使溶解成1000m1.取上述甲液72.5m1与乙液27.5m1混合,摇匀,即得。
3、磷酸盐缓冲液(pH2.5)取磷酸二氢钾100g,加水800m1,用盐酸调节PH至2.5,用水稀释至1000m1σ4、磷酸盐缓冲液(pH5.0)取0.2mo1∕1磷酸二氢钠溶液一定量,用氢氧化钠试液调节PH值至5.0,即得o5、磷酸盐缓冲液(pH5.8)取磷酸二氢钾8.34g与磷酸氢二钾0∙87g,加水使溶解成IOOOm1,即得。
6、磷酸盐缓冲液(pH6.5)取磷酸二氢钾0.68g,加0.1mo1∕1氢氧化钠溶液15.2m1,用水稀释至IOOrn1,即得。
7、磷酸盐缓冲液(pH6.6)取磷酸二氢钠1.74g、磷酸氢二钠2.7g与氯化钠1.7g,加水使溶解成400m1,即得。
8、磷酸盐缓冲液(含胰酶)(pH6.8)取磷酸二氢钾6.8g,加水500m1使溶解,用0.1mo1∕1氢氧化钠溶液调节PH 值至6.8;另取胰前10g,加水适量使溶解,将两液混合后,加水稀释至IOOom1,即得。
9、磷酸盐缓冲液(pH6.8)取0.2mo1∕1磷酸二氢钾溶液250m1,加0.2mo1/1氢氧化钠溶液118m1,用水稀释至IOOOm1,摇匀,即得。
10、磷酸盐缓冲液(pH7.0)取磷酸二氢钾0.68g,加0.Imo1/1氢氧化钠溶液29.Im1,用水稀释至100m1,即得。
11、磷酸盐缓冲液(pH7.2)取0.2mo1∕1磷酸二氢钾溶液50m1与0.2mo1∕1氢氧化钠溶液35m1,加新沸过的冷水稀释至200m1,摇匀,即得。
12、磷酸盐缓冲液(pH7.3)取磷酸氢二钠1.9734g 与磷酸二氢钾0.2245g,加水使溶解成1000m1,调节PH 值至7.3,即得。
ph标准缓冲溶液的配制

ph标准缓冲溶液的配制pH标准缓冲溶液的配制。
在化学实验和生物实验中,pH标准缓冲溶液是一种非常重要的试剂,它可以帮助我们在实验中精确控制溶液的酸碱度,保证实验结果的准确性。
本文将介绍pH标准缓冲溶液的配制方法,希望能对大家有所帮助。
首先,我们需要准备一些基本的试剂和设备,包括具有精确刻度的容量瓶、天平、蒸馏水、pH计、标准物质等。
在进行配制之前,务必保证所有试剂和设备的清洁和干燥,以免影响实验结果。
接下来,我们以配制pH=7的磷酸盐缓冲溶液为例,介绍具体的步骤。
首先,我们需要称取适量的二氢磷酸二氢盐和磷酸二氢钾,按照一定的摩尔比例加入到容量瓶中。
在称取试剂的过程中,要尽量保证称取的准确性,可以使用天平进行称量。
然后,我们需要加入适量的蒸馏水,将二氢磷酸二氢盐和磷酸二氢钾溶解,直到溶液均匀透明。
在溶解的过程中,可以使用磁力搅拌器进行搅拌,以加快溶解的速度。
接着,我们需要使用pH计检测溶液的酸碱度,调节溶液的pH值至7。
在调节pH值的过程中,可以逐渐加入少量的盐酸或氢氧化钠溶液,直到达到所需的pH 值。
在调节pH值的过程中,要小心操作,避免溶液的pH值超出目标范围。
最后,我们需要用蒸馏水将容量瓶中的溶液加至刻度线,摇匀后即可得到pH=7的磷酸盐缓冲溶液。
在配制完成后,可以使用标准物质进行校准,以确保配制的缓冲溶液的准确性和稳定性。
除了pH=7的磷酸盐缓冲溶液,我们还可以根据实际需要,配制其他pH值的缓冲溶液,具体的配制方法类似,只需根据不同的酸碱对配比不同。
在配制其他pH值的缓冲溶液时,需要注意选择合适的酸碱对,以及保证溶液的准确性和稳定性。
总之,pH标准缓冲溶液的配制是一项重要的实验技术,它需要我们严格按照配制方法操作,保证试剂的准确性和稳定性。
只有在配制过程中严格控制各个步骤,才能得到准确可靠的缓冲溶液,为实验结果的准确性提供保障。
希望本文的介绍能对大家有所帮助,谢谢阅读!。
ph计标准溶液配制

中国PH计校正溶液配置的标准方法一、引言:根据目前市场的应用情况看来,中国即我国国内使用的PH计校正的缓冲溶液有三种,即标称pH4 ,pH7 和pH9的三种缓冲溶液,分别学名为如下,笔者根据多项资料整理可得,为的是您能方便快速弄明白这些问题,详情:1)pH4:0.05M 邻苯二甲酸氢钾溶液;2)pH7:0.025M 磷酸二氢钾和磷酸氢二钠混合盐溶液;3)pH9:0.01M 硼砂溶液;接下来介绍以上3种溶液的主要配置简单方法。
二、PH计校正溶液配置的标准方法1)pH4,邻苯二甲酸氢钾标准缓冲液:精密称取在115±5℃干燥2~3小时的邻苯二甲酸氢钾[KHC8H4O4]10.12g,加水使溶解并稀释至1000ml。
2)pH7,磷酸盐标准缓冲液(pH7.4):精密称取在115±5℃干燥2~3小时的无水磷酸氢二钠4.303g与磷酸二氢钾1.179g,加水使溶解并稀释至1000ml。
另补充:磷酸盐标准缓冲液(pH6.8) 精密称取在115±5℃干燥2~3小时的无水磷酸氢二钠3.533g与磷酸二氢钾3.387g,加水使溶解并稀释至1000ml。
3)pH9,硼砂标准缓冲液:精密称取硼砂[Na2B4O7·10H2O]3.80g(注意:避免风化),加水使溶解并稀释至1000ml,置聚乙烯塑料瓶中,密塞,避免与空气中二氧化碳接触。
总结:从现在使用PH计来看,中国境内即国产的PH计或者是酸度计,它的校正缓冲液拥有的情况有两种:1)即标准溶液是可以在市场上买到的,一般是在聚乙烯瓶中密闭保存的。
在室温条件下标准溶液一般以保存1~2个月为宜,当发现有浑浊、发霉或沉淀现象时,不能继续使用。
在4℃冰箱内存放,且用过的标准溶液不允许再倒回。
2)还可以自己买缓冲剂回去配置得。
但一般厂家发货时,由于国家规定发货时有的不准有液体或药物存在,所以只能是带有的是干燥的PH缓冲剂,客户使用时需要自己配置,只要使其溶解在预先煮沸15~30分钟的去离子水中,适当冲洗试剂袋中残留的试剂。
PH标准缓冲液配置

标准缓冲溶液(均用pH标准缓冲物质配制)1.1 苯二甲酸氢钾标准缓冲溶液:c(KHC8H4O4)=0.05 mol/L(25℃时,pHs=4.003)。
苯二甲酸氢钾的pH标准缓冲物质,有小塑料袋和瓶装两种,配制方法如下:a)袋装配制法:在250 mL(或500 mL)量瓶中(根据袋中标准缓冲物质量,选择量瓶大小),按袋上的说明配制成所需的浓度。
保存于聚乙烯瓶中。
b)瓶装配制法:称取5.10 g苯二甲酸氢钾(KHC8H4O4预先在115℃±5℃,烘2~3 h,于干燥器中冷却),溶于水并稀释至500 mL,混匀。
保存于聚乙烯瓶中。
1.2 0.025 mol/L磷酸二氢钾(KH2PO4)和0.025 mol/L磷酸氢二钠(Na2HPO4)混合标准缓冲溶液(25℃时,pHs=6.864):磷酸二氢钾和磷酸氢二钠的pH标准缓冲物质,有小塑料袋装(混合磷酸盐)和瓶装(两种pH标准缓冲物质分别包装)两种。
配制方法如下:a)袋装配制法:在量瓶(根据袋上说明确定量瓶大小)中按袋上说明配制成所需浓度后,保存于聚乙烯瓶中。
b)瓶装配制法:迅速称取3.40 g磷酸二氢钾(KH2PO4)和3.55 g磷酸氢二钠(Na2HPO4)(均预先在115±5℃烘2~3 h,于干燥器中冷却)溶于蒸馏水,转入1 000 mL量瓶中,加水至标线,混匀。
1.3 0.008 695 mol/L磷酸二氢钾(KH2PO4)和0.030 43 mol/L磷酸氢二钠(Na2HPO4)标准混合缓冲溶液(25℃时,pH=7.413):磷酸二氢钾和磷酸氢二钠两种pH标准缓冲物质分别用瓶包装,配制方法如下:迅速称取1.18 g磷酸二氢钾和4.31 g磷酸氢二钠(均预先在115℃±5℃烘2~3 h,于干燥器中冷却),溶于水,全量移入1 000 mL量瓶中,加水至标线,混匀。
保存于聚乙烯瓶中。
1.4 硼砂标准缓中溶液:c(Na2B4O7·10H2O)=0.010 mol/L(25℃时,pHs=9.182)。
ph缓冲溶液的配制方法

ph缓冲溶液的配制方法PH缓冲溶液是指在一定范围内,具有缓冲pH值的溶液,适用于化学、生物、医药等各个领域的实验和应用。
在实验中,通常需要制备一定浓度和pH值的缓冲溶液,以保证实验结果的准确性和可重复性。
本文将介绍几种常见的缓冲溶液配制方法。
一、磷酸缓冲液(PBS)磷酸缓冲液是一种常用的生物化学实验缓冲液,可以用于细胞培养、酶活性测定、免疫学实验等等。
其配制方法如下:1. 准备250ml坐标瓶,称取1.37g Na2HPO4·12H2O和0.26g KH2PO4。
3. 将两个溶液混合,加入NaCl使溶液最终重量达到250g,调节pH值至7.4-7.6,如果pH值过低,可加入1M NaOH调节,反之加入1M HCl。
二、三氯醋酸缓冲液(TCA)三氯醋酸缓冲液是一种酸性缓冲液,适用于蛋白质的沉淀和提取等实验。
其配制方法如下:1. 准备250ml坐标瓶,在其中加入11.9g三氯乙酸,加入去离子水至250ml。
2. 调节溶液pH值至2.0-2.5,可使用无水HCl或NaOH来调节pH值。
3. 再加入去离子水,使溶液最终体积达到500ml,并根据需要添加NaCl和KCl等。
五、TRIS缓冲液TRIS缓冲液是一种常用的生化和细胞学实验用缓冲液,其缓冲范围在7.0~9.2之间。
其配制方法如下:1. 准备500ml坐标瓶,称取12.11g Tris-Base。
3. 在室温下缓慢加入0.1M HCl溶液,同时使用pH计监测溶液pH值,当pH值达到所需值时停止加入。
4. 将溶液体积补至500ml,并调节pH值。
可根据实验需要调节缓冲液中的NaCl或其他化学物质的浓度。
以上就是几种常见缓冲溶液的配制方法,需要注意的是在配制过程中,一定要严格按照实验要求和操作规程进行,以获得准确的实验结果。
同时,制备的缓冲液要遵循使用前检测pH值、滤过消毒等规定操作,以保证实验的可重复性和安全性。
常见缓冲溶液配制方法

常见缓冲溶液配制方法1.醋酸钠/醋酸酸性缓冲液醋酸钠/醋酸酸性缓冲液适用于pH范围为4.0-6.0的实验。
配制方法如下:- 准备质量浓度为0.1mol/L的醋酸钠溶液和0.1mol/L的醋酸溶液。
-根据所需pH值,按照相应的比例混合醋酸钠溶液和醋酸溶液即可。
2.磷酸/盐酸性缓冲液磷酸/盐酸性缓冲液适用于pH范围为1.0-3.0的实验。
配制方法如下:- 准备0.2mol/L的盐酸溶液。
- 准备分别为0.2mol/L和0.1mol/L的磷酸溶液。
-具体配制时,根据所需pH值,按照相应的比例混合盐酸溶液和磷酸溶液即可。
3.磷酸/氢磷酸二盐酸性缓冲液磷酸/氢磷酸二盐酸性缓冲液适用于pH范围为2.0-7.0的实验。
配制方法如下:- 准备0.2mol/L的盐酸溶液。
- 准备分别为0.2mol/L、0.1mol/L和0.05mol/L的氢磷酸二盐溶液。
-具体配制时,根据所需pH值,按照相应的比例混合盐酸溶液和氢磷酸二盐溶液即可。
4.磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液适用于pH范围为5.0-8.0的实验。
配制方法如下:- 准备分别为0.2mol/L的梯度磷酸盐溶液。
-根据所需pH值,按照相应的比例混合相应浓度的磷酸盐溶液即可。
5.三氯乙酸/三氯乙酸钠酸性缓冲液三氯乙酸/三氯乙酸钠酸性缓冲液适用于pH范围为3.0-4.6的实验。
配制方法如下:- 准备质量浓度为0.2mol/L的三氯乙酸钠溶液和0.2mol/L的三氯乙酸溶液。
-根据所需pH值,按照相应的比例混合三氯乙酸钠溶液和三氯乙酸溶液即可。
以上是一些常见的缓冲溶液配制方法,具体的配制过程可能会因实验需求和具体试剂而略有不同。
在配制缓冲溶液时,一定要注意使用高纯度的试剂,并按照配制方法进行准确的实验操作。
各种缓冲液配制方法

各种缓冲液配制方法不同缓冲液的缓冲范围pH缓冲液是化学实验室中常用的一种试剂,可以帮助维持溶液的酸碱度。
下面介绍三种常用缓冲液的配制方法和缓冲范围。
一、甘氨酸-盐酸缓冲液(0.05 mol/L)配制方法:取X毫升0.2 mol/L甘氨酸和Y毫升0.2 mol/L 盐酸,加入适量的水稀释至200毫升。
缓冲范围:pH值在2.2至3.6之间,X和Y的取值见上表。
二、邻苯二甲酸-盐酸缓冲液(0.05 mol/L)配制方法:取X毫升0.2 mol/L邻苯二甲酸氢钾和Y毫升0.2 mol/L盐酸,加入适量的水稀释至20毫升。
缓冲范围:pH值在2.2至3.8之间,X和Y的取值见上表。
三、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液配制方法:根据上表中的数据,取相应的0.2 mol/L和0.1 mol/L的Na2HPO4和柠檬酸,加入适量的水稀释至20毫升。
缓冲范围:pH值在2.2至8.0之间,具体取值见上表。
以上缓冲液的配制方法和缓冲范围可根据实验需要进行调整和改变。
在实验过程中,正确选择缓冲液可以提高实验的成功率和准确性。
以下是已经修改好的文章:柠檬酸的浓度可以用毫升表示,其浓度数据如下:9.28 mL8.85 mL8.40 mL7.91 mL7.37 mL6.78 mL6.15 mL5.45 mL4.55 mL3.53 mL2.61 mL1.83 mL1.27 mL0.85 mL0.55 mL对于Na2HPO4,其分子量为141.98,0.2 mol/L的溶液需要28.40 g/L。
而Na2HPO4·2H2O的分子量为178.05,0.2 mol/L的溶液需要35.61 g/L。
最后,Na2HPO4·12H2O的分子量为358.22,0.2 mol/L的溶液需要71.64 g/L。
对于C6H8O7·H2O,其分子量为210.14,0.1 mol/L的溶液需要21.01 g/L。
以下是柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液的相关数据:pH: 2.2.3.1.3.3.4.3.5.3.5.8.6.5钠离子浓度(mol/L): 0.20.0.20.0.20.0.20.0.35.0.45.0.38柠檬酸(g) 氢氧化钠(g) 盐酸(mL)C6H8O7·H2O NaOH 97% HCl (浓)210 210 210210 245 285266 84 8383 144 186156 160 116106 45 68105 126最终体积(L):10使用时可以每升中加入1克酚。
ph标准缓冲溶液配制

ph标准缓冲溶液配制PH标准缓冲溶液是实验室常用的一种溶液,它可以帮助实验人员在一定的PH范围内稳定样品的PH值。
在生物化学、分子生物学、生物工程等领域,PH标准缓冲溶液的配制和使用是非常重要的。
本文将介绍PH标准缓冲溶液的配制方法及注意事项,希望能为实验人员提供一些帮助。
首先,我们需要准备一些基本的试剂和设备,包括PH计、天平、磁力搅拌器、蒸馏水等。
在配制PH标准缓冲溶液之前,需要确保这些试剂和设备都是干净的,并且已经校准过。
接下来,我们需要选择合适的缓冲物质。
常用的缓冲物质有磷酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液等。
选择缓冲物质时,需要考虑样品的PH范围和化学性质,选择最适合的缓冲物质。
在配制缓冲溶液时,需要按照一定的配比将缓冲物质和蒸馏水混合,直至溶解。
在这个过程中,可以使用PH计监测溶液的PH值,确保PH值在目标范围内。
如果PH值偏离目标范围,可以适当调整缓冲物质的用量,直至达到理想的PH值。
配制好的PH标准缓冲溶液需要进行标定。
标定的过程包括使用PH计测量溶液的PH值,并与已知PH值的标准溶液进行比较,调整PH值直至与标准溶液相符。
标定完成后,需要将溶液存储在密封的容器中,避免受到外界环境的影响。
在使用PH标准缓冲溶液时,需要注意以下几点。
首先,避免溶液受到污染,使用前需要确保溶液的清洁和透明度。
其次,在使用过程中需要严格按照实验方法操作,避免操作失误导致PH值的偏离。
最后,使用完毕后需要及时清洗使用的玻璃仪器,并将溶液妥善存放。
总的来说,PH标准缓冲溶液的配制和使用需要一定的技术和经验。
正确的配制方法和注意事项能够保证溶液的质量稳定性,为实验结果的准确性提供保障。
希望本文介绍的内容能够对实验人员有所帮助,谢谢阅读!。
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【引用】常用pH缓冲溶液的配制和pH值2011-05-13 20:01:24| 分类:生物|字号订阅本文引用自DSC《常用pH缓冲溶液的配制和pH值》一、常用溶液的配制(文章来自:医药园() 整理:zfg)(一)溶液配制注意事项1.药品要有较好的质量试剂分为优级纯(保证试剂,Guaranteed reagent,G.R.)、分析试剂(Antalytical reagent,A.R.)化学纯(Chemical pure,C.P.)和实验试剂(Laboratory reagent,L.R.)等等。
工业用的化学试剂,杂质较多,只在个别情况下应用,如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等。
2.药品称量要精确。
3.配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏水,比电阻值在50万欧姆以上,pH在5.5~7.0之间才可应用,在组织培养等特殊用途时应注意此项要求,配制一般化验用溶液只要求用双蒸馏水或去离子水。
4.配好后的溶液,应立即除菌处理(如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质),以防杂菌生长。
(二)0.067(1/15)Mol/L磷酸缓冲液1.1/15Mol/L磷酸二氢钾溶液的配制:称取磷酸二氢钾(KH2PO4,A.R.)9.08g,用蒸馏水溶解后,倾入1 000ml容量瓶内,再稀释至刻度(1 000ml)。
2.1/15Mol/L磷酸二氢钠溶液的配制:称取无水磷酸氢二钠(Na2HPO4,A.R.)9.47g (或者Na2HPO4·2H2O 11.87g)用蒸馏水溶解后,放入1 000ml容量瓶内,再加蒸馏水稀释至刻度(1 000ml)。
3.按附表的比例,配制成不同pH值的缓冲溶液。
(三)0.15Mol/L PB液Na2HPO4·2H2O分子量=175.05 0.15Mol/L溶液含26.7g/L。
Na2HPO4·12H2O分子量=358.22 0.15Mol/L溶液含53.7g/L。
NaH2PO4·H2O分子量=138.00 0.15Mol/L溶液含20.7g/L。
NaH2PO4·2H2O分子量=156.03 0.15Mol/L溶液含23.4g/L。
(四)0.2Mol/L PB缓冲液0.2Mol/L Na2HPO4·2 H2O溶液35.61g/LNa2HPO4·12 H2O溶液含71.64g/L0.2Mol/LNaH2PO4·H2O溶液含27.60g/LNaH2PO4·2 H2O溶液含31.21g/L欲配0.1Mol/L PB缓冲液则在0.2Mol/L PB缓冲液的基础上加H2O稀释1倍即可。
欲配制PBS液时,则在溶液中加0.85%的NaCl溶液即可。
(五)无钙镁离子磷酸缓冲盐水(PBS)(0.15Mol/L PH 7.2)NaCl 8.0gKCl 0.2gNa2HPO4 1.15g(如为Na2HPO4·12H2O,则为2.89g)KH2PO4 0.2g将上述试剂依次溶于1 000ml去离子水中,完全溶解后,115℃高压灭菌10min~15min,存在4℃冰箱中备用。
此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗涤细胞培养物。
) 整理:zfg1.硼酸(H3BO3)0.2Mol/L硼酸:硼酸12.37g加水至1 000ml。
2.硼砂(Na2B4O7)0.05Mol/L硼砂:硼砂19.07g加水至1 000ml。
(七)巴比妥缓冲液1.pH8.2离子强度0.05Mol/L巴比妥缓冲液巴比妥钠 47.6g蒸馏水 3 000ml1.17N HCl 55.0ml(1.17 N HCl=193ml浓HCl加1 807ml蒸馏水)⑴将4.76g巴比妥钠溶于3 000ml蒸馏水。
⑵加1.17 N HCl 55ml。
⑶用HCl调节pH到8.2,并加蒸馏水至4 265ml。
2.pH8.4 0.06Mol/L巴比妥缓冲液巴比妥 1.84g巴比妥钠10.30g加蒸馏水至 1 000.00ml3.pH8.6 0.06Mol/L巴比妥缓冲液巴比妥 1.66g巴比妥钠12.76g加蒸馏水 1 000.00ml(八)0.2Mol/L醋酸盐缓冲液见表附表5(九)三羟甲基甲烷—盐酸缓冲液(Tris—HCl缓冲液)不同pH,0.05Mol/L25ml0.2Mol/L三羟甲基氨基甲烷加хml0.1NHCl,加水稀释至100ml(见下表)三羟甲基氨基甲烷(Tris)分子量=121.140.2Mol/L三羟甲基氨基甲烷:Tris24.23g,加水至1 000ml。
0.1NHCl:取HCl8.6ml,加水至1 000ml。
(十)0.5Mol/L pH9.5碳酸盐缓冲液NaHCO3 3.70gNa2CO3 0.60g溶于600.00ml蒸馏水中即得。
不用时塞紧瓶塞,以免吸收空气中二氧化碳使PH下降。
最好小量配制。
(十一)甘油磷酸缓冲液1.配制pH8.0磷酸缓冲液0.1Mol/L Na2HPO4 94.50ml0.1N NaH2PO4 5.50ml混合即可2.9份甘油与1份pH8.0磷酸缓冲液混合,即为甘油磷酸缓冲液。
用途:用于免疫荧光试验。
(十二)Hank’s液1.贮存液NaCl 80.00gKCl 4.00gNa2HPO4·12 H2O 1.52gKH2PO4 0.60g葡萄糖 4.00g0.4%酚红液50.00ml双馏水加至100.00ml115℃高压灭菌15min,冰冻保存。
2.工作液贮存液1份双馏水9份115℃高压灭菌15min。
临用时用灭菌的5.6%NaHCO3液调pH值至7.2左右(溶液呈橙红色)。
(十三)萘(钠)氏试剂(Nessler’s reagent)配方1:氯化汞 6.0g碘化钾12.4g20%NaOH 30ml加蒸馏水至100ml配方2:碘化汞11.5g碘化钾8g蒸馏水50ml(完全溶解后)过滤,加20%NaOH 50ml。
用途:检测溶液中氨离子。
(十四)阿氏(Alsever’s)液葡萄糖 2.05g柠檬酸钠0.80g氯化钠0.42g蒸馏水 100ml溶解后,以10%柠檬酸调节pH至6.1,过滤,分装,10磅10min灭菌,4℃保存。
(十五)青、链霉素混合液(简称S.P.液或双抗液)青霉素(40万U)5支链霉素(200万μg)1支分别溶于100ml灭菌无离子水中或共同溶于200ml灭菌无离子水中,混合后分装小瓶,置-10℃~-20℃冰箱保存备用(1万单位μg/ml)。
临用时,按1%的量加入营养液或其他溶液中,最后浓度是青霉素100U/ml,链霉素100ug/ml。
(十六)洗液(清洁液)配方1:重铬酸钾150g蒸馏水300ml浓硫酸 3 000ml将重铬酸钾加入蒸馏水中,使之自然溶解或水浴溶解,亦可在大坩埚中加热溶解,然后慢慢加入浓硫酸,边加边搅拌,见发热过剧则稍停,冷却后再继续加。
此为强洗液。
盛清洁液的容器要坚固,上加厚玻璃盖,操作时要穿橡皮围裙、长统胶靴、戴上眼镜和厚胶皮手套,以保安全。
洗液一旦变绿,表示铬酸已经还原,失去了氧化能力,不宜再用。
如将这样洗液加热,再加适量重铬酸钾,又可重新使用。
配方2:浓硫酸50%蒸馏水50%重铬酸钾5%此为中等强度洗液。
配方3:重铬酸钾100g蒸馏水 1 000ml加热溶解,冷却后缓慢加入工业硫酸100ml此液为弱洗液,为棕红色。
使用此液时,必须预先用热肥皂水将玻璃器皿洗净,经自来水冲洗,沥干然后才能浸入,否则该洗液很快失效。
1.0.2mol/L(pH7.4)磷酸盐缓冲液(Phosphate Buffer, PB)试剂:NaH2PO4?2H2ONa2HPO4?12H2O配制方法:配制时,常先配制0.2mol/L的NaH2PO4和0.2mol/L的Na2HPO4,两者按一定比例混合即成0.2mol/L的磷酸盐缓冲液(PB),根据需要可配制不同浓度的PB和PBS。
(1) 0.2mol/L的Na2HPO4;称取Na2HPO4?12H2O 31.2g(或NaH2PO4?H2O 27.6g)加二次水至1000ml溶解。
(2) 0.2mol/L的Na2HPO4:称取NaHPO4.?12H2O 71.632g(或Na2HPO4?7H2O 53.6g或Na2HPO4?2H2O 35.6g)加二次水至1000ml溶解。
(3) 0.2mol/L pH7.4的PB的配制:取19ml 0.2mol/L的NaH2PO4和81ml 0.2mol/L的Na2HPO4?12H2O,充分混合即为0.2mol/L的PB(pH约为7.4~7.5)。
若pH 偏高或偏低,可通过改变二者的比例来加以调整,室温保存即可。
2.0.01mol/L磷酸盐缓冲生理盐水(Phosphate Buffered Saline, PBS)试剂:0.2mol/L PB50mlNaCl 8.5~9g(约0.15mol/L)二次水至1000ml配制方法:称取NaCl 8.5~9g及0.2mol/L的PB 50ml,加入1000ml的容量瓶中,最后加二次水至1000ml,充分摇匀即可。
若拟配制0.02mol/L的PBS,则PB量加倍即可,依此类推。
PB和PBS是免疫细胞化学实验中最为常用的缓冲液,0.01mol/L的PBS主要用于漂洗组织标本、稀释血清等,其pH应在7.25~7.35之间,否则需要调整。
0.1mol/L的PB 常用于配制固定液、蔗糖等。
一般情况下,0.2mol/L PB的pH值稍高些,稀释成0.01mol/L 的PBS时,常可达到要求的pH值,若需调整pH,通常也是调PB的pH。
3.Karasson –Schwlt’s磷酸盐缓冲液试剂:NaH2PO4?H2O 3.31gNa2HPO4?7H2O33.77g二次水至1000ml配制方法:同前该缓冲液主要用于配制Zamboni’s固定液。
4.0.5mol/L pH7.6的Tris- HCl缓冲液。
试剂:Tris(三羟甲基氨基甲烷) 60.57g1N HCl约420ml二次水至1000ml配制方法:先以少量二次水(300~500ml)溶解Tris,加入HCl后,用1N的HCl或1N的NaOH将pH调至7.6,最后加二次水至1000ml。
此液为储备液,于4℃冰箱中保存。
免疫细胞化学中常用的Tris-HCl缓冲液浓度为0.05mol/L,用时取储备液稀释10倍即可。
该液主要用于配制Tris缓冲生理盐水(TBS)、DAB显色液。
5.Tris缓冲生理盐水(Tris Buffered,Saline,TBS)试剂:0.5mol/L Tris-HCl缓冲液100mlNaCl 3.5~9g(0.15mol/L)二次水至1000ml配制:先以二次水少许溶解NaCl,再加Tris-HCl缓冲液,最后加二次水至1000ml,充分摇匀使Tris终浓度为0.05mol/L。