细胞生物学研究方法学习课件
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第三章细胞生物学研究方法精品PPT课件
（1.33x10-5～ 散射和透射形成明 1.33x10-3Pa） 暗反差
（3）透射电镜主要制样技术
1）超薄切片技术 用 于 透 射 电 镜 （ TEM） 观 察样本内部超微结构。
电子束穿透力很弱，很难通过细胞、组织切 片，样品须先制备超薄切片。
超薄切片厚度：50～100nm 制备程序：
取材 固定 脱水 浸透 包埋 切片 染色 观察
第三章 细胞生物 学研究方法
本章学习要求
概要了解细胞生物学常用研究方 法，包括细胞形态结构观察方法、细胞组 分分析方法、细胞培养方法、细胞工程与 显微操作技术等。
本章主要教学内容
细胞形态结构观察方法 细胞组分分析方法 细胞培养、细胞工程与显微操
作技术
第一节 细胞形态结构的观察方法
一、光学显微镜技术（light microscopy)
载网上一般包被一层支持膜，以支撑 载网上的超薄切片，增加其稳定性。 最常用的支持膜是Formvar(聚乙烯甲 醛)、火棉胶、碳等。
染色与观察
生物样品多数是由碳、氢、氧、氮等元素组 成的，这些元素的原子序数低，散射电子的 能力不强，在电镜下的反差非常弱，因此通 常需用高分子量的金属盐来对超薄切片进行 染色，由于细胞的不同结构对金属盐的亲和 力不同，因此染色后不同结构对电子的散射 能力亦不同，从而增强了细胞结构的反差。
3、激光共焦扫描显微镜技术
（Laser Scanning Confocal Microscopy）
原理
物镜和聚光镜同时聚焦到同一小点，彼此互相共 聚焦。激光束（光源）经双色镜反射后，通过物 镜汇聚到样品某一焦点。从焦点发射的荧光（样 品一般经免疫荧光标 记）经透镜汇聚成像， 被检测器检出。通过 样品其他部位的激光 即激光发出的荧光不 会聚焦成像，因而检 测器不能检出。
（3）透射电镜主要制样技术
1）超薄切片技术 用 于 透 射 电 镜 （ TEM） 观 察样本内部超微结构。
电子束穿透力很弱，很难通过细胞、组织切 片，样品须先制备超薄切片。
超薄切片厚度：50～100nm 制备程序：
取材 固定 脱水 浸透 包埋 切片 染色 观察
第三章 细胞生物 学研究方法
本章学习要求
概要了解细胞生物学常用研究方 法，包括细胞形态结构观察方法、细胞组 分分析方法、细胞培养方法、细胞工程与 显微操作技术等。
本章主要教学内容
细胞形态结构观察方法 细胞组分分析方法 细胞培养、细胞工程与显微操
作技术
第一节 细胞形态结构的观察方法
一、光学显微镜技术（light microscopy)
载网上一般包被一层支持膜，以支撑 载网上的超薄切片，增加其稳定性。 最常用的支持膜是Formvar(聚乙烯甲 醛)、火棉胶、碳等。
染色与观察
生物样品多数是由碳、氢、氧、氮等元素组 成的，这些元素的原子序数低，散射电子的 能力不强，在电镜下的反差非常弱，因此通 常需用高分子量的金属盐来对超薄切片进行 染色，由于细胞的不同结构对金属盐的亲和 力不同，因此染色后不同结构对电子的散射 能力亦不同，从而增强了细胞结构的反差。
3、激光共焦扫描显微镜技术
（Laser Scanning Confocal Microscopy）
原理
物镜和聚光镜同时聚焦到同一小点，彼此互相共 聚焦。激光束（光源）经双色镜反射后，通过物 镜汇聚到样品某一焦点。从焦点发射的荧光（样 品一般经免疫荧光标 记）经透镜汇聚成像， 被检测器检出。通过 样品其他部位的激光 即激光发出的荧光不 会聚焦成像，因而检 测器不能检出。
第三章 细胞生物学的研究方法_PPT课件
激光共聚焦的工作原理简单表达就是它采用激光为光源，在传统荧光 显微镜成像的基础上，附加了激光扫描装置和共轭聚焦装置，通过计 算机控制来进行数字化图像采集和处理的系统。
2.激光扫描共聚焦显微镜的应用
完成对活细胞和组织或切片进行连续扫描，获得精细的单个细胞 或一群细胞的各个层面结构三维图像。
利用荧光标记，测定细胞内如钠、钙、镁、 PH等离子浓度的比率 及动态变化；
不要求真空
要求真空
1.33x10-5～ 1.33x10-3Pa
利用样品对电子的散射 和透射形成明暗反差
（二）电子显微镜成像原理
原理:在真空条件下,电子束经高压加速后,穿 透样品时形成散射电子和透射电子,它们在 电磁透镜的作用下在荧光屏上成像。
（三）电子显微镜的基本构造
透射电镜(Transmission electron microscope ) 1.电子束照明系统 2.成像系统 3.真空系统 4.记录系统
分辨率
2000Å 1000Å 0.2～1Å
电镜与光镜的比较
显微镜 分辨本 领
光源
透镜
真空
成像原理
LM TEM
200nm 100nm
0.1nm
可见光 玻璃透镜 （400-700）
紫外光 玻璃透镜 （约 200nm)
电子束
（0.010.9nm）
电磁透镜
不要求真空 利用样品对光的吸收形 成明暗反差和颜色变化
第二节 细胞及其组分的分析方法
一.超离心技术
超离心（ultracentrifugation ）：根据物质沉降系数、质量、 浮力因子等不同，应用强大的离心力使物质分离、浓缩提 纯的方法。
（二）相差显微镜(phase contrast microscope) 1.相差显微镜的结构 1）环形光阑（annular diaphragm）：由大小不同的孔环成的光阑。它位于光源与 聚光器之间，作用是 使透过聚 光器的光线形成空心光 锥，焦聚到标本上。 2）相位板（annular phaseplate）：与物镜相适应的圆环，涂有氟化镁等电解质， 位于物镜后焦面，它可将直射光或衍射光的相位推迟1/4λ。分为两种：
2.激光扫描共聚焦显微镜的应用
完成对活细胞和组织或切片进行连续扫描，获得精细的单个细胞 或一群细胞的各个层面结构三维图像。
利用荧光标记，测定细胞内如钠、钙、镁、 PH等离子浓度的比率 及动态变化；
不要求真空
要求真空
1.33x10-5～ 1.33x10-3Pa
利用样品对电子的散射 和透射形成明暗反差
（二）电子显微镜成像原理
原理:在真空条件下,电子束经高压加速后,穿 透样品时形成散射电子和透射电子,它们在 电磁透镜的作用下在荧光屏上成像。
（三）电子显微镜的基本构造
透射电镜(Transmission electron microscope ) 1.电子束照明系统 2.成像系统 3.真空系统 4.记录系统
分辨率
2000Å 1000Å 0.2～1Å
电镜与光镜的比较
显微镜 分辨本 领
光源
透镜
真空
成像原理
LM TEM
200nm 100nm
0.1nm
可见光 玻璃透镜 （400-700）
紫外光 玻璃透镜 （约 200nm)
电子束
（0.010.9nm）
电磁透镜
不要求真空 利用样品对光的吸收形 成明暗反差和颜色变化
第二节 细胞及其组分的分析方法
一.超离心技术
超离心（ultracentrifugation ）：根据物质沉降系数、质量、 浮力因子等不同，应用强大的离心力使物质分离、浓缩提 纯的方法。
（二）相差显微镜(phase contrast microscope) 1.相差显微镜的结构 1）环形光阑（annular diaphragm）：由大小不同的孔环成的光阑。它位于光源与 聚光器之间，作用是 使透过聚 光器的光线形成空心光 锥，焦聚到标本上。 2）相位板（annular phaseplate）：与物镜相适应的圆环，涂有氟化镁等电解质， 位于物镜后焦面，它可将直射光或衍射光的相位推迟1/4λ。分为两种：
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结构：在普通光学显微镜上添加一些附件： A.光源：通常采用超高压汞灯或氙灯，由它发出各种波长的
光。
B.滤片：根据性能分为两组。 一是激发滤片，作用是仅使一定波长的激发光透过照射到 标本上，而将其它光都吸收掉。 二是阻断滤片，安装在物镜后，作用是吸收和阻挡激发光 进入目镜，以免干扰荧光和刺伤眼睛；选择并让特异的荧 光透过，表现出专一的荧光色彩。
通过公式可知光学显 微镜最大分辨率0.2um
α
减小分辨率需减小λ
标本
介质 折射率
空气 1
水 1.33
香柏油 1.515
α溴萘 1.66
显微镜的几个光学特点：
sin α /2的最大值小于1；
普通光线的波长为400~700nm，光镜分辨力约为 0.2μm，人眼的分辨力为0.2mm，因此显微镜的最大有 效倍数为1000X。
普通光学显微镜
神经节细胞内高尔基体
组织切片的制备
固定的目的是使细胞及其成分锁定在原有的位置， 常用的有乙醇、甲醇、甲醛、戊二醛等。
常用的染色剂有苏木精、伊红、孔雀绿、苏丹黑、 考马斯亮蓝等，它们对细胞某一特殊的亚细胞成分 有特异的亲和性。
切片厚度1-10um
细胞染色常用方法主要包括
1.简单染色法，常用碱性染料如美蓝等进行简单染色; 2.革兰氏染色法，主要包括结晶紫初染、碘液媒染、乙醇(或丙酮) 脱色以及番红复染四个过程;微生物染色 3.瑞氏染色法：瑞氏染料溶剂主要是由伊红-美蓝（亚甲基蓝）组 成; 4.吉姆萨染色法，吉姆萨染色原理与结果和瑞氏染色法基本相同， 该法对细胞核和寄生虫着色较好，结构显示更清晰，而胞质和中性 颗粒则着色较差，染色体显带染色G带 5苏木素-伊红染色 供组织学诊断用的优秀常规染色剂，可使胞核 表现为蓝色，胞浆和结缔组织纤维呈各种色调的粉红，因此这是一 种最常用的常规染色剂 6.细胞免疫荧光染色法，免疫荧光染色的主要原理是利用抗原 抗 体之间的特异性结合。
第03章细胞生物学研究方法ppt课件
这只老动鼠物身上细的胞培养技术的应用
“人耳”是由我国 科学家•（曹1）谊生林产教蛋授白生物制品：病毒疫苗、干 利用细扰胞素工、单程克技隆术抗体等。 复制出•（来2）的获。得大量自身的皮肤细胞，用于植
皮。
•（3）用于检测有毒物质
•（4）用于生理、病理、药理等方面的研 究，为治疗和预防疾病提供理论依据
（如核酸与蛋白质等）在细胞内的含量。 包括： 紫外光显微分光光度测定法
可见光显微分光光度测定法
流式细胞仪（Flow Cytometry）
主要应用：
用于定量测定细胞中的DNA、RNA或某一特异蛋白的含量；
测定细胞群体中不同时相细胞的数量； 从细胞群体中分离某些特异染色的细胞； 分离DNA含量不同的中期染色体。
流式细胞术
第三节 细胞培养、细胞工程与 显微操作技术
细胞的培养
细胞工程
一、细胞的培养
动物细胞培养
类型：原代培养细胞（primary culture cell） 继代培养细胞（sub-culture cell）
细胞系（cell line） 有限细胞系，永生细胞系 细胞株（cell strain）
Feulgen Staining
三、特异蛋白抗原的定位与定性
免疫荧光技术：
快速、灵敏、有特异性，但其分辨率有限 （图）
蛋白电泳(SDS-PAGE) 与免疫印迹反应(Western-Blot)
免疫电镜技术：
免疫铁蛋白技术 免疫酶标技术 免疫胶体金技术 应用：通过对分泌蛋白的定位，可以确定某种蛋白的分
利用样品对电子的散射 和透射形成明暗反差
电镜与光镜光路图比较
电子显微镜的基本构造
主要电镜制样技术
超薄切片技术 用于电镜观察的样本制备示意图 负染色技术（Negative staining）与金属投影
第三章 细胞生物学研究方法 PPT
荧光蛋白作为各种生物现象的亮光基因标签的价值。钱永健
对我们理解绿色荧光蛋白如何发光作出了贡献,他还将颜色标
签扩展至除绿色之外的颜色,以便能够用各种颜色标识不同的
20蛋21/6白/27和细胞。
8
1、2 电子显微镜
• 电镜采纳波长比可见光短得多的电子束作 为光源。
• 电子束的波长只有0、01-0、9nm,分辨率可 达0、2nm,是光镜的1000倍。
(400-700)
成明暗反差和颜色变化
TEM
电子束 0、2nm (0、01-0、 电磁透镜
9)
要求真空
1、33x105～1、
33x10-3Pa
利用样品对电子的散射 和透射形成明暗反差, 图像需要用荧光屏显示 或者感光胶片作记录。
2021/6/27
11
电镜超薄样本制备示意图
2021/6/27
12
冷冻蚀刻技术
第三章 细胞生物学研究方法
细胞生物学研究方法
第一节 细胞形态结构的观察方法 第二节 细胞及其组分的分析方法 第三节 细胞培养与细胞工程 第四节 细胞及生物大分子的动态变化 第五节 模式生物与功能基因组的研究
2021/6/27
2
第一节 细胞形态结构的观察方法
• 工欲善其事,必先利其器。显微镜之 于生物学,犹如望远镜之于天文学。
究的工具之一。
• 目前,荧光显微镜得到了广泛 的应用,特别是细胞内动态的 研究。
2021/6/27
7
荧光蛋白
日本科学家下村修、美Байду номын сангаас科学家马丁·沙尔菲和美籍华裔
科学家钱永健获得2008年诺贝尔化学奖。
下村修是首位从水母中分离绿色荧光蛋白的科学家,他发
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B. 用特异性RNA探针检测鼠胚胎切片中Sonic hedgehog 基因mRNA的表达，结果与A图类似：在背/腹轴上的神经 管下面的脊索中（红箭头所示），有Sonic hedgehog mRNA的表达。
C.果蝇全胚胎原位杂交结果，显示果蝇气管发育中某种 特定mRNA的表达。可见果蝇身体节段呈现清晰的重复模 式，前部（头）在上面，腹部靠左。
原位杂交技术与原理
原位杂交技术
原位杂交检测全胚胎及胚胎切片上特异基因的活性
A. 用特异性RNA探针检测发育约10天的全鼠胚胎中 Sonic hedgehog 基因mRNA的表达，显色结果表明Sonic hedgehog mRNA主要表达于脊索，即将来发育成脊柱脊 髓的中胚层轴线（红箭头所示）。
记忆形成中电极记录神 经元冲动
纳米丝信号诱导干细胞分化为不同类型的组织细胞。
二、细胞生物学的主要研究方法及进展
➢ 可视化技术（Visualizing Cells） ➢ 原位组分显示技术（ Displaying techniques in Situ） ➢ 体外培养技术（Cell and Tissue Culture in Vitro） ➢ 细胞及其组分的分离和纯化技术（Segregation and
应该注意不断地改进和革新所用的工具、方法和 技术，使其更加实用和完善，要善于从其他学科领 域引入并建立新的技术方法和技术途径，更要努力 提出和创立新的技术思路或设想，以对学科的进步 做出更多的贡献。
细胞生物学的研究方法的进步和实验工具的革新， 尤其是具有突破意义的新技术的建立，必然对学科的 发展起到巨大的推动作用。
（三）体外培养技术（culture techniques in Vitro）
使器官和细胞在模拟体内环境的实验状况下生 长，有利于探索生命的基本活动规律并获得大量的 特定的细胞。
荧光显微镜
相差显微镜
果蝇胚胎的基因差异性表达
将带有不同荧光标记的三种抗体与果蝇早期胚胎 的细胞核中特异性蛋白结合，在荧光显微镜下不同荧 光标记分别发出黄、绿、蓝荧光，黄色和蓝色荧光重 叠区显示红色荧光，每个小的球状荧光区域对应一个 细胞核。荧光标记显示的不同蛋白质定位结果表明： 在果蝇胚胎发育早期，细胞间即已出现差异，特定基 因的表达开启于特定的细胞类型中，控制着果蝇身体 进一步发育为重复节段。
对细胞及组织的多种化学成分分进行定性、定 位和定量的研究。
原位组分展示技术
免疫细胞化学技术（immunocytochemistry，ICC）是 利用免疫学中抗原抗体特异性结合的原理来定性和定位研 究器官、组织和细胞中的生物活性大分子的技术。
免疫细胞化学技术
放射自显影术（autoradiography）以放射性核素标记生 物标本中的大分子或其前体物质，在显微和亚显微结构水 平显示组织和细胞内放射性核素标记的物质的位置和数量 及其变化。
purification of cellular components) ➢ 生物大分子的分析和鉴定技术（Analysis and
Identification of biomacromolecules ） ➢ 其他技术（Other techniques）
（一）可视化技术（Visualizing Cells）
细胞生物学研究方法
(Cell Biology Research Methods)
内容
一、细胞生物学研究方法的评价
二、细胞生物学的主要研究方法 及进展
细胞生物学研究方法
一、细胞生物学研究方法的评价
细胞生物学是一门重要的生命科学学科，生命科 学的理论建立在严密的科学实验的基础上，因此，细 胞生物学研究技术和方法的进步以及实验工具的革新， 尤其是具有突破意义的新技术新方法的建立，必然对 学科的发展起到巨大的推动作用。
法检测，因此不能成像。
激光扫描共聚焦显微镜图像及计算机三维重建图像
扫描隧道显微镜、X线衍射技术和原子力显微镜 等成像方法使研究者能在分子水平探索细胞的微细 结构及其功能。
血细胞经新型抗菌肽Phyllomelittin（猴树蛙）处理 后的表面变化。
（二）原位组分展示技术（displaying techniques in Situ）
果蝇胚胎的基因差异性表达
四种不同的光镜成像技术下的培养的成纤维细胞图像，
大部分现代显微镜都可以通过互换光学部件获得这四种图 像。
A.亮视野显微镜；B.相差显微镜；C.Normarski相差显 微镜；D.暗视野显微镜
激光扫描共聚焦显微镜成像原理
A 激光经过针孔聚焦于样品的一点上。 B 从样品点上发出的荧光聚焦于针孔到达检测器。 C 从样品的其他部位发出的光线不能聚焦于针孔处，检测器无
放射自显影术
胰岛B细胞电镜放射自显影结果 A. 3H-亮氨酸脉冲标记完成10分钟后，被标记的胰岛
素蛋白（黑色银颗粒）从粗面内质网进入高尔基复 合体中； B. 3H-亮氨酸脉冲标记完成45分钟后，被 标记的胰岛素蛋白进入分泌颗粒内。
原位杂交技术（in situ hybridization，ISH）是使用 标记的DNAБайду номын сангаасRNA探针，通过分子杂交检测原位组织和 细胞中的特异性核酸分子的方法。
学习细胞生物学应该了解各种方法和技术的基本 原理、主要过程和适用范围。
应该认识到所有的技术和方法均有其局限性，没 有任何一种方法在解决科学问题上是万能的和不可替 代的。
电镜下细胞超微结构的观察
电镜下细胞超微结构的观察
细胞体外培养
应该根据具体的研究对象和所处的研究条件，选 择最合适的方法组合，设计最佳的技术途径以达到研 究目的。昂贵的设备或者复杂的技术方法在研究中并 不一定是最可靠和绝对必要的，而设计巧妙的、简明 的技术路线同样可以阐明重大的科学命题。
显微成像技术帮助人们在不同的层次观察和研 究组织、细胞的活动及其规律。
光镜显示显微结构（microscopic structure）,电 子显微镜显示的亚微结构（submicroscopic structure） 或超微结构(ultrastructure）。
最早的一台光学显微镜
光学显微镜和电子显微镜的成像原理
C.果蝇全胚胎原位杂交结果，显示果蝇气管发育中某种 特定mRNA的表达。可见果蝇身体节段呈现清晰的重复模 式，前部（头）在上面，腹部靠左。
原位杂交技术与原理
原位杂交技术
原位杂交检测全胚胎及胚胎切片上特异基因的活性
A. 用特异性RNA探针检测发育约10天的全鼠胚胎中 Sonic hedgehog 基因mRNA的表达，显色结果表明Sonic hedgehog mRNA主要表达于脊索，即将来发育成脊柱脊 髓的中胚层轴线（红箭头所示）。
记忆形成中电极记录神 经元冲动
纳米丝信号诱导干细胞分化为不同类型的组织细胞。
二、细胞生物学的主要研究方法及进展
➢ 可视化技术（Visualizing Cells） ➢ 原位组分显示技术（ Displaying techniques in Situ） ➢ 体外培养技术（Cell and Tissue Culture in Vitro） ➢ 细胞及其组分的分离和纯化技术（Segregation and
应该注意不断地改进和革新所用的工具、方法和 技术，使其更加实用和完善，要善于从其他学科领 域引入并建立新的技术方法和技术途径，更要努力 提出和创立新的技术思路或设想，以对学科的进步 做出更多的贡献。
细胞生物学的研究方法的进步和实验工具的革新， 尤其是具有突破意义的新技术的建立，必然对学科的 发展起到巨大的推动作用。
（三）体外培养技术（culture techniques in Vitro）
使器官和细胞在模拟体内环境的实验状况下生 长，有利于探索生命的基本活动规律并获得大量的 特定的细胞。
荧光显微镜
相差显微镜
果蝇胚胎的基因差异性表达
将带有不同荧光标记的三种抗体与果蝇早期胚胎 的细胞核中特异性蛋白结合，在荧光显微镜下不同荧 光标记分别发出黄、绿、蓝荧光，黄色和蓝色荧光重 叠区显示红色荧光，每个小的球状荧光区域对应一个 细胞核。荧光标记显示的不同蛋白质定位结果表明： 在果蝇胚胎发育早期，细胞间即已出现差异，特定基 因的表达开启于特定的细胞类型中，控制着果蝇身体 进一步发育为重复节段。
对细胞及组织的多种化学成分分进行定性、定 位和定量的研究。
原位组分展示技术
免疫细胞化学技术（immunocytochemistry，ICC）是 利用免疫学中抗原抗体特异性结合的原理来定性和定位研 究器官、组织和细胞中的生物活性大分子的技术。
免疫细胞化学技术
放射自显影术（autoradiography）以放射性核素标记生 物标本中的大分子或其前体物质，在显微和亚显微结构水 平显示组织和细胞内放射性核素标记的物质的位置和数量 及其变化。
purification of cellular components) ➢ 生物大分子的分析和鉴定技术（Analysis and
Identification of biomacromolecules ） ➢ 其他技术（Other techniques）
（一）可视化技术（Visualizing Cells）
细胞生物学研究方法
(Cell Biology Research Methods)
内容
一、细胞生物学研究方法的评价
二、细胞生物学的主要研究方法 及进展
细胞生物学研究方法
一、细胞生物学研究方法的评价
细胞生物学是一门重要的生命科学学科，生命科 学的理论建立在严密的科学实验的基础上，因此，细 胞生物学研究技术和方法的进步以及实验工具的革新， 尤其是具有突破意义的新技术新方法的建立，必然对 学科的发展起到巨大的推动作用。
法检测，因此不能成像。
激光扫描共聚焦显微镜图像及计算机三维重建图像
扫描隧道显微镜、X线衍射技术和原子力显微镜 等成像方法使研究者能在分子水平探索细胞的微细 结构及其功能。
血细胞经新型抗菌肽Phyllomelittin（猴树蛙）处理 后的表面变化。
（二）原位组分展示技术（displaying techniques in Situ）
果蝇胚胎的基因差异性表达
四种不同的光镜成像技术下的培养的成纤维细胞图像，
大部分现代显微镜都可以通过互换光学部件获得这四种图 像。
A.亮视野显微镜；B.相差显微镜；C.Normarski相差显 微镜；D.暗视野显微镜
激光扫描共聚焦显微镜成像原理
A 激光经过针孔聚焦于样品的一点上。 B 从样品点上发出的荧光聚焦于针孔到达检测器。 C 从样品的其他部位发出的光线不能聚焦于针孔处，检测器无
放射自显影术
胰岛B细胞电镜放射自显影结果 A. 3H-亮氨酸脉冲标记完成10分钟后，被标记的胰岛
素蛋白（黑色银颗粒）从粗面内质网进入高尔基复 合体中； B. 3H-亮氨酸脉冲标记完成45分钟后，被 标记的胰岛素蛋白进入分泌颗粒内。
原位杂交技术（in situ hybridization，ISH）是使用 标记的DNAБайду номын сангаасRNA探针，通过分子杂交检测原位组织和 细胞中的特异性核酸分子的方法。
学习细胞生物学应该了解各种方法和技术的基本 原理、主要过程和适用范围。
应该认识到所有的技术和方法均有其局限性，没 有任何一种方法在解决科学问题上是万能的和不可替 代的。
电镜下细胞超微结构的观察
电镜下细胞超微结构的观察
细胞体外培养
应该根据具体的研究对象和所处的研究条件，选 择最合适的方法组合，设计最佳的技术途径以达到研 究目的。昂贵的设备或者复杂的技术方法在研究中并 不一定是最可靠和绝对必要的，而设计巧妙的、简明 的技术路线同样可以阐明重大的科学命题。
显微成像技术帮助人们在不同的层次观察和研 究组织、细胞的活动及其规律。
光镜显示显微结构（microscopic structure）,电 子显微镜显示的亚微结构（submicroscopic structure） 或超微结构(ultrastructure）。
最早的一台光学显微镜
光学显微镜和电子显微镜的成像原理