液质联用安装培训电子版
安捷伦液质联用培训教材(中文版)
=安捷伦 G6300 系列LC/MSD Trap现场培训教材质谱数据系统毛细管电泳液相色谱气相色谱注意包含在该文件中的信息将可能在未通知的情况下改变。
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安捷伦科技有限公司售后服务电话：800-8203278手机用户：400-8203278中文网站：/chem/cn2007年6月G6300A 系列离子阱软件概述以及开机关机操作仪器硬件概述1.1典型配置1.2仪器原理简介1.2.1离子阱的主体包含一个环电极和两个端电极，环电极和端电极都是绕Z轴旋转的双曲面，并满足r20=2Z20（ r0为环形电极的最小半径，Z0为两个端电极间的最短距离）。
射频电压V rf加在环电极上，两个端电极都处于零电位。
1.2.2与四极杆分析器类似，离子在离子阱内的运动遵循马修方程，也有类似四极杆分析器的稳定图。
在稳定区内的离子，轨道振幅保持一定大小，可以长时间留在阱内，不稳定区的离子振幅很快增长，撞击到电极而消失。
离子阱的操作只有射频RF电压，没有直流DC电压，因此离子阱的操作只对应于稳定图上的X轴。
对于一定质量的离子，在一定V rf下，不同质量数的离子按照m/z由小到大在稳定图的X轴上自右向左排列。
当射频电压从小到大扫描时，排在稳定图上的离子自左向右移动，振幅逐渐加大，依次到达稳定图右边界，从离子阱中抛出，经过高能打拿极然后由电子倍增器检测。
1.3仪器硬件概述1.3.1离子源1.3.2离子源原理1.3.3仪器构造-示意图1.3.4 仪器构造-实物离子阱整体离子阱分解图1.3.5 LC-MSD Trap 的典型操作模式（以MS2为例）：首先样品组分通过LC 进行分离，然后通过大气压电离源电离产生离子，离子阱在电场作用下，通过离子电荷控制（ICC ）在阱中进行离子累积存储一定数量的离子，然后通过扫描隔离掉低于目标离子质量数的离子，通过在端电极上施加附加电场排除掉阱中高于目标质量数的离子，这个过程为Isolation ，接下来通过在端电极上施加特定离子的共振波形，使其与He 碰撞导致离子内能增加而使离子碎裂，此过程称之为Fragmenation 或CID ，最后在离子阱上扫描Rf 电压得到二级质谱。
WatersLCMS液质联用培训讲义
MS1
Argon gas Collision
Cell
MS2
Precursors
Static m/z 609.1
Product
Static m/z 195.1
Waters 四极杆质谱培训
定性实验 调谐仪器
©2005 Waters Corporation
样品1．利血平标样1ppm, 根据全扫描获得最佳实验锥孔 （CV），调谐特定碎片最佳实验碰撞能量（CE），进行 多反应监控MRM实验准备
仪器质量校正
Waters 四极杆质谱培训
仪器质量校正
©2005 Waters Corporation
8. 按OK键后会跳出步骤6的自动校正选单，此时 按此页面OK键就会开始进行质量校正。
9. 当所有的校正都完成后，将校正的结果储存起 来，从质量校正页面的档案（File）选取另存新 档（Save As）。输入所欲储存之文件名称后按 OK即可。
峰进行准确质量测量 (如在全扫描方式)
• scan speed compensation扫描速度补偿: 当仪器进行
快速扫描时，对系统进行‘延时’补偿校正。
Waters 四极杆质谱培训
©2005 Waters Corporation
7. 设定采集参数：
选择适当的校正质量范 围，校正大范围的全质 量从22校正到2000，其 余的参数可以使用预设 参数default即可，设定 完后按OK键。
Cell
MS2
Products
Scanning (m/z M-46Da)
样品：混合氨基酸实验 中性丢失46(甲酸) 中性丢失63(甲酸+NH3)
Waters 四极杆质谱培训
Agilent 1290 6400 LCMS Training(液质培训)
液质联用讲座.ppt
• LC可以直接分析不挥发性化合物、极性化合物、热不稳 定化合物和大分子化合物(包括蛋白、多肽、多糖、多聚 物等)，分析范围广，而且不需衍生化步骤。
• MS是强有力的结构解析工具，能为结构定性提供较多的 信息，作为理想的色谱检测器，不仅特异性强，而且具有 极高的检测灵敏度。自1983年McLaffeny等 开发串联质 谱技术(MS／MS)以来，经过短短十几年的发展，串联质 谱已成为一种成熟的技术，在许多领域发挥了巨大作用。 串联质谱法是指质量分离的质谱检测技术，在单极质谱给 出化合物相对分子量的信息后，对准分子离子进行多级裂 解，进而获得丰富的化合物碎片信息，确认目标化合物， 对目标化合物进行定量等，有分离、结构解析同步完成的 特点，能直接分析混合物组分，有高度的选择性和可靠性， 其检测水平可以达到pg级
用MS2质量分析器扫描指定母离子的子离子碎片，所 得到的质谱图只能是由指定母离经碰撞产生。
子离子扫描，pruduct ion scan
• 子离子扫描可以得到母离子的碎片信息。这 些信息可以帮助操作者了解母离子的结构信 息，区别几种m/z相同的母离子，降低假阳 性率。 子离子扫描的作用是：
• 通过母离子碎片种类和强度的差异来区别 m/z相同的母离子
• 扫描类型选择
• 全扫描(Full Scan) • 子离子扫描(Daughter Scan) • 母离子扫描(Parent Scan) • 中性碎片丢失扫描(Constant Neutral Loss Scan) • 选择离子监测(SIR) • 多反应监测(MRM)
全扫描
• 全扫描用于检测离子源产生的离子流中，各种离 子的m/z和强度。从全扫描得到的信息可以知道 目前样品中的组分状态。
仪器用途
该系统是Waters-Micromass公司在2005年推出的一 款最新高质量三重四极杆串联液质联用仪，它能广泛应 用于医药、农药、生物化学、食品安全、环保、生命科 学等领域，它是解决不易挥发、热不稳定、大分子量及 宽极性范围等样品分析难题的强有力工具。通过高灵敏 度的串联质谱系统，结合高效液相色谱的分离或直接进 样可以详细地研究未知组分的结构。从分子水平上准确 阐述样品的化学成分，也十分适合新产品、新配方的开 发研制，同时可准确和深入地了解各种化合物的实质性 差异，并实时定性、定量地描述样品中的复杂组分的产
Waters_液质联用基础知识(waters中国培训中心)
质量过滤器 质子过滤器
离子检测器
数据采集及控制
离子源
分析器
检测器
数据处理
接口
HPLC
色谱分离 质谱图
样品引入 样品引入
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质谱的种类及相关联用技术
GC LC CE Flow Inj Probe FB/EI ESI APCI TSP FAB MALDI Quadrupole Magnetic Sector Time of Flight Ion Trap FT-MS Electron Multiplier Photomultiplier Microchannel Plate
C
原子序数 = 质子数 具有相同的元素符号,在元素符号的左上角表明其质量数
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天然同位素丰度
原子符号 氮
14N 15N
质量, amu 14.0031 15.0001 31.9721 32.9715 33.9679 34.9689 36.9659 78.9183 80.9163
4.00 2.27 7.22 9.12 11.59 14.87 2.04 9.98 19.12 13.15 17.40 25.16 21.42 22.52 26.8228.84
1: Scan AP+ BPI 8.29e4
%
33.78 35.04 38.26 39.52 33.32
0 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00
MS的历史
60’s-70’s 大气压电离(APcI)源被发现(但并未被广泛 应用) 70’s-80’s 开始广泛研究 LC/MS 1979年 1982年 1984年 1988年 …... 传送带式 LC/MS 接口成为商业产品 离子束LC/MS接口出现 第一台电喷雾 MS仪宣告诞生 电喷雾离子源 MS 首次应用于蛋白质的分析
Agilent G6500 Series Q-TOF On-site Training-201301
注意：在您打电话到 Agilent 时，请事先务必记下您仪器的型号和序列号。这对于我们在系统里及时 给您提供服务非常重要！
比如上图所示的仪器，您的液相色谱泵有故障，请把泵的型号 G1312B, 序列号 DE63060245 提 供给我们；而如果您的质谱有故障，则请把其型号 G6530A 和序列号 US84920328 提供给我们。
APCI 的电离是在常压下的气态化学电离 (CI) 过程, 是 ESI 电离的一种有效补充。溶剂或反应气 在电晕针的作用下先带电，再把电荷转移给化合物形成离子。APCI 一般只产生单电荷离子，且需要 在高温的离子化环境下操作。它属于质量-流量敏感型离子化技术，样品分子量越大，性能越高；在 相对较高的流速下灵敏度更高。适合分析中等极性到弱极性的化合物。
ESI 是目前应用最多的电离方式，具有极为广泛的应用领域。ESI 属于浓度敏感型离子化技术， 样品浓度越高，灵敏度越高。适合分析中等极性到极性的小分子；另外，由于其可以产生多电荷离 子的特性和相对较低的离子化温度，因而也适合分析生物大分子，比如蛋白质和多肽的分析。 1.4.2 APCI 源—大气压化学电离离子源
安捷伦 HPLC- 6500 系列 Q-TOF 液质联用仪现场培训手册
Page 8
1.4.3 ESI with Agilent Jet Steam Technology—带有安捷伦喷射流技术的 ESI 源 带有安捷伦喷射流技术的 ESI 源（简称 Jet Stream）与普通的 ESI 源的电离原理相同，提供和普
网络交换机
2.2 仪器序列号位置 对于 HPLC，每个模块的型号和序列号在该模块的右下方。对于 Q-TOF，仪器的型号和序列号
标 示 在 左 下 角 的 左 侧 。 如 下 图 所 示 。 所 有 安 捷 伦 的 产 品 ， Gxxxx 代 表 的 是 该 产 品 的 型 号 ， USxxxxxxxx、DExxxxxxxx、JPxxxxxxxx 或 SGxxxxxxxx 等代表的是仪器的序列号。
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API LC/MS 的 Z-Spray接口
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Z-Spray 接口技术
苯海拉明, 10mM 磷酸盐缓冲液
第 1 次进样 第 509次进样 >25小时
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MS的电离技术
MS的历史
60’s-70’s 大气压电离(APcI)源被发现(但并未被广泛 应用) 70’s-80’s 开始广泛研究 LC/MS 1979年 1982年 1984年 1988年 …... 传送带式 LC/MS 接口成为商业产品 离子束LC/MS接口出现 第一台电喷雾 MS仪宣告诞生 电喷雾离子源 MS 首次应用于蛋白质的分析
*为了保持 3 x 10-6 torr (4 x 10-6 mbar)的真空
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LC/MS联用关键技术－接口
液相色谱的出口情况: 从液相色谱流出的组分存在于大 气压条件下的溶液之中 质谱的入口情况: 在高真空工作条件下的质谱仅接受气 相离子 因此液质联用的接口必须完成三个转变: – 物态转变: 液态 - 气态 – 带电状态: “中性” - 离子 – 真空变化: 760 torr - 10-5—10-8 torr(乇) 要求:雾化,去溶剂和电离同时完成
25小时?2005waterscorporationms的电离技术hplc离子源分析器检测器数据处理离子化质子过滤器离子检测器质谱图离子化质子过滤器离子检测器质谱图接口色谱分离样品引入数据采集及控制质量过滤器样品引入?2005waterscorporation质谱的种类及相关联用技术gclcceflowinjprobefbeiesiapcitspfabmaldiquadrupolemagneticsectortimeofflightiontrapftmselectronmultiplierphotomultipliermicrochannelplateturbomechanical?离子分离模式?质量分析器?离子检测?数据的采集及处理?样品的引入模式?溶剂的去除或抽真空方式溶剂的去除或抽真空方式?质子化模式?2005waterscorporation同一个样品的质谱图可能不一样sampledescription80859095100105110115120125130135140145150mz0100salicylamide10067cncen28000arscanes119e81380137012121002901881852939958114011021020133012391389143014932hydroxybenzamidemw
(新)液质联用培训讲义
6. 混合扫描
• 样品：对羟基苯甲酸甲酯/对羟基苯甲酸丙酯/对羟
基苯甲酸丁酯与氨基酸混合液。
• 要求：一次实验同时完成多种扫描组合方式 • 羟基苯甲酸甲酯/对羟基苯甲酸丙酯/对羟基苯甲酸
丁酯采用母离子扫描
• 氨基酸采用中性丢失扫描
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定性实验 调谐仪器
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3. 多反应监控MRM
MS1 Collision Cell Argon gas MS2
Product Precursors
Static m/z 609.1
Static m/z 195.1
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定性实验 调谐仪器
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样品1．利血平标样1ppm, 根据全扫描获得最佳实验锥孔 （CV），调谐特定碎片最佳实验碰撞能量（CE），进行 多反应监控MRM实验准备 ESI + MRM :609 /195(CV=45,CE=55)
M+H+ 134 106 148 76 156 175 120 90 116 121 182 118 150 147 132 132 166 备注： * 碱性氨基酸 易中性丢失63(甲酸+NH3) ▼ 带苯环氨基酸 ● 仲氨酸 易中性丢失46(甲酸)
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定性实验 调谐仪器
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实验要点:通过调谐仪器各项参数,不同化合物ESI/APCI的响应,毛细管电压,锥 孔电压,RF lens,离子能量,去溶剂化气温度,去溶剂化气流量,反吹气流量等参 数,找出目标化合物最佳响应参数,发挥最佳仪器检测灵敏度.
API5000training液质培训教材
Evaporation
Formation of Charged Droplets
Orifice (DP)
Curtain Gas (CUR)
TIS 任务原理同EI,不同的是TIS有辅佐加热气(GS2),可加大去溶剂(róngjì)的速度 可用于比拟大的液体流量
第十一页，共37页。
大气压化学(huàxué)电离源 (APCI)
第六页，共37页。
Turbo Vtm 离子源 ( API 3200, API 4000, 和 API 5000)
垂直精密调节 旋钮
水平精密调 节旋钮
两通或三通
离子源排气口
液体进入口
TIS or APCI 喷雾针
辅助气加热 头
喷雾针出口
APCI电晕针
第七页，共37页。
Turbo VTM 离子源
勇于开始，才能找到成功的路
• 在两种 Q1 scans方式下, Q3 处于 RF-only 方式 • Q3 传输一切(yīqiè)的离子到检测器
• 关于Q3 scan 方式-用 Q3 替代Q1 • 关于 Q3 scans ，Q2 是离子源. 用大批的 CAD 气作碰撞聚焦 • Q3 full scan 用于校准 Q3
第三十页，共37页。
.
A
第二十页，共37页。
RF
180° phase shift电信号180
度相移
Q0, Q2 & Stubbies always RF only.
Q3 RF only if selecting in Q1. Q1 RF only if selecting in Q3
离子簇在离子通道的运动方式 A极和B极上的RF交流电压及ROV直流偏
Q1 和 Q3 Scan
液质联用仪基本介绍和其应用技术专题培训课件
2.质量范围mass range
四极质谱：
4000以内
离子阱质谱： ~ 6000
飞行时间质谱： 无上限
四、液质联用技术
高效液相液质联用(HPLC/MS)是指高效液相液相色谱与质 谱串联的技术。HPLC-MS主要由HPLC仪、接口离子源(HPLC与MS 之间的连接装置)、质量分析器、真空系统和计算机数据处理 系统组成。
利用这个特点，我们用液质联用的软电离方式 可以得到化合物的准分子离子，从而得到分子量。 由机械真空泵(前极低真空泵)，扩散泵或分子泵(高 真空泵)组成真空机组，抽取离子源和分析器部分 的真空。只有在足够高的真空下，离才能从离子 源到达接收器，真空度不够则灵敏度低。
2.离子源
电离室原理与结构图
根据离子化方式的不同分类：
1.单聚焦质量分析器 特点：具有质量色散作用
2.双聚焦扇形磁场-电场串联仪器(sector). 3.四极杆质谱仪(Q).
特点：扫描速率快，结构简单，价格较低。 4.飞行时间质谱仪(TOF). 5.离子阱质谱仪（TRAP） 6.傅里叶变换-离子回旋共振质谱仪(FT-ICRMS). 7.串列式多级质谱仪 (MS/MS) ： 四极+TOF（Q-TOF）、三重四极杆（QqQ）、TOF+TOF
进样系统
离子源
质量分析器
检测器
1.气体扩散 2.直接进样 3.气相色谱 4.液相色谱
1.电子轰击 2.化学电离 3.场致电离 4.激光
1.单聚焦 2.双聚焦 3.飞行时间4.四极杆
5.离子阱 6.串列式多级
1.真空系统
质谱仪的离子源、质量分析器和检测器必须在 高真空状态下工作，以减少本底的干扰，避免发生 不必要的离子-分子反应,所以质谱反应属于单分子 分解反应。
液质联用培训讲义
Waters 四极杆质谱培训
仪器质量校正
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Waters 四极杆质谱培训
仪器质量校正
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10. 输入所欲储存之文件名称后按存盘即可，确认所 有的扫描模式都已经被校正。
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仪器质量校正
样品2. 对羟基苯甲酸甲酯/对羟基苯甲酸乙酯/对羟基苯甲 酸丁酯1ppm实验，调谐最佳实验锥孔电压（CV）/碰撞 能量（CE） ESI 对羟基苯甲酸甲酯 MRM :151/136,92 CV 30/ CE 15/ CE 20 对羟基苯甲酸丙酯 MRM :179/136,92 CV 30/ CE 15/ CE 20 对羟基苯甲酸丁酯 MRM :193/136,92 CV 30/ CE 18/ CE 25
• 此为第一段和第二段扫描模式参数。这是因为在进行质量
校正的时候必须同时校正两个质量分析器的三种模式（静 态扫描、动态扫描、扫描速率补偿）的缘故。
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M+H+ 134 106 148 76 156 175 120 90 116 121 182 118 150 147 132 132 166 备注： * 碱性氨基酸 易中性丢失63(甲酸+NH3) ▼ 带苯环氨基酸 ● 仲氨酸 易中性丢失46(甲酸)
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干货：液质联用入门帖！
干货：液质联用入门帖！食品实验室服务关于液质联用呢，对于菜鸟来说，似乎总有说不完的点，也总有各种新的疑问冒出来。
为什么呢？因为你不通原理、仪器构造，不会举一反三。
但如何做到？这只能靠自己，师傅讲太多，你不去用仪器、拆仪器，仍白搭，所以，多学学、多用用、多想想、多拆拆就是玩转仪器的必备秘诀啦。
本帖只挑重点说，不让你错过任何一个关于液质的必备知识点。
液质联用到底是咋回事？质量分析器的类型了解LC-MS的接口也很重要1.种类及发展：1.传送带(moving belt)式的LC-MS: 目前已经停用2.热喷雾(TSP) LC-MS接口: 已经很少使用3.粒子束(PBI)4.大气压电离源(API):目前最常用的方法电喷雾(ESI)、大气压化学电离源(APCI)。
2.各接口应用范围3.大气压电喷雾质谱应用范围两种接口各有何不同？正、负离子化模式的选择?流动相的选择流量和色谱柱的选择辅助气体流量和温度的选择【这些你知道吗？】1、由于液质的流速较小（ESI一般为0.2ml/min），所以配置样品的溶剂强度不能太大，尽量小于起始比例，否则，会出现保留时间偏移等问题。
2、如果在液相上摸好的条件，注意尤其是流动相的组成要转化成合适LCMS分析的。
3、磷酸盐及其他不挥发缓冲盐在离子源会沉淀并堵塞毛细管等，要更换成可挥发的有机缓冲盐。
4、缓冲盐会导致离子抑制，因此要控制缓冲液的强度，<10mM。
5、去污剂、表面活性剂会有离子抑制现象发生，表面活性剂产生的加合物和离子簇会干扰质谱数据，因此作液质联用仪时，不要使用洗涤剂清洗玻璃器皿等容器，如果一定要用，建议超声清洗多次。
来自网友的忠告1.前处理：样品一定要干净，不管是为了质谱还是为了保护柱子，生物样品提取的好些，如果直接沉淀，一定要注意，尽量高转速12000rpm以上，低温离心，最好离2次（保险一点），转移样品也要仔细，从中间慢慢吸，有时会有漂浮物。
2.样品浓度：质谱是灵敏度很高的仪器，进样浓度一定不能太高，1－2μg/ml已经可以啦，太高的浓度对仪器来说比较容易造成残留，而且定量也会不准啦。
液质联用仪培训安全操作及保养规程
液质联用仪培训安全操作及保养规程前言液质联用仪是一种高级的仪器设备，能够在分子水平上观察和分析化合物，广泛应用于生命科学、药物研发、环境分析等领域。
为保障液质联用仪的正常运行和使用者的安全，特制定此规程。
请严格按照规程操作，遵从实验室安全管理制度。
一、液质联用仪安全操作规程1.在操作液质联用仪前，应先查看使用说明书，确保了解每一个组件的功能及其作用；2.地面应平整稳固，液质联用仪的位置应在通风、排气良好的实验室中，禁止在潮湿、多尘、多油烟的环境下使用；3.在打开液质联用仪前，先确认仪器仪表上的安全保护装置齐全完好且符合要求，如：保护罩、安全锁、漏电保护器、过载继电器等；4.将样品放入样品槽前，应先清洗样品槽和样品支架，并使用所需的溶剂对样品进行处理和纯化；将样品注入进样口时，请勿将样品溅到其他组件上，以免影响仪器使用寿命；5.液质联用仪在工作时会产生危险的高压，不能自行进行维修，在维修前应将仪器从电源拔出，并及时联系维修人员进行处理；6.在液质联用仪使用过程中，如遇仪器发生噪声、冒烟等异常情况，请第一时间停止使用，断电并及时通知维修人员处理；7.液质联用仪下机时，应先停止“样品流动”，再关闭其与计算机的链接，等待液质联用仪内部所有流体流过后，方可进行关闭。
操作结束后，应将仪器表面清洁干净，并进行彻底的消毒。
二、液质联用仪保养规程1.定期对液质联用仪进行专业的保养及校正操作，以保证其正常运行；2.养护操作应在完全断电的情况下进行，拆卸和组装时禁止使用硬物、金属器具避免损坏组件；3.维护液质联用仪的灵敏度和稳定性，在使用前应先检查各部分的电缆、电源接口、电池等物品，如发现问题，请及时更换；4.对液质联用仪进行严谨的消毒处理，去除残留物，和细菌，应使用专业的消毒剂，并彻底清洗和消毒机器表面；5.液质联用仪上的各类杂质，例如石蜡、油污等需要及时清理，换油周期应相应缩短，以防止污垢影响液质联用仪运作的性能和寿命。
液质基础培训班
缺点
有可能发生热裂解 样品需要有一定的挥发性 适合分析分子量小于 2000 Da 的样品
22
© 2012 AB SCIEX
基础应用培训
离子源互换
TurboIonSpray和Heated Nebulizer
2
1
1. 一个不用使用工具，只要换
探针就可以切换ESI和APCI 的离子源 电晕针
2. 用手或螺丝起子就可调节的
3 © 2012 AB SCIEX
基础应用培训
液相色谱串联质谱系统基本理论体系
三个重点
液相色谱原理与应用
液相色谱-质谱离子化接口原理
质量分析器工作原理
4
© 2012 AB SCIEX
基础应用培训
液相色谱串联质谱系统
基本结构
信号 液流
液相色谱 三重四极杆/串联线性离子阱质谱仪
5
© 2012 AB SCIEX
3. 电晕针一直在离子源中
3
23
© 2012 AB SCIEX
基础应用培训
Turbo V™离子源推荐参数
Heated Nebulizer（APCI）部分
英文名 （简称） Curtain Gas （CUR） IonSpray Voltage （IS） 中文译名 （单位） 气帘气 （psi） 离子化电压 （V） 推荐值 ≥600 µL/min 40$ +5500 -4500 150~550 ≥40 N/A On Medium
基础应用培训
电喷雾离子化原理（续）
溶剂蒸发和小液滴碎裂 + + + + + + + + + ++ + + + + + + 液滴非均匀 碎裂 + +
LC-MS液质联用资料系列1.
Ion Production
API Chemistry and
Example Spectra
GAS PHASE Acid-Base Scale
for Positive Ions & Neutral Molecules
Neutral Molecules Strong acid
Reagent Ions Weak Base
1100
Adducts & Clusters formed in LC/MS
Adduct Ion Formed
Lithium [M+Li] +
Ammonia [M + NH4]+
Water [M + H3O]+
Sodium [M + Na]+
Methanol [M + H + CH3OH]+
Chloride [M + Cl]-
1000.42
300
400
500
–Q1 MCA (10 scans): from CCK PURIFIED Q1 SACN 16.7
4.0e7
3.5e7
3.0e7 2.5e7
Intens2it.y0,ec7ps
1.5e7
292.82
377.02
1.0e7 439.03 497.03
5.0e6
600
700
Reagent Ions Strong Base
NH3
NH2-
Water
OH-
Toluene
C6H5CH2-
Methanol
CH3O-
Ethanol
C2H5O-
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液质联用现场安装培训
一、关机：先卸掉真空再停电
1、退出软件→打开网页（http:192.168.254.101）→Servic e→Vacuumcontrol→Vent vacuum System（10-20min中放完）→关总电源
二、开机：打开电源抽真空（大约4-5个小时），若有异常情况，打开网页，点击Star vacuum system（氦气不关）
三、Tracontrol（质谱控制软件）
查看真空情况：options→vacuum system：Fore：3-7+00，High：至少达到1.0*10-5.
四、氦气出口压力：保持在0.6Mpa。
Notice：换氦气后，要对氦气进行充管：Options→vacuum system→Flush Helium Line （至少3-5遍）
Helium后面的方框打钩。
五、仪器的三种状态
1、Operate：运行状态：进样及看谱图时点击。
2、Standby：待机状态：不用时可将Nebulizer设为2.0psi以下，以节省氮气。
3、Shutdown：关机状态：为保证气体管路电磁阀关闭，换液氮时需将仪器处于
该状态下，加液氮后再点击Stangby。
4、Standby参数的设置：Options→Standby前面显示的是设定值，后面显示的
是实测值，平时不做实验的时候可将气质设小一点，
如：Nebulizer：2.0；ry Gas：2.0；Dry Temp：220，
设置好参数后，点击Apply→Close→Yes生效。
六、进样部分参数设置
在operate状态下，选择手动进样。
1、Source □方框打钩，Sying pump灯变绿是正常状态。
一般情况下，参数设
置如下：
Flow rate 240.00 ul/h,点击Fast forward，进样针：Hamilton。
2、标准校正液的配制：95%质谱纯的乙腈（Acetonitrile）与超纯水1:50或者
1:100的比例配制。
校正液的作用：（1）校正质量轴；（2）确定仪器有无故障，如进样品后没有峰的情况下，可以进一针校正液样品，若出峰正常，则表明仪器正常，不出峰是样品的原因。
峰强度大致在106左右。
3、校正液的质量数：322、622、922、1522，质量偏差不能超过1。
4、校正质谱
配好校正液→进样→Automtic→Mast list→调入质量列表→
勾选Scan calibration→star。
5、编辑质量列表
Options→edit mast list，可以删掉一些不需要的离子→另取名字，系统自带的不可以删除。
6、校正质谱完整步骤（一般1至几个月校正一次）
配好校正液→进样→Automtic→Mast list→调入质量列表→勾选Scan calibration→star。
，一次校正后若仍不能则需将校正液浓度调大一点后再进行一次校正。
7、手动校正
Scan→Star→打开文件，选质量列表→逐个拉动红线到目标位置→Accept point→循环选点→Save
Scan calibration→①dep:出T②Back up 返回。
七、各部分参数的设置
1、Mode：□勾选，save spectra，只需更改Scan mode。
根据扫描范围和扫描
速率分为以下三种：
（1）Ultra Scan，扫描速度快；
（2）Enhance Resalution 分辨率高，半峰宽小；
（3）Extended Mass Range：以分辨率为代价扩大扫描范围，分辨率高。
（1）、（2）是常用的两种扫描模式，（3）种基本不用。
2、Source界面
（1）设置进样速度，一般为240.00 ul/h。
（2）Volume control ：体积控制，三角框内打钩。
（3）Nebulizer 喷雾器，当流速加大时其值要相应地加大，240.00 ul/h流速下一般设置为8-10Psi。
Dry Gas：干燥气，目的是将多余的液滴汽化。
一般设置为5-10L/min，若与液相联用，则应调整为10-12L/min。
若实测值达不到预设值，
则可能需要换液氮。
进样浓度，一般从稀浓度开始进样。
Dry Temp：一般设置为220℃
（4）Capilary End Plateoffset，默认值即可，无须改动。
3、Tune
View →sorrcert模式。
Target Mass调整离子透镜电压，知道分子量的大致范围时可以设定；
4、二级
（1）Auto-Ms（n）自动N级
Main→precursor selection
Exclude：分段排除，除去哪些范围外进入二级。
Include：包含，规定哪些范围进行二级。
（2）Auto-Ms,二级，三级
Threshold Abs 阈值，设定值以下的不显示
No of presursor lons 分子母离子，选几个就显示当前强度最高的几个。
Threshold Rel 相对阈值
Ms/Ms Frag Ampl ：碰撞能量在，只有做多级的时候才需要设置，能量一般为2，最高可以设置为25。
Active Exclusion 加大信息，加大集量，做蛋白质时用的多，勾选后表示：采集完2张强度最高的谱图之后，在1min中内采集强度次高的谱图。
Notice：在Auto-Ms（n）状态下，设置main菜单的参数即可，其他参数值使用默认值即可。
（3）手动多级，手动最多能达到11级：原理是先分离出分子母离子，再进行碰撞，多次循环。
（4）MRM：多反应监测（只能做到三级）
5、polarity正负离子切换模式；positve正离子模式；alternating正负离子
交互模式
6、Trap，在□ICC内打钩:控制进入离子阱的离子数目；
如：Target：10000，负离子模式下此值要设置小一点，50000左右。
7、Max Accutime不需要变动，Scan扫描范围
Average平均值越低，扫描频率越快，累加多少次再平均。
Rolling Average 更进一步累加，□打钩，ON:2
8、sample Info ，设置完后点Apply。
9、两种采集模式，右键拖动平均，右键→Copy to spectra ，方可处理数据。
八、更换离子源步骤
先点击shutdown→更换离子源→按住灯3秒→standby →operate
九、LC-MS培训
（一）Hystar3.0
1、硬件配置
Hardware set up一般情况下不用自己配置：Rud→cmd→ping192.168.254.11，质谱地址：192.168.254.10；最后配置上网网卡，可进行布鲁克远程控制。
2、Meteods：只要是包括三个方面的方法编辑：
（1）LC control：具体编辑如下，
LC control→Edit→Yes→OK,然后再针对泵、自动进样器、检测灯等逐个进行编辑；
①泵：Advanced：不用改；Time Table梯度洗脱方法，编辑梯度洗脱的
方法，等梯度洗脱，流动相混合比不变，泵需要人工关。
Stop time停止时间，柱子堵塞后压力将会急速上升。
②自动进样器：定义进体积
Standard injiection 标准进样模式
Injection with needle wash洗针模式
Location进样位置
③检测器：190-400 nm
此外：Signals 1-8；2，MS：提取离子流；总离子流；积峰离子流；
编辑完LC control之后可以作为液相的方法单独保存下来。
Auto sampler→standard；
Ms control:只能调用，在质谱控制软件上编辑好方法保存后直接调用。
（2）Auto sampler
Sample table创建
①Sample Indentifier样品盘名称；
Autosampler Parameters ；Vial样品位置；Volume进样体积,进样体积要与液相方法编辑中设置的体积一致。
②重新编辑方法：编辑好样品盘信息后点击Acquisition再选择Yes即可。
（3）Ms control
（4）Star
3、冲柱子：点Sample或Acquisition即可。