农产品品质检验(甜玉米品质的测定)

一、实验目的和要求
1、掌握外植体消毒技术；
2、学会超净工作台的使用和维护方法；
3、学会无菌接种技术；
二、材料、器具和使用方法
1、材料：水稻种子
2、器具：无菌吸水纸、酒精灯、脱脂棉花、记号笔、超净工作台、酒精瓶、酒精喷壶、烧
杯、镊子、解剖刀、碟子、大烧饼等。

3、超净工作台的使用方法：用75%酒精棉球擦拭超净工作台台面；将培养基及接种用具放
在超净工作台台面；打开超净工作台紫外灯，照射约20-30min；打开送风开关，并关闭
紫外灯，通风约10min后，开日光灯；接种；做好清洁卫生；关掉电源。

4、消毒药品的配制：0.1%HgCl2，准备一个500ml的玻璃杯，倒入约100ml的蒸馏水，称
取0.5g的氯化汞放入磁条后，放到磁场搅拌器哪里搅拌，待溶液彻底溶解后，倒入500ml
的容量瓶中定容；75%乙醇，准备一个1000ml的量筒，倒入750ml的95%的乙醇，后
加水到950ml就配成了75%的乙醇溶液。

三、操作步骤
1、接种材料的准备：将水稻颖果人工去壳，洗净手后用洗洁精水溶液清洗颖果，流水冲洗
干净后，沥干水分带到超净工作台。

2、外植体的消毒（超净工作台上进行）：点燃酒精灯，把颖果置于无菌空瓶中，倒入75%
酒精溶液浸泡30秒后，把酒精倒入到烧杯中，用无菌水清洗，并把无菌水倒进烧杯中，
再用0.1%的氯化汞，浸泡10min后，无菌水冲洗六次备用
3、接外植体：将消毒后的颖果用无菌镊子接种到诱导培养基上，每瓶接上六粒，盖上盖子
后，用记号笔写上小组号，接种日期、接种材料。

4、将上述接种有颖果的培养瓶防止与组织培养室内，黑暗条件下处理15天，后揭开报纸，
自然散射光下进行培养。

5、培养过程中要观察、记录：于接种后5天、10天、20天、30天观察污染和脱分化的情
况，记录初代培养过程（起始脱分化时间、愈伤组织形成上涨过程）、污染个数和启动
个数，计算污染率和诱导率。

四、注意事项
1、超净工作台在进行接种前必须擦拭干净并通风够30min，否则很容易引起污染；
2、手伸进超净工作台进行任何操作或者在接种过程中手伸到外面时，必须用酒精喷壶喷手
或者用酒精棉充分擦拭，防止手引起的细菌真菌污染；
3、接种过程中，尽量不要讲话。

五、实验记录
水稻愈伤组织的诱导接种日期2013.9.22
接种天数（天）接种种子数（个）污染数（个）启动数（个）诱导率
5 9
6 36 90 93.75%
10 96 42 90 93.75%
20 96 42 90 93.75%
30 96 42 90 93.75%
六、思考题
1、接种过程中，如何防止交叉污染？
首先外植体用具都要严格依照实验操作要求杀毒灭菌。

实验超净工作台先开半个小时
以上，还要用酒精消毒擦拭工作台面。

镊子手术刀都要用酒精灯烧炙杀菌，禁止手过
多的在已消毒的器皿上空晃动，禁止手接触已消毒器具。

把外植体植入培养基里的时候，尽量快，不能让镊子接触瓶口和瓶内壁，也不能接触到培养基。

一般情况下将外植体45度角插入培养基。

2、紫外线、氯化汞、75%酒精灭菌的原理各是什么？
紫外线可以使得DNA中的嘧啶形成二聚体，导致基因结构破坏，从而杀死微生物；氯化汞可以使蛋白质变性，从而起到消毒的作用，因为氯化汞是一种有毒物质，所以只能进行植物的表面消毒，它对细菌的消毒能力要比真菌强；酒精之所以能消毒是因为酒精能够吸收细菌蛋白的水分，使其脱水变性凝固，从而达到杀灭细菌的目的。

如果使用高浓度酒精，对细菌蛋白脱水过于迅速，使细菌表面蛋白质首先变性凝固，形成了一层坚固的包膜，酒精反而不能很好地渗入细菌内部，以致影响其杀菌能力。

75%的酒精与细菌的渗透压相近，可以在细菌表面蛋白未变性前逐渐不断地向菌体内部渗入，使细菌所有蛋白脱水、变性凝固，最终杀死细菌，酒精浓度低于75%时，由于渗透性降低，也会影响杀菌能力。