3-少见和苛养菌抗菌药物敏感性试验方法介绍(孙长贵-长沙)
抗菌药物敏感性的测定关乎临床合理用药
抗菌药物敏感性的测定关乎临床合理用药□本报记者张思玮药敏试验需要培养时间，结果具有滞后性，再加上检验与临床缺乏沟通，往往会导致药敏试验结果不能满足临床治疗要求。
解放军第一一七医院检验科主任孙长贵日前在接受《科学时报》记者采访时表示，测定细菌对抗菌药物的敏感性，是临床合理用□本报记者张思玮“药敏试验需要培养时间，结果具有滞后性，再加上检验与临床缺乏沟通，往往会导致药敏试验结果不能满足临床治疗要求。
”解放军第一一七医院检验科主任孙长贵日前在接受《科学时报》记者采访时表示，测定细菌对抗菌药物的敏感性，是临床合理用药的重要依据，而确保其结果的准确性，必须要懂得正确选择药敏试验指征、药敏试验方法、科学合理地选择试验抗菌药物及解释标准等。
的确，随着近年来新型抗菌药物不断出现和抗菌药物的广泛应用，逐渐导致耐药菌株的不断出现，尤其是抗生素滥用，造成抗药突变菌株的大量出现。
“抗菌药物会对病原体有一定的作用，但如果使用不当便会导致抗药性的形成，甚至干扰机体内的正常微生物群的作用，反而对机体带来不良影响。
”孙长贵说，抗菌药物是临床常用的药物，但是各种病原体对抗菌药物的敏感性是各不相同的。
有选择地进行药敏试验药敏试验的目的是检出细菌的耐药性，确定病原细菌对哪种药物有抗药性，避免医生将其作为治疗用药。
但并不是所有的细菌都需要进行药敏试验。
“只有已知可能出现耐药的菌株，并且属于引起感染的致病菌，或引起免疫功能低下患者感染的条件致病菌，才需要做药敏试验，若属于正常菌群的污染菌或与感染无关的细菌则无需试验。
”孙长贵说。
当然，也存在着起初对某种抗菌药物敏感的菌株在患者开始治疗后发展成为中介或耐药。
孙长贵建议，此时就应该从身体相同部位分离出相同菌株，进行药物敏感性试验，来检测是否已发展为耐药。
“这种耐药性可在治疗后3~4天内出现，已注意到在用第三代头孢菌素治疗肠杆菌属、枸橼酸杆菌属和沙雷菌属，以及所有抗菌药物治疗铜绿假单胞菌以及喹诺酮类治疗葡萄球菌最常出现上述情况。
抗菌药物的敏感试验
最 低 杀 菌 浓 度 （ minimal bactericidal concentration,MBC）： 某 抗 菌 药 物 能 杀 灭 99.9%以上测试菌时的最低药物浓度。
7. 质量控制 采用标准菌株：金黄色葡萄球ATCC25923，
大肠埃希菌ATCC25922，和铜绿假单胞菌
ATCC27853
2）直接纸片药敏法 由确证感染部位采集到的一些重要临
床标本直接涂布接种MH琼脂或5%羊血 MH琼脂，然后放置药敏纸片。不仅可 提早24h得出初步药敏结果供临床用药参 考，还有助于发现混合感染中的不同菌
（2）方法
菌液、平板接种等同纸片琼脂扩散 法,待琼脂平板完全干燥，用E试验加样 器或镊子将试条放在已接种细菌的平板 表面，试条全长应与琼脂平板紧密接触， 试条MIC刻度面朝上，浓度最大处靠平 板边缘。
采用NCCLS2002 AST执行标准推荐 孵育条件。
（3）结果判读：读取椭圆环与E试验试 条的交界点IC值。
(2) 方法 试管编号： 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
抗生素： 1ml 2ml
(512µg/ml)
不加抗生素
MH肉汤 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml
对倍稀释： 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml1ml(弃去 ) 抗生素含量 256 128 64 32 16 8 4 2 1---
B.拮抗作用： 甲+乙＜甲单或乙单
细菌对甲药耐 药，对乙药敏 感，甲药对乙 药发生切割状 拮抗现象。
NCCLS抗菌药物敏感性试验执行标准第14版信息增刊更新内...
9.4 鼠疫耶尔森菌、鼻疽伯克霍尔德菌和假鼻疽伯克霍尔德菌 MIC（μg/ml）解释标准
微生物群
抗菌药物
MIC（μg/ml）解释标准
S
I
R
假鼻疽伯克霍尔德菌 鼻疽伯克霍尔德菌 假鼻疽伯克霍德菌
阿莫西林/克拉维酸 头孢他啶
≤8/4 ≤8
16/8
≥32/16
16
≥32
鼻疽伯克霍尔德菌 假鼻疽伯克霍德菌
亚胺培南
等药物敏感性，应按常规解释标准对结果进行解释和报告。不具有 mecA 基因或不产生 PBP2a 的分离株， 但 MIC≥4μg/ml，应报告对苯唑西林耐药。
6 肠球菌属菌 在 M2 表 2D 注释 5 和 M7 表 2D 注释 4 中增加“氨苄西林敏感性可用于预示粪肠球菌 对亚胺培南的敏感性”内容。
注：应用标准的纸片扩散法试验条件，孵育 24h；但如耐药则在孵育 18h 后可报告结果
5.6 在 M2 和 M7 表 2C 头孢西丁或苯唑西林一栏中增加用 30μg 头孢西丁纸片进行纸片扩散试验，其 结果预示 mecA 介导的耐药性的注释。内容为“使用含 30μg 头孢西丁纸片进行纸片扩散试验所得结果 和替代临界值（见本表后面介绍）能用于葡萄球菌中预示 mecA 介导的耐药性”。 5.7 在 M2 表 2C 注释 11 和 M7 表 2C 注释 10 中补充了苯唑西林敏感的凝固酶阴性葡萄球菌对针剂和口 服头孢菌素、β-内酰胺/β-内酰胺酶抑制剂复合制剂及碳青霉烯类报告结果的解释。内容为“对于苯 唑西林敏感菌株，如测定针剂和口服头孢菌素、β-内酰胺/β-内酰胺酶抑制剂复合制剂和碳青霉烯类
11 QC（苛养菌） 11.1 在 M7 表 3A 脚注中增加“阿莫西林/克拉维酸和阿莫西林对 E. coli ATCC®35218 在 HTM 上检测时 质控范围分别是 4/2~16/8μg/ml 和≥256μg/ml；测试阿莫西林有助于检测该株菌是否仍然保持产β内酰胺酶的能力”。
细菌对抗菌药物敏感试验 - 湖南省高等学校精品课程网
怀化医专《微生物学检验》教案编号：10细菌对抗菌药物敏感试验药敏试验(antimicrobial susceptibility,AST)（一）概念：在体外检测药物抑制或杀死细菌能力的试验。
（二）检测意义：1、疾病的治疗：指导用药。
2、耐药菌检测和流行病学调查。
3、评价新药抗菌作用。
4、某些菌种的鉴定。
第一节临床常用的抗菌药物抗菌药物：是指具有杀菌或抑菌活性的抗生素和化学合成药物。
一、青霉素类抗生素：青霉素种类抗菌活性1、天然青霉素不产青霉素酶的G+G-球菌、普雷沃菌等。
青霉素G、青霉素V2、耐青霉素酶青霉素产青霉素酶的G+G-球菌甲氧西林、奈夫西林、苯唑西林等3、广谱青霉素青霉素G敏感细菌、大部分大肠埃希菌、氨苄西林、阿莫西林奇异变形杆菌、流感嗜血杆菌等G-菌替卡西林、羧苄西林、氨苄西林无效的G-菌，产β-内酰胺酶美洛西林、派拉西林克雷伯菌、铜绿假单胞菌、肠杆菌、厌氧菌二、头孢菌素类抗生素：1、第一代头孢菌素（头孢噻啶、头孢噻吩、头孢氨苄、头孢唑啉、头孢羟氨苄等）作用：对G+菌作用强，如金葡菌、链球菌等。
2、第二代头孢菌素（头孢羟唑、头孢呋辛、头孢克洛、头孢尼西、头孢雷特等）作用：产青β-内酰胺酶G-菌有作用，如肠杆菌科细菌，铜绿假单胞菌等。
3、第三代头孢菌素注射用头孢噻肟、头孢曲松、头孢他啶、头孢派酮：对产青β-内酰胺酶G-菌有很大抗菌活性。
口服用头孢克肟、头孢布坦等：对肠球菌、铜绿假单胞菌及不动杆菌无用。
4、第四代头孢菌素（头孢匹罗、头孢匹美）作用：对肠杆菌科细菌和铜绿假单胞菌作用强。
三、其它β-内酰胺类抗生素：1、单环β-内酰胺类抗生素（氨曲南、卡芦莫南）对G-菌作用强2、头霉素类：对G+菌、厌氧菌作用较好氧头孢烯类抗生素：抗菌谱广，对产β-内酰胺酶G-菌作用强，对产酶的金葡菌有效3、碳青酶烯类抗生素（亚胺培南、米洛培南等）广谱（最广），抗菌活力强4、β-内酰胺酶抑制剂（克拉维酸、舒巴坦、他唑巴坦）与β-内酰胺类抗生素联用能增强后者的抗菌活性。
抗菌药物敏感性试验
方法：
菌液制备：生理盐水校正测试菌和质控菌至 0.5麦氏比浊标准，再用MH肉汤稀释到 107CFU/ml；
加菌液：用微量加样器取0.1ml稀释菌液由低 到高加于各排试管中，其最终的接种量为 5×105 CFU/ml。测试菌排、测试菌生长对照 管加测试菌液；质控菌排、质控菌生长对照 管加质控菌液。
实验内容
常用抗菌药物敏感性试验与耐药检测 方法介绍。
纸片扩散法。 肉汤稀释法。
一、常用抗菌药物敏感性试验与耐药 检测方法介绍
纸片扩散法（Kirby-Bauer test） 稀释法（dilution test） E试验法（E test） 联合药物敏感试验 特殊耐药菌及耐药酶的表型检测
耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的检测 β-内酰胺酶、超广谱β-内酰胺酶检测等
二、纸片扩散法（K-B法）
原理：
含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上， 纸片所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断向纸片周 围区域扩散，形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度 范围内的细菌生长被抑制，形成透明的抑菌圈。
抗菌药物
青霉素 苯唑西林 万古霉素 庆大霉素 红霉素 克林霉素 磺胺药
纸片含药量
10U 1μg 30μg 10μg 15μg 2μg 1.25/23.75μg
耐药 ≤28 ≤10 — ≤12 ≤13 ≤14 ≤10
抑菌圈直径(mm)
中介
敏感
—
≥29
11～12
≥13
—
≥15
13～14
≥15
14～22
≥23
涂布接种：无菌棉拭蘸取菌液，在试管壁旋转挤去多 余菌液后在MH琼脂表面均匀涂布接种3次，每次旋转 平板60º，最后沿平板内缘涂抹1周；
细菌对抗菌药物敏感性的检验
细菌对抗菌药物敏感性的检验1、扩散法：琼脂加上细菌所需要的各种养料，将培养基融化后，倒入无菌培养皿中，冷却，凝成一个平面或叫平板(平皿)。
这时将含有少数细菌的菌液涂到平板上，培养后细菌就会分别在平皿上繁殖，如果在平皿的培养基内事先加入抗生素纸片，由于药物在培养基中扩散，起了抑(杀)菌作用，形成了不长菌落的抑制圈。
抑制圈的大小，反映某一抗生素对该菌抑菌的程度。
K-B法：最常用的药敏试验是WHO推荐的Kirby-Bauer纸片扩散法(K-B法)。
该法将药敏试验抑菌环大小分为四个等级，即：敏感、中度敏感、中介度、耐药。
由于中介度介于敏感和耐药之间，所以不予报告，故化验单上只报告敏感、中度敏感或耐药。
【临床意义】1．敏感：表示被测菌株所引起的感染可以用常用剂量的该抗菌药物治愈，禁忌症除外。
2．中度敏感：表示被测菌株可以通过提高剂量被抑制或在药物被生理性浓集的部位被抑制，如β-内酰胺类药物。
3．中介度：这一范围只是抑菌环直径介于敏感和耐药之间的“缓冲域”，以防止由微小的技术因素失控所导致的较大的结果解释错误。
抑菌环落入中介度范围，意义不明确，如果没有其他可替代的药物，应重复做药敏试验，或以稀释法测定MIC。
4．耐药：被测菌不能被常用剂量所达到组织内或血液中的抗生素所抑制。
5．最低抑菌浓度：抑制被测菌的最低药物浓度。
6．最低杀菌浓度：抗菌药物杀灭细菌所需的最低浓度。
联合药敏试验：【临床意义】常用于严重感染时对两种或两种以上抗生素的选择。
常用K-B法和方阵棋盘稀释法。
结果以部分抑菌浓度FIC的指数报告。
1．FIC指数＜0．5，为协同作用。
即两种抗菌药物联合后的药效大于同样浓度的两种药物抗菌作用的总和。
2.FIC指数0．5～1，为相加作用，即两种药物联合后其活性等于两种药物抗菌作用的总和。
3．FIC指数1～2，为无关作用，即联合药物的活性与单独的抗菌作用相同。
4．FIC指数＞2，为拮抗作用，即两种药物联合后的抗菌活性小于单独一种药物的抗菌作用。
抗菌药物敏感性试验
β溶血菌对万古霉素。
抗菌药物敏感性试验
第7页
5.自标本中分离出各种细菌，不能确定为致病菌各 种细菌，分离菌可能是来自环境或人体正常菌群污 染时，通常无须进行药敏试验。
6.分离自正常寄生部位条件致病菌和非致病菌，不 能说明其与污染关系，不需要进行药敏试验。
抗菌药物敏感性试验
第8页
体外药敏Байду номын сангаас验选药标准
药敏试验中抗菌药品选择要遵照合理科学标准， 含有以下几个方面标准：1.依据抗菌药品抗菌谱， 每种抗菌药品都有一定抗菌谱，药品类型不一样， 其抗菌范围也不一样。2.依据细菌种属：抗菌药 品对不一样种属细菌作用效果不一样，所以应有 针对性地选择抗菌药品进行敏感性试验，标准上 可依据CLSI推荐抗菌药品选择方法选择药品进 行试验，如肠杆菌科，葡萄球菌，假单胞菌。 （见表1）
2.从同一患者体中同部位连续分离到相同菌株， 为检测它们是否已经发展为耐药，应重新进行 药敏试验。尤其是在第四代头孢菌素治疗肠杆 菌属、枸橼酸杆菌属和沙雷氏菌属，全部抗菌 药品治疗铜绿假单胞属，喹诺酮类治疗葡萄球 菌属3-4天后，起初对某种抗菌药品敏感菌株易 发展位耐药。
抗菌药物敏感性试验
第6页
3.进行细菌耐药性调查和抗菌药品疗效时 需要进行药敏试验。
在药品生理部位含有临床效力（如尿 液中喹诺酮类和β-内酰胺类）。另外 中介还能作为缓冲区，以预防微小， 未受控制技术原因造成较大错误结果 ，尤其是针对那些药品毒性范围靠近 疗效范围药品。
抗菌药物敏感性试验
第5页
药敏试验普通标准
1.药敏试验只在被认为是引发感染细菌纯培养物 上进行，当从合格临床标本中分离出任何感染 可疑病原菌，又不能从该菌种属特征可靠地推 测其反抗菌药品敏感性时，则需要进行药敏试 验。
细菌或真菌的抗菌药物敏感性的检查方法及其中使用的系统[发明专利]
![细菌或真菌的抗菌药物敏感性的检查方法及其中使用的系统[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/1623f1d0ee06eff9aff807c9.png)
专利名称：细菌或真菌的抗菌药物敏感性的检查方法及其中使用的系统
专利类型：发明专利
发明人：松本佳巳,叶山浩平,榊原升一,西野邦彦,山口明人,野地博行,饭野亮太
申请号：CN201280044700.X
申请日：20120831
公开号：CN104011541A
公开日：
20140827
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：提供一种可简便且迅速地检查细菌或真菌对抗菌药物的敏感性的新方法以及用于该方法的检查系统。
本发明的检查方法是细菌或真菌的抗菌药物敏感性的检查方法，其特征为，具有以下步骤：使用具有流路的微型装置，在所述微型装置的所述流路内培养抗菌药物与被检菌液的混合液的步骤；及检测所述微型装置的所述流路的观察区域中来自所述被检菌液的细菌或真菌的检测步骤。
所述检测步骤例如可通过用显微镜等检测所述观察区域中来自所述被检菌液的细菌或真菌的增减或形态变化而进行。
申请人：国立大学法人大阪大学,株式会社富国,流体制品技术株式会社
地址：日本大阪府吹田市
国籍：JP
代理机构：北京北翔知识产权代理有限公司
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细菌对药物敏感性检测的临床应用
细菌对药物敏感性检测的临床应用
孙大椿
【期刊名称】《吉林医药学院学报》
【年(卷),期】1995(000)003
【摘要】应用式管法测定绿脓杆菌对Rocephin(菌必治)的敏感性及有效浓度.此法操作简便,各细检验室均有条件开展,能及时指导临床用药减少二重感染的发生,不失为一种受临床欢迎的药敏检测方法.自磺胺类药物
【总页数】2页(P193-194)
【作者】孙大椿
【作者单位】空军总医院!北京市100036
【正文语种】中文
【中图分类】R446.5
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两种方法测抗菌药物敏感试验的比较
(Λg m l)。 且该点必须是完全抑制生长处。 1. 4. 3 N it rocefin 试纸测 Β2内酰胺酶参照文献2 。
2 结 果
2. 1 100 株革兰阴性菌用两法检测结果 见表 1, ς2= 2. 44 P < 0. 005。
表 1 100 株革兰阴性菌用两法测 8 种抗菌药的药敏结果
药 物
IPM CA Z C IP GM CRO A K CFP CPS
E2test 法
S
I
R
88
0 0
57
8 2
44
4 5
40
5 1
பைடு நூலகம்
32
0 0
53
细菌对抗菌药物的敏感性试验
细菌对抗菌药物的敏感性试验
赵源昌
【期刊名称】《《农家之友》》
【年(卷),期】2008(000)022
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【总页数】5页(P53-56,59)
【作者】赵源昌
【作者单位】藤县天平镇渔牧兽医站广西藤县543300
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苛养菌药敏试验方法
苛养菌药敏试验方法
张银旺
【期刊名称】《现代检验医学杂志》
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【总页数】3页(P63-65)
【作者】张银旺
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临床常见念珠菌对四种抗真菌药物体外敏感性研究
临床常见念珠菌对四种抗真菌药物体外敏感性研究孙长贵;王奇军;张丽君;成军;曾贤铭;孙关忠【期刊名称】《浙江检验医学》【年(卷),期】2004(000)003【摘要】目的了解临床常见致病念珠菌对4种抗真菌药物的敏感性情况,旨在为临床治疗此类菌株引起的感染提供实验依据。
方法采用NCCLS推荐的微量肉汤稀释法(NCCLSM27-A2),测定从临床血液、痰液和尿液等标本中分离的226株常见念珠菌对氟康唑、伊曲康唑、两性霉素B和氟胞嘧啶的最低抑菌浓度(MIC)。
结果226株受试菌对氟胞嘧啶100%敏感,MIC90为≤0.125～0.5μg/ml;168株白色念珠菌对氟康唑、伊曲康唑和两性霉素B的MIC90分别为32μg/ml、1μg/ml和1μg/ml,敏感率分别为90.5%(S88.1%+SDD2.4%)、92.3(S87.5%+SDD4.8%)和91.7%;31株热带念珠菌对氟康唑、伊曲康唑和两性霉素B敏感率分别为96.8%(S93.6%+SDD3.2%)、93.5%(S83.9%+SDD9.6%)和100%;16株副秃发念珠菌对氟康唑、伊曲康唑和两性霉素B均敏感;11株光滑念珠菌对氟康唑和伊曲康唑的敏感率分别为81.8%(S18.2%+SDD63.6%)和72.8%(S36.4%+SDD36.4%),而对两性霉素B100%敏感。
在白色念珠菌、热带念珠菌和光滑念珠菌中有3.2%～27.2%菌株对氟康唑和伊曲康唑等唑类药物耐药。
结论临床常见致病念珠菌对氟胞嘧啶和两性霉素B的敏感性最高,对唑类药物存在不同程度耐药性。
【总页数】4页(P18-21)【作者】孙长贵;王奇军;张丽君;成军;曾贤铭;孙关忠【作者单位】解放军第一一七医院检验科;温州医学院检验卫生学院【正文语种】中文【中图分类】R446.5【相关文献】1.临床常见念珠菌对四种抗真菌药物体外敏感性研究 [J], 王奇军;孙长贵2.白色念珠菌对四种抗真菌药物敏感性研究分析 [J], 王静;张淑娟3.临床常见念珠菌对抗真菌药物体外敏感性的研究 [J], 李莉;王玉洁;谭海艳;殷晓婕4.阴道念珠菌病对常见抗真菌药物体外敏感性研究 [J], 梅小燕; 黄静; 陈宇丽5.常见念珠菌属的临床分布及对抗真菌药物敏感性研究 [J], 李莉;苏维奇;纪迎春;国霞;于清华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
离体抗菌药物敏感性试验常用的两种检测方法（2）
离体抗菌药物敏感性试验常用的两种检测方法（2）
孟思好;孟长明;陈昌福
【期刊名称】《渔业致富指南》
【年(卷),期】2014(000)007
【摘要】即为拟测定药敏敏感性的病微生物。
需要注意的是，因为不同的致病微
生物对同种药物的敏感性是不相同的，药敏纸片法测定相同药物对不同种类的致病微生物的抑菌效果时，可能会观察到直径不同大小的抑菌环。
如果致病微生物不纯，该供试微生物在试验中所产生的抑菌环与纯培养状态下所产生的抑菌环大小差异比较大，
【总页数】2页(P63-64)
【作者】孟思好;孟长明;陈昌福
【作者单位】河南省新乡康大消毒剂有限公司;华中农业大学水产学院武汉430070
【正文语种】中文
【中图分类】S858.237.2
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福
5.离体抗菌药物敏感性试验常用的两种检测方法（3） [J], 孟思妤;孟长明;陈昌福;孟思好
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苛养菌的药敏试验(一)
苛养菌的药敏试验（一）苛养菌是指一类需要特殊营养成分才能生长繁殖的细菌，如淋病奈瑟菌、嗜血杆菌及肺炎链球菌等。
1．淋病奈瑟菌的药敏试验可采用纸片扩散法和稀释法进行。
但需在含1%添加剂的淋病奈瑟菌GC平板上进行。
操作方法同纸片扩散法和稀释法。
在35℃5%C02孵育20～24小时后测量抑菌环直径。
可选用头孢克肟、头孢噻肟、头孢泊肟、头孢唑肟、头孢曲松等抗生素中的1～2种，头孢西丁、头孢呋辛、头孢替坦、环丙沙星或氧氟沙星、青霉素G、壮观霉素、四环素等进行测定。
对于分离的菌株可测定p内酰胺酶，阳性结果预示青霉素 G等耐药。
2．嗜血杆菌属的药敏试验以下抗菌药物：阿莫西林／克拉维酸、头孢克洛、头孢丙烯、氯碳头孢、头孢地尼、头孢克肟、头孢泊肟、口服头孢呋辛酯、阿奇霉素和克拉霉素等对单一嗜血杆菌感染患者的治疗往往不需进行敏感试验，仅在耐药性监测或流行病学调查时才进行。
从脑膜炎、败血症、会厌炎和面部蜂窝炎等重危患者的血液和脑脊液中分离到的流感嗜血杆菌，应进行常规试验并报告氨苄西林、一种三代头孢菌素、氯霉素和美洛培南的药敏结果。
氨苄西林敏感试验测定的结果，可预报阿莫西林的活性；大多数耐氨苄西林和阿莫西林的流感嗜血杆菌分离株产生TEM型l3内酰胺酶。
从细菌性脑膜炎及败血症患者标本中分离的嗜血杆菌，应直接作l3内酰胺酶试验，以快速检出氨苄西林和阿莫西林耐药菌株。
可用纸片扩散法和稀释法进行药敏试验。
纸片扩散法使用嗜血杆菌专用HTM培养基，操作同纸片扩散法。
接种物制备按直接菌悬液法。
稀释法用HTM 肉汤。
可在常规条件下孵育20～24小时报告，而不一定在50/4COz的环境下。
3．肺炎链球菌的药敏试验在M-H琼脂中添加5%绵羊血，倾注平板用于肺炎链球菌的纸片扩散法试验，接种后置5%CO。
、35℃孵育20～24小时观察结果，其他操作同纸片扩散法。
大多数抗菌药物需要用含2%～5%(V／V)溶解马血的阳离子调节的M-H肉汤(AMHI3-LHB)作为基质，稀释抗菌药物，进行稀释法测定。
5种抗真菌药物的体外敏感性试验
5种抗真菌药物的体外敏感性试验尹玉琴;王根春;李崇映;李春东;徐贵丽【期刊名称】《药学实践杂志》【年(卷),期】2004(22)2【摘要】目的:了解呼吸道感染患者痰中念珠菌对5种抗真菌药物的敏感性特性,为临床合理用药提供依据.方法:采用标准微量稀释法(NCCLSM-27A)[1]测定43珠念珠菌对氟康唑片、伊曲康唑胶囊、大蒜素注射液、大蒜液及氟康唑注射液的最低抑菌浓度(MIC).结果:氟康唑片MIC为0.8～100μg/mL,83.7%(36/43)敏感,氟康唑注射液MIC 6.25～25μg/mL,100%敏感;伊曲康唑胶囊2.5～10μg/mL,90.7%(39/43)敏感;大蒜素注射液4.69～18.75μg/mL,100%敏感;大蒜液(本院制剂)0.78～100mg/mL,88.4%(38/43)敏感.结论:结果提示对白色念珠菌引起的深部感染患者,12.5μg以上氟康唑注射液、大蒜素注射液,临床治疗有效.【总页数】2页(P79-80)【作者】尹玉琴;王根春;李崇映;李春东;徐贵丽【作者单位】成都军区昆明总医院,云南,昆明,650032;成都军区昆明总医院,云南,昆明,650032;大理学院药学院,云南,大理,671000;大理学院药学院,云南,大理,671000;成都军区昆明总医院,云南,昆明,650032【正文语种】中文【中图分类】R978.5【相关文献】1.葡萄糖消耗试验用于体外抗真菌药物敏感性试验 [J], 夏修蛟;宋为民;金海生;郑俊惠;康云平;许爱娥2.改良琼脂培养基稀释法在抗真菌药物体外敏感性试验中的应用研究 [J], 陈思敏;何巧;谌立巍3.体外抗真菌药物敏感性试验ATB FUNGUS 3法与微量肉汤稀释法的对比评价[J], 高锦;王中新4.常用抗真菌药物对念珠菌的体外敏感性试验方法探讨 [J], 王子仲;戎建荣;杨晓东5.念珠菌对5种抗真菌药物的体外敏感性试验 [J], 尹玉琴;王根春;李崇映;李春东;徐贵丽因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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微生物
万古霉素 全部 “R” 某些种“S” 全部 “R” 全部 “R”
万古霉素折点? 无 有 无 无
丹毒丝菌属
乳杆菌属 明串球菌属
“明串珠菌对万古霉素固有耐药。 建议与感染病医生沟通”
片球菌属
8
某些实验室快速鉴定万古霉素-耐药革 兰阳性球菌使用的方法
血培养有革兰阳性球菌，取肉汤培养物转种平板贴 万古霉素纸片。 无抑菌圈和菌落形态与万古霉素-R菌种符合 － 通知 临床医生“推定” 万古霉素耐药。
CLSI M45M45-A2. 表 12.
嗜水气单胞菌复合群 类志贺邻单胞菌
试验方法和折点改编于 试验方法和折点改编于肠杆菌科 肠杆菌科
– 邻单胞菌属目前公认作为肠杆菌科成员，与气单胞菌表型 和疾病谱相似。
嗜水气单胞菌复合群
5/14 菌种引起人类疾病
– 豚鼠气单胞菌、嗜水气单胞菌、简达气单胞菌、休伯特气单胞
– 由于万古霉素常常被用于怀疑革兰阳性微生物引起感染的 经验治疗，因此快速区别非常重要。 经验 治疗，因此快速区别非常重要。
HACEK 群
嗜沫嗜血杆菌、副嗜沫嗜血杆菌 、惰性嗜血杆菌、 伴放 线凝聚杆菌 (以前的放线杆菌) 、心杆菌属、侵蚀艾肯菌
和金氏杆菌属 。
常常与 常常与心内膜炎 心内膜炎有关 有关
少见或苛养菌抗菌药物稀释 和纸片扩散敏感性试验方法
M45-A2 2010 M45M45M45 -A 2006 M45M45 -P 2005
M45－A2文件包括主要内容
1、正文部分 2、表1-表16. 不同菌种敏感性试验资料和/或解释解释标准 3、表17. 试验条件和质量控制建议摘要 4、质量控制（表18、18A、18B、18C、18D、18E、19、19A） 5、术语表（I、II、III）
CLSI M45M45-A2 表 4－空肠 / 大肠弯曲菌
红霉素 环丙沙星
空肠 /大肠弯曲菌
由于这种感染常常是 由于这种感染常常是自限的 自限的，因此通常不需要执行 ，因此通常不需要执行 AST 。 对于 对于持续性腹泻或重症 持续性腹泻或重症患者可考虑执行 患者可考虑执行AST。 治疗:
HACEK群
卡他莫拉菌
9
卡他莫拉菌
卡他莫拉菌
“若需要, 可执行-内酰胺酶试验, 使用显色头孢菌素法如 头孢硝噻吩” 。 大多数卡他莫拉菌产 -内酰胺酶(>90%菌株 阳性 )，对氨 苄西林和阿莫西林耐药。 “不建议常规试验，对流行病学目的或管理持续或重症感 染患者则是有用的” 。
– 红霉素 或 环丙沙星 – 多西环素－作为替代选择
空肠弯曲菌- Etest
耐药性与日俱增
– 红霉素 0~11% – 氟喹诺酮类 10~40% (在治疗期间可出现耐药) 注解: 商业试验, 在M45 M45-A2中未提到Etest , 但在某些情况下可使用。
是什么原因阻碍商业MIC板条(如. 用于测试 链球菌板条) 测试M45中微生物? 板条中 板条中没有需要测试的某些药物 没有需要测试的某些药物。 。 浓度范围 浓度范围不足以解释 不足以解释S、I、R 结果。 还没有 还没有用 用M45中大多数微生物来评价商业板条的 适用性。
2
如何对M45中微生物进行MIC 试验?
标本: 脑脊液 诊断: 脑室分流感染 明串珠菌
初步报告: a-溶血链球菌 –菌落类似 (最初用万古霉素治疗患者无明显改善) 最终报告: 明串珠菌属 (转用青霉素治疗患者)
明串珠菌属
万古霉素-耐药革兰阳性菌
(菌落有时看上去像链球菌)
标本: 脑脊液 诊断: 脑室分流感染 明串珠菌
MIC (µg/ml) 青霉素 2 S
少见和苛养菌 抗菌药物敏感性试验方法介绍
解放军第一一七医院检验科 南京军区医学检验检验质控中心 孙长贵
主要内容：
少见或苛养菌抗菌药物敏感性试验方法介绍。 讨论执行CLSI M45M45-A2中微生物药敏试验时机。 讨论 CLSI M45M45-A2中微生物的关键耐药及药物选择。
CLSI M45M45-A2 文件
空肠 / 大肠弯曲菌纸片扩散法
Zone (mm) S I R 6
抗菌药物
注释
2) 纸片扩散抑菌圈直径6 mm (生长至6mm纸片边 缘) 提示对大环内酯类 (如, 红霉素)耐药。出现任何 大小抑菌圈，为了正确分类敏感性，需测定MIC 。
红霉素
环丙沙星
-
-
6
(3)纸片扩散抑菌圈直径6 mm (生长至6mm纸片边 缘) 提示对环丙沙星耐药。出现任何大小抑菌圈， 为了正确分类敏感性，需测定MIC 。
正文部分目录
CLSI M45 是如何发展的?
据CLSI M2, M7, 和 M100 文件建议，尽可能与之适应 。 – 培养基 – 试验程序 – QC M45…. “苛养” = 细菌生长需要在培养基添加血液或血液成分 ，以及可能需要特殊气体环境 (如，5% CO2)。
1
CLSI M45 是如何发展的?
CLSI M45M45-A2. 表 4
5
标本: 粪便 诊断: 持续性腹泻 空肠弯曲菌 MIC (µg/ml) 环丙沙星 红霉素 四环素 >4 R 1.0 S 1.0 S
标本: 骨髓 诊断: 白血病 棒状杆菌属
应该执行AST? 用什么方法? 选择什么药物?
棒状杆菌属
棒状杆菌属
棒状杆菌属
大多数杰氏棒状杆菌、解脲棒状杆菌 表现对多种抗菌 药物 耐药（R） 。 其他菌株结果具多样性。 由于存在erm 基因，对大环内酯和林可酰胺类 基因，对大环内酯和林可酰胺类耐药。 耐药。 大多数菌种对-内酰胺类, 利福平、氨基糖苷类、四环 素类、氟喹诺酮类耐药 素类、氟喹诺酮类 耐药。 。 -内酰胺类 “S” 结果，孵育不到48 h，不应报告。
折点来源：
– 检索文献 – 工作组成员的调查经验 – 有限的研究 – 改编于CLSI M100折点 折点。 。
CLSI M45M45-A2 所列微生物 乏养菌属 / 颗粒 链菌属 芽胞杆菌属 HACEK
折点来源举例
折点来源于…. 链球菌属 葡萄球菌属 氯霉素来源于链球菌 其他药物来源于流感嗜血杆菌
药敏试验方法
E-test
– 对大多数M45微生物， 微生物，测试数据有限 测试数据有限。 。
* 除参考MIC法外，还描述了纸片扩散法
M45M45 -A2指南中 指南中包括的微生物 包括的微生物
1、乏养菌属和颗粒链菌属(以前称营养缺陷或营养变异链球菌) 2、HACEK群： 凝聚杆菌(以前的嗜沫嗜血杆菌、副嗜沫嗜血 杆菌、惰性嗜血杆菌和伴放线凝聚杆菌）、心杆菌、侵蚀艾肯 菌和金氏杆菌。
48 h 最终结果
应该执行AST? 用什么方法? 选择什么药物?
“建议与感染病医生沟通”
CLSI M45M45-A2 表13－巴斯德菌属
CLSI M45M45-A2 表13－巴斯德菌属
补充资料中，包括-内酰胺酶试验…..
咬伤感染
常见治疗: -内酰胺 / -内酰胺酶抑制剂(如, 阿莫西林克拉维酸) -内酰胺酶 内酰胺酶可 可阳性 阳性的常见微生物： 的常见微生物： – 多杀巴斯德菌 – 侵蚀艾肯菌 -内酰胺酶 内酰胺酶通常 通常阳性 阳性的常见微生物： 的常见微生物： – 金黄色葡萄球菌
3
CLSI M45M45-A2 表 1 乏养菌属 / 颗粒链菌属
标本: 血液 诊断: 心内膜炎
乏养菌属
青霉素 头孢噻肟或头ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ曲松 万古霉素
应该执行AST? 用什么方法? 选择什么药物?
CLSI M45M45-A2 表 1 (续) 乏养菌属 / 颗粒链菌属
乏养菌属 / 颗粒链菌属
营养变异链球菌 可表现对 可表现对青霉素敏感性减低 青霉素敏感性减低… 在治疗心内膜炎时可引起困难
少见或苛养细菌试验条件和质量控制建议摘要
少见或苛养细菌试验条件和质量控制建议摘要 什么时候应测试CLSI M45-A2中微生物药敏？
当有临床意义分离菌株(如, 无菌部位分离菌)
– M45 M45-A2中某些微生物是 典型的 “正常菌群” (如, 来源于
泌尿生殖道的乳酸杆菌)
假如认为不适合经验治疗，或有特殊需求。
标本: 脑脊液 诊断: 脑膜炎 产单核细胞李斯特菌 应该执行AST? 用什么方法? 选择什么药物?
7
产单核细胞李斯特菌
标本: 脑脊液 诊断: 脑膜炎 产单核细胞李斯特菌 氨苄西林 复方新诺明 MIC (g/ml) 1 S 0.5/9.5 S
“建议与感染病医生沟通。 头孢菌素对产单核细胞李斯特菌是无效的”
标本: 骨髓 诊断: 白血病 棒状杆菌属
红霉素 庆大霉素 青霉素 万古霉素
“青霉素结果未定;
MIC (µg/ml) >2R 1S 1S
24 h 初步结果
建议与感染病医生沟通”
6
标本: 骨髓 诊断: 白血病
棒状杆菌属
红霉素 庆大霉素 青霉素 万古霉素
标本:局部脓肿分泌物 诊断:狗咬伤
多杀巴斯德菌
MIC (µg/ml) >2R 1S 0.5 S 1S
– 以前治疗建议是 ：氨苄西林+ 庆大霉素。 – 产 -内酰胺酶菌株与日俱增。 – 目前治疗建议是 ：头孢噻肟 / 头孢曲松
执行-内酰胺酶试验。 某些嗜血杆菌和凝聚杆菌可通过非产 -内酰胺酶机制对 氨苄西林－“ 氨苄西林－ “R”。
HACEK群
HACEK群MIC 试验
CAMHB ＋ 2.5 2.5-5% 溶解马血。 某些分离菌株使用推荐试验条件可出现生长不佳。 确证生长对照孔充分生长。 有时候添加新鲜和最大量 (5%) 溶解马血可增强生长。
菌、维隆气单胞菌。
胃肠炎、蜂窝组织炎、菌血症、溶血性尿毒综合症、烧 伤相关败血症、呼吸道感染。 氨苄西林-R, 但常对对β-内酰胺酶抑制剂复合剂-“S” 可产诱导型β-内酰胺酶; 因此，在治疗期间可出现“R”