产粘乳酸球菌的筛选与鉴定
食品中乳酸细菌的筛选和鉴定
食品中乳酸细菌的筛选和鉴定食品是人类生活中不可或缺的一部分，而乳酸细菌则是食品产业中的重要组成部分。
乳酸细菌在食品加工过程中起着关键的作用，例如发酵乳制品、面包、啤酒等。
因此，筛选和鉴定食品中的乳酸细菌对于食品安全和质量的保障具有重要意义。
首先，筛选食品中的乳酸细菌应该从源头开始。
当我们选择原料时，应注意选择新鲜且有机的食材。
乳酸细菌通常存在于新鲜的奶制品、蔬菜和水果中。
因此，在生产过程中应该选择高质量的原料，以确保食品中含有丰富的乳酸细菌。
其次，对食品中的乳酸细菌进行鉴定也是非常重要的。
目前常用的方法有传统培养方法和分子生物学方法。
传统培养方法是通过将食品样品接种到乳酸菌富集培养基中，然后根据菌落形态和生理特性进行鉴定。
虽然该方法简单易行，但对于少数难以培养的乳酸细菌则无法准确鉴定。
分子生物学方法是近年来迅速发展的一种鉴定乳酸细菌的新方法。
这种方法基于对乳酸细菌基因组的分析，通过PCR、蛋白质电泳等技术手段来确定乳酸菌的种类和数量。
分子生物学方法具有快速、准确和高通量的特点，可以帮助我们更好地了解食品中乳酸细菌的情况。
此外，筛选合适的乳酸菌应具备以下特点。
首先，应具备较强的耐受性，能够在食品加工过程中存活和繁殖。
其次，应具备较好的产酸能力，确保食品发酵的质量和风味。
最后，应能够对食品中的有害细菌起到一定的抑制作用，从而保证食品的安全性。
乳酸细菌在食品发酵过程中起到的作用不仅仅是改善风味，还具有多种益处。
首先，乳酸细菌能够制造出多种有益物质，例如乳酸、对乳酸菌独有的多种抗菌物质等。
这些物质具有抗菌、抗氧化和免疫调节等作用，对人体健康有益。
其次，乳酸细菌可以帮助消化，改善肠道菌群的平衡，增加人体对营养的吸收。
此外，乳酸细菌还可以帮助降低肠道内有害菌的数量，提高人体的免疫力。
然而，在乳酸细菌的选择过程中也存在一些问题和挑战。
首先，不同种类的食品需要不同的菌株，因此我们需要根据具体产品的特点来选择适合的乳酸菌。
乳酸菌菌种的分离筛选方法解读
乳酸菌菌种的分离筛选方法解读第一篇：乳酸菌菌种的分离筛选方法解读乳酸菌菌种的分离筛选方法乳酸细菌是一类能利用发酵糖产生大量乳酸的细菌通称。
为兼性厌氧菌，杆状或球状，革兰氏阳性菌，无芽孢，不运动。
营养要求高，需要提供丰富的肽类氨基酸维生素。
在琼脂表面或内层形成较小的白色或淡黄色的菌落。
通常用作为有益微生物的菌种有乳酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、粪肠球菌、乳酸片球菌、双歧杆菌、屎肠球菌、戊糖片球菌等。
乳杆菌常用MRS琼脂作半选择培养基。
当乳杆菌仅是复杂区系中的部分菌类时，SL培养基常用作为选择性培养基。
对于芽孢乳杆菌常用GYP培养基，链球菌有TYC培养基、MS培养基。
M17培养基被用作乳球菌的分离培养基。
嗜酸乳杆菌属于乳杆菌属的一个种。
其特性为：杆菌，两端圆，不运动，无鞭毛。
粪肠球菌为革兰氏阳性，圆形或椭圆形。
乳酸片球菌细胞呈球状，直径0.6~1.0μm，在直角两个平面交替形成四联状，一般细胞成对生，单生者罕见，不成链状排列。
革兰氏阳性，不运动，兼性厌氧。
在MRS培养基上菌落小，呈白色。
沿洋菜穿刺线的生长物呈丝状。
乳酸菌在一般琼脂培养基上形成微小菌落，不易观察，所以分离时先富集培养并选择合适的培养基。
分离培养基一般添加西红柿、酵母膏、吐温-80等物质，也常常加入醋酸盐，因醋酸盐能抑制部分细菌生长，对乳酸菌无害。
培养基中添加碳酸钙，乳酸溶解培养基中的碳酸钙形成透明圈，作为分离鉴别的依据，通过对生成的乳酸量进行性能鉴定。
乳酸菌生长繁殖时需要多种氨基酸，维生素及微氧，一般菌落比较小。
分离培养基一般可添加西红柿酵母膏油酸吐温等物质，均具有促进生长作用。
也常常添加醋酸盐抑制有些细菌的生长，对乳酸菌无害。
一.筛选方法： 1.溶钙圈法：利用一些产酸类细菌在含CaCO3的培养基上产生CaCO3溶解圈，从而筛选出这些产酸类细菌，可用于乳酸菌的筛选。
其中培养基中加入CaCO3的作用是：①鉴别能产生酸的细菌；②中和产生的酸，以维持培养基的PH。
乳酸菌的提取和鉴定
酸奶中乳酸菌的筛选试验一、实验目的：熟悉从酸奶中分离和纯化乳酸菌的一般方法二、实验原理：市场销售的酸奶主要含乳酸菌，乳酸菌的主要作用是把牛奶中乳糖发酵成乳酸，此外酸奶中还含有其他球菌，利用它产酸等性质可以分离乳酸菌，分离培养基一般添加蛋白胨、酵母膏提供氮源、维生素、生长因子；葡萄糖为可发酵糖类；磷酸氢二钾为酸碱缓冲剂；柠檬酸铵、硫酸镁、硫酸锰、亚硫酸铁、吐温-80和乙酸钠为培养各种乳酸菌提供生长因子，其成分还能抑制某些杂菌；琼脂是培养基的凝固剂。
、也常常加入醋酸盐，因醋酸盐能抑制部分细菌生长，对乳酸菌无害。
培养基中添加碳酸钙，乳酸溶解培养基中的碳酸钙形成透明圈，作为分离鉴别的依据。
.筛选方法：.溶钙圈法：利用一些产酸类细菌在含CaCO3 的培养基上产生CaCO3 溶解圈，从而筛选出这些产酸类细菌，可用于乳酸菌的筛选。
其中培养基中加入CaCO3 的作用是：①鉴别能产生酸的细菌；②中和产生的酸，以维持培养基的PH、更利于乳酸菌的生长和分离三、实验药品及仪器牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、葡萄糖、乳糖、吐温-80、柠檬酸二铵、CaCO3 、K2HPO4 NaAc·3H2O、MgSO4·7H2O、MnSO4·H2O、琼脂、结晶紫染色液、碘液、95%乙醇、石蜡、蒸馏水。
仪器：超净工作台、电子显微镜、接种环、恒温培养箱、接种环、培养皿、涂布环、高压锅、试管、微波炉、电子天平、离心机四培养基类型①改良MRS 培养基（乳酸菌分离培养基）：牛肉膏10g，蛋白胨10g，酵母膏5g，葡萄糖20g，吐温-80 1.0ml（它是一种很好的乳化剂和分散剂也就是说它的作用就是是培养基的营养成分更加的均匀就是对营养成分的再一次优化），K 2HPO4 2g，NaAc·3H2O 5g，柠檬酸二铵2g，MgSO4·7H2O 0.58g，MnSO4·H2O 0.25g，补蒸馏水至1000ml（固体培养基中加琼脂 1.5%-2%），调pH 至6.4±0.2，121℃高压灭菌15min②改良MC 培养基（乳酸菌选择培养基）：牛肉膏5g，蛋白胨5g，酵母膏5g，葡萄糖20g，乳糖20g，CaCO3 10g，琼脂20g，中性红0.05g（指示剂），最终pH6.5±0.2，补蒸馏水至1000ml，121℃高压灭菌15min。
乳酸菌的分离与筛选具体实验流程
乳酸菌的分离与筛选具体实验流程1. 引言1.1 背景介绍乳酸菌是一类广泛存在于自然界中的细菌，它们能够以乳酸为代谢产物进行无氧发酵，并且在食品工业、农业和医学领域具有重要的应用价值。
乳酸菌不仅能够促进食品品质的改善和保鲜，还对人体健康具有积极影响。
然而，目前市面上存在许多商业化的乳酸菌制剂，其有效成分及效果并不尽相同。
因此，研究和筛选出优质活性的乳酸菌种类，具有重要意义和广阔前景。
1.2 研究意义本研究旨在通过分离与筛选方法得到高活性的乳酸菌。
通过该研究可以加深我们对乳酸菌及其作用机制的理解，并为特定领域如食品工业、农业等提供先进的技术支持和解决方案。
此外，筛选出具有优良特性的乳酸菌株也将为开发新型功能性食品、生物农药等领域的产品提供重要支持。
因此，本研究对于推动食品工业、农业发展具有积极意义。
1.3 实验目的本实验主要目的如下：- 收集和处理样品：收集富含乳酸菌的样品，并经过适当处理以提高分离效果。
- 选择与制备分离培养基：根据乳酸菌的特性选择适合的培养基并进行制备。
- 设定分离培养条件：通过调控温度、pH值等参数，确定适宜的乳酸菌分离培养条件。
- 鉴定活性乳酸菌指标：确定评价乳酸菌活性和质量的指标，并进行相关试验和检测。
- 设计与实施筛选试验：根据所选指标设计筛选试验，并在实验中采用相应方法进行实施。
- 可行性评估与结果分析：对筛选试验结果进行评估和分析，并总结可行性及相关优化建议。
通过以上实验流程，我们旨在深入了解乳酸菌的特点及其在不同领域中应用潜力，并为进一步研究和开发具有市场竞争力的乳酸菌产品提供理论和实践基础。
2. 乳酸菌的分离方法2.1 样品收集与处理在乳酸菌的分离研究中，样品的选择和处理十分重要。
我们可以选择不同来源的样品，如发酵食品、生态环境等。
收集样品后，需要进行适当的处理以消除非目标微生物对于乳酸菌生长和筛选的干扰。
常见的样品处理方法包括冷藏、过滤、稀释等。
2.2 分离培养基选择与制备为了促进乳酸菌的分离和生长，在实验中需要选择适宜的分离培养基。
乳酸细菌分类鉴定及实验方法
乳酸细菌分类鉴定及实验方法乳酸细菌是一类可以发酵果糖或蔗糖产生乳酸的革兰氏阳性细菌。
它们广泛存在于自然界中的土壤、水体、动物肠道、植物表面等环境中，并且在食品加工、乳制品、膳食补充剂等领域具有重要的应用价值。
分类鉴定乳酸细菌的方法主要包括传统分离鉴定和分子生物学方法，而实验方法主要包括培养、生理生化鉴定和分子鉴定等。
1.传统分离鉴定传统分离鉴定是通过培养、生理生化特性的观察和细菌形态学特征的分析来进行分类鉴定的方法。
一般的步骤包括：1.2分离：采用适当的培养基，如MRS培养基等，在适当条件下进行分离培养。
可以采用不同的稀释度和培养温度来增加分离率和适应性。
1.3纯化：从培养出的菌落中选择纯净的菌落进行纯化。
1.4形态学观察：观察细菌的形态学特征，如菌落形态、细胞形态、孢子形态等。
1.5生理生化特性鉴定：通过生理生化实验，如氧需氧性、产气、产酸、碱性产蛋白酶等特性的鉴定来进一步确定细菌的分类。
1.6比较分析：将鉴定结果与已知的乳酸菌进行比较分析，以确定菌株的分类。
2.分子生物学方法分子生物学方法是一种快速、准确的分类鉴定方法，可以通过检测细菌的DNA序列来进行鉴定。
常用的分子生物学方法包括PCR、16SrRNA测序和随机扩增多态性DNA(RAPD)等。
2.1PCR：PCR是通过扩增细菌DNA的特定区域来进行鉴定的方法。
首先，从培养的细菌中提取DNA。
然后，使用特定引物扩增目标区域的DNA，并通过凝胶电泳分析PCR产物的大小。
比较PCR产物的片段大小和带型模式，可以确定乳酸菌的分类。
2.216SrRNA测序：细菌的16SrRNA序列是一个高度保守的基因序列，可以用来进行细菌分类鉴定。
通过提取DNA，扩增16SrRNA基因片段，并进行测序，然后将测序结果与已知的乳酸菌序列比对，可以确定细菌的分类。
2.3RAPD：RAPD是一种无须事先了解目标序列的技术，它利用随机引物扩增细菌DNA的多态位点，通过凝胶电泳分析不同样品间的DNA带型模式，来进行菌株分类。
《乳酸细菌分类鉴定及实验方法》
《乳酸细菌分类鉴定及实验方法》一、引言乳酸细菌（Lactobacillus）是一类常见的益生菌，它们能帮助消化系统聪明，同时也可以通过促进有益的肠道微生物的生长来改善肠道健康。
因此，乳酸细菌的分类和鉴定对于研究乳酸细菌的功能和应用具有重要意义。
本文将首先介绍乳酸细菌的分类和鉴定，然后介绍乳酸细菌的实验方法。
二、乳酸细菌的分类和鉴定1. 乳酸细菌的分类乳酸细菌是属于细菌科（Bacteroidetes）的一类细菌。
它们可以分为三大类：乳酸菌（Lactobacillus）、乳酸乳球菌（Streptococcus）和乳酸变形杆菌（Bifidobacterium）。
每一类乳酸菌都有不同的特征，如形态、生长习性和生理功能。
2. 乳酸细菌的鉴定乳酸细菌的鉴定可以分成宏观鉴定和微观鉴定两种。
宏观鉴定可以从外观上分辨不同种类的乳酸细菌，其中包括形态、大小、色泽和膜结构等。
微观鉴定则是从细节上来识别乳酸细菌的特征，包括菌体的形态、菌落的形状、菌落的大小和染色等。
三、乳酸细菌的实验方法1. 样品采集乳酸细菌的实验方法首先要从样品的采集开始。
乳酸细菌的样品可以从食品、生物体表面、自然环境或肠道等环境中获取。
采集的样品应当及时保存，以防乳酸细菌的生长和繁殖。
2. 培养基制备乳酸细菌的培养基是乳酸细菌实验的基础，它可以保证乳酸细菌的生长和繁殖。
常用的乳酸细菌培养基有MRS培养基、MRS-glucose培养基和MRS-sucrose培养基等。
这些培养基中的成分可以满足乳酸细菌的需求，从而促进乳酸细菌的繁殖和活力。
3. 培养和筛选采集到的样品和制备好的培养基可以混合在一起，然后置于培养室中，根据规定的条件进行培养。
一旦乳酸细菌在培养基中获得了生长和繁殖的机会，就可以开始筛选。
筛选的过程可以通过诸如生长观察、生理鉴定和生化鉴定等方法来进行。
4. 分子鉴定最后，分子鉴定是乳酸细菌分类鉴定的最关键步骤。
分子鉴定可以通过PCR技术、限制性片段长度多态性分析（RFLP）和16S rRNA基因测序等方法准确地识别乳酸细菌的种类。
产粘乳酸球菌的筛选与鉴定
Ｃｈ ｎ ， ｙ ｓｉｋ ｉ —ｃ ｅ ｎ ｎ ｔ ｏ ｎ ｏ ｈ ｒ ｆ ｒ ｎ ａｉ ｎ ｐ ｒｏ ｍａ ｃ — ｓ ｒｅ ｉｇ ｍｅｈ ｄ Ｔ ｔａｎ ｒ ｅ ｔ ｅ ｓ ｉ ａ ｂ ｔ ｙ ｓｌ ｓ ｒ ｅ ｉ ｇ ｍｅｈ ｄａ ｄｙ ｇ ｕ ｔ ｅ ｍｅ ｔ ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ ｅ ｆ ｒ ｎ ｅ ｒ ｃｅ ｎ ｎ ｔ ｏ ． ｗｏ ｓｒ ｉ ｓ ｃ ｋ ｏ ｅ ｗｅ ｅｉ ｎｉ ｄ ａ ｄ ｉ ｆ
Ｓ ａ ｇ ａ ２ ０ ３ ， ｈｎ ） ｈ ｎ ｈ ｉ ０ ４ ６ Ｃ ｉａ
乳酸菌分离鉴定及试验方法
乳酸菌分离鉴定及试验方法一、引言乳酸菌是一类广泛存在于自然界中的微生物，具有重要的生物学功能和应用价值。
乳酸菌可以通过发酵作用，将葡萄糖、果糖等碳源转化为乳酸和其他有机酸，同时还会产生一些对人体有益的物质，如维生素、酶、抗生素等。
乳酸菌在食品工业、医药工业、农业等领域具有重要的应用前景。
乳酸菌的分离鉴定及试验方法对于深入研究乳酸菌菌种的特性、功能以及在不同领域中的应用具有重要意义。
本文将介绍乳酸菌的分离鉴定及试验方法，旨在为相关研究人员提供参考和指导。
二、乳酸菌分离方法1. 采样乳酸菌的分离首先需要进行采样工作。
可以从发酵食品、乳制品、蔬菜、水果、土壤、肠道等多种来源进行采样。
在采样过程中应注意样品的新鲜性和卫生性，避免外部污染对实验结果造成影响。
2. 培养基的选择乳酸菌可以利用多种培养基进行分离和培养，常用的培养基有MRS培养基、乳清培养基等。
根据具体的分离目的和需求选择适合的培养基。
3. 分离将采样得到的样品进行系列稀释，取适量的稀释液均匀涂布在含有适当培养基的琼脂平板上，培养温度一般在30-37摄氏度之间，培养时间约48-72小时。
4. 纯化观察培养基上的菌落形态，选择典型的菌落进行分离单菌培养，通过多次传代稀释可以纯化获得纯种的乳酸菌。
5. 形态观察利用显微镜对分离得到的菌株进行形态学观察，包括细胞形状、大小、排列方式等。
三、乳酸菌鉴定方法1. 生理生化鉴定通过对分离得到的菌株进行生理生化特性的研究，包括乳酸发酵能力、氧耐受性、温度、pH值的适应能力等，可以初步判断乳酸菌的种属。
2. 生化试剂法利用生化试剂对乳酸菌进行鉴定，如气体发生试验、氧化还原酶试验、酶活性试验等。
3. 分子生物学鉴定通过PCR扩增乳酸菌的16S rRNA基因序列，测序后与数据库比对，确定乳酸菌的种属分类。
四、乳酸菌试验方法1. 发酵活性测定通过测定菌株在不同条件下的发酵活性，如发酵速率、产酸速率、产酶能力等。
2. 抗菌活性测定测定乳酸菌对一些有害菌的抑菌作用，判断其在抗菌方面的潜力。
从自然界筛选产乳酸微生物及菌种初步鉴定的毕业论文
从⾃然界筛选产乳酸微⽣物及菌种初步鉴定的毕业论⽂从⾃然界筛选产乳酸微⽣物及菌种初步鉴定的毕业论⽂⽬录摘要 ............................................................................................. 错误！未定义书签。
Abstract ................................................................................................ 错误！未定义书签。
1 绪论 (2)1.1 乳酸菌的概述 (2)1.2 乳酸菌的基本属性 (3)1.3 乳酸菌的发展时期及分类 (4)1.3.1 乳酸菌的发展时期 (4)1.3.2 乳酸菌的分类 (4)1.4 乳酸菌的发酵特性 (4)1.5 乳酸菌的应⽤ (5)1.5.1 乳酸菌在⾷品领域的应⽤ (5)1.5.2 乳酸菌制剂 (5)1.6 乳酸菌的⽣理作⽤和作⽤机理 (6)1.6.1 乳酸菌的⽣理作⽤ (6)1.6.2 乳酸菌的作⽤机理 (6)1.7 乳酸菌的国内外发展现状 (8)1.7.1 乳酸菌的发展历史 (8)1.7.2 乳酸菌的发展现状 (9)1.8 乳酸的⽣产及应⽤ (9)1.8.1 乳酸的概述 (9)1.8.2 L—乳酸的⽣产 (9)1.8.3 乳酸提取⼯艺 (11)1.9 本课题的⽬的及研究的意义 (13)2 实验部分 (11)2.1 实验材料与仪器 (11)2.1.1 实验材料 (11)2.1.2 实验仪器 (11)2.1.3 实验试剂 (12)2.1.4 实验培养基 (12)2.2 实验⽅法 (13)2.2.1 从⾃制酸菜汁中分离提纯乳酸菌的思路和原理 (13)2.2.2 培养条件 (13)2.2.3 菌种储藏 (13)2.2.4 样品采集 (13)2.2.5 乳酸菌的分离和筛选 (14)2.2.6 乳酸菌的产酸定性定量试验 (14)2.2.7 乳酸菌的⽣理⽣化鉴定 (14)3 结果与讨论 (16)3.1 乳酸菌的形态学鉴定 (16)3.1.1 初步分离 (16)3.1.2 乳酸菌的复筛 (16)3.1.3 菌株形态 (17)3.2 乳酸菌的产酸定性定量试验 (18)3.2.1 菌株产乳酸试验 (18)3.2.2 乳酸定量试验 (18)3.3 乳酸菌的⽣长过程鉴定 (19)3.2.1 乳酸菌在37℃恒温培养pH值变化 (19)3.2.2 菌株最适⽣长起始pH值的确定 (19)3.2.3 乳酸菌株耐盐性的确定 (20)3.2.4 乳酸菌的不同温度⽣长鉴定 (21)3.3 乳酸菌的⽣理⽣化鉴定 (23)结论 (26)参考⽂献 (27)致谢 (29)绪论1.1乳酸菌的概述乳酸菌是对能利⽤可发酵碳⽔化合物产⽣出⼤量乳酸的⾰兰⽒阳性细菌的通称。
产细菌素乳酸菌的筛选及鉴定
产细菌素乳酸菌的筛选及鉴定摘要：采用琼脂平板扩散实验，从湖南传统发酵腊肉和香肠中筛选出3株对单核增生李斯特菌（Listeria monocytogene54002）具有明显抑制作用的乳酸菌，排除酸和过氧化氢的干扰后，仍具有抑菌活性，而用胰蛋白酶和胃蛋白酶处理以后，其抑菌活性消失，因此确定该抑菌物质为蛋白质类物质，即细菌素。
三株菌所产细菌素具有一定热稳定性，在pH5～10之间仍具有一定的抑菌活性。
通过生理生化实验和16S rRNA基因序列分析对3株菌进行了鉴定。
PCR扩增得到1600bp左右的16S rRNA基因序列，将序列通过BLAST软件在NCBI网站上进行同源性对比，并通过MEGA5.0软件绘制系统发育树。
结果显示3株菌的16S rRNA序列和数据库中的屎肠球菌的序列同源性均在99%以上，这与生理生化实验初步鉴定结果一致。
关键词：细菌素，筛选，屎肠球菌Identification and screenging of bacteriocin-producing lactic acid bacteriaAbstract：Three lactic acid bacterium were isolated from Hunan traditonal fermented meats，which exhibitedstrong inhibitory activity against Listeria monocytogenes 54002. After eliminating the interference factors suchas the organic acids，hydrogen peroxides，the inhibitory activity still existed. But inhibitory activity was lost aftertreatment with trypsin and pepsin. Therefore，the inhibiotory substance could be classed as bacteriocin. Thebacteriocin exhibited good thermal stability and its active pH range from 5~10. The three bacteriocin-producingbacteria were identified on the base of physiological and biochemical characteristics and 16S rRNA genesequence. The sequence fragments around 1600bp 16S ribosomal RNA were amplified from total DNA of thethree isolated strains by PCR. The sequence was completed by the application of BLAST on the websites ofNCBI and phylogenetic tree was drawn with MEGA5.0. According to the high homology of 16S rRNA sequence，the three bacteriocin-producing bacteria was identified as Enterococcus faecium. Key words：bacteriocin；screening；Enterococcus faecium细菌素是由某些细菌产生的一类抑菌物质，是由细菌在代谢过程中通过核糖体合成机制产生的一类多肽类物质[1]。
乳酸菌的分离和初步鉴定
乳酸菌的分离和初步鉴定刘海音张超(长春师范学院生物系，长春，130032)摘要：本文采用BCG牛乳培养基琼脂平板筛选乳酸菌，经过连续6次以上的传代，以达到分离提纯，镜检时观察到链球状和杆状两种形状。
为了鉴定分离出的菌种，做了一系列的生理生化反应实验，如吲哚试验的反应结果为阴性，糖发酵试验的反应结果为阳性。
此外还进一步做了小型发酵实验，检测出了乳酸的存在⑴。
以上实验结果符合乳酸菌的特征，从而证实该分离出的菌种为乳酸菌，杆状的叫做短乳杆菌，链球状的叫做乳链球菌。
关键词：乳酸菌分离鉴定乳酸菌为一群可发酵碳水化合物以获取能量，并生成大量乳酸的一类细菌的总称。
利用发酵技术保藏食品，最典型的是通过乳酸菌的发酵。
这在发酵乳工业中已经得到广泛的应用。
利用天然的或经筛选的乳酸菌发酵，已经生产出多种不同类型的发酵乳。
因而分离和鉴定乳酸菌对人类的生产和生活都具有非常重要的意义。
本报告采用BCG牛乳培养基琼脂平板筛选和分离乳酸菌，利用镜检观察到了链球状和杆状两种形状。
通过吲哚试验和糖发酵试验以及小型发酵实验证明该菌种为乳酸菌，杆状的叫做短乳杆菌，链球状的叫做乳链球菌1. 材料和方法1.1材料1.1.1 选用沈阳乳业有限责任公司乳品一厂生产的辉山纯酸奶1.1.2 培养基BCG牛乳培养基A(溶液)：脱脂奶粉100g, 水500 ml, 加入1.6%溴甲酚绿（B.C.G）乙醇溶液1 ml,80 摄氏度灭菌20 min.B(溶液)：酵母膏10 g, 水500 ml, 琼脂20 g, PH : 6.8 121摄氏度灭菌20 min以无菌操作趁热将A ,B 溶液混合均匀后倒平板。
乳酸菌培养基牛肉膏 5 g , 酵母膏5 g , 蛋白胨10 g ,葡萄糖10 g , 乳糖5 g , 氯化钠 5 g ,水1000 ml , PH : 6.8121摄氏度湿热灭菌20 min蛋白胨水培养基蛋白胨10 g , 氯化钠5 g , 水1000 ml , PH : 7.2 ~ 7.4121 摄氏度湿热灭菌20 min糖发酵培养基蛋白胨水培养基1000 ml , 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1~2 ml ,PH : 7.6 , 另配20%糖溶液（葡萄糖，蔗糖）各10 ml.制法：1）.将上述含指示剂的蛋白胨水培养基（PH : 7.6 ）分装于试管中，在每管内放一倒置的小玻璃管（Durhem tube）,使充满培养液。
乳酸菌的筛选与鉴定流程
乳酸菌的筛选与鉴定流程1.材料首先要确定目标，即所筛选的乳酸菌来自哪里，例如想要筛选一株果蔬发酵乳酸菌，那我们就得找一个产区或者其他地方自然发酵果蔬的样品。
1.1培养基查找相关文献，菌种生化鉴定用培养基建议查看文献：工业微生物实验手册MRS培养基：牛肉膏10 g/L，蛋白胨10 g/L，吐温801g/L，葡萄糖50 g/L，乙酸钠5g/L，硫酸镁0.2 g/L，磷酸氢二钾2 g/L，柠檬酸二铵2 g/L，溴甲基酚紫0.4 g/L，酵母提取物5 g/L，琼脂15～20 g/L，pH 6.3～6.7，121 ℃湿热灭菌30 min。
（PS：若自己嫌麻烦，可买现成的MRS培养基）初筛培养基：在MRS分离培养基的基础上，添加0.5%碳酸钙，乳酸调至PH2.0.（加碳酸钙是为了能更好的挑出优势菌，乳酸调至PH2.0也是同样道理）如图：若是乳酸菌菌落旁会有清晰可见的透明圈，这是由于乳酸与碳酸钙反应了。
高盐复筛培养基∶在MRS分离培养基的基础上，添加10%氯化钠和0.5%碳酸钙。
高糖复筛培养基∶在MRS分离培养基的基础上将葡萄糖质量分数提高到30%，添加0.5%碳酸钙。
明胶培养基∶蛋白胨25 g/L，牛肉膏7.5 g/L，氯化钠5g/L，明胶100 g/L，pH7.0～7.2，121∶湿热灭菌15 min。
果蔬发酵培养基∶将苹果、胡萝卜、西瓜、西红柿等水果、蔬菜清洗去皮切分后分别榨汁除渣制得发酵果酱，然后按1∶1∶1∶1比例混合经巴氏灭菌后4 ∶冷藏。
按照混合果蔬汁33.3%、葡萄糖5%、蔗糖5%、氯化钙0.5%、磷酸氢二钠0.05%、磷酸二氢钠0.05%、硫酸镁0.03%、柠檬酸0.1%的配比配制，除果蔬和柠檬酸外其余成分于115 ∶湿热灭菌15 min。
2.方法2.1乳酸菌的分离筛选取产区自然发酵苹果原浆，用0.9%灭菌生理盐水进行10 倍梯度稀释后，吸取适宜稀释度溶液涂布至MRS分离培养基中，37 ∶恒温厌氧培养24h，挑取菌落黄色范围大并具有乳酸菌典型特征的单菌落，进行革兰氏染色观察菌体形态。
乳酸菌检验的方法要点
乳酸菌检验的方法要点乳酸菌不是分类学上的名称，它是指一群能分解葡萄糖或乳糖产生乳糖产生乳酸、需氧和兼性厌氧、多数无动力、过氧化氢酶阴性、革兰氏阳性的无芽孢杆菌和球菌。
这类细菌在自然界分布广泛，可栖居在人和各种动物的口腔、肠道等器官内，在土壤、食品、饲料、水及一些临床标本中都有乳酸菌的存在。
乳酸菌在工业、农业和医药等与人类生活密切相关的领域应用价值很高，相当多的乳酸菌对人、畜的健康起着有益的作用，但个别菌种能对人畜致病，乳酸菌主要包括23个属的细菌。
乳酸菌的检测流程：1、乳酸菌悬液的制备：将待检测的样品，准确称取0.5克，量取99.5mL无菌生理盐水稀释，（此次稀释了200倍，即0.5克样品，稀释到了100克水溶液），再加入灭菌玻璃珠20～30粒于250mL三角瓶中，置于振荡器或摇床上剧烈摇晃30分钟以上，目的是将粘连在一起的乳酸菌细胞打散从而分散开来。
2、稀释到适当倍数：根据所待检测的样品可能的乳酸菌含量，进行适当的稀释操作，例如如果估计样品的含乳酸菌活菌数为200亿/克左右，则建议稀释2亿倍，这样将来在90mm平板上培养时会长出大约100个乳酸菌落，比较便于计数，总之控制平板培养皿上的乳酸菌落数量在30～300个的范围内，比较便于计数。
3、倒制平板即“接种”：倒制平板在超净工作台上进行，养殖户可使用一盏简单的酒精灯和一个干净的操作台就可操作。
即事先配制好并灭菌处理的检测用琼脂培养基，在水浴锅内保持50℃的温度，使琼脂培养基呈溶解状态，置于操作台旁边备用。
（养殖户可先不从压力锅中取出，在压力锅维持一定的温度，从而也不会凝固。
）取事先干热灭菌处理后的90mm培养皿（也叫平板）若干、1mL移液管若干，置于操作台上备用。
（养殖户的培养皿平板可在压力锅中进行蒸汽灭菌处理。
）在无菌条件下（打开超净工作台无菌风，或养殖户点上酒精灯），将稀释了2亿倍的乳酸菌液，用移液管移取1mL，于培养皿中，再在此培养皿中倒入前述保持溶解状态的检测培养基液15mL左右（倒培养基时，估计能覆盖满平皿的液体量即可），然后，盖好培养皿盖，轻轻转动平皿，原地转几圈，使培养基液与乳酸菌液混合均匀，等数分钟后，待培养基凝固后，可移入培养箱中进行培养；4、在培养箱中进行培养：将前面倒制好的平板倒转（即盖子在下面），放于培养箱中于33℃温度下培养2～3天，待培养皿平板中长出比较明显的带有透明圈的菌落时，即可进行计数得出检测结果。
乳酸菌的分离与初步鉴定
学院：漓江学院年级专业：09生物技术组员：吴汉川200913007005杨隆荷200913007006李翠200913007007王志远200913007008乳酸菌的分离及初步鉴定一、实验目的1了解和掌握放线菌的菌种特性和分离方法2初步掌握军中筛选方法设计3掌握平菌种的选育二、实验原理乳酸菌是指以糖为原料，属于真细菌纲真细菌目中的乳酸细菌科。
乳酸细菌科根据细胞呈球状或呈杆状，又分成乳酸杆菌族和链球菌族。
在BCG 牛乳培养基琼脂平板上，乳酸菌菌落大约1-3 mm，圆形隆起，表面光的溶滑或稍粗糙，呈乳白色、灰白色或暗黄色；在产酸菌落周围还能产生CaCO3解圈。
乳酸菌革兰氏染色呈阳性，涂片镜检细胞杆状或链球状。
乳酸杆菌呈杆状，成单杆、双杆或长丝状；乳酸杆菌，呈球状，成对或短链或长链状。
乳酸菌革兰氏染色后呈蓝紫色。
平板涂布法平板涂布法是将样品经稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释液接种到平板上，经过培养，由每个单个细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个但菌落代表原样品中的一个单细胞。
生理盐水：称取9g氯化钠，溶解在少量蒸馏水中，稀释到1000毫升。
四、实验器材与试剂含乳酸菌的酸奶、结晶紫、卢哥氏碘液、95%乙醇、蕃红溶液、灭菌CaCO3粉末、NaCl；BCG牛乳培养基：(A)溶液：脱脂乳粉100g，水500mL，加入1.6%溴甲酚绿(B.C.G)乙醇溶液1mL，80℃灭菌20min。
(B)溶液：酵母膏10g，水500mL，琼脂20g, pH6.8, 121℃湿热灭菌20min。
以无菌操作趁热将(A)、(B)溶液混合均匀后倒平板。
1000ml烧瓶一个, 无菌培养皿9个, 500ml容量三角瓶2个，25ml无菌移液管1只，20ml无菌试管7只，1ml无菌移液管6只，培养基分装器一个，玻棒2根, 无菌涂布器3只，酒精灯一盏，接种环一个，天平，牛角匙，漏斗，漏斗架，载玻片，盖玻片，pH试纸若干，液体石蜡，棉塞，吸管，牛皮纸，线绳、标签等。
乳酸菌的分离与筛选试验
ｌ ７
酸菌 ，将 其 编 号 从 Ｌ ．到 Ｌ ．９ Ｓ １ Ｓ２ 。
２２ 菌株 的筛选 ． 通 过产酸 能 力的检 定和 对猪源 弱 毒型大肠 杆菌有 抑 制效果的 比较 ，Ｌ ． 、Ｌ ．、Ｌ ．５ 个菌株产酸 能力较 Ｓ３ Ｓ９ Ｓ １ －
强，对Ｅ ｃｉ 抑菌 圈的直径（ ． ｏｌ 的 ｍｍ） 别 为 ： １． ２ １． 分 ８２ 、 ５ ＋ ８
１ ． 初 筛 将 分 离 得 到 的 纯 化 菌 株 接 种 于 液 体 产 酸 培 ．３ ２
２ 结果与分析
２１ 菌种 的确 定 ．
从 不 同来 源材 料 中，共 分离得 到纯 培养菌株 ５ 株 。 ６ 其ｑ Ｇ染色 结果 为 阳性 、ＫＯ － ＇ Ｈ试 、Ｈ２ ２ Ｏ 酶试验 、明胶 水 解 试验 、产硫 化氢试 验均 为为 阴性 的有２ 株 ，确定 为乳 ９
（ ａｍｏｅｌ Ｃ ９ １ ，革 兰 氏 阳性 菌 金黄 色 葡 萄球 菌 Ｓ ｌ ｎｌ ７ ．３） ａ （ ｔｐ）ｏｏ ｃｓ ａ ｒｕ ） 单 核 细 胞 增 生 利 斯 特 氏菌 Ｓａｈｒｃ ｃｕ ｕｃ ｓ ， ｌ （ ｉｅａｍｏ ｏ ｙｏ ｅｅ ４ ０ ） Ｌｓ ｒ ｎ ｅｔｇ ｎ ｓ５ ０ ２ ，热带产朊 假丝酵母和啤 ｔ 酒酵母 （ ａｃ ａ ｍａｅ ｅｅ ｉ ａ ）作 为试 验菌 ，用管碟 Ｓ ｃｈｒ ｃｓｃｒｖｓ ｅ ｏ ｉ 法测定复筛确定的菌株对上述供试菌株 的抑菌作用。 １ ． 抗 药性 的测 定 采用 牛津杯 法 。预 先将 复筛 确定 ．７ ２
优良乳酸球菌的筛选及增殖研究
培养 、离心分离 、深度冷藏 或冷冻干燥 。其 中菌体增
殖 为最基本的环节 ，筛选 最适及效果最佳培 养基 ，能 够 充分利用 培养基营养基质 ，从而最大 限度 的提高活 菌数 ，降低发酵剂 制备成本 。 本文通 过对优 良乳酸球 菌的筛 选和增殖研 究，希
另生长因子的组成对菌种 的增 殖有一定的影响 关键词：乳酸球 菌；培养基；增 殖
中图 分 类号 ：Ｔ ２２１ Ｓ ５ ．；文献 标 识码 ：Ａ；文 章篇 号 ： ７．０ ８２０ ）１ ０ １ ３ １ ３９ ７ （０ ７１－ ６ — ６ ． ０ ０
Ｓ ｕ ｅ ｎ Ｓ ｌｃ ｉ ｎ ａ ｎｕｍｂｅ ａ ｉ ｎ ｆＦａ ｏ ａ ｌ ｃｏ Ｏ Ｃ Ｓ ｔ ｄｉｓ０ ｅ ｅ ｔｏ ｎｄ Ｅ， ｒ ｔｏ ｏ ｖ ｒ ｂ ｅＬａ ｔ Ｃ Ｃ Ｕ
ＷＡ ＮＧ ｅ． ＥＮｉ ａ －ｈ ＺＨＡ ｅ Ｚｈ ‘Ｍ Ｇ Ｘｉｎ． ｉ ｚ ． Ｏ Ｗ ｒ
Ａ ｓ ａｔＴ ｅ ｅ ｃｏ ｎ ｎｍｂｒｔ ｎｏ ａｔ ｏｃｓＱ ６ ａ ｕ ｉ ． ｅｒｓｌ ｏ ｅ ａ ｔ ｃ ｓ， ｓｕｃｓｔｅ ａ ｏ ｆ ｂｔ ｃ： ｈ ｌ ｔｎａｄｅｕ ｅａ ｏ ｆ ｃ ｃ ｃｕ ２ｗ ｓ ｔｄｅ Ｔ ｕ ｓ ｈ ｗ ｄｔ ｔ ｅｓ ｒ ｅＮ－ ｒ ， ｔ ｒ ｓｅｉ ｉ Ｌ ｏ ｓ ｄ ｈ ｅ ｔｓ ｈ ｕ ｏ ． ｏ ｅ． ｒ ｉ ｏ ｈ ｈ Ｐｐｏ ｅ ｎ Ｂ ｅｅｔ ｃａｄ ｅ ｔ ｘ ａｔＹ ｍｅｔ ｃ， ａ ％ ， ， ｄ ｏ ａｏ ｘ ａｔ ｆｕ ｕｅ ｄｕ ｉ０５ ２ ％， ： １ ／ ／０ ５ ｅｔ ｄ ｅｆ ｘ ａｔｎ Ｙ ａ ｅｔ ｃ ａ ｘｒ ｔＣ Ｃ Ｖｃａ Ｔ ｍ ｔ ｅｔ ｃｏ ｃｌｒ ｍｅｉｍ ｓ ．％， ． ２２ （ ｍ ｎ ， ％， ｎａ ｒ ｓ ｒ ． ， ａ ｎ ｒ ｔ ５ ：ｍ
一株乳酸片球菌的分离鉴定
一株乳酸片球菌的分离鉴定
对乳酸菌的分离鉴定是识别乳酸菌株的一个必要步骤。
它具有不同的生理，发酵性质，以
及生物学和化学属性。
本文旨在介绍一种乳酸片球菌的分离鉴定方法。
第一步对样品进行培养，以确定乳酸片球菌的细菌性状，并显示其生长特性。
发酵试验也
可以用来测定样品中葡萄糖含量以及乳酸和乳酸盐含量。
我们需要在恒定温度条件下进行
培养，以确保正确的发酵过程，可以利用红色素抑制试验来识别乳酸菌的存在。
其次，对乳酸菌进行抗性测试以鉴定乳酸菌株，其中包括抗生素抗性和耐酸碱等抗性测试，这可以确定乳酸菌的类型，也可以帮助我们正确识别乳酸菌。
另外，可以使用膜过滤法来
检测乳酸菌的活性，并使用育种技术进行筛选以鉴定乳酸菌株。
最后，可以使用基因分析技术来检测乳酸菌的基因型。
通过对基因组的测序，可以了解乳
酸菌的遗传结构，学习其生物学和重要细菌属性，这是识别乳酸菌的最有效方法。
总之，乳酸片球菌的分离鉴定需要各种生物学和化学技术，如培养，发酵分析，抗性测试，抗生素，筛选等技术。
此外，基因分析是鉴定乳酸菌株的优秀方法，可以识别乳酸菌的特征。
以上技术都可以帮助我们准确地分离和鉴定乳酸菌。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
产粘乳酸球菌的筛选与鉴定齐沙沙1，陈卫1，艾连中2，吴正钧2，郭本恒1,2*（1江南大学食品学院食品科学与技术国家重点实验室，江苏无锡 214122；2光明乳业股份有限公司技术中心乳业生物技术国家重点实验室，上海 200436）摘 要：采用发酵乳粘丝法初筛与发酵乳综合品质对比法复筛相结合的方法，从我国西北部三种不同来源的发酵制品中筛选了三株产粘性能良好的乳酸菌。
经鉴定其中两株为嗜热链球菌，一株为乳酸乳球菌乳脂亚种。
选取两株嗜热链球菌与保加利亚乳杆菌进行复配发酵试验，以市售酸奶做对照，筛选出使发酵乳粘性好、乳清析出少、感官评价好的菌株，命名为Streptococcus thermophilus ST-1。
关键词：嗜热链球菌；粘性菌株；筛选；酸奶中图分类号：TS252.51 文献标识码：A 文章编号：1671-5187(2011)01-0001-05 Screening and Identification of Lactococcus with Viscosity-producingQi Shasha1, Chen Wei1, Ai Lianzhong2, Wu Zhengjun2, Guo Benheng1,2*(1 State Key Laboratory of Food Science and Technology, School of Food Science and Technology, Jiangnan University, Wuxi of Jiangsu 214122, China; 2 State Key Laboratory of Dairy Biotechnology, Technology Center of Bright Dairy and Food Co. Ltd.,Shanghai 200436, China)Abstract: Three Lactic acid bacteria with viscosity-producing were get from different fermentation products from northwest of China, by sticky silk-screening method and yoghurt fermentation performance-rescreening method. Two strains were identified as Streptococcus thermophilus, one was the Lactococcus lactis subsp cremoris. Two strains of Streptococcus thermophilus were select to ferment milk with Lactobacillus bulgaricus, and then selected the strain which make the yogurt with good viscosity, low syneresis, good sensory evaluation as control with commercial yogurt.Key words:Streptococcus thermophilus, viscous strain, screening, yogurt嗜热链球菌被誉为全球第二大重要的工业乳酸菌种[1]，是酸奶生产过程中不可缺少和替代的菌种。
根据发酵鲜牛乳所形成的酸乳粘度不同，可将嗜热链球菌分为粘性嗜热链球菌和非粘性嗜热链球菌两种。
粘性酸乳是由于粘性菌株在发酵过程中产生了胞外多糖的结果[2]，这种乳酸菌胞外多糖（简称LAB EPS）是乳酸菌在生长代谢过程中分泌到细胞壁外的粘液或荚膜多糖，不仅能够明显的增强酸乳的粘度，而且能够有效的改善酸乳的质构、流变学特性，并能提高产品得率，提高产品的营养保健价值[3]。
可见，选择优良的产粘菌种，对于提高乳品的综合质量有着至关重要的作用。
但是目前由于条件的限制，我国绝大多数酸乳产品使用国外的直投式商品发酵剂，受限较多[4]。
因此，积极的筛选具有自主知识产权的优良菌株对与我国发酵工业生产领域有着非常重要的现收稿日期：2010-12-01；作者简介：齐沙沙，女，硕士研究生，主要从事食品科学及乳制品研究；*通讯作者：郭本恒；基金项目：国家973计划（项目编号：2010CB735705）；上海乳业生物工程技术研究中心（项目编号：09DZ2251400）。
实意义。
在菌株的筛选中，很多学者采用胞外多糖产量作为主要指标[5]，但是近年来的研究表明，酸乳的粘度与乳酸菌胞外多糖的产量并没有直接的关系[6]，而是与乳酸菌胞外多糖的分子量和结构的关系比较密切[7]，即粘度较大的酸乳中所含胞外多糖的分子量也较大。
所以在筛选优良的工业用嗜热链球菌时，产粘是一个非常重要和直观的指标，可作为初筛时快速有效的筛选途径[12, 14]。
因此，本研究根据乳酸菌产胞外多糖的性质，采用快速初筛“粘丝法”和以粘度为主的酸乳质量综合评价法相结合的筛选方法进行菌株的筛选，旨在得到优良的酸乳生产发酵剂，与实验室现存乳酸杆菌复配应用于酸奶的生产中。
1材料与方法1.1试验材料1.1.1菌株来源筛选样品：青海牧民家自制发酵乳样一份（样品一）；西藏藏灵菇发酵乳一份（样品二）；内蒙古开菲尔发酵乳中分离出的已知产胞外多糖的球菌12株（样品三）。
现有菌株：保加利亚乳杆菌LB40（光明乳业技术中心保存）。
1.1.2 培养基M17琼脂培养基、M17液体培养基：用于球菌菌落计数，菌株的分离、纯化、活化；MRS琼脂培养基、MRS液体培养基：用于杆菌的培养；脱脂乳培养基：12 %（w/v）的脱脂乳，115℃灭菌10 min，用于发酵试验。
1.1.3试剂市售某品牌原味酸奶（购于上海大润发超市）；脱脂乳粉、纯化琼脂粉、甘油、过氧化氢、结晶紫染液、番红染液、氢氧化钠等（购自国药集团）。
1.2试验仪器TH-CB-402型超净工作台（LABCONCO公司）；恒温培养箱（英国RUSKINN TECHNOLOGY LIMITED公司）；ZD-2酸度计（上海雷磁仪器厂）；HVE-50高压蒸汽灭菌锅（日本HIRAYAMA公司）；J30I高速冷冻离心机（Beckman Coulter公司）；粘度计（美国Brookfield公司）；120目不锈钢筛；均质机（丹麦RaNVIE公司）；-85 ℃超低温冰箱（日本SANYO公司）。
1.3试验方法1.3.1发酵乳中乳酸菌的分离、纯化及保存取供试发酵乳1 mL，混匀后用无菌水梯度稀释。
选取适宜浓度菌液各0.1 mL涂布于M17琼脂培养基，37 ℃恒温厌氧培养24 h~48 h。
观察培养皿上菌落形态，挑选出生长较好的单菌落在同种培养基上反复划线培养，镜检直至菌株纯化。
将镜检结果为阳性、过氧化氢酶试验为阴性的菌株暂定为乳酸菌，接种于M17斜面培养基中，培养24 h后，放置在4 ℃冰箱中暂时保存；同时用甘油管保存所得菌株置于-85 ℃超低温冰箱中长期冻存。
1.3.2凝乳试验取活化好的菌株，接种于10 mL脱脂乳培养基中，42 ℃恒温培养，每0.5 h观察一次，分别记录菌株初始凝乳时间。
1.3.3酸乳粘丝测定试验保存的菌株经三代活化后，接种于10 mL的脱脂乳中，置于42 ℃恒温培养至凝乳后迅速放置4 ℃冰箱保存24 h，取出样品混匀，用棉签棒沾取倒入平皿中的待测样品，垂直上拉，旁边固定刻度尺用以测量拉丝的长度。
每种菌落做三个平行管，拉丝长度以cm计，测量结果为算术平均值。
1.3.4酸奶的制作配置12 %（m/v）的脱脂乳→充分搅拌→加入7 %（m/v）的白砂糖→室温下搅拌并乳化1 h →加热到65 ℃均质→95 ℃/5 min杀菌→冷却至43 ℃→3 %的接种量接入发酵剂→分装→42 ℃恒温发酵→酸度达75 °T左右取出→4 ℃冰箱后熟24 h→成品1.3.5酸度测定酸碱滴定法测定后熟24 h样品的酸度[8]。
1.3.6粘度的测定后熟24 h的样品从冰箱中取出混匀，放置于冰水混合物中调节温度，使测定温度保持在4 ℃左右，选用2号转子，64 r/min测定3 min，待示数稳定后读取。
每个样品做三个平行样，结果取算术平均值。
1.3.7乳清析出量的测定[9]酸乳持水力的计算公式为：1.3.8持水力的测定[9]酸乳对胶体脱水收缩作用敏感性（STS）的测定，结合参考文献中乳清析出量的测定方法，根据以下公式计算酸乳胶体的脱水收缩作用敏感性，每个样品设置两个对照，结果为三次计算的平均值。
1.3.9感官评定将酸奶样品分别装入一次性品尝杯中并编号。
请9名评定者进行样品的品评。
对不同样品的色泽，组织状态，滋气味进行评价，评价标准见参考文献[10]。
具体指标描述及分值分布为：风味（包括滋味和气味）的描述及分值：优质酸奶（5分）：酸奶酸甜适中，有发酵乳特有的香气，且香气浓郁。
.良质酸奶（4分）：稍微偏酸或者偏甜，有发酵乳特有的香气，香气一般。
次质酸奶（3分）：明显偏甜或者偏酸，无发酵乳特有香气或有异味。
组织状态的描述及分值：优质酸奶（5分）：无气泡，凝乳均匀细腻，外表光滑，无乳清析出或少量乳清析出。
良质酸奶（4分）：无气泡，凝乳比较均匀，外表略有粗糙感，有乳清析出。
(g)100%(g)=×剩余沉淀物重量持水力酸乳样品总重量gSTS100%g=×乳清析出量（）酸乳样品总重量（）次质酸奶（3分）：有气泡，凝乳粗糙，大量乳清析出或分层状。
低于3分的为感观评价人员主观不可接受的指标。
1.3.10菌株的鉴定1.3.10.1菌株的16 Sr DNA序列测定PCR扩增：反应体系25 µL，反应条件：94℃/5 min，94 ℃/1 min，50 ℃~55 ℃/1 min，72 ℃/1.5 min，进行30个循环；72 ℃/5 min。
回收PCR 产物，由invitrogen公司测序。
1.3.10.2菌落菌体形态观察取活化好的菌株在M17琼脂培养基上划线，置于37 ℃恒温培养箱中培养48 h后观察菌落形态；用接种环挑取单菌落于载玻片上进行涂片，革兰氏染色后进行镜检。
2 结果与分析2.1菌株的分离样品一初步分离获得乳酸球菌15株，标记为“QH-”系列；样品二初步分离获得乳酸球菌25株，标记为“XZ-”系列；样品三检测获得乳酸球菌6株，标记为“S-”系列。
样品的初步分离总共获得46株疑似目标菌株，做进一步筛选。
2.2粘丝法为指标初筛结果目前许多研究采用菌落拉丝法来初步筛选产粘菌株[11, 13]。
但是此法因培养时间、培养基等条件的不同结果差异比较大。