大肠杆菌和沙门氏菌生化试验鉴定表
沙门菌检验技术和方法
沙门菌的增菌液
四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB)：含有胆盐，抑 制革兰氏阳性球菌和部分大肠埃希氏菌的生 长，而伤寒与付伤寒沙门菌仍能生长。
亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）：可对伤寒及 其他沙门菌作选择性增菌，亚硒酸与蛋白胨 中的含硫氨基酸结合，形成亚硒酸和硫的复 合物，影响细菌硫代谢，从而抑制大肠埃希 氏菌、肠球菌和变形杆菌的增殖。
➢ 现修改为：在接种TSI琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培 养基的同时增加一项营养琼脂（NA），经TSI琼 脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基的选择后，可筛掉 大部分非沙门氏菌株，大大减少了工作量，同时 也满足了API 20E或 Vitek GNI鉴定的需要。
➢ 为保持与原标准的一致性，新标准也保留 了可以同时直接接种蛋白胨水 (供做靛基质 试验)、尿素琼脂 (pH7.2)、KCN 培养基的 内容。本部分还增加了对疑似菌落进行留 样确认的部分，以备必要时复查，这对生 化鉴定不确定的菌落进行进一步验证是非 常必要的。
沙门菌的菌落形态：产H2S的菌落为黑色 有金属光泽、棕褐色或灰色。菌落周围培 养基可呈黑色或棕色，有些不产H2S的菌 落，形成灰绿的菌落，周围培养基不变。
注：此培养基在制作过程中过分加热可使培 养基的选择性降低，与TTB或SC合用可获 得更高的检出率。
沙门菌的分离培养基
HE琼脂：在保证细菌所需营养的基础上，加 入了一些抑制剂，如：胆盐、柠檬酸盐、去 氧胆酸钠等，可抑制某些肠道致病菌和革兰 氏阳性菌的生长，但对革兰氏阴性的肠道致 病菌则无抑制作用。
样品液增加调整pH值。 选择性增菌：使用“TTB、SC”，取消“MM”。
分离培养基：使用BS、XLD、HE、科 玛嘉显色培养基。取消DHL、SS。
生化鉴定： 1.采纳API 20E或Vitek GNI为传统生化鉴定方法 的选择性替代方法。 2.生化鉴定项目进行调整：
大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定方案
大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定方案实验原理：1、大肠杆菌的性质：大肠杆菌是G--无芽孢直杆菌，在大多数培养基上表现出不同的特性。
在麦康凯琼脂平板上是凸起光滑湿润的粉红菌落，革兰氏染色镜检为红色短杆菌。
三糖铁琼脂上的反应为斜面和底部都变黄，产气，不产生硫化氢。
生化特性为发酵葡萄糖、乳糖、甘露醇、麦芽糖，不发酵蔗糖。
MR试验，吲哚试验为阳性，VP试验为阴性，不产生H2S，不能利用枸椽酸盐。
半固体中沿穿刺线向四周生长。
2、沙门氏杆菌的性质：沙门氏杆菌是G-直杆菌。
在麦康凯平板上为细小半透明、圆形、无色小菌落，三糖铁斜面下层变黄色，上层仍为红色，穿刺处为变黑产生H2S。
能发酵葡萄糖产酸产气，能利用枸椽酸盐，不发酵乳糖不利用蔗糖肌醇，MR阳性，VP阴性，不产吲哚，不分解尿素。
实验材料：含有大肠杆菌和沙门氏菌的猪肝脏、培养基（琼脂平板培养基、三糖铁琼脂斜面培养基、麦康凯琼脂、生化培养基、SC）、器械（剪刀、记号笔、接种环、酒精灯、显微镜、试管、玻片、培养皿）、药品（消毒酒精、结晶紫、碘液、酸酒精、品红、松柏油）实验内容及操作程序：一、培养基制备：制备普通琼脂培养基、麦康凯平板、SC增菌培养基、生化培养基，制备方法见附1.二、标本制备：（1）取新鲜猪肝脏一小块，火焰表面消毒。
（2）用浸过消毒液的剪刀剪开一个小口于消过毒的猪肝脏。
（3）用接种环在剪开的肝脏小口沾取肝脏液，分别画线于麦康凯培养基和接种于SC中，37°C恒温培养24小时。
三、细菌分离培养：（1）取出培养了24小时的麦康凯平板。
挑选麦康凯平板上的凸起光滑湿润的粉红菌落染色镜检，看是否为红色短杆菌，若是，即疑似为大肠杆菌，则取其接种于另一麦康凯平板，37°C 恒温培养24小时。
（2）取出培养了24小时的SC增菌培养基，染色镜检，看是否有疑似沙门氏菌，有则取其中细菌画线接种于麦康凯平板上，37°C恒温培养24小时。
四、细菌的鉴定纯化：（1）检查疑似大肠杆菌的培养基是否长满了粉红色菌落，染色镜检。
沙门氏菌原始记录表
第 页，共 页沙门氏菌检验原始记录表检测员： 校核人： 审核人：年 月 日 年 月 日 年 月 日样品编号检测类别环境条件温度： ℃ 湿度： ％检测标准 医疗水污染物排放标准 医疗机构污水和污泥中沙门氏菌的检验方法 GB18466-2005 附录B设备名称设备编号增菌□ 污水 移取200mL 污水，用灭菌滤膜抽滤，用100mL 二倍浓度SF 增菌液将滤膜上的杂质洗脱到灭菌三角烧瓶中，摇匀。
37℃下培养12~24h□ 污泥 称取20g 污泥，加200mL 灭菌水，制成1:10混悬液，移取100mL 混悬液，加入到装有100mL 二倍浓度SF 增菌液的已灭菌三角烧瓶中，摇匀。
37℃下培养24h检验项目现象初判断分离 培养SS 培养基平板 37℃培养， h （24~48h ）BS 培养基平板 37℃培养， h （24~48h ）生化试验表1 在TSI 试验培养基内的反应结果TSI 培养基 37℃培养， h （18~24h ）初步判断斜面 底层 产气 硫化氢注：K ：产碱，A ：产酸；+：阳性，—阴性：初步判断：可疑沙门氏菌或非沙门氏菌。
表2 生化反应初步鉴定表葡萄糖甘露醇 麦芽糖乳糖 蔗糖 靛基质 硫化氢 动力 尿素酶注：＋阳性；－阴性；＋/－阳性或阴性表3 补做试验（选做）侧金盏花醇水杨素 氰化钾结果判断注：＋：阳性，－：阴性；结果判断：沙门氏菌或非沙门氏菌。
血清学鉴定盐水 ，多价抗O 型抗血清（ A-F ） 。
结果 mL 样品中 沙门氏菌 备注。
大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定方案
实验原理：1、大肠杆菌的性质:大肠杆菌是G无芽抱直杆菌，在大多数培养基上表现出不同的特性。
在麦康凯琼脂平板上是凸起光滑湿润的粉红菌落，革兰氏染色镜检为红色短杆菌。
三糖铁琼脂上的反应为斜面和底部都变黄，产气，不产生硫化氢。
生化特性为发酵葡萄糖、乳糖、甘露醇、麦芽糖，不发酵蔗糖。
MR试验，口引噪试验为阳性，VP试验为阴性，不产生H2S,不能利用xx酸盐。
半固体中沿穿刺线向四周生长。
2、沙门氏杆菌的性质：-沙门氏杆菌是G直杆菌。
在麦康凯平板上为细小半透明、圆形、无色小菌落，三糖铁斜面下层变黄色，上层仍为红色，穿刺处为变黑产生H2S。
能发酵葡萄糖产酸产气，能利用枸椽酸盐，不发酵乳糖不利用蔗糖肌醇，MR阳性，VP阴性，不产呵噪，不分解尿素。
实验材料：含有大肠杆菌和沙门氏菌的猪肝脏、培养基（琼脂平板培养基、三糖铁琼脂斜面培养基、麦康凯琼脂、生化培养基、SQ、器械（剪刀、记号笔、接种环、酒精灯、显微镜、试管、玻片、培养皿）、药品（消毒酒精、结晶紫、碘液、酸酒精、品红、松柏油）实验内容及操作程序：一、培养基制备：制备普通琼脂培养基、麦康凯平板、SC增菌培养基、生化培养基，制备方法见附1.二、标本制备：(1) 取新鲜猪肝脏一小块，火焰表面消毒。
(2) 用浸过消毒液的剪刀剪开一个小口于消过毒的猪肝脏。
(3) 用接种环在剪开的肝脏小口沾取肝脏液，分别画线于麦康凯培养基和接种于SC中，37 C恒温培养24小时。
三、细菌分离培养：(1) 取出培养了24小时的麦康凯平板。
挑选麦康凯平板上的凸起光滑湿润的粉红菌落染色镜检，看是否为红色短杆菌，若是，即疑似为大肠杆菌，则取其接种于另一麦康凯平板，37 C恒温培养24小时。
(2) 取出培养了24小时的SC增菌培养基，染色镜检，看是否有疑似沙门氏菌，有则取其中细菌画线接种于麦康凯平板上，37 C恒温培养24小时。
四、细菌的鉴定纯化：(1) 检查疑似大肠杆菌的培养基是否长满了粉红色菌落，染色镜检。
实训二十三 大肠杆菌、沙门菌属生化反应试验
四、结果分析
1、1、2、3、4号菌分别用接种针接种一套肠
编码
鸟 赖 葡 纤 山 侧 鼠 木 蔗 丙 甘 氨 氨 磷 维 梨 金 李 糖 糖 二 露 酸 酸 胨 二 醇 盏 糖 酸 醇 水 糖 花 盐 醇 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 1 0 1 4 2 1 4 2 1 4 2 1 阿 拉 伯 糖 蛋 七 半 氨 白 叶 固 基 胨 苷 体 酸 水 对 照 1 13 14 15 2 4 2 1
4 2 1
－
+ 3
+
－
+ 2
－ －
+ 2
－ － + + 3
+
+ 7+来自 该菌序号为32237
2、鸟氨酸、赖氨酸、氨基酸对照需要加石蜡
封口（氨基酸对照不能变色，如不变色，鸟 氨酸与氨对同色，为阴性；不同色，为阳 性）； 3、1、2、3、4号菌分别用接种针接种一支 KIA； 4、放置温箱37度24h培养后观察结果。
实验十一、大肠杆菌、沙门菌属 生化反应试验
一、目的：
1、掌握肠道杆菌鉴定方法和原则； 2、掌握肠道杆菌生化反应（肠编码）名称、
试验原理。
二、内容：
1、观察记录上次试验结果－画图、描述菌落
特点、颜色； 2、挑取可疑单个菌落接种生化反应培养基； 3、记录生化培养基初始颜色。
三、操作：
微生物实验方案
猪肉中大肠杆菌和沙门氏菌的鉴定一、实验目的：1、掌握食品大肠杆菌、沙门氏菌检验的方法。
2、熟悉检验中各种培养基的配制。
二、实验器材及试剂：乳钵、剪子和镊子、记号笔、温箱、天平、烧杯、量筒、盐水瓶、试管架、瓷缸、灭菌试管、5ml吸管、10ml吸管、洗耳球、电炉、灭菌平皿、PH试纸、乳糖发酵管、无菌生理盐水、乳糖胆盐发增菌液、煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤、亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）、伊红美蓝琼脂（ＥＭＢ）、普通肉汤培养基、SS琼脂、DHL琼脂、三糖铁（TSI）琼脂、硝酸盐还原试验培养基、枸橼酸盐培养基、吲哚（靛基质）试验和乳糖发酵试验培养基周四下午3:00培养基及各种实验材料的准备第一组：乳钵（2个）、剪子和镊子(2套)、天平（2个）、记号笔（5个）、接种环（5个）、第二组：酒精灯（5个）、打火机（2个）、100ml盐水瓶（2个）第三组：5ml的吸管（4个）、10ml的吸管（4个）、平皿（60个），大试管（90个）、第四组：小试管（90）、锥形瓶（2个）、试管架（5）、洗耳球（5个）、玻璃棒（5个）第五组：瓷缸（5个）、电炉（2个）、乳糖发酵小倒管（30个）、烧杯（100ml（5个））、量筒（100ml（5个））周五上午8:30制备各种培养基，将所需的材料及分装后的培养基高压灭菌第一组1、无菌生理盐水 90ml×2 配200ml2、煌绿乳糖胆盐（BGLB）（大试管) 90ml 配100ml3、亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）（大试管) （已配好） 90ml 配100ml第二组4、伊红美蓝琼脂（ＥＭＢ）（2*6=12板）×2 配500ml5、麦康凯培养基（2*6=12板）×2 配500ml6、DHL琼脂（2*6=12板）×2 配500ml第三组7、普通肉汤培养基（大试管) 6管*5ml×5 配200ml8、三糖铁琼脂(TSI) （大试管) 6管*7-8ml×5 配250ml第四组9、枸橼酸盐培养基（小试管) 6管*2-3ml×5 配100ml10、乳糖发酵液（小试管) 6管*2-3ml×5 配100ml第五组11、硝酸盐还原试验培养基（小试管) 6管*2-3ml×5 配100ml12、蛋白胨水（靛基质试验用）（大试管) 6管*5ml×5 配250ml三、检验方法周六8:30-12:00配两组人员安排：范丽娜、丁冲、刘金玲、李凯、袁妍洁、武召珍、姚瑶、温丙言、韩斐、冯文虎（一）检样稀释：以无菌操作，将检样 10g剪碎放于含有 90 mL灭菌生理盐水的灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨作成1： 10的均匀稀释液。
实验五大肠杆菌与沙门氏菌
0.02g 60mL 40mL
• V-P试剂
甲液：α萘酚酒精溶液 （α萘酚5g无水乙醇100mL）
乙液：KOH溶液 （KOH 40g，水100ml）
将甲液和乙液分装棕色瓶中，于4-10℃保存。
五、结果观察
1. 大肠杆菌的生长表现
普通琼脂：形成圆形、光滑、湿润、半透明、灰白色菌落， 直径约2~3mm；
• 在加入甲基红指示剂后显红色为阳性。
② V-P试验： 某些细菌能发酵
粉
碱
红
+ 二乙酰 色
葡萄糖 丙酮酸 乙酰甲基甲醇 2,3-丁二烯醇
+
化 合
胨中的胍基化合物 物
注意：通常M.R和V-P试验是密切相关： 如果一个微生物M.R是阳性，则V-P是阴性；或者相反。
• M.R试剂
甲基红 95％酒精 蒸馏水
3. 生化管接种培养
① 糖发酵试验：
葡乳麦甘蔗
② H2S试验； ③ 尿素酶试验； ④ 枸橼酸盐利用试验。
葡 乳 麦 甘 蔗 H2S 尿 枸
葡 乳 麦 甘 蔗 H2S 尿 枸
大肠杆菌
沙门氏菌
大肠杆菌 沙门氏菌 置 37℃培养
4. 吲哚试验
① 接种大肠杆菌或沙门氏菌于5mL邓亨氏蛋白胨水中， 置37℃培养3-5d；
＋(－) ；＋(－)
3. 细菌的染色、镜检
大肠杆菌
沙门氏菌
G－直杆菌，大小0.4-0.7×2-3μm， 无芽胞，两端钝圆，散在或成对。
4. 生化管接种培养
大肠杆菌
沙门氏菌
葡 乳 麦 甘 蔗 H2S 尿 枸
⊕ ⊕ ⊕ ⊕ ⊕/- － － －
葡 乳 麦 甘 蔗 H2S 尿 枸
⊕－ ⊕ ⊕ － ＋ － ＋
沙门氏菌检验PPTGB4789.4-2016 -JW
BS琼脂：某些非典型菌株产生绿色菌落， 其周围培养基稍微或不呈暗色。如果BS平 板培养24±2小时后，没有出现典型菌落， 则不挑取任何菌落，让平板继续培养24±2 小时。如果经48±2小时培养后，仍没有典 型或可疑的菌落出现，则挑取2个或更多个 非典型的菌落。
38
赖氨酸脱羧酶试验
赖氨酸脱羧酶试验培养基：蛋白胨、酵母浸 膏、葡萄糖、溴麝香草酚蓝（紫）。 原理：细菌使氨基酸脱羧，产生胺类，使培 养基变碱，颜色不改变。 沙门菌的反应：阳性。 意义：柠檬酸杆菌、志贺菌 均为阴 性；埃 希氏菌不定。
亚硫酸铋琼脂（BS）：含有煌绿、亚硫酸铋能抑制大 肠杆菌、变形杆菌和革兰氏阳性菌的生长，但对伤寒、 副伤寒等沙门菌的生长无影响。伤寒杆菌及其他沙门 菌能利用葡萄糖将亚硫酸铋还原成硫酸铋，形成黑色 菌落周围绕有黑色和棕色的环，对光观察可见有金属 光泽。该培养基制备过程不宜过分加热，以免降低其 选择性，应在临用时配制，超过48h不宜使用。陆桥 的说明书要求提前一天配置？
11
四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB)：含有胆盐， 抑制革兰氏阳性球菌和部分大肠埃希氏菌 的生长，而伤寒与副伤寒沙门氏菌仍生长
亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）：可对伤寒 及其他沙门氏菌作选择性增菌，亚硒酸与 蛋白胨中的含硫氨基酸结合，形成亚硒酸 和硫的复合物，影响细菌硫代谢，从而抑 制大肠埃希氏菌、肠球菌和变形杆菌的增 殖。
注：此培养基在制作过程中过分加热可使培养基的选择性降 低，与TTB或SC合用可获得更高的检出率。
35
沙门菌的分离培养基
XLD琼脂：培养基中含有去氧胆酸钠作指示剂， 在该浓度下的去氧胆酸钠也同时作为大肠埃 希氏菌的抑制剂 ，而不影响沙门菌属和志贺 菌属的生长。
XLD培养基分离沙门菌和志贺菌的敏感性超过 了传统的培养基，如：EMB、SS、BS。因这些 培养基尚有抑制志贺菌属生长的潜在因素， 故本培养基是分离鉴定沙门菌及志贺菌属的 可靠培养基。在国外广泛使用。
家禽大肠杆菌和沙门氏菌分离及药敏试验
家禽大肠杆菌和沙门氏菌分离及药敏试验方法鸡大肠杆菌病主要依靠药物防治，但药物的大量使用带来了大肠杆菌多重耐药性和药物残留等诸多问题。
目前世界许多地方开展了调查研究试验材料1.病料来源。
养殖户送检样本有典型大肠杆菌和沙门氏菌病变的病死鸡，孵化后期死亡鸡胚（没有出壳鸡苗）作病料。
毛蛋没有出壳小鸡小鸡卵黄囊青年鸡病料2.细菌分离用的培养基：麦康凯培养基、普通培养基、SS培养基、亚硫酸铋培养基等二、试验方法1.大肠杆菌的分离培养。
无菌采取死鸡的肝、孵化后期死胚卵黄囊（没有出壳鸡苗）在麦康凯平板上分区划线37℃培养12~24小时，在麦康凯培养基上生长出边缘整齐稍凸起、表面光滑湿润、直径1～2毫米的红色圆形菌落，革兰氏阴性，接种到SS培养基37℃培养12~24小时，生长出粉红菌落。
亚硫酸铋琼脂大肠杆菌不生长。
2.沙门氏菌分离培养。
无菌采取死鸡的肝、孵化后期死胚卵黄囊在在麦康凯平板上分区划线37℃培养12~24小时，然后挑取麦康凯琼脂平板上淡黄色半透明单个菌落，接种到SS培养基37℃培养12~24小时，生长出黄色半透明或黑色菌落。
亚硫酸铋琼脂沙门氏菌生长绿色单个菌落。
如图：SS培养基沙门氏亚硫酸铋琼脂沙门氏菌麦康凯培养基大肠杆菌SS培养基大肠杆菌和沙门氏菌普通培养基大肠杆菌和沙门氏菌三．药敏试验分离到的大肠杆菌和沙门氏菌混合在一起，涂匀营养培养基，选用的药敏片做好标号，平整贴在培养基上37℃培养12~24小时，观察细菌抑菌圈大小，选抑菌圈越大药物敏感度越高，使用疗效越好。
同时考虑某些药物肠道不吸收问题。
四．药敏分析及预防：该地区的大肠杆菌和沙门氏菌对粘杆菌素、痢菌净、氟苯尼考、硫酸阿米卡星、头孢噻呋、硫酸新霉素较敏感。
合理搭配抗生素使用减少细菌耐药性的产生，临床上长期大量使用不规范抗菌药物，致使大肠杆菌沙门氏菌耐药菌株不断产生，敏感的药物越来越少，也可以据本场的大肠杆菌和沙门氏菌血清型做疫苗预防。
这提示我们每隔一定时间要对本地区的大肠杆菌耐药性进行检测，以便更好地选择敏感有效的药物，以控制该病的流行。
鸡肠道致病菌的分离鉴定试验设计
鸡肠道致病菌的分离鉴定试验设计鸡肠道致病菌种类：大肠杆菌与沙门氏菌实验内容：阶段一：大肠杆菌与沙门氏菌的形态培养特性的观察，实验材料的增菌与直接分离培养。
阶段二：识别菌落、做纯培养及三糖铁琼脂接种阶段三：菌种纯度检查及生化培养基接种阶段四：生化反应结果观察与沙门氏菌血清学诊断。
阶段一：1、材料实验菌种混合菌液甲（大肠杆菌和沙门氏菌），混合菌液乙（产气肠杆菌与普通变形杆菌）观察材料四种细菌的融通培养物、琼脂平板、麦康凯或SS琼脂平板的培养物、三糖铁琼脂培养物。
培养基亚硒酸盐亮绿增菌液或四磺酸钠增菌液；SS琼脂平板、麦康凯、琼脂平板等选择与鉴别培养基。
2、内容与方法培养特性观察对大肠杆菌、沙门氏菌、产气肠杆菌、普通变形杆菌在常用培养基上的培养特性作仔细观察并相互比较。
形态观察以无菌接种环分别挑取上述四种细菌在麦康凯等琼脂平板上生长的单个菌落。
在玻片上制成涂片，待自然干燥后，以火焰固定，用革兰氏染色法染色，镜检。
观察没在细菌的形态、大小与排列方式，并作比较。
这四种细菌都是革兰氏阴性而两端钝圆的杆菌，无芽孢和荚膜，大小差异不显著。
增菌培养用无菌2ml刻度吸管吸取混合菌液甲2ml，分别加入亚硝酸盐亮绿增菌液100ml 的试管与四磺酸钠增菌液10ml的试管中各1ml。
换另一支无菌吸管，以同样的方法将混合菌液乙接种到两种增菌液中，接种后轻轻摇匀，置37摄氏度恒温箱内培养18---24h。
直接分离培养每种混合菌液用常规划线方法，接种麦康凯琼脂平板和SS琼脂平板各一个。
置37摄氏度恒温箱内培养24h后取出，观察每种平板上两种细菌的生长情况，单个菌落的形态，并比较之。
保留活动单个菌落的平板培养物，待阶段二使用。
阶段二1、材料普通琼脂斜面、三糖铁琼脂等。
2、内容与安排纯培养从经24h培养的麦康凯琼脂平板上，分别选出4种不同的细菌的单个菌落。
然后，用无菌接种环在四个单个菌落的中央表面轻轻取培养物少许，各移植至普通琼脂斜面一管，置37摄氏度恒温箱中培养24后，取出后在冰箱内或室温保存备用。
菌(毒)种鉴定表
菌(毒)种鉴定表主要包括以下内容：
1.鉴定项目：包括菌（毒）种名称、菌（毒）种编号、鉴定机构、
鉴定人、鉴定时间等。
2.鉴定方法：描述所采用的鉴定方法和技术，如形态学观察、生
理生化试验、基因测序等。
3.鉴定结果：详细记录鉴定结果，包括菌（毒）种的形态特征、
生理生化特征、基因序列等信息。
4.结论：根据鉴定结果，给出对菌（毒）种的鉴定结论，如是否
为特定菌（毒）种、与其他已知菌（毒）种的差异等。
5.备注：记录其他相关信息，如鉴定过程中出现的问题、需要特
别说明的事项等。
细菌检验表格整理(球菌、肠杆菌、弧菌)
肠外无菌部位——增菌——BAP；
混有其他污染菌——MAC、EMB——抑制其他革兰阳性菌及少数革兰阴性菌；
粪便标本——BAP、MAC、SS；
鉴定：
（科间鉴别）氧化酶、O/F实验
（属间鉴别）
KIA：分解葡——产酸/产酸产气；
分解乳糖——鉴别致病菌与非致病菌
MIU：U——大肠阴性为黄、变形阳性为红；
MAC：发酵乳糖产酸，形成较大黏液型、红色菌落；
在科玛嘉定位显色培养基呈绿色菌落
BAP、MAC培养基分离培养——挑选可疑菌落；
属间鉴别：
MIU（- - +）I除了产酸克雷伯菌，都为阴
KIA（发酵葡萄糖/发酵乳糖）
志贺菌属
4个血清群：A、B、C、D群
致病与侵袭力、内毒素、外毒素有关；
引起人类细菌性痢疾即菌痢，粪口传播；
生化：
发酵葡萄糖（产酸或产酸产气）、触酶+、氧化酶-、硝酸盐还原+；
抗原构造：
主要包括菌体O抗原（脂多糖）、鞭毛H抗原（蛋白质）、表面抗原（多糖）；
O抗原与H抗原是肠杆菌科血清型分群和分型的依据
抵抗力：
不强，高温即可被杀死
标本采集：
只有肠外感染标本做直接镜检（除血液）；
肠道感染标本（粪便、脓血、粘液）；
分类
（1）肠杆菌科：
革兰阴性杆菌，多为肠道的正常菌群；
（2）KIA：克氏双糖铁培养基，为肠杆菌科细菌常用的鉴别培养基
（3）迁徙现象：普通变形杆菌和奇异变形杆菌的大多数菌种在普通琼脂平板上生长时可蔓延成波纹状，布满整个培养基表面
形态：
革兰阴性杆状或球杆状，无芽孢，多有鞭毛，能运动，致病性的菌株多有菌毛；兼性厌氧，营养要求不高，在BAP和MAC上生长良好；
肉鸡大肠杆菌与沙门氏菌混合感染的诊治
１ ． １ 病 料
２ ． ２ 大肠杆菌分离培养 在 无 菌 操作 下 ， 用接 种 环从 病死 鸡 肝脏 里取 样 ， 划线 于麦 康 凯 琼 脂 培 养 基 上 ， 然 后 将 培 养 皿 倒 置 于 ３ ７℃ 温 箱 中培 养 ２ ４ ｈ 。挑 取 单 个 菌 落 进 行 革 兰 染 色， 显微 镜 检查 。 ２ ． ３ 沙 门氏菌 分离培 养 在 试 管 中配 制 １ ０ ｍ Ｌ亚 硒 酸 盐 胱 氨 酸 增 菌 液 （ Ｓ Ｃ ） ， 无菌 剪取 病死 鸡 肝 脏 １ ｇ放 人 增 菌液 中 ， 塞 上 试管塞 ， ３ ７℃温箱 中培养 １ ２ ｈ 。用接种环蘸取菌液 并 在胆 硫 乳 培 养 基 上 进 行 划 线 ， ３ ７℃ 温 箱 中 培 养 ２ ４ ｈ 。 挑取 单个 菌落 进行 革 兰染色 ， 显 微镜 检查 。
ｏ ｊ ｌ ： 越 畜 牧 兽 差
２ ０ １ ６ （ ０ ２ ） ： １ ０ ５ — １ ０ ６
肉 鸡 大 肠钎 菌 与 沙 ｎ 氏 菌 混 含 感 染 的 诊 治
贺永明 ， 鄂禄 祥
（ 辽 宁农 业 职业 技术学 院 ， 辽 宁 熊岳 １ １ ５ ０ ０ ９ ） 中图分类 号 ： ￥ ８ ５ ８ ． ３ ； ￥ ８ ５ ２ ． ６ １ 文献 标识 码 ： Ｂ 关键 词 ： 肉鸡 ； 大肠杆 菌 ； 沙 门氏茵 ； 混合 感 染 ； 诊 治 摘 文章 编号 ： １ ０ ０ ４—７ ０ ３ ４ （ ２ ０ １ ６ ） ０ ２— ０ １ ０ ５— ０ ２ ‘
流感 、 支原体等疾病的防控会起到很好 的效果。
参考 文献 ：
［ １ ］ 张宗植 ， 金鑫 ， 金 吉东 ， 等． 鹌鹑 大肠杆 菌与沙 门氏菌混 合感染
沙门菌常用生化试验
测试时使用接种针先穿刺至底部，而后于斜面作划线 接种，经培养18-24小时后，依情况判断糖类发酵情形。
观察结果：有三种类型
丙二酸盐试验 阳性（兰） 阴性（不变）
沙门菌常用生化试验
ONPG试验 阳性（黄） 空白
中华人民共和国国家标准
GB/T 4789.4-2003
微生物学检验 沙门氏菌检验
冻肉、蛋品、乳品及其他加工食品
鲜肉、鲜蛋、鲜乳或其他未经加工的食品
前增菌法 25g＋BPW225mL
36 ℃ ± 1 ℃ 一般4h，干蛋品18h～24h
非如左述的各种反应结果 非沙门氏菌
（一）前增菌 •前增菌：使食品加工过程中受伤的沙门菌细胞恢 复活力 •未经加工过的食品，检验前不需要前增菌
前增菌：25克（加工食品）+225毫升缓冲蛋白胨 水 37度培养4小时（干蛋品18—24小时）。
选择性增菌
含选择性抑制剂 1：1稀释液而不是1：10，提高检出率
无色半透明，产硫化氢 乳糖迟缓阳性或阴性的菌株，与沙门氏菌Ⅰ、 菌株有的菌落中心带黑色， Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ相同；乳糖阳性的菌株为粉 但不如以上培养基明显. 红色，中心黑色，但中心无黑色形成时与大
肠艾希氏菌不能区分.
肠道菌选择性培养基分离培养
SS平板
分离肠道致病菌的强选择培养基 SS平板组成
slant color/butt color/ gas production/hydrogen sulfide production
a. uninoculated b. little change/alkaline/-/c. alkaline/acid/-/+ d. acid/acid/+/+ e. acid/acid/+/-
大肠杆菌与沙门氏菌鉴定
大肠杆菌与沙门氏菌的鉴定08动检1班：魏静翟阿官李盼盼尚延丽田方方崔亚婷一、实验目的与要求1、通过本实验了解大肠杆菌及沙门氏菌的主要生化特性与培养特性2、掌握大肠杆菌与沙门氏菌的鉴别方法二、实验器材及试剂温箱、显微镜、载玻片、营养琼脂、接种环、灭菌平皿、麦康凯培养基、无菌试管、伊红美兰培养基、三糖铁培养基、革兰氏染色剂、棉签、火柴等三、实验内容1、直接镜检法：1）操作步骤：a）用棉签沾取适量样液直接涂在载玻片上b）用革兰氏染色剂染色c）显微镜下观察2）预期实验结果：a）大肠杆菌：大肠杆菌为革兰氏阴性菌，中等大小，两端略圆的短粗杆菌，成单个存在，也有成双排列；周身鞭毛，能运动，有时两端着色较浓，要注意与巴氏杆菌区分开来。
b）沙门氏菌：沙门氏菌也为革兰氏阴性菌，无芽孢，大小通常为0.7~1.5um*2.0~5.0um，菌端钝圆，散在，偶有短丝状，无荚膜，除鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌外均有周身鞭毛，能运动，绝大多数菌株有菌毛。
2、分离培养法：将样液分别划线接种在麦康凯培养基、伊红美兰培养基上，温箱培养24h后观察生长情况，根据菌落的形态、颜色、大小等方面的差异来鉴别大肠杆菌和沙门氏菌。
1）麦康凯培养基（预期实验结果）：a）大肠杆菌：鲜桃红色或微红色，菌落中心呈深桃红色，圆形，扁平，边缘整齐，表面光滑，湿润；b）沙门氏菌：无色至浅橙色，透明或半透明，菌落中心有时为暗色。
2）伊红美兰培养基（预期实验结果）：a）大肠杆菌：紫黑色菌落，有的有金属光泽b）沙门氏菌：形态特征与在麦康凯培养基上的相似2、三糖铁培养基穿刺试验1）操作方法：将待检样液穿刺接种于三糖铁培养基中，培养18~24h后，取出观察2）预期实验结果：a）大肠杆菌：穿刺后不变黑，表面呈黄色b）沙门氏菌：穿刺底部有气体，穿刺后变黑，中间为黄色表面为红色3、乳糖发酵试验1）操作方法：将待检样液接种于乳糖发酵管内放于温箱内培养18h后，观察结果2) 预期实验结果：a）大肠杆菌：产酸产气b）沙门氏菌：不产酸产气。
大肠杆菌和沙门氏菌生化试验鉴定表
大肠杆菌和沙门是杆菌鉴定表1．糖发酵试验取纯培养物分别接种葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇和蔗糖发酵管，37℃培养2～3d，观察结果。
2．吲哚试验取纯培养物接种蛋白胨水，37℃培养2～3d，加入吲哚指示剂，观察结果。
3．MR试验和VP试验取纯培养物接种葡萄糖蛋白胨水，37℃培养2～3d，分别加入MR和VP指示剂，观察结果。
4．枸橼酸盐试验取纯培养物接种枸橼酸盐培养基上，37℃培养18～24h，观察结果5．硫化氢试验取纯培养物接种醋酸铅琼脂，37℃培养18～24h，观察结果。
大肠杆菌与沙门氏菌生化试验鉴别表注：⊕产酸产气、+ 阳性、- 阴性、 +/- 大多数菌株阳性/少数阴性、 v 种间有不同反应。
（四）运动性检查及在鉴别培养基上的培养特性1．运动性有周鞭毛，镜检可见呈圆周运动；半固体培养基穿刺培养使培养基呈云雾状。
2．培养特性钩取纯培养物分别接种远滕氏琼脂平板、伊红美蓝琼脂平板、SS琼脂平板，37℃温箱培养18～24ｈ，观察菌落特征。
1、给出周鞭毛菌镜下观察结果的动态图片画2、给出在半固体培养基上的结果观察图片大肠杆菌与沙门氏菌在鉴别培养基上的菌落特征由于大肠杆菌合成代谢能力强，在含无机盐、胺盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。
最适生长温度为37℃，在42-44℃条件下仍能生长，生长温度范围为15-46℃。
在普通营养琼脂上生长表现3种菌落形态：（1）光滑型：菌落边缘整齐，表面有光泽、湿润、光滑、呈灰色，在生理盐水中容易分散。
（2）粗糙型：菌落扁平、干涩、边缘不整齐，易在生理盐水中自凝。
（3）粘液型：常为含有荚膜的菌株。
此菌兼性厌氧，在有氧条件下生长良好，最适生长pH为6.8-8.0，所用培养基pH为7.0-7.5,若pH值低于6.0或高于8.0则生长缓慢。
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沙门氏菌鉴定检验原始记录
甘露醇
山梨醇
ONPG
结果判断
注：＋：阳性，－：阴性；结果判断：沙门氏菌或非沙门氏菌。
5.血清学鉴定：（20年月日）
玻片上划出2个约1cm×2cm的区域，挑取1环待测菌，各放1/2环于玻片上的每一区域上部，在其中一个区域下部加1滴多价菌体（O）抗血清，在另一区域下部加入1滴生理盐水，作为对照。再用无菌的接种环或针分别将两个区域内的菌落研成乳状液。将玻片倾斜摇动混合1min，并对着黑暗背景进行观察。
3.分离：（20年月日）
分别用接种环取增菌液1环，划线接种于一个BS琼脂平板和一个XLD琼脂平板。于℃分别培养h（XLD琼脂平板）h（BS琼脂平板），观察各个平板上生长的菌落,
BS上可疑菌落形态：※菌落颜色：□黑色有金属光泽□棕褐色□灰色□灰绿色
※周围培养基：□呈黑色或棕色□不变□
※□其它：
XLD上可疑菌落形态：□粉红色□黄色□黑色中心□全部黑色的菌落□其它：
血清凝集结果：（+或-）
7.结果：（20年月日）
沙门氏菌。
检验者：复核者：检毕日期：20 年 月 日
沙门氏菌
1.前增菌：（20年月日）
取检样加入含BPW225mL的均质杯中，以r/min均质min，转入锥形瓶℃培养h；
2.增菌：（20年月日）
轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1 mL，转种于10 mL TTB内，于℃培养h。同时，另取1 mL，转种于10 mL SC内，于℃培养h；
4.生化试验：（20年月日）
自选择性琼脂平板上分别挑取个典型或可疑菌落，接种三糖铁琼脂，先在斜面划线，再于底层穿刺；接种针不要灭菌,直接接种赖氨酸脱羧酶试验培养基、蛋白胨水（供做靛基质试验）、尿素琼脂（pH7.2）、氰化钾（KCN）培养基和营养琼脂平板，于℃培养h，将已挑菌落的平板储存于室温保留24 h，以备必要时复查。反应结果见年月日
微生物限度检查记录表格
乳糖胆盐发酵培养基（18～
24h）
EMB培养基（18～24h）
（批号：）
乳糖发酵培养基（24～
48h）
供
试
品
10-
（批号：）
（批号：）
1-
10
2-
10
3
阴性对照
阳性对照
结果
个/g（规定：＜个/
微生物限度检查（根据需要在表头补充产品名称、批号，日期等）
供试液制备
取供试品g，加入pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至ml，混匀。
供试液制备
取供试品g，加入pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至ml，混匀。
□研钵法□振摇法
细菌、霉菌和酵母菌计数□
平皿
号
细菌数（30～35℃3天）
营养琼脂培养基（批号：）
霉菌和酵母菌数（23～28℃5天）
玫瑰红钠琼脂培养基（3
10-4
阴性对照
10-1
10-2
阴性对照
1
2
□研钵法□振摇法
细菌、霉菌和酵母菌计数□
平皿
号
细菌数（30～35℃3天）
营养琼脂培养基（批号：）
霉菌和酵母菌数（23～28℃5天）
玫瑰红钠琼脂培养基（批号：）
10-1
10-2
10-3
10-4
阴性对照
10-1
10-2
阴性对照
1
2
平均
结果
cfu/g（规定：≤cfu/g）
cfu/g(规定：≤cfu/g)
大肠埃希菌检查□培养条件：30～35℃18～24h
平均
结果
cfu/g（规定：≤cfu/g）
cfu/g(规定：≤cfu/g)
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大肠杆菌和沙门是杆菌鉴定表
1．糖发酵试验取纯培养物分别接种葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇和蔗糖发酵管，37℃培养2～3d，观察结果。
2．吲哚试验取纯培养物接种蛋白胨水，37℃培养2～3d，加入吲哚指示剂，观察结果。
3．MR试验和VP试验取纯培养物接种葡萄糖蛋白胨水，37℃培养2～3d，分别加入MR和VP指示剂，观察结果。
4．枸橼酸盐试验取纯培养物接种枸橼酸盐培养基上，37℃培养18～24h，观察结果
5．硫化氢试验取纯培养物接种醋酸铅琼脂，37℃培养18～24h，观察结果。
大肠杆菌与沙门氏菌生化试验鉴别表
注：⊕产酸产气、+ 阳性、- 阴性、+/- 大多数菌株阳性/少数阴性、v 种间有不同反应。
（四）运动性检查及在鉴别培养基上的培养特性
1．运动性有周鞭毛，镜检可见呈圆周运动；半固体培养基穿刺培养使培养基呈云雾状。
2．培养特性钩取纯培养物分别接种远滕氏琼脂平板、伊红美蓝琼脂平板、SS琼脂平板，37℃温箱培养18～24ｈ，观察菌落特征。
1、给出周鞭毛菌镜下观察结果的动态图片画
2、给出在半固体培养基上的结果观察图片
大肠杆菌与沙门氏菌在鉴别培养基上的菌落特征
由于大肠杆菌合成代谢能力强，在含无机盐、胺盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。
最适生长温度为37℃，在42-44℃条件下仍能生长，生长温度范围为15-46℃。
在普通营养琼脂上生长表现3种菌落形态：（1）光滑型：菌落边缘整齐，表面有光泽、湿润、光滑、呈灰色，在生理盐水中容易分散。
（2）粗糙型：菌落扁平、干涩、边缘不整齐，易在生理盐水中自凝。
（3）粘液型：常为含有荚膜的菌株。
此菌兼性厌氧，在有氧条件下生长良好，最适生长pH为，所用培养基pH为若pH值低于或高于则生长缓慢。