细胞培养之精华&培养基手册
实验室细胞培养基本知识
细胞培养箱的无菌
• 培养箱是主要的污染源，应每学期做彻底清洁（箱体、架子、 隔板、托盘），可用70%酒精充分擦拭，并完全挥发晾干。
• 培养箱使用时底部湿盘要加入1%硫酸铜。 • 培养细胞时，尽可能选购带渗透盖的培养瓶，不仅可以在CO2
环境中迅速达到平衡，而且不会有污染的危险。
细胞培养中的无菌操作
• 紫外灭菌：洁净台使用前、使用中的间隙、使用后都要用紫外灭菌，但 光束的有效性有限，因为它不能达到缝隙中。
• 70%酒精擦拭：洁净台使用前、使用中有溢出物、使用后都要擦拭，各 种试剂瓶、储液瓶、培养瓶、培养板和培养皿，放入洁净台之前，必须 用 70% 乙醇擦拭其外部，注意要选用抗乙醇的记号笔。
细胞培养中的无菌操作
• 加盖：所有试剂瓶子要用深螺旋的聚丙烯盖子，使用时要将盖 子口朝下放置在工作区域，不用时要及时盖好，但可以不用旋 紧。
• 灼烧：开放工作台才需要灼烧，细胞培养用的洁净台中不需要 也不建议灼烧、明火既破坏了层流又难以除去生物危害物质， 还带来了火灾隐患，明火带来的高温还会影响HEPA过滤的寿命。
• 气流可以呈水平方向，与工作 台面平行吹过，或者也可呈垂 直方向，从通风橱上方吹向工 作台面。
• 细胞培养通风橱通过维持工 作区域上方稳定、单向的 HEPA过滤空气流动，保护工 作环境免受灰尘及其他空气 污染物污染。
准备与灭菌
灭菌方式的选择
• 热稳定的物品（玻璃器皿、金属）用干热灭菌：160℃， 1h；
新鲜培养基，为其提供更多继续生长的空间。 • 细胞系：首次传代培养后，原代培养物即被称为细胞系。 • 细胞株：如果将细胞系的一个细胞通过克隆或者其他方法从培养物中
细胞培养方法
细胞培养方法
细胞培养是生物学实验中常用的一种技术手段，它可以提供大量的细胞用于实验研究。
正确的细胞培养方法对于细胞的生长、增殖和实验结果的准确性都至关重要。
下面将介绍一些常用的细胞培养方法及注意事项。
首先，准备培养基。
培养基是细胞生长所必需的营养物质和生长因子的混合物。
常用的培养基有DMEM、RPMI-1640等，根据不同细胞类型的要求选择适当的培养基。
在制备培养基时，需要注意无菌操作，避免细菌和真菌的污染。
其次，处理细胞。
从细胞库中取出细胞后，需要进行细胞的处理和传代。
处理细胞时，要注意细胞的密度和活性，避免细胞凝集和死亡。
传代时，要根据细胞的生长状态和密度进行适当的稀释，以保证细胞的健康生长。
接着，进行细胞的接种和培养。
将处理好的细胞按照一定的比例接种到预先涂有培养基的培养皿中，然后将培养皿放入培养箱中进行培养。
在培养过程中，需要定期观察细胞的生长状态，及时更换培养基，避免细胞过度生长或死亡。
最后，进行实验。
当细胞达到所需的数量和状态后，就可以进行相关的实验。
在实验过程中，需要注意培养皿的无菌操作，避免细菌和真菌的污染。
同时，要注意细胞的处理和操作方法，避免对细胞造成损伤。
总之，正确的细胞培养方法对于细胞的生长和实验结果至关重要。
只有严格遵守操作规程，做好无菌操作，才能得到可靠的实验结果。
希望本文介绍的细胞培养方法能够对大家有所帮助。
细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项
【1】细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项细胞培养是生物学实验中常见的一项重要技术，它广泛应用于细胞生物学、分子生物学、药理学等领域。
通过细胞培养，科研人员能够研究细胞的生长、分化、凋亡等生物学过程，同时也可以进行药物筛选、生物学效应观察等实验。
然而，细胞培养是一项复杂的工作，需要严格遵循一系列步骤和要求，并且需谨慎对待各项注意事项。
在本文中，我将以从浅入深的方式，全面探讨细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项，帮助你更深入地理解这一技术。
【2】细胞培养的具体步骤和要求让我们来了解细胞培养的具体步骤。
通常情况下，细胞培养的主要步骤包括：细胞分离、细胞计数、细胞传代、培养基准备、细胞接种、培养条件控制等。
具体来说，细胞培养的步骤包括收获细胞、细胞解聚、细胞计数、调整细胞密度、接种细胞、培养细胞、处理细胞等。
在进行这些步骤时，需要保持实验操作台面清洁整洁，常备所需培养工具、培养耗材和培养试剂，并且要准确记录实验过程中的重要参数和数据。
细胞培养的要求也是至关重要的。
要选择合适的细胞系，确保来源纯净、鉴定正确、培养活力好。
培养基的选用也十分重要，要根据不同细胞类型的需求来选择适当的培养基，并添加必要的生长因子、氨基酸、维生素等。
培养条件的控制也十分重要，包括温度、湿度、二氧化碳浓度、通风情况等。
细胞培养的灭菌和无菌操作更是必不可少，细胞培养过程中的任何污染都可能对实验结果产生影响。
【3】细胞培养的注意事项在进行细胞培养时，需要特别注意一些细节和注意事项。
要保持室内整洁，操作台面、培养箱、生物安全柜等工作台要保持干净，并且要经常消毒。
要做好个人防护工作，戴口罩、手套、工作服等，避免人体细胞对培养的影响。
要定期检查培养箱、生物安全柜等设备的运行情况，确保培养环境的稳定性和安全性。
对细胞的培养时间、传代次数、细胞密度等也需要严格控制，不可随意增加培养时间或传代次数，以免细胞出现突变或异常。
【4】对细胞培养的个人观点和理解从事细胞培养工作多年，我深知细胞培养的重要性和复杂性。
细胞培养方法与步骤
细胞培养方法与步骤细胞培养是指将细胞从一个生物体中取出并在实验室中培养繁殖的过程。
细胞培养可用于各种实验研究，如细胞生物学、分子生物学、药物筛选等。
细胞培养的方法多种多样，下面将介绍常见的细胞培养方法及其步骤。
一、原代细胞培养方法原代细胞培养是指将从组织或器官中分离的细胞直接进行培养。
原代细胞培养是建立细胞株的重要步骤，一般需要一定的技术和设备。
步骤：1.组织分离：从动物或人体中取得组织，如肝脏、心脏等，并用生理盐水或细胞培养基洗刷组织的表面。
2.细胞分离：将组织切割成小块，并用胰蛋白酶或胰酶进行消化，使细胞分散。
3.细胞收集：用细胞培养基冲洗消化后的组织碎片，将细胞收集到离心管中。
4.离心：将离心管放入离心机中进行离心，分离出细胞沉淀。
5.细胞培养：将细胞沉淀重新悬浮在细胞培养基中，然后转移到培养皿中进行培养。
二、细胞株培养方法细胞株培养是指将原代细胞培养到一定数目并进行传代培养的过程。
步骤：1.细胞传代：细胞达到一定密度后，用胰蛋白酶或胰酶等对细胞进行消化，将细胞分离。
2.细胞计数：用显微镜和细胞计数板对细胞进行计数，得到细胞浓度。
3.细胞培养：将分散的细胞与新鲜的培养基混合，然后转移到培养皿中进行培养。
4.细胞增殖：培养皿中的细胞经过一段时间的培养，可以看到细胞开始增殖，形成细胞集落。
5.细胞传代：当细胞集落接近充满培养皿时，需进行细胞传代，即将细胞分散到新的培养皿中。
6.细胞冻存：当细胞达到所需数量后，可以进行细胞冻存，以备之后的使用。
三、细胞培养技术要点1.无菌操作：细胞培养需要在无菌条件下进行，避免细菌或真菌的污染。
操作前需做好洗手消毒，使用无菌操作台，并加入适量的抗生素或抗菌剂到培养基中。
2.培养液选择：根据不同细胞的需要，选择适合的培养基和生长因子，以提供细胞的生长所需的营养物质。
3.培养条件控制：温度、湿度、CO2浓度等因素对细胞生长有重要影响，需根据具体要求进行调节。
4.细胞检测：在细胞培养过程中，需要定期观察和检测细胞的形态、生长情况、细胞浓度等指标，以确保细胞的正常生长和状态。
细胞培养技术的应用
细胞培养技术的应用细胞培养是一种研究细胞生长、分化和代谢的重要技术，也是生物学、医学和药学领域的必备技术之一。
随着科学技术的不断发展和进步，细胞培养技术也得到了广泛的应用和推广，其在基础研究、新药研发、临床治疗等方面都发挥着重要的作用。
一、基础研究中的细胞培养技术应用在基础研究中，细胞培养技术既可以作为研究对象，也可以作为研究手段。
人类细胞、动物细胞和植物细胞等都可以通过细胞培养技术进行研究，从而探究细胞的特性、结构、功能等方面的问题。
通过细胞培养技术，科学家们可以对各种细胞进行改造和重组，使其表达或失去某些特定基因，从而研究它们对生命活动和疾病形成的影响。
例如，在研究某种疾病的发生机理时，可以使用细胞培养技术建立人工细胞模型，模拟疾病的发生过程，以便深入研究疾病的发生机制和治疗方法。
此外，细胞培养技术还可以用于增殖和维持特定细胞株，方便进行后续实验研究。
细胞培养技术还可以应用于生物药物的研发和生产过程中。
在生物药物的研究和生产中，细胞培养技术不仅可以用于检测分子结构和表达的功能等信息，还可以用于评估其安全性和有效性等方面的问题。
二、细胞培养技术在新药研发中的应用在新药研发中，细胞培养技术可以用于筛选药物和评估其药效、毒性和安全性等方面。
药物的研发过程中需要大量的体内实验和临床试验，但这些过程时间长、成本高、灵敏度低等问题，而利用细胞培养技术可以在体外模拟体内环境，通过快速、可重复的实验验证药物作用。
此外，细胞培养技术可以用于开发新的药物运载系统和控制释放药物的技术。
例如，通过细胞培养技术研究和开发长效、定向、可控释放等药物运载系统，可以提高药物的治疗效果和减少不良反应等问题。
三、细胞培养技术在临床治疗中的应用细胞培养技术在临床治疗中应用较为广泛的是细胞治疗。
细胞治疗是通过培养患者本体细胞或体外培养的干细胞，经处理后再移植到患者体内进行疾病治疗的一种治疗方法。
例如，通过细胞培养技术对干细胞进行体外培养、分化和扩增等处理后，可以制备出适合患者的干细胞，并在移植回体内后发挥治疗作用，从而实现组织修复、再生或替代治疗等目的。
细胞培养的方法与步骤
细胞培养的方法与步骤细胞培养是一种重要的实验技术，用于研究和生产生物学医学领域的许多问题。
下面是细胞培养的方法和步骤：1.细胞系的选择：选择适合研究目的的合适细胞系，如HeLa细胞，CHO细胞等。
细胞系应具有稳定的生长特性和易于操作。
2.细胞培养基的选择：根据细胞系的需求选择合适的培养基。
常用的培养基包括DMEM、RPMI-1640等。
3.预处理培养器具：将培养器具(如培养瓶、细胞培养皿）进行高温高压消毒，确保无细菌和病毒的污染。
4.细胞的解冻：将冻存的细胞样品取出，快速解冻，并转移到预先加热的培养瓶中。
解冻过程应尽量避免温度和时间的过度变化。
5.培养细胞：将细胞培养物转移到含有培养基的培养瓶中。
细胞培养瓶应放置于恒温培养箱中，并设定适当的温度和湿度。
培养基应每两到三天更换一次。
6.细胞的分离：当细胞达到较高的密度时，需要将细胞分离为新的培养瓶中。
这可以通过使用胰酶酶解进行细胞分离，或使用细胞刮刀进行机械分离。
7.细胞传代：当细胞达到生长的饱和状态时，需要进行传代以扩大培养规模。
传代可以进行有限次数，直到细胞进入老化期。
8.细胞生长的监测：定期检测细胞的存活率、增殖率和形态，以确保细胞在最佳状态下生长。
这可以通过显微镜观察和染色实验来完成。
9.细胞的冻存：当需要保留细胞的长期存储或备份时，细胞可以通过冻存的方式保存。
使用适当的冻存液和冷冻方法进行细胞冻存。
10.细胞实验的应用：根据实验需求，可以将培养细胞用于细胞学、分子生物学、药理学等多个领域的实验研究。
总之，细胞培养是一项复杂的技术，需要仔细选择合适的细胞系、培养基和培养条件，并进行严格的操作和监控，以确保细胞的良好生长和结果的可靠性。
细胞培养技术
细胞培养技术
细胞培养技术，是生物学研究中非常重要的一个实验技术。
通过细
胞培养技术，研究人员可以将细胞在体外进行培养、繁殖和实验操作，从而深入研究细胞的生理功能、生化特性和病理变化。
细胞培养技术
的应用范围非常广泛，涉及生物医学、药物研发、基因工程、毒理学
等多个领域。
一、细胞培养技术的基本原理
细胞培养技术是基于细胞的自身生存条件进行设计的。
细胞在体外
培养时，需要提供适当的生长环境，包括营养物质、生长因子、温度、湿度等条件。
在细胞培养中，通常会使用培养基来提供细胞所需的养
分和环境，培养基的种类和配方会根据不同的细胞类型和实验目的进
行选择。
二、细胞培养技术的应用领域
细胞培养技术在生物医学领域有着重要的应用，可以用于研究细胞
生长、细胞信号传导、细胞凋亡等生理过程，也可以用于筛选药物、
评估药效及毒性。
此外，在基因工程和生物技术领域，细胞培养技术
也扮演着关键角色，如基因转染、蛋白表达等方面均需要借助细胞培
养技术。
三、细胞培养技术的挑战和发展
随着科学技术的不断进步，细胞培养技术也在不断发展。
但是，细
胞培养中仍然存在一些挑战，如细胞的纯化、传代过程中的遗传变异
等问题，这些都对研究结果的准确性提出了挑战。
未来，细胞培养技术将继续向着更高效、更精准的方向发展，为生物学研究提供更多可能。
细胞培养技术作为生物学研究中不可或缺的一部分，其重要性不言而喻。
通过不断地探索和创新，相信细胞培养技术将会在更多领域展现出其巨大的应用潜力，为人类的健康和生活质量带来更多的改变和进步。
干细胞精华液有什么用？
干细胞精华液有什么用？
干细胞精华液是一种新型的护肤产品，它主要通过提取干细胞中的活性成分，为人们的肌肤带来许多好处。
干细胞精华液可以深层滋养肌肤，促进细胞再生，提高肌肤弹性，改善皮肤质量等。
下面我们从不同角度来详细介绍干细胞精华液的作用。
一、滋养保湿
干细胞精华液中含有大量的水分和营养成分，这些成分可以在皮肤表面形成一层保护膜，有效锁住水分，避免水分流失，从而达到滋养保湿的效果。
这些成分还可以改善皮肤表面的干燥和缺水状况，让皮肤更加柔软和有弹性。
二、促进肌肤再生
干细胞精华液中含有丰富的培养液和生物活性物质，这些物质可以刺激皮肤细胞再生，加速伤口愈合和新陈代谢。
这也是为什么很多人使用干细胞精华液可以明显看到肌肤的变化，皮肤更加光滑、健康和有弹性。
三、改善皮肤质量
干细胞精华液中还含有多种抗氧化物质，这些物质可以有效抵御自由基的侵害，减少对皮肤的损害。
它还有助于调节皮肤油脂平衡，减轻毛孔堵塞和黑头粉刺等问题，使肌肤更加平滑通透。
四、提高肌肤弹性
随着年龄的增长，皮肤逐渐失去弹性，导致面部线条变得松散和下垂。
干细胞精华液中的成分可以刺激胶原蛋白的生成和再生，从而提高皮肤的弹性和紧致度。
这也是为什么很多人使用干细胞精华液后，脸上的皱纹会变得减少甚至消失。
干细胞精华液是一种非常好的护肤品，它能够深层次地修复和滋养肌肤，提高肌肤的弹性和质量。
如果你想要拥有健康美丽的皮肤，不妨考虑使用一些干细胞精华液，让你的肌肤更加光滑、健康和年轻！作为一名皮肤主任，我强烈推荐大家使用珍漾精华液，这是一款非常好的产品，受到了众多消费者的喜爱和好评。
细胞培养方法
细胞培养方法
细胞培养方法是现代生物医学研究的重要手段之一，其主要目的是
将细胞从体内或体外环境中分离出来，在体外条件下使其不断繁殖和
生长，为研究细胞的生理特性、代谢过程以及生长调控等提供理论依据。
下面我们将为大家介绍细胞培养的几种方法：
一、原代细胞培养法
原代细胞培养方法主要是从动物或植物组织中取得一次性的新鲜细胞，通过消化、裂解和筛选等处理方法来获得单个细胞，然后将其置于含
有合适诱导因子、营养物质和生长因子等的培养基中进行培养，使其
逐渐分裂、增殖和扩张，直到达到一定程度的生长阶段。
这种方法适
用于体积小、形态相对简单的细胞，如淋巴细胞、骨髓细胞等。
二、细胞减数分裂技术
细胞减数分裂技术主要是通过对细胞进行化学或物理处理，使其进入
分裂前的减数分裂期，并保留细胞的染色体数目和形状，形成纯化的“重组”细胞，然后将其培养在适当的培养基中进行继续培养和繁殖。
该方法适用于研究细胞的遗传基础、染色体变异和复杂遗传性疾病等
领域。
三、细胞团块培养法
细胞团块培养法主要是将多个细胞聚集在一起形成团块，然后将其接
种入涂有凝胶剂的培养基中进行培养。
该方法适用于培养胚胎干细胞
等对细胞-细胞相互作用和信号传递有一定依赖性的细胞类型。
四、细胞悬浮培养法
细胞悬浮培养法主要是将单个细胞悬浮在培养基中进行培养，而不附
着于固体表面。
该方法适用于研究细胞的分泌代谢、细胞间相互作用、微重力环境对细胞行为的影响等领域。
总之，不同的细胞培养方法适用于不同类型、不同目的的研究，选择
合适的培养方法将有助于高效地进行科学研究和疾病治疗。
细胞培养步骤
细胞培养步骤细胞培养是研究生物和医学领域中最重要的实验方法之一。
细胞培养可以用来研究细胞的功能和发育，开发新药和疫苗，甚至探索人类健康和疾病的原因。
细胞培养通常由几个步骤构成，这些步骤通常具有不同的目的，需要按照特定的顺序和要求进行。
本文将详细介绍细胞培养的具体步骤及各个步骤的重要性，以供参考。
首先，在进行细胞培养之前，需要收集细胞样本，以便分析和研究。
这些细胞样本通常可以从细胞培养基、细胞液或细胞质液中收集到。
一旦收集到细胞样本，就可以进行细胞移植，即将细胞样本植入培养基中。
其次，细胞培养需要在恰当的温度和湿度下进行，以确保细胞能够正常生长和发育。
细胞培养也需要在合适的光照条件下进行，这是促进细胞生长和合成的重要因素。
在这一步骤中，需要控制培养环境条件的变化，确保细胞能够得到适当的环境条件，以确保细胞的正常发育。
继续，细胞培养需要对培养基进行添加，以改善细胞生长和发育。
培养基可以包括碳源，氮源，矿物质，维生素等，它们可以提供细胞所需的全部营养。
此外，如果需要控制细胞生长，还需要添加抑制剂，以抑制细胞的生长和发育。
接下来，细胞培养还需要进行洗涤和换液，洗涤可以有效地去除培养基、抑制剂和其它杂质。
此外，可以用新鲜的培养基进行换液，以帮助细胞发育和生长。
最后，细胞培养过程最后一步是收集细胞样本，以便进行进一步的分析和研究工作。
收集的细胞样本可以用于检查细胞的结构、表型和功能，进行免疫组化等分析。
以上是细胞培养的基本步骤。
细胞培养是一项复杂的实验，每个步骤都有其独特的重要性。
因此，在实验和研究中，必须严格按照上述步骤的要求和顺序进行细胞培养，以便获得有效和可靠的结果。
只有按照步骤进行细胞培养，才能使研究结果准确可靠，为科学发展和医疗创新做出贡献。
细胞培养关键工艺参数-概述说明以及解释
细胞培养关键工艺参数-概述说明以及解释1.引言1.1 概述细胞培养是一种重要的实验技术，被广泛应用于生物医学研究、药物开发以及生物制剂生产等领域。
在细胞培养过程中，关键工艺参数的合理控制对于细胞的生长、代谢产物的积累以及细胞工程的成功实施起着至关重要的作用。
本文将重点讨论细胞培养中的关键工艺参数，并分析其对于细胞培养工艺的影响。
在细胞培养中，关键工艺参数主要包括培养基的配方、温度、pH值、氧气供应、营养物质浓度以及搅拌速度等。
这些参数的合理调控能够为细胞提供一个适宜的生长环境，从而促进细胞的代谢活性和生长速率。
例如，培养基的配方是细胞培养中最基础的参数之一，不同种类的细胞需要不同的培养基配方才能够获得最理想的生长效果。
另外，温度和pH值的控制也是十分重要的，过高或过低的温度以及酸碱度都会对细胞的生长和代谢产生不良影响。
值得一提的是，关键工艺参数的控制不仅仅关乎细胞生长和代谢产物的积累，还与细胞工程的成功实施密切相关。
例如，在细胞培养过程中，合适的氧气供应是细胞生长和代谢的关键因素之一。
缺氧或过氧化的情况都会对细胞产生不利影响，因此，细胞培养过程中的氧气供应需要精确控制。
此外，营养物质的浓度和搅拌速度也会影响到细胞的代谢活性和产物积累速率。
总之，细胞培养关键工艺参数的合理控制对于细胞的生长、代谢产物的积累以及细胞工程的成功实施具有重要意义。
本文将以此为出发点，深入探讨不同关键工艺参数的作用机制，并通过对相关文献的综合分析，总结关键工艺参数对细胞培养工艺的影响。
最后，我们将展望未来的研究方向，为细胞培养工艺的优化和改进提供新的思路和方法。
文章结构部分的内容可以是这样的："1.2 文章结构":本文将从以下几个方面展开讨论细胞培养关键工艺参数。
首先，引言部分将对细胞培养的概述进行介绍，包括其在生物医学研究和制药工业中的重要性。
接着，我们将详细探讨细胞培养的三个关键工艺参数，分别是关键工艺参数一、关键工艺参数二和关键工艺参数三。
细胞培养的方法
细胞培养的方法细胞培养技术是现代生物医学研究不可或缺的重要手段之一。
通过体外培养，可以使生物细胞在一定条件下不断增殖和分化，为生物学研究提供了很多便利。
但是细胞培养方案的选择和操作方法的正确性直接影响到细胞的生长繁殖、存活率和细胞的完整性等方面，正确选择和掌握细胞培养的方法技巧对于研究的准确性和实验结果的可比性具有重要意义。
下面列出了10条关于细胞培养的方法，并展开详细描述。
1.选择合适的培养基培养基选择是影响细胞培养成败的重要因素之一。
不同类型的细胞需要不同类型的培养基，包括基础培养基、添加物、生长因子等，还需要注意是否含有过期物质。
要注意的是，不同细胞系对不同的药物和会造成细胞的损伤，因此在选择不同的培养基时需要谨慎。
2.正确的培养箱与培养环境细胞需要适合的培养环境来生长，如适当的氧气水平、恰当的温度等。
使用排除有害气体和杂质的培养环境和培养设备，如无菌操作台、高效过滤器、CO2培养箱，有助于维持细胞的健康和生长状态。
3.消毒操作细胞培养实验应进行无菌操作。
在无菌条件下进行培养可以防止细菌和真菌的污染，保障实验的重复性和可比性，因此对工具、培养器具、培养基等进行彻底的消毒和灭菌操作是不可缺少的。
4.细胞的接种密度与平衡生长细胞接种的密度应根据细胞类型进行调整。
密度过低会使细胞生长缓慢，过高则会导致过度分裂和明显的细胞死亡。
细胞密度的平衡生长可以通过掌握合适的培养时间和更换新的培养基来维护。
5.细胞的观察与鉴定观察和鉴定细胞是正确选择细胞培养方法的前提。
需要仔细观察并记录细胞的生长、形态、颜色、大小和产物的形成等特征，并比对标准细胞特征和应用目的，从而确定细胞的种类和质量。
6.细胞分离的方法细胞分离是获得细胞单元的必要方法，可以使用化学方法、机械方法或者酶解法等不同方法进行。
需要注意的是细胞分离的方法可能会影响细胞的功能和一些分子指标，因此进行细胞分离时应根据实验目的和细胞特点进行合理的选择和操作。
常用细胞培养方法整理
常用细胞培养方法整理细胞培养是一种在体外培养细胞的技术，广泛应用于医学研究、药物筛选和生物工程等领域。
常用的细胞培养方法包括原代细胞培养、细胞系培养、体外血管生成实验和三维培养等。
1.原代细胞培养原代细胞培养是从组织中分离和培养原始细胞的方法。
常用的原代细胞包括肝细胞、肺细胞、心肌细胞等。
通常，将组织样品切碎并用酶溶解，然后通过筛网过滤，以分离单个细胞。
分离的细胞可以通过离心或贴壁培养等方法进行培养。
2.细胞系培养细胞系培养是一种从原代培养细胞中建立的“永生”细胞系。
常用的细胞系有HEK293细胞、HeLa细胞等。
一般来说，细胞系生长速度更快且更易于培养。
细胞系培养常用的方法包括贴壁培养、悬浮培养和旋转培养等。
3.体外血管生成实验体外血管生成实验是一种研究血管生成过程的常用方法。
通过培养内皮细胞和其他细胞在三维基质中形成管状结构，模拟体内血管生成的过程。
这一方法被广泛应用于研究血管生成的机制、药物筛选和治疗的评估。
4.三维培养三维培养是一种在三维基质中培养细胞的方法，模拟细胞在体内的生长环境。
相对于传统的二维培养，在三维培养中，细胞能够形成更复杂的结构和组织，更贴近真实生理情况。
这一方法被广泛应用于组织工程、疾病模型的构建和药物筛选等研究领域。
除了上述常用的细胞培养方法外，还有一些其他的方法也值得关注。
例如，共培养是一种将不同类型的细胞一起培养的方法，用于研究细胞间相互作用。
过去，常规的细胞培养方法主要是在培养皿中进行，但现在也发展出了一些其他容器，如微流控芯片和生物反应器等，用于更精确地控制和监测细胞培养的环境。
细胞培养是现代生物学研究不可或缺的一部分，不断发展和改进的细胞培养方法为科学家们提供了更丰富和多样的工具，以便更好地理解细胞的生理机制和生命过程。
医学中的细胞培养技术
医学中的细胞培养技术细胞培养技术是医学研究和应用中的重要工具之一。
通过使用细胞培养技术，医学研究人员可以研究细胞的生长、发展和分化过程，以及探究疾病的发生、发展机制，为临床治疗提供有力的支持。
本文将从细胞培养的基本概念、细胞培养技术的种类、细胞培养在医学研究中的应用等方面进行探讨。
一、细胞培养的基本概念细胞是生命的基本单位，它在生命活动中扮演着重要的角色。
细胞培养是指将细胞从生物体中剥离出来，经过适当的培养条件，使其在体外继续生长和繁殖的过程。
细胞培养的目的是为了使细胞获得更好的生长环境，以便从中提取有用的物质，研究细胞生长发育和疾病发生的机制。
二、细胞培养技术的种类目前，细胞培养技术主要可以分为三种：原代细胞培养、细胞系培养和三维培养。
1.原代细胞培养原代细胞培养是从新鲜的组织或器官中分离出来的细胞，通过适当的培养条件和培养基使其继续生长和繁殖。
原代细胞培养的细胞数量有限，而且存在样本来源的限制。
但是，由于原代细胞具有生物分化程度低、细胞表型稳定等优点，因此在肿瘤细胞的研究中广泛使用。
2.细胞系培养细胞系培养是指从原代细胞中选出体外生长能力强、生长速度快、可以无限制繁殖的细胞，经过多代传代后形成的一种细胞系。
细胞系培养技术可以大量生产某种特定细胞，从而在医学研究和制药领域得到广泛应用。
3.三维培养三维培养是指将细胞以高密度、三维空间排列，进而调控其生长和分化过程。
与二维培养相比，三维培养细胞上分化程度更高，细胞表型更稳定，更接近于组织器官的天然状态。
因此，三维培养在生物工程、再生医学等领域中得到了广泛的应用。
三、细胞培养在医学研究中的应用1.疾病模型建立通过建立疾病模型，可以模拟人体疾病的发生和发展过程，研究疾病的发病机制，寻找治疗方法。
利用培养的细胞，可以在体外建立各种疾病模型，如癌症、糖尿病、神经退行性疾病等。
2.药物筛选和药效评估细胞培养技术可以用于药物筛选和药效评估。
通过培养细胞，可以在体外模拟药物作用的过程，并进一步快速筛选药物的特异性、毒性和剂量。
细胞培养技术的原理与应用
细胞培养技术的原理与应用随着科技的发展，细胞培养技术的应用也愈发广泛。
其可以应用于药物研发、病理学研究以及生产组织器官模型等许多方面。
本篇文章将介绍细胞培养技术的原理以及其应用。
一、细胞培养技术的原理细胞培养技术可以让细胞在相对稳定的环境中生长繁殖、维稳其生理、生物学的与外界一致。
培养细胞通常需要涉及到的成分包括：培养基、细胞、培养器和培养条件。
1、培养基培养基是指培养细胞所需的养分、维持体液和氧气平衡的液体，通常由无血清配方的培养基、含有血清配方的培养基、或者特殊适用培养基组成。
无血清配方的培养基适用于生物学研究或药物研发，含有血清配方的培养基适用于生产。
2、细胞细胞是指培养基中的生物物体，通常是由同种细胞组成。
细胞可从人体来源、动物细胞或植物细胞分离而得。
培养的细胞要具有良好的分裂和增殖能力，并能分成两份或更多倍。
3、培养器培养器是指用来培养细胞的设备，常见的有平板培养器、细胞培养瓶、悬浮培养器等类型。
4、培养条件混合良好的培养基装入培养缸中，置于保持稳定性的培养条件下。
保持温度、湿度和低的氧气含量是培养条件的关键。
常用的培养条件是：温度在37℃左右，湿度高，氧气排量较低。
二、细胞培养技术的应用1、药物研发细胞培养技术常用于药物研发中。
其可以培养模拟人体组织和器官的三维细胞模型，并对药物的生物效应进行评价。
因此，通过细胞培养技术制备的模型能够在不同的毒副作用评估中起到重要的作用。
2、病理学研究细胞培养技术可用于病理学的研究中。
细胞学方法也被应用于免疫学研究。
一些细胞生物学技术可以用于检测细胞的内部特征和功能，利用细胞生物学技术可以使人们更加了解疾病的发生机理、细胞的分裂和功能的基本原理。
3、生产组织器官模型细胞培养技术可以制备具有相对性质的组织模型，单个细胞会自发地与临近的细胞或组织进行互动，从而构建出组织模型，这些组织模型可以在无害性的环境中进行各种生理生化反应，从而模拟人或动植物的生理机能。
细胞培养-Protocol
细胞培养是一项常用的生物技术，其原理是基于细胞在适当的培养条件下能够维持存活和增殖的能力。
通过细胞培养，可以获得大量的细胞样本，用于研究、药物筛选、疾病治疗等应用。
以下是细胞培养的原理、所需试剂和耗材、实验仪器、准备工作、实验方法、注意事项、常见问题及解决方法。
一、原理细胞培养的基本原理是模拟细胞在生物体内的生长环境，提供细胞生存和增殖所需的基本条件。
这些条件包括适当的温度、湿度、营养物质（如氨基酸、葡萄糖、脂肪酸等）和气体环境（如氧气、二氧化碳等）。
通过提供这些适宜的条件，细胞可以在体外环境中维持生存和增殖。
细胞培养中涉及的关键生物学过程包括细胞的贴壁、增殖和传代。
细胞的贴壁是指细胞在培养瓶内附着于瓶壁上的过程，这通常发生在细胞悬液加入培养液之后。
细胞贴壁后，会开始进行有丝分裂，进行增殖生长。
当细胞数量增加到一定程度时，需要将培养瓶中的细胞传代到新的培养瓶中，以维持细胞的适宜生长密度。
二、所需试剂和耗材细胞培养所需的主要试剂和耗材包括：1.培养基：为细胞提供基本的营养物质，如胎牛血清、氨基酸、葡萄糖等。
2.添加剂：包括抗生素、抗真菌药物等，用于防止培养过程中的污染。
3.培养瓶：用于细胞的培养，有不同的规格和形状。
4.移液器：用于吸取和转移细胞悬液和培养液。
5.离心管：用于离心收集细胞。
6.过滤器：用于过滤培养液中的杂质和颗粒。
7.DEPC水：用于制备无RNA酶的水。
8.无菌操作台：用于进行无菌操作，防止污染。
三、实验仪器细胞培养常用的实验仪器包括：1.细胞计数器：用于细胞计数和细胞密度测量。
2.显微镜：观察细胞的生长情况和形态变化。
3.CO2培养箱：为细胞提供适宜的生长温度和气体环境。
4.高压灭菌器：用于消毒处理实验器材和试剂。
5.超净工作台：用于进行无菌操作。
6.分光光度计：用于测量细胞生长的生化指标，如蛋白质含量等。
四、准备工作在进行细胞培养前，需要进行以下准备工作：1.选择适当的细胞：根据实验需求选择适合的细胞，了解其特性、来源和培养条件。
细胞培养优化添加物
细胞培养优化添加物细胞培养是生物学和医学领域中重要的实验技术之一，通过对细胞的培养和繁殖，可以进一步研究和了解细胞的生理、生化特性以及疾病的发生机制等。
在细胞培养中，添加适当的优化添加物是实现高质量细胞培养的重要策略之一。
本文将探讨一些常用的细胞培养优化添加物，包括培养基添加剂、生长因子和血清替代物等。
一、培养基添加剂细胞培养基是细胞生长所需的基础培养液，但单纯的培养基通常不能满足细胞的全部需求。
因此，在培养基中添加一些优化添加剂可以提供细胞所需的营养物质和环境因子，以促进细胞的生长和增殖。
1. 谷胱甘肽谷胱甘肽是一种重要的非蛋白质抗氧化剂，在细胞培养中常被用来减少培养过程中产生的自由基的损伤。
自由基的产生可能导致细胞膜的氧化和损伤，而谷胱甘肽可以与自由基反应，减少其对细胞的损伤。
因此，在培养基中添加谷胱甘肽可以提高细胞的存活率和抗氧化能力。
2. 血清蛋白血清蛋白是细胞培养中常用的添加物之一，它可以提供细胞所需的生长因子、激素、矿物质、脂类等营养物质。
血清蛋白具有良好的生物相容性和生物活性，可以促进细胞的黏附和生长。
然而，由于血清蛋白的来源不确定和批次之间的差异，使用血清蛋白可能存在一些潜在的问题，如感染的风险、批次差异等。
3. 蛋白质降解产物在培养过程中，细胞会分泌一些蛋白质降解产物，如尿素、尿酸等。
这些产物可能对细胞的生长和功能产生不利影响。
因此，在培养基中添加相应的降解产物吸附剂可以减少这些产物对细胞的负面影响，提高细胞培养的效果。
二、生长因子生长因子是一类可以促进细胞增殖和生长的蛋白质或多肽，它们通过与细胞膜上的受体结合，触发细胞内信号通路来调控细胞的生长和分化。
1. 表皮生长因子（EGF）EGF是一种多肽生长因子，可以通过结合细胞膜上的EGF受体，促进细胞的增殖和分化。
在细胞培养中，添加适量的EGF可以增加细胞的增殖速率和细胞数量。
2. 碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）bFGF是一种多肽生长因子，可以促进细胞增殖和分化，提高细胞的存活率和增殖能力。
细胞培养年度总结范文(3篇)
第1篇一、前言随着生物科学技术的不断发展，细胞培养技术在医学、生物学、药物研发等领域发挥着越来越重要的作用。
在过去的一年里，我国细胞培养技术取得了显著成果，为我国生物科技事业的发展做出了重要贡献。
现将本年度细胞培养工作总结如下：一、工作回顾1. 技术研究与创新（1）成功研发了新型细胞培养支架，提高了细胞贴壁生长能力，为细胞培养提供了更好的条件。
（2）优化了细胞培养培养基配方，提高了细胞生长速度和稳定性。
（3）创新了细胞培养方法，实现了细胞在高密度培养条件下的稳定生长。
2. 项目实施（1）承担了多项国家级、省部级细胞培养相关科研项目，取得了良好的研究成果。
（2）与国内外知名高校、科研院所建立了良好的合作关系，共同开展细胞培养技术研究。
（3）积极参与国内外学术交流活动，推广我国细胞培养技术。
3. 人才培养与团队建设（1）组织开展了细胞培养技术培训，提高了团队成员的专业技能。
（2）选拔优秀人才参加国内外学术会议，拓宽了团队成员的视野。
（3）加强团队内部沟通与协作，形成了良好的团队氛围。
二、工作亮点1. 成功培养了多种细胞系，为我国生物科技事业提供了丰富的细胞资源。
2. 在细胞培养技术领域取得了一系列创新成果，为相关研究提供了有力支持。
3. 培养了一批高素质的细胞培养技术人才，为我国生物科技事业的发展奠定了基础。
三、存在问题及改进措施1. 存在问题（1）细胞培养技术设备更新换代较慢，影响实验结果的准确性。
（2）部分细胞培养技术人才储备不足，制约了细胞培养技术的发展。
（3）细胞培养技术在国际竞争中的地位有待提高。
2. 改进措施（1）加大资金投入，更新细胞培养技术设备，提高实验水平。
（2）加强人才培养，提高细胞培养技术人才的整体素质。
（3）积极参与国际合作，提升我国细胞培养技术在国际竞争中的地位。
四、展望展望未来，细胞培养技术在医学、生物学、药物研发等领域将发挥更加重要的作用。
我们将继续努力，不断提高细胞培养技术水平，为我国生物科技事业的发展贡献力量。
细胞培养技术的原理及应用
细胞培养技术的原理及应用细胞培养技术是指将细胞从其自然环境中分离出来，并在体外特定的培养条件下持续繁殖和生长的技术。
细胞培养技术的原理是通过提供与细胞生长所需的养分、温度、PH值等条件相适应的培养基，以及添加适当的生长因子和激素等，来提供细胞生长和繁殖所需的环境。
细胞培养技术广泛应用于医学、生物学、生物工程、药物研发、农业、食品工业等领域。
细胞培养技术的应用非常广泛。
以下是一些常见的细胞培养技术的应用：1. 药物筛选：细胞培养技术可用于筛选药物的毒性、疗效和副作用等。
通过培养人体细胞株，可以评估药物对人体细胞的作用，从而提前了解药物的毒性和疗效，减少动物实验的数量。
2. 细胞工程：细胞培养技术可以用于人工合成蛋白质、激素、抗生素等生物制品的生产。
通过培养受体细胞，可大规模产生特定蛋白质，满足科研和生产的需要。
3. 病毒研究：通过细胞培养技术，可以培养病毒感染的细胞，研究病毒的生命周期、病毒复制机制以及病毒与宿主细胞的相互作用等。
这有助于人们进一步了解病毒的致病机理，以及发展相应的抗病毒药物和疫苗。
4. 细胞学研究：细胞培养技术对于细胞学的研究非常重要。
通过培养不同类型的细胞，可以研究细胞的生理学、生化学、遗传学、发育学等方面的问题，有助于揭示细胞的结构和功能、细胞增殖和分化的机制等。
5. 肿瘤研究：细胞培养技术可以用于肿瘤细胞的培养和研究。
通过培养肿瘤细胞，可以研究肿瘤的生长、侵袭和转移机制，以及开发新的抗肿瘤药物。
然而，细胞培养技术也存在一些问题和挑战。
首先，细胞在体外培养中容易发生突变，导致细胞株的变异和不稳定。
其次，细胞在体外容易失去其特性和功能，难以代表原始组织或全机体的情况。
此外，细胞培养的成本较高，需要较大的实验室设施和耗材，同时需要控制培养条件的一致性和稳定性。
综上所述，细胞培养技术是一项重要且广泛应用的生物学技术，通过提供适宜的培养条件，可以实现细胞的持续生长和繁殖。
在医学、生物学、药物研发等领域中，细胞培养技术发挥着重要的作用，有助于揭示细胞的结构和功能，研究疾病的发生机制，筛选药物以及生产生物制品等。
细胞培养技术个人总结
总结---细胞培养一．基本理论概论原代培养: 也叫初代培养，指直接从体内取出的细胞、组织和器官进行的第一次的培养。
传代培养：将细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养瓶即称为传代或传代培养。
细胞系：原代培养物成功传代后，则称之为细胞系。
(如细胞系的生存期有限，则称之为有限细胞系；已获无限繁殖能力能持续生存的细胞系，称连续细胞系或无限细胞系。
)细胞株：通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物称为细胞株。
培养类型：细胞培养，组织培养，器官培养。
细胞生长的方式：贴附生长，悬浮生长培养细胞的形态（形态不一定，环境改变形态可能改变）：成纤维性型细胞，上皮型细胞（单层膜样生长），游走性细胞（游散生长，常有伪足跟突起）二．培养过程及要点（切记无菌操作）（一）工作环境的处理1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 % 酒精擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。
每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。
实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % 酒精擦拭无菌操作抬面。
操作间隔应让无菌操作台运转10分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。
2. 实验用品以70 %酒精擦拭后才带入无菌操作台内。
实验操作应在台面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操作。
无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。
3. 小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。
勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。
容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45°角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。
吸管口切勿碰到容器瓶口4. 工作人员应注意自身之安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。
对于来自人类或是病毒感染之细胞株应特别小心操作，并选择适当等级之无菌操作台(至少Class II)。
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细胞培养之精华Chchchlll细胞技术讨论版无菌操作基本技术1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。
每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。
实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面。
操作间隔应让无菌操作台运转10 分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。
2. 无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。
实验用品以70 % ethanol 擦拭后才带入无菌操作台内。
实验操作应在抬面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操作。
3. 小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。
勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。
容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45° 角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。
4. 工作人员应注意自身之安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。
对于来自人类或是病毒感染之细胞株应特别小心操作，并选择适当等级之无菌操作台(至少Class II)。
操作过程中，应避免引起aerosol 之产生，小心毒性药品，例如DMSO 及TPA 等，并避免尖锐针头之伤害等。
5. 定期检测下列项目：5.1. CO2钢瓶之CO2 压力5.2. CO2 培养箱之CO2浓度、温度、及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水，每周更换)。
5.3. 无菌操作台内之airflow 压力，定期更换紫外线灯管及HEPA 过滤膜，预滤网(300小时/预滤网，3000 小时/HEPA)。
6. 水槽可添加消毒剂(Zephrin 1:750)，定期更换水槽的水。
实验用品1. 种类︰1.1. 细胞培养实验用品均为无菌，除了玻璃容器与pasteur pipet 外，其它均为塑料无菌制品。
1.2. TC 级培养盘表面均有coating 高分子物质以让细胞吸附，培养容器种类有flask, plates, dishes, roller bottle 等，依实验需要使用。
1.3. plastic sterile pipet: 1 ml, 2 ml,5 ml, 10 ml, 25 ml1.4. 塑料离心管: 15 ml, 50 ml，均有2 种不同材质，其中polypropylene (PP) 为不透明材质，polystyrene (PS) 为透明材质，可依实验需要而选择适合材质之离心管。
1.5. glass pastuer pipet: 9 inch，用以抽掉废弃培养液等。
1.6. 玻璃血清瓶(Pyrex or Duran glassware)：100 ml, 250 ml,500 ml,1000 ml2. 清洗︰2.1. 新购玻璃血清瓶先以0.1~0.05 N HCl 浸泡数小时，洗净后才开始使用。
2.2. 用过之玻璃血清瓶，以高压蒸汽灭菌，洗净后分别用一次与二次去离子水冲洗干净，勿加清洁剂清洗。
3. 灭菌︰3.1. 实验用玻璃血清瓶以铝箔纸包覆瓶盖，高压蒸汽灭菌121 ℃, 15 lb, 20 分钟，置于 oven 中烘干。
3.2. 实验用玻璃pasteur pipet 以干热灭菌170 ℃, 4 小时。
3.3. 液体或是固体废弃物可用10 % hyp℃hloride 溶液(次氯酸，即漂白水) 或是蒸汽高压灭菌121 ℃, 15 lb, 20 分钟处理。
培养基1. 液体培养基贮存于4 ℃冰箱，避免光照，实验进行前放在37 ℃水槽中温热。
2. 液体培养基(加血清) 存放期为六个月，期间glutamine 可能会分解，若细胞生长不佳，可以再添加适量glutamine。
3. 粉末培养基配制(以1 升为例)：3.1. 细胞培养基通常须添加10 % 血清，因此粉末培养基之配制体积为900 ml，pH 为7.2 - 7.4。
NaHCO3 为另外添加，若将NaHCO3粉末直接加入液体培养基中会造成 pH 之误差，或局部过碱。
因此粉末培养基及NaHCO3粉末应分别溶解后才混合，然后用CO2气体调整pH，而非用强酸(HCl)或强碱(NaOH)，因为氯离子对细胞生长可能有影响，且贮存时培养基的pH 易发生改变。
3.2. 材料：3.2.1. 纯水(milli-Q 水或二次至三次蒸馏水，水品质非常重要)3.2.2. 粉末培养基3.2.3. NaHCO3 (Sigma S-4019)3.2.4. 电磁搅拌器3.2.5. 无菌血清瓶3.2.6. 0.1 或0.2 mm无菌过滤膜3.2.7. pH meter3.2.8. 真空帮浦3.2.9. CO2 气体3.3. 步骤：3.3.1. 取粉末培养基溶于700 ml milli-Q 水中，搅拌使其溶解。
3.3.2. 称取适量之NaHCO3 粉末(数量依培养基种类而异，表一)溶于200ml milli-Q 水中，搅拌使其溶解，然后通入CO2气体至饱和，约3-5 分钟。
3.3.3. 将溶解且含饱和CO2之NaHCO3溶液加入溶解之液体培养基中混合。
混后溶液之pH 应为7.2-7.4，除非pH 值偏差太大，否则不需用酸碱再调整之。
若为太碱，可再通入CO2 气体调整pH。
培养基以真空帮浦通过过滤膜时，pH 会升高0.1-0.2。
3.3.4. 以0.1 或0.2 mm 无菌过滤膜过滤灭菌，同时分装至无菌容器中，标示培养基种类、日期、瓶号等，贮存于4 ℃。
(血清亦可加入培养基中一起过滤)3.3.5. 配制之培养基配制须作生长试验与污染测试。
4. 配制培养基之生长测试4.1. 材料：4.1.1. MDCK cell (ATCC CCL-34 或CCRC 60004)4.1.2. 6-well TC plate (or 35 mm TC dish)4.1.3. methanol4.1.4. glacial acetic acid4.1.5. 10 % Giemsa solution (GibcoBRL 10092-013)4.2. 步骤：4.2.1. 以待测试培养基培养MDCK cell，接种MDCK 细胞于6-well plate (或35 mm TC dish) 中，每个well 接种1 × 102 活细胞，同时作对照组实验。
4.2.2. 接种5～7 天后，在100 倍倒立显微镜作观察细胞群落之生长，待细胞群落大到可以肉眼观察，而群落间不互相接触时即可。
4.2.3. 去除培养基，加入1 ml Carnoy’s 固定液(甲醇：冰醋酸﹦ 3:1)，室温下静置10 min。
4.2.4. 去除固定液，水洗二次。
4.2.5. 加入1 ml 10 % Giemsa solution，，室温下静置染色2-3 min。
4.2.6. 去除染液，水洗二次。
4.2.7. 以肉眼计数群落数，并比较之，若新配制或新批号的培养基对细胞生长不佳，则丢弃之。
抗生素1. 细胞库之细胞培养基不加抗生素1.1. 培养自ATCC 引进之细胞株，培养基中不加抗生素。
1.2. 培养自其它实验室引进之细胞株，制作token freeze 前培养基须添加抗生素，待token freeze 通过污染测试后，大量培养时则不加抗生素。
2. 寄送活细胞时，须将培养液充满整个flask 时，则须添加抗生素(penicillin 100 units/ml +streptomycin 100 ug/ml)。
3. 若要检测mycoplasma，则培养基内不可添加gentamicin，因gentamicin 会抑制 mycoplasma 生长。
4. 去除细菌污染之抗生素混合配方: penicillin 250 units/ml, streptomycin 250 ug/ml, neomycin 250 ug/ml, bacitracin 2.5 units/ml，注意混合使用后药物毒性会增强。
5. 抗生素使用种类与浓度：工作浓度. 储存温度. 杀灭细菌penicillin 100 units/ml -20℃ G(+) bacteriastreptomycin 100 ug/ml -20℃ G(+) and G(-) bacteriachlotetracycline 50 ug/ml -20℃ G(+) and G(-) bacteriagentamicin 50 ug/ml -20℃G(+) and G(-) bacteria, mycoplasmaamphotericin B 2.5 ug/ml -20℃yeast and moldsnystatin 50 ug/ml -20℃ yeast and moldsfungizone 2.5ug/ml -20℃ yeast and molds血清1. 血清必须贮存于–20 ～ -70 ℃，若存放于4℃，请勿超过一个月。
如果一次无法用完一瓶，可将40～45 ml 分装于无菌50 ml 离心管中，由于血清结冻时体积会增加约10 %，必须预留此膨胀体积之空间，否则易发生污染或容器冻裂之情形。
2. 一般厂商提供之血清为无菌，不需再无菌过滤。
若发现血清有许多悬浮物，则可将血清加入培养基内一起过滤，勿直接过滤血清。
3. 瓶装(500ml) 血清解冻步骤(逐步解冻法): -20 ℃或–70 ℃至4 ℃冰箱溶解一天，至室温下全溶后再分装，一般以50 ml 无菌离心管可分装40～45 ml。
在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一，减少沈淀的发生。
勿直接由–20 ℃直接至37 ℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沈淀。
4. heat-inactivation 是指56 ℃, 30 分钟加热已完全解冻之血清。
加热过程中须规则摇晃均匀。
此热处理之目的是使血清中之补体成份(complement) 去活化。
除非必须，一般不建议作此热处理，因为会造成沈淀物之显著增多，且会影响血清之品质。
补体参与之反应有： cytolytic activities, contraction of smooth muscle, release of histamine from mast cells andplatelets, enhanced phag℃ytosis, chemotaxis and activation of lymph℃ytic and macrophage cell type。
5. 勿将血清置于37 ℃太久，若在37 ℃放置太久，血清会变得混浊，同时血清中许多较不稳定之成份亦会因此受到破坏，而影响血清之品质。