DNA测定
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ʺ实验材料
1. 试剂 200 µg/mL DNA标准溶液、二苯胺试剂 µg/mL 2. 器材 可见分光光度计、恒温水浴锅、移液管
ʺ实验方法
& 标准曲线的制作
试管
标准DNA/mL 标准DNA/mL
0 0 2
1 0.4 1.6
2 0.8 1.2
3 1.2 0.8
4 1.6 0.4
5 2.0 0
(200 µg/mL) µg/mL
1.6
1.6
二苯胺试剂/mL 二苯胺试剂/mL
4
4
4
100℃恒温水浴中保温15min，流水冷却，在595nm波长处比色 100℃恒温水浴中保温15min，流水冷却，在595nm波长处比色 光密度值
ʺ计算
DNA含量( DNA含量(µg/mL) = 标准曲线查得值 X 5
蒸馏水/mL 蒸馏水/mL
二苯胺试剂/mL 二苯胺试剂/mL
4
4
4
4
4
4
100℃恒温水浴中保温15min，冷却，在595nm波长处比色 100℃恒温水浴中保温15min，冷却，在595nm波长处比色
光密度值
& 样品测定
试管 0 1 2
待测液/ 待测液/mL
0
0.4
0.4
蒸馏水/mL 蒸馏水/mL
2
二苯胺法测定DNA含量 二苯胺法测定DNA含量
ʺ目的
学习和掌握二苯胺法测定DNA含量的原理和方法。
ʺ原理Hale Waihona Puke Baidu
& 紫外吸收法 &定磷法
&二苯胺法
& 二苯胺法
DNA +
NH
蓝色化合物
冰醋酸，少量硫酸
£ 在酸性溶液中，DNA与二苯胺共热生成蓝色化合物，该物 质在595nm有最大吸收 £ 在40～400mg/mL范围内其峰值与DNA含量成正比