乳酸菌菌落特征与鉴定

乳酸菌菌落特征与鉴定
纯培养
挑取3个或以上的可疑菌落，嗜热链球菌接种于MC琼脂平板，乳杆菌属和双歧杆菌属接种于MRS琼脂平板，双歧杆菌需绝对厌氧，置36 ℃±1 ℃恒温箱内培养48 h±2 h，不含双歧杆菌需兼性厌氧，置36 ℃±1℃恒温箱内培养48 h±2 h。

鉴定
涂片镜检：乳杆菌属细胞形态多样，从长的杆状和细长杆状到弯曲杆状及短杆状，一般形成链。

通常不运动。

无芽胞，革兰氏染色阳性。

嗜热链球菌形态为球形或球杆状，直径为μm～μm，细胞成对或成链排列，无芽胞，革兰氏染色阳性。

双歧杆菌属细胞呈多样形态，有较规则短杆状或纤细杆状具有尖细末段的细胞，也有呈球形者，可形成各种分支或分叉形。

无芽胞，革兰氏染色阳性。

1。

乳酸杆菌的分离、鉴定及体外拮抗试验

１材料与方法１１材料．
１实验仪器培养皿、～１１移液管、牛津杯、微型发酵管（空管）针头、、试管、蒸馏水、三角棒、微量加样枪枪头、注射器、心管等器具，已作高压湿热灭菌。离均
１１培养基．２．ＬＳ乳酸杆菌选择培养基的制备：Ｂ蛋
红、美蓝混匀，２灭菌１ｍｎ１１Ｃｏ５ｉ。
２１乳酸杆菌的分离纯化结果．
在ＬＳ划线培养的Ｂ
菌株中随机挑选１菌株，株进行纯化培养，鸡粪菌株代号为ＬＪＢ、猪粪菌株代号为ＬＺＢ、牛粪菌株代号为
ＬＢＮ。
营养琼脂培养基的制备：牛肉膏１－白胨２、蛋ｇｇ
前为淡紫色，阳性反应为黄色，阴性反应为深红色。以
上微量发酵管除精氨酸外，其余都为糖、醇发酵，精氨
分别取猪粪、牛粪、鸡酸发酵是为了验证有无氨气产生，接种前为绿色，阳
１．乳酸杆菌的分离纯化．１２
粪约１，９ｍ加９Ｌ生理盐水，ｇ室温下１０／ｉ５ｒｎ摇床振ｍ摇ｌ～０ｉ。分别在ＬＳ培养基上划线，将划线的５３ｎｍＢ
ｌｔａｉｕｙｓｓａｄｔｅＣＷｓｕｅｌｔａｉｕｒｈｃｓｈｄｎｉｏｃｔｇｎｓｃａｔｎｔａｏｃｌｓｘｌｕｎｈＯｏｒａｏｃｌｓｔｃｏｔａｏｂｏｇａａａｏｉｉｃｏｏｃｂｌｏｃｃｂｌｉｅｌｌｎｉｔｉ
０ｇ七水硫酸镁０４、．、４．ｇ四水硫酸镁０１、０．琼脂粉０ｇ

酸奶菌种的分离及鉴定（5篇）

酸奶菌种的分离及鉴定（5篇）第一篇：酸奶菌种的分离及鉴定酸奶菌种的分离及鉴定乳酸菌是指一群通过发酵糖类，产生大量乳酸的细菌总称。

乳酸从形态上可分为球菌和杆菌，并且均为革兰氏染色阳性、在缺少氧气的环境中生长良好的兼性厌氧性或厌氧性细菌。

目前，对乳酸菌的应用研究，着重于食品（如发酵乳制品、发酵肉制品和泡菜）和医药工业等人类生活密切相关的领域。

目前市售的各种酸奶制品中, 作为发酵剂的乳酸菌, 通常为保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌这两株菌。

用嗜热链球菌和保加利亚乳酸杆菌混合培养发酵的乳酸饮品能补充人体肠道内的有益菌，维持肠道的微生态平衡，且含有易于吸收的营养素，具有抑制腐败菌、提高消化率、防癌及预防一些传染病等功效，并能为食品提供芳香风味，使食品拥有良好的质地。

保加利亚乳杆菌（L.Bulgarius）:长杆形，直径1-3mm左右,能产生大量的乳酸。

酸碱度方面,为耐酸或嗜酸性,因低pH能防止一些微生物的生长;温度方面,为嗜温至少许嗜热,最适生长温度在37-45℃之间,对低温非常敏感。

嗜热链球菌（S.thermophilus）：卵圆形，直径0.7－0.9微米，呈对或链状排列，无运动性。

为健康人肠道正常菌群，可在人体肠道中生长、繁殖。

可直接补充人体正常生理细菌，调整肠道菌群平衡，抑制并清除肠道中对人具有潜在危害的细菌。

本研究对市售主要品牌酸奶中（河南花花乳业生产的酸奶）乳酸菌进行了分离鉴定，并进一步探讨制备酸奶条件（温度、时间等），以达到最佳的天然酸奶质量效果。

一、实验内容（1）乳酸菌的分离纯化1．无菌操作倒平板、十倍稀释、划线分离，恒温培养2．菌落观察与镜检 3．筛选生产用菌株（2）优化酸奶制作条件1．制备发酵液2．不同条件下，接种发酵菌剂并发酵生产 3．观察发酵情况4．品尝发酵产品，进行质量评价 5．记录结果二、实验器材1）菌种：新鲜乳酸饮料（标记只含有保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌）2）试剂：脱脂奶粉、蔗糖、1.6%溴甲酚绿乙醇溶液(溴甲酚绿、无水乙醇)、酵母膏、琼脂、革兰氏染液（结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、沙黄）、75%乙醇、香柏油、1mol/L NaOH、1mol/L HCl、碳酸钙；0.4gNaOH固体、4.2ml浓HCL(分析纯)、20gCaCO3固体、酵母膏20g、琼脂30g香柏油、脱脂奶粉100g、蔗糖10g；3）仪器：高压蒸汽灭菌锅、恒压干热灭菌箱、超净工作台、光学显微镜、培养箱、pH试纸、酸乳瓶、培养皿（φ9或φ12）、试管、300ml三角瓶（带玻珠）、移液管、天平、牛角匙、电炉、量筒、漏斗、漏斗架、玻璃棒、棉塞、吸管、线绳、标签、500ml锥形瓶、250ml锥形瓶、250ml烧杯、酒精灯、石棉网、接种针（环）、擦镜纸四、实验方法4.1乳酸菌的分离纯化 4.1.1分离(1)配制BCG牛乳培养基，分装三角瓶，包扎，灭菌备用。

酸奶中乳酸菌的微生物学检验与酸奶的制作_2

酸奶中乳酸菌的检测与酸奶的制作综合性实验报告组员：摘要：以奶粉为原料，蒙牛酸奶为接种剂自制酸奶并进行感官评价。

用稀释倒平皿法和划线分离法分离出蒙牛酸奶中的乳酸菌。

分别用改良MC培养基和改良TJA培养基培养一段时间后观察菌落形态并进行菌落计数。

再挑取少许不同培养基上的菌落用革兰氏染色法染色，观察乳酸菌的个体形态。

关键词：酸奶制作、乳酸菌菌落形态及总数、MC培养基、TJA培养基、革兰氏染色、乳酸菌个体形态1 前言酸奶是以新鲜的牛奶为原料经过巴氏杀菌后再向牛奶中添加有益菌（发酵剂），经发醇后，再冷却灌装的一种牛奶制品。

按是否加糖，酸奶可分为淡酸奶和加糖酸奶两种，我国常见的酸奶制品是加糖酸奶，即在制作酸奶的原料乳中加入一定量的白糖进行发酵得到的酸奶产品。

酸奶营养丰富，其蛋白质和钙质较鲜乳更易消化吸收，抑制腐败细菌的繁殖，降低肠道内毒素浓度。

酸奶内含乳酸菌并在发酵过程中产生乳酸及族维生素等,能增强消化，促进肠道蠕动和机体物质的代谢，提高人的免疫力, 长期饮用即可保证钙质的需求, 又可健肠胃, 是一种对人体肠胃非常有益的保健食品。

2 材料与方法2.1 仪器与器材温箱：47℃、冰箱： 4℃、电磁炉、锅吸管：容量为1，10和25mL、广口瓶或三角瓶：容量为500mL、平皿：直径为9cm、试管（带试管塞）：18×180mm、显微镜、带玻璃珠的三角瓶、移液枪、移液管、恒温箱、电磁炉、平底锅、2个奶瓶、保鲜膜、接种环、酒精灯。

2.2 培养基和试剂培养基：改良MC 培养基,改良TJA培养基。

材料：番茄汁、革兰氏染色液、蒙牛酸奶、脱脂奶粉、白砂糖。

2.3 方法2.3.1 无菌水和培养基的制备(1)无菌水：将20支试管分别用移液枪注入9ml的自来水，塞上试管塞，分10支捆成一扎并用牛皮纸包好。

将2个三角瓶分别注入150ml的自来水，塞上瓶塞，分别用牛皮纸封好。

将上述的试管以及三角瓶一起高压蒸汽灭菌。

(2)培养基：MC培养基:称取16g改良MC培养基粉末加200mL水置于电炉上小火加热溶解；TJA培养基:称取12g改良TJA培养基粉末加10mL茄汁和200mL水置于电炉上小火加热溶解，分别制得。

乳酸菌的验收标准

乳酸菌的验收标准
乳酸菌的验收标准主要包括以下几个方面：
1. 感官指标：乳酸菌应呈现微黄色，状态近似炼乳状，表面有少量乳清析出，质地均匀一致，无砂质、片状或糊状感，口感细腻，甜酸适中，具有纯正的乳酸发酵香味和芒果风味。

2. 微生物指标：乳酸菌的数量应≥10~6个／毫升，杂菌总数≤100个／毫升；大肠杆菌≤3个／毫升；致病菌不得检出。

3. 保质期：用塑料杯灌装密封，保质期3个月。

以上信息仅供参考，具体的验收标准可能会根据不同的产品类型和生产厂家有所不同。

乳酸菌的提取和鉴定

酸奶中乳酸菌的筛选试验一、实验目的：熟悉从酸奶中分离和纯化乳酸菌的一般方法二、实验原理：市场销售的酸奶主要含乳酸菌，乳酸菌的主要作用是把牛奶中乳糖发酵成乳酸，此外酸奶中还含有其他球菌，利用它产酸等性质可以分离乳酸菌，分离培养基一般添加蛋白胨、酵母膏提供氮源、维生素、生长因子；葡萄糖为可发酵糖类；磷酸氢二钾为酸碱缓冲剂；柠檬酸铵、硫酸镁、硫酸锰、亚硫酸铁、吐温-80和乙酸钠为培养各种乳酸菌提供生长因子，其成分还能抑制某些杂菌；琼脂是培养基的凝固剂。

、也常常加入醋酸盐，因醋酸盐能抑制部分细菌生长，对乳酸菌无害。

培养基中添加碳酸钙，乳酸溶解培养基中的碳酸钙形成透明圈，作为分离鉴别的依据。

.筛选方法：.溶钙圈法：利用一些产酸类细菌在含CaCO3 的培养基上产生CaCO3 溶解圈，从而筛选出这些产酸类细菌，可用于乳酸菌的筛选。

其中培养基中加入CaCO3 的作用是：①鉴别能产生酸的细菌；②中和产生的酸，以维持培养基的PH、更利于乳酸菌的生长和分离三、实验药品及仪器牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、葡萄糖、乳糖、吐温-80、柠檬酸二铵、CaCO3 、K2HPO4 NaAc·3H2O、MgSO4·7H2O、MnSO4·H2O、琼脂、结晶紫染色液、碘液、95%乙醇、石蜡、蒸馏水。

仪器：超净工作台、电子显微镜、接种环、恒温培养箱、接种环、培养皿、涂布环、高压锅、试管、微波炉、电子天平、离心机四培养基类型①改良MRS 培养基（乳酸菌分离培养基）：牛肉膏10g，蛋白胨10g，酵母膏5g，葡萄糖20g，吐温-80 1.0ml（它是一种很好的乳化剂和分散剂也就是说它的作用就是是培养基的营养成分更加的均匀就是对营养成分的再一次优化），K 2HPO4 2g，NaAc·3H2O 5g，柠檬酸二铵2g，MgSO4·7H2O 0.58g，MnSO4·H2O 0.25g，补蒸馏水至1000ml（固体培养基中加琼脂 1.5%-2%），调pH 至6.4±0.2，121℃高压灭菌15min②改良MC 培养基（乳酸菌选择培养基）：牛肉膏5g，蛋白胨5g，酵母膏5g，葡萄糖20g，乳糖20g，CaCO3 10g，琼脂20g，中性红0.05g（指示剂），最终pH6.5±0.2，补蒸馏水至1000ml，121℃高压灭菌15min。

乳酸菌的简介

乳酸菌的简介一、乳酸菌的起源根据圣经旧的书上记载，公元前4000多年，人类已经开始发酵乳酸肉制品及蔬菜腌渍物。

直到公元1857年，巴斯德(Pasteur)发现酸乳(sour milk)中有微小生物体存在，将其定名为”levue lactique”，发酵乃微生物作用所致的秘密才首次得以揭露；这是发现乳酸菌的开端。

1873年李斯特(Lister)利用稀释法，由酸乳中纯化分离出Bacterium lactis，也就是目前的Lactococcus lactis，这是乳酸菌最早被分离出来的纪录(廖,1998；李,2000)。

二、乳酸菌的定义乳酸菌一般是指能将碳水化合物发酵分解为乳酸的细菌群(佐佐木隆,1998)。

乳酸菌群具有以下几点特性：1.为革兰氏阳性(gram positive)球菌或杆菌。

2.不产生孢子(nonsporting)且无运动性(nonmotile)3.不具分泌催化酶(catalase negative)之能力。

4.可在有氧环境生长，但以无氧状态下生存较佳，亦有绝对厌氧者。

5.需有碳水化合物、胺基酸、维生素等多种生长因子方能生长之复合营养需求性(complex nutritional requirements)。

6.依代谢途径与最终产物的不同，可分为同质发酵(homofermentative)及异质发酵(heterofermentative)两种乳酸菌。

同质发酵性乳酸菌含有aldolase，最终产物90％-100％为乳酸；异质发酵性乳酸菌具有phosphoketolase，其最终产物除了40％-50％的乳酸外，还包括乙醇、二氧化碳及醋酸等多项产物(Ingledew,1995)。

乳酸菌普遍存在动物体消化道中，因耐酸性佳且可分泌乳酸及抗菌物质等有利于生存的条件，故消化道三大菌群当中最占优势(Nemcova et al. 1997)三、乳酸菌的分类乳酸菌一般包括Lactobacillus (L)、Leuconostoc (Leuc.)、Streptococcus (S)及Pediococcus (Ped.)四属；广义的乳酸菌尚包括Bifidobacterium与Sporolactobacillus 两个属(Jay, 2000)。

细菌的菌落特点

细菌的菌落特点细菌的菌落特点是其价值的必备组成部分，它们影响着细菌的自然功能和性质，一般来说，菌落表现出许多不同的特点。

下面，我们将深入研究菌落的特点以及这些特点如何影响细菌的性质和自然能力。

首先要介绍的是乳酸菌菌落特点。

乳酸菌是一类常见的革兰氏阴性菌，它们释放乳酸，能够分解淀粉，并且具有广谱抗菌性，这一特性使它们最适合被用于制备乳酸饮料。

乳酸菌菌落特点有三个主要方面：一是其分泌能力，乳酸菌分泌大量的乳酸，可以改善乳酸饮料的口感；二是其耐受性，乳酸菌的耐受性很高，可以在广泛的环境条件下存活；三是其抗菌能力，乳酸菌具有广谱抗菌性，可以抵御外界细菌的侵害。

其次，枯草芽孢杆菌菌落特点是其耐酸碱性和高热稳定性。

枯草芽孢杆菌属于中性菌，它们具有耐酸性和耐碱性，可以承受pH值在2-10的环境，而且它们的热稳定性很高，能够在50°C以上的温度环境中存活。

这使得枯草芽孢杆菌不仅可以在自然界中生存，而且可以用来催化不同的化学反应，例如乙醇的生物合成反应以及制备生物柴油的反应。

最后，大肠杆菌菌落特点是其脂肪分解能力和对无机酸的耐受性。

大肠杆菌是一种常见的细菌，它们能够分解多种脂肪，可以将植物油脂转化成石油，是一种重要的催化剂；它们还具有对无机酸的耐受性，可以在碱性条件下分解植物油，而且在酸性和碱性环境中都可以存活。

大肠杆菌的特殊特性让它们广泛用于食品加工和制药领域，如乳品制作、药物研发等。

以上就是细菌的菌落特点介绍。

细菌的菌落特点非常重要，它们的性质和自然能力受到菌落的影响，从而影响着细菌的价值和应用范围。

因此，了解细菌的菌落特点非常重要，如果要使各种细菌发挥最大的商业价值，就必须首先进行全面系统的菌落特征研究，分析各种细菌菌落的特点，以便更好地发掘其价值。

经过以上综述，可以明确地得出结论：不同细菌的菌落表现出不同的特点，而这些特点又会影响细菌的自然功能和性质。

因此，要想更好地发掘多种细菌的价值，就必须首先对其菌落特性进行全面研究与分析，这样才能有效地发掘其多样性。

乳酸细菌分类鉴定及实验方法

乳酸细菌分类鉴定及实验方法乳酸细菌是一类可以发酵果糖或蔗糖产生乳酸的革兰氏阳性细菌。

它们广泛存在于自然界中的土壤、水体、动物肠道、植物表面等环境中，并且在食品加工、乳制品、膳食补充剂等领域具有重要的应用价值。

分类鉴定乳酸细菌的方法主要包括传统分离鉴定和分子生物学方法，而实验方法主要包括培养、生理生化鉴定和分子鉴定等。

1.传统分离鉴定传统分离鉴定是通过培养、生理生化特性的观察和细菌形态学特征的分析来进行分类鉴定的方法。

一般的步骤包括：1.2分离：采用适当的培养基，如MRS培养基等，在适当条件下进行分离培养。

可以采用不同的稀释度和培养温度来增加分离率和适应性。

1.3纯化：从培养出的菌落中选择纯净的菌落进行纯化。

1.4形态学观察：观察细菌的形态学特征，如菌落形态、细胞形态、孢子形态等。

1.5生理生化特性鉴定：通过生理生化实验，如氧需氧性、产气、产酸、碱性产蛋白酶等特性的鉴定来进一步确定细菌的分类。

1.6比较分析：将鉴定结果与已知的乳酸菌进行比较分析，以确定菌株的分类。

2.分子生物学方法分子生物学方法是一种快速、准确的分类鉴定方法，可以通过检测细菌的DNA序列来进行鉴定。

常用的分子生物学方法包括PCR、16SrRNA测序和随机扩增多态性DNA(RAPD)等。

2.1PCR：PCR是通过扩增细菌DNA的特定区域来进行鉴定的方法。

首先，从培养的细菌中提取DNA。

然后，使用特定引物扩增目标区域的DNA，并通过凝胶电泳分析PCR产物的大小。

比较PCR产物的片段大小和带型模式，可以确定乳酸菌的分类。

2.216SrRNA测序：细菌的16SrRNA序列是一个高度保守的基因序列，可以用来进行细菌分类鉴定。

通过提取DNA，扩增16SrRNA基因片段，并进行测序，然后将测序结果与已知的乳酸菌序列比对，可以确定细菌的分类。

2.3RAPD：RAPD是一种无须事先了解目标序列的技术，它利用随机引物扩增细菌DNA的多态位点，通过凝胶电泳分析不同样品间的DNA带型模式，来进行菌株分类。

GB4789. 35乳酸菌检验

乳酸菌计数
乳杆菌计数乳酸菌总数结果减去双歧杆菌与嗜热链球菌计数结果之和即得乳杆菌计数。
报告（GB/T4789.35-2008）
根据菌落计数结果出具检测报告。最终确定的乳酸菌菌落在30～300之间的平板计数，再乘以相应的稀释倍数，修约保留两位有效数字，之后的数字，采用10的指数表示。参照GB/T 4789.2规定。每克（或毫升）食品中所含有的乳酸菌数以CFU/g（mL）表示。
结果的表述
7.4.1 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（mL）中菌落总数结果。 7.4.2 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式（1）计算：
7.4.3 若所有稀释度的平板上菌落数均大于300 CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。 7.4.4 若所有稀释度的平板菌落数均小于30 CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。 7.4.5 若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1 乘以最低稀释倍数计算。 7.4.6 若所有稀释度的平板菌落数均不在30 CFU～300 CFU 之间，其中一部分小于30 CFU 或大于300CFU 时，则以最接近30 CFU 或300 CFU 的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
2010版
样品制备
7.1.3 固体和半固体食品：以无菌操作称取25 g 样品，置于装有225 mL 生理盐水的无菌均质杯内，于8000 r/min～10000 r/min 均质1 min～2 min，制成1:10 样品匀液；或置于225 mL 生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min 制成1:10 的样品匀液。 7.1.4 液体样品：液体样品应先将其充分摇匀后以无菌吸管吸取样品25 mL 放入装有225 mL 生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分振摇，制成1:10 的样品匀液。

乳酸菌的筛选与鉴定流程

乳酸菌的筛选与鉴定流程1.材料首先要确定目标，即所筛选的乳酸菌来自哪里，例如想要筛选一株果蔬发酵乳酸菌，那我们就得找一个产区或者其他地方自然发酵果蔬的样品。

1.1培养基查找相关文献，菌种生化鉴定用培养基建议查看文献：工业微生物实验手册MRS培养基：牛肉膏10 g/L，蛋白胨10 g/L，吐温801g/L，葡萄糖50 g/L，乙酸钠5g/L，硫酸镁0.2 g/L，磷酸氢二钾2 g/L，柠檬酸二铵2 g/L，溴甲基酚紫0.4 g/L，酵母提取物5 g/L，琼脂15～20 g/L，pH 6.3～6.7，121 ℃湿热灭菌30 min。

（PS：若自己嫌麻烦，可买现成的MRS培养基）初筛培养基：在MRS分离培养基的基础上，添加0.5%碳酸钙，乳酸调至PH2.0.（加碳酸钙是为了能更好的挑出优势菌，乳酸调至PH2.0也是同样道理）如图：若是乳酸菌菌落旁会有清晰可见的透明圈，这是由于乳酸与碳酸钙反应了。

高盐复筛培养基∶在MRS分离培养基的基础上，添加10%氯化钠和0.5%碳酸钙。

高糖复筛培养基∶在MRS分离培养基的基础上将葡萄糖质量分数提高到30%，添加0.5%碳酸钙。

明胶培养基∶蛋白胨25 g/L，牛肉膏7.5 g/L，氯化钠5g/L，明胶100 g/L，pH7.0～7.2，121∶湿热灭菌15 min。

果蔬发酵培养基∶将苹果、胡萝卜、西瓜、西红柿等水果、蔬菜清洗去皮切分后分别榨汁除渣制得发酵果酱，然后按1∶1∶1∶1比例混合经巴氏灭菌后4 ∶冷藏。

按照混合果蔬汁33.3%、葡萄糖5%、蔗糖5%、氯化钙0.5%、磷酸氢二钠0.05%、磷酸二氢钠0.05%、硫酸镁0.03%、柠檬酸0.1%的配比配制，除果蔬和柠檬酸外其余成分于115 ∶湿热灭菌15 min。

2.方法2.1乳酸菌的分离筛选取产区自然发酵苹果原浆，用0.9%灭菌生理盐水进行10 倍梯度稀释后，吸取适宜稀释度溶液涂布至MRS分离培养基中，37 ∶恒温厌氧培养24h，挑取菌落黄色范围大并具有乳酸菌典型特征的单菌落，进行革兰氏染色观察菌体形态。

乳酸菌活菌数量检测方法--菌落计数法

乳酸菌活菌数量检测方法--菌落计数法本方法适用于乳酸菌制剂及配合饲料中有效活菌数和杂菌率的测定。

按照国家标准GB/T 14699.1进行抽样，获得样品200g，分装于两个无菌、干燥的玻璃瓶中，贴上标签，注明产品名称、批号、取样日期等信息。

一瓶供检验用，一瓶密封保，以备复查。

一、测定原理：乳酸肠球菌用肠球菌琼脂培养基，杂菌用营养琼脂培养基；培养后利用平板菌落计数法进行计数。

二、培养基与缓冲液配方：（1）营养琼脂培养基，每L蛋白胨 10.0g 牛肉膏 3.0g 氯化钠 5.0g 琼脂 18.0g 水稀释至1000ml PH 7.0~7.4（2）肠球菌琼脂培养基，每L蛋白胨 20.0g蔗糖 5.0g 葡萄糖 5.0g 乳糖 5.0g 酵母膏 5.0g氯化钠 4.0g 乙酸钠 1.5gVc 0.5g 琼脂 17.0g 水稀释至1000mlPH 6.5~7.0（3）PH6.8磷酸缓冲液配制方法取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液250ml，加0.2mol/L氢氧化钠溶液118ml，用水稀释至1000ml，摇匀即得。

三、样品处理：（1）乳酸菌纯品制剂样品测定乳酸菌纯品制剂时，取样量为1g，溶解到100ml缓冲液中，缓冲液与样品的比例为100:1。

（2）配合饲料样品测定饲料样品时，取样量为25g，溶解到225ml缓冲液中，缓冲液与样品的比例为10:1。

四、有效活菌数、杂菌数的测定：（1）本方法采用平板菌落计数法（2）操作方法：1．取磁力搅拌棒装入500ml三角瓶中，再量225ml PH6.8的磷酸缓冲液一并装入三角瓶中灭菌备用。

纯品制剂量取缓冲液100ml。

2．取25g饲料样品放入三角瓶中，在磁力搅拌器中震荡混匀5min后，再放到摇床上37℃，150转/分，充分震荡45min，混匀成1：10稀释液。

纯品制剂样品量为1g，混匀成1：100稀释液。

3．在超净工作台内用灭菌的1.5ml离心管，按10倍比稀释法稀释。

用移液器吸取上述混悬液100ul，注入含有900ul缓冲液的离心管内，并在液体中反复吹打5次，在漩涡振荡器上震荡30s混匀（注意每次稀释时更换枪头及充分震荡混匀）。

乳酸菌分离鉴定及试验方法

乳酸菌分离鉴定及试验方法
乳酸菌的分离鉴定主要包括以下步骤：
1. 菌落筛选：根据菌落的颜色、大小、光泽度和透明程度，挑取含溶钙圈的单菌落。

2. 分离纯化：在MRS或Elliker固体培养基上反复划线分离，直到分离到纯的单一菌落。

3. 革兰氏染色：镜检观察菌体颜色、大小、形状和排列方式。

4. 过氧化氢酶实验：将革兰氏染色阳性、过氧化氢酶阴性的菌株初步认定为乳酸菌。

5. 保藏：用终浓度为25%甘油冻存管进行菌株的保藏，置于-80℃冰箱中保存备用。

乳酸菌的试验方法主要包括以下步骤：
1. 耐酸性优良菌株筛选试验：将分离纯化的乳酸菌和实验室耐酸性较好的WHH544接种到MRS液体培养基中，接种量为2%，于37℃培养箱中培养24小时，连续活化2代后，以6000r/min离心10分钟，弃去上清液，沉淀菌体用灭菌生理盐水洗涤、离心2次后，通过麦氏比浊法调整菌悬液浓度为×108CFU/mL。

2. 其他试验：根据具体研究需求进行相关试验，例如通过不同条件培养，观察菌株生长情况；或通过发酵实验，测定乳酸菌的产酸能力等。

以上内容仅供参考，建议查阅专业微生物学书籍或文献获取更全面和准确的信息。

乳酸菌菌落特征与鉴定

乳酸菌菌落特征与鉴定乳酸菌是一类广泛存在于自然界中的微生物，可以在发酵食品、发酵饲料等的制作过程中产生乳酸，具有重要的应用价值。

乳酸菌菌落的特征与鉴定有助于确定其种类、品质以及发酵能力等方面的信息。

以下将从乳酸菌的菌落形态特征、生理生化特征以及分子生物学特征等方面进行介绍。

乳酸菌的菌落形态特征对于鉴定其种类至关重要。

乳酸菌的菌落通常呈白色或乳白色，与一些其他菌落形态相比较容易区分。

乳酸菌的菌落一般较小，直径在1-2毫米左右，起初呈球形，逐渐变平展，并具有典型的菌落边缘光滑或呈不规则的边缘。

此外，乳酸菌的菌落表面光滑或凹凸不平，质地柔软，并且菌落会发生一定的变色现象，例如有的乳酸菌会在菌落周围形成红色环带。

乳酸菌的生理生化特征也是鉴定其种类的重要依据之一、乳酸菌具有好气性和厌氧性两种类型，好气性乳酸菌需要氧气才能生长，而厌氧性乳酸菌则可以在无氧条件下生长。

乳酸菌在形成乳酸的过程中不产生气体，与产气菌相比较容易区分。

此外，乳酸菌一般为革兰氏阳性菌，不产生芽孢。

乳酸菌的生理生化特征还包括是否产生过氧化氢酶、蛋白酶、氧化酶等酶类，以及对不同的碳源和氮源的利用情况等。

分子生物学技术的应用使得乳酸菌的鉴定更为准确和方便。

通过PCR技术可以扩增乳酸菌的16SrRNA基因序列，然后通过测序和序列分析来鉴定乳酸菌的种类。

16SrRNA序列是乳酸菌的系统分类研究中最常用的序列标记，其具有高度保守性和足够的区分度，有助于确定乳酸菌的种属和进一步的亚种分类。

此外，对于一些重要的产酸乳酸菌种类，还可以通过多重引物聚合酶链式反应技术来进行鉴定。

例如，通过对乳酸菌的ldh基因进行扩增和分析，可以鉴定产酸乳酸菌中嗜酸性的乳酸菌种类。

通过分子生物学的方法，乳酸菌的鉴定可以更加迅速和准确。

总之，乳酸菌的菌落特征、生理生化特征和分子生物学特征是鉴定乳酸菌的重要依据。

综合运用这些方法可以确定乳酸菌的种类、品质以及发酵能力等信息，对于乳酸菌的研究和应用具有重要意义。

乳酸菌在培养基上的菌落特征

乳酸菌在培养基上的菌落特征乳酸菌是一类广泛存在于自然界中的微生物，其在发酵及食品生产、医药制品等领域中具有重要的应用价值。

在分离纯化乳酸菌过程中，对乳酸菌在培养基上的菌落特征有一定的认识，可以帮助酸奶、营养酒等发酵产品的生产以及医药领域中相关药物的研究与改进。

一、形态特征乳酸菌在培养基上的菌落可以简单地分为平滑菌落和粗糙菌落两类。

平滑菌落的外形较为规则，表面光滑呈发亮状态，周缘清晰，直径一般在1-5 mm之间。

菌落的颜色主要与菌株的种类有关，有些为乳白色，有些为黄色、淡黄色甚至棕色。

粗糙菌落的外形不规则，菌落表面较为粗糙，常常呈现出海绵状，直径可达10 mm甚至更大，表面颜色也随菌株的不同而有所差异。

二、质地特征软质菌落质地松软，质地细腻，菌落表面光滑，易破碎。

中等质地菌落质地适中，表面较为平整，菌落周围的边缘明显。

三、透明度特征乳酸菌在培养基上的菌落透明度特征可分为透明、半透明和不透明三种。

透明菌落透光性强，看起来像透明的水滴，只在菌落边缘有色。

半透明菌落比较模糊，菌落中间清晰，边缘模糊。

不透明菌落透光性弱，没有看到菌落下的培养基颜色，高度浑浊。

四、边缘特征乳酸菌在培养基上的菌落边缘特征可以分为光滑边缘、锯齿状边缘和波浪状边缘三种。

光滑边缘菌落边缘清晰，呈现圆形或椭圆形，无凹凸突起。

锯齿状边缘菌落形态不规则，边缘有很多小锯齿状起伏，所以其边缘呈现出不规则的形状。

波浪状边缘菌落形状不规则，呈现出波浪状，边缘不明显，需要查看其下方培养基才能看得出来。

五、表面特征平滑表面菌落表面较为平滑，呈现圆形或椭圆形。

凹凸不平表面菌落表面凹凸不平，可能是由菌落内的气泡所致。

组织蒸发表面菌落呈现出较为光滑的环状，该现象主要是由于菌落内部的液体挥发形成的。

总结起来，乳酸菌在培养基上的菌落特征，包括形态、质地、透明度、边缘和表面特征。

这些特征可以通过肉眼或显微镜来观察，对乳酸菌的鉴别、区分、纯化以及乳酸菌的酸奶、营养酒等发酵产品的生产具有重要的参考价值。

乳酸菌的分离

乳酸菌的分离一、实验目的: (1)了解乳酸菌的菌落特征及细胞形态；(2)了解乳酸菌的分离及鉴定原理。

二、实验内容: 酸乳中乳酸菌的分离及初步鉴定(1)从酸乳中分离乳酸菌；(2)对乳酸菌进行初步鉴定。

三、实验器材:样品：含乳酸菌的酸奶；培养基：BCG牛乳培养基；设备：高压蒸汽灭菌锅，电磁炉，恒温培养箱；仪器用品：1000ml烧杯一个，500ml量筒一个, 无菌培养皿12个, 500ml容量三角瓶2个，25ml无菌移液管1只，20ml无菌试管7只，1ml无菌移液管6只，培养基分装器一个，玻棒2根, 无菌涂布器3只，酒精灯一盏，接种环一个，天平，牛角匙，漏斗，漏斗架，载玻片，盖玻片，pH试纸若干，液体石蜡，棉塞，吸管，牛皮纸，线绳、标签等。

药品：结晶紫，乙醇，草酸氨，碘，碘化钾，番红，番红，NaOH，NaCl。

三、实验原理:自然条件下，微生物常以群落状态存在，这种群落往往是不同种类微生物的混合体，为了研究某种微生物的特性或者要大量培养或者使用某种微生物，必须从这些混杂的微生物群落中获得纯培养，这些获得纯培养的方法称为微生物的分离和纯化。

培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质,用以培养,分离,鉴定,保存各种微生物和代谢产物。

此次分离纯化乳酸菌采用BCG牛乳培养基[3]。

乳酸菌分离目的是要在培养基上出现乳酸菌的单个菌落，为此我们采用以下两种方法：平板划线法：平板划线分离法是将混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基表面通过划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后繁殖成单菌落；从而得到待分离菌种的纯种。

其原理是将微生物在固体培养基表面多次做”由点到线”稀释而达到分离的目的。

平板涂布法：平板涂布法是将样品经稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释液接种到平板上，经过培养，由每个单个细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个但菌落代表原样品中的一个单细胞。

乳酸菌菌落特征与鉴定

乳酸菌菌落特征与鉴定
纯培养
挑取3个或以上的可疑菌落，嗜热链球菌接种于MC琼脂平板，乳杆菌属和双歧杆菌属接种于MRS琼脂平板，双歧杆菌需绝对厌氧，置36 ℃±1 ℃恒温箱内培养48 h±2 h，不含双歧杆菌需兼性厌氧，置36 ℃±1℃恒温箱内培养48 h±2 h。

鉴定
涂片镜检：乳杆菌属细胞形态多样，从长的杆状和细长杆状到弯曲杆状及短杆状，一般形成链。

通常不运动。

无芽胞，革兰氏染色阳性。

嗜热链球菌形态为球形或球杆状，直径为μm～μm，细胞成对或成链排列，无芽胞，革兰氏染色阳性。

双歧杆菌属细胞呈多样形态，有较规则短杆状或纤细杆状具有尖细末段的细胞，也有呈球形者，可形成各种分支或分叉形。

无芽胞，革兰氏染色阳性。

1。

乳酸菌的鉴定

乳酸菌的鉴定吲哚试验1）.试管标记：取装有蛋白胨水培养基的试管2支，分别标记乳酸菌和空白对照。

2）.接种培养：以无菌操作分别接种少量菌苔到标记乳酸菌的试管中，标记有空白对照的不接种，置37摄氏度恒温箱中培养24~48小时。

3）.观察记录：在培养基中加入乙醚1~2 ml ,经充分振荡，使吲哚萃取至乙醚中，静置片刻后乙醚层浮于培养液的上面，此时沿管壁缓慢加入5~10滴吲哚试剂，如有吲哚存在，乙醚层呈玫瑰色，此为吲哚试验阳性反应，否则为阴性反应。

糖发酵试验1）.试管标记：取分别装有葡萄糖，蔗糖发酵培养液试管各2支，每种糖发酵试管中分别标记乳酸菌和空白对照。

2）.接种培养：以无菌操作分别接种少量菌苔至以上各相应试管中，每种糖发酵培养液的空白对照均不接菌。

将装有培养液的杜氏小管倒置试管中，置37摄氏度恒温培养箱中培养24小时，观察结果。

3）.观察记录：与对照管比较，若接种培养液保持原由颜色，其反映结果为阴性；如果培养液呈黄色，反映结果为阳性。

培养液中的杜氏小管内有气泡为阳性反应，杜氏小管内没有气泡为阴性反应。

1.2.3 乳酸的检测选用已经分离的菌种做小型发酵实验，取发酵液的上清液约10 ml于试管中，加入10%硫酸1 ml ,再加2%高锰酸钾 1 ml ,此时乳酸转化为乙醛，把事先在含氨的硝酸银溶液中侵泡的滤纸条搭在试管口中，微火加热试管至沸，观察滤纸变化。

1.结果和分析2.1 乳酸菌的分离提纯在平板上出现了圆形稍扁平的黄色菌落，周围培养基变为黄色，初步定为乳酸菌⑴，取出少量在显微镜下观察到了链球状和杆状两种形状（如图一2.2乳酸菌的鉴定该菌种的菌落为圆形稍扁平的黄色菌落，有杆状和链球状两种形状。

在吲哚试验中，加入菌种的试管无任何变化，证明为阴性反应（如图二）。

说明该菌不具有分解色氨酸产生吲哚的能力。

也说明此菌种不是大肠杆菌，因为大肠杆菌的吲哚试验证明为阳性。

在糖发酵试验中，在加入葡萄糖的发酵培养液中加入菌种后，培养液变为黄色，反应结果为阳性，且杜氏小管内无气泡（如图三）；加入蔗糖的发酵培养液中加入菌种后的反应结果也为阳性且杜氏小管内无气泡（如图四）。

乳酸菌鉴定方法

乳酸菌鉴定方法嘿，你问乳酸菌的鉴定方法哈。

那我们得先从形态学方面入手。

把含有乳酸菌的样本放在显微镜下观察。

乳酸菌的形状有点特别，大多数是杆状或者球状的。

就像一个个小卫士，在微观世界里排着队。

你可以看看它们的大小，一般都比较小，得仔细观察才能看清它们的模样。

有的乳酸菌还会连在一起，像一串串小珠子似的。

再说说菌落特征。

把乳酸菌接种到固体培养基上，让它们生长繁殖。

过一段时间后，你会看到培养基上长出了一个个小菌落。

乳酸菌的菌落通常比较小，而且表面光滑、湿润。

有点像小小的露珠落在培养基上。

颜色一般是白色或者乳白色的，看起来很干净。

接着讲讲生化反应鉴定。

乳酸菌能发酵一些糖类，比如葡萄糖、乳糖等。

我们可以通过检测它们发酵糖类产生的产物来鉴定。

比如检测有没有产生乳酸，因为乳酸菌的名字可不是白叫的，它们可是产乳酸的能手。

可以用一些化学试剂来检测，要是试剂变色了，那就说明产生了乳酸。

还有一个方法是通过分子生物学技术来鉴定。

这就有点像用高科技手段来识别乳酸菌。

提取乳酸菌的DNA，然后用特定的引物进行PCR 扩增。

就像给乳酸菌的DNA 做个标记，这样就能准确地知道是不是乳酸菌了。

我给你讲个事儿哈。

在一家做酸奶的工厂里，他们很关心酸奶里的乳酸菌。

有一次，他们怀疑酸奶里的乳酸菌有点问题，就开始进行鉴定。

先把酸奶样品放在显微镜下看，发现有很多球状的小东西，看着像是乳酸菌。

然后把样品接种到培养基上，长出了好多小菌落，菌落的特征和乳酸菌的很像。

接着他们又做了生化反应测试，发现这些菌确实能发酵乳糖产生乳酸。

最后还不放心，又用分子生物学技术验证了一下，确定就是乳酸菌。

这样他们就放心了，知道自己的酸奶里有足够的、正宗的乳酸菌。

在鉴定乳酸菌的时候，每一个方法都很重要。

就像我们认识一个人，要从不同的方面去了解。

不能只看外表，还得看看他的行为、习惯等。

鉴定乳酸菌也是一样，综合运用这些方法，才能准确地鉴定出乳酸菌。

而且操作过程要仔细，不能马虎，不然就可能得出错误的结论。