液质联用培训讲义
液质联用安装培训电子版
液质联用现场安装培训一、关机：先卸掉真空再停电1、退出软件→打开网页（http:192.168.254.101）→Servic e→Vacuumcontrol→Vent vacuum System（10-20min中放完）→关总电源二、开机：打开电源抽真空（大约4-5个小时），若有异常情况，打开网页，点击Star vacuum system（氦气不关）三、Tracontrol（质谱控制软件）查看真空情况：options→vacuum system：Fore：3-7+00，High：至少达到1.0*10-5.四、氦气出口压力：保持在0.6Mpa。
Notice：换氦气后，要对氦气进行充管：Options→vacuum system→Flush Helium Line （至少3-5遍）Helium后面的方框打钩。
五、仪器的三种状态1、Operate：运行状态：进样及看谱图时点击。
2、Standby：待机状态：不用时可将Nebulizer设为2.0psi以下，以节省氮气。
3、Shutdown：关机状态：为保证气体管路电磁阀关闭，换液氮时需将仪器处于该状态下，加液氮后再点击Stangby。
4、Standby参数的设置：Options→Standby前面显示的是设定值，后面显示的是实测值，平时不做实验的时候可将气质设小一点，如：Nebulizer：2.0；ry Gas：2.0；Dry Temp：220，设置好参数后，点击Apply→Close→Yes生效。
六、进样部分参数设置在operate状态下，选择手动进样。
1、Source □方框打钩，Sying pump灯变绿是正常状态。
一般情况下，参数设置如下：Flow rate 240.00 ul/h,点击Fast forward，进样针：Hamilton。
2、标准校正液的配制：95%质谱纯的乙腈（Acetonitrile）与超纯水1:50或者1:100的比例配制。
WatersLCMS液质联用培训讲义
MS1
Argon gas Collision
Cell
MS2
Precursors
Static m/z 609.1
Product
Static m/z 195.1
Waters 四极杆质谱培训
定性实验 调谐仪器
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样品1．利血平标样1ppm, 根据全扫描获得最佳实验锥孔 （CV），调谐特定碎片最佳实验碰撞能量（CE），进行 多反应监控MRM实验准备
仪器质量校正
Waters 四极杆质谱培训
仪器质量校正
©2005 Waters Corporation
8. 按OK键后会跳出步骤6的自动校正选单，此时 按此页面OK键就会开始进行质量校正。
9. 当所有的校正都完成后，将校正的结果储存起 来，从质量校正页面的档案（File）选取另存新 档（Save As）。输入所欲储存之文件名称后按 OK即可。
峰进行准确质量测量 (如在全扫描方式)
• scan speed compensation扫描速度补偿: 当仪器进行
快速扫描时，对系统进行‘延时’补偿校正。
Waters 四极杆质谱培训
©2005 Waters Corporation
7. 设定采集参数：
选择适当的校正质量范 围，校正大范围的全质 量从22校正到2000，其 余的参数可以使用预设 参数default即可，设定 完后按OK键。
Cell
MS2
Products
Scanning (m/z M-46Da)
样品：混合氨基酸实验 中性丢失46(甲酸) 中性丢失63(甲酸+NH3)
Waters 四极杆质谱培训
液质联用ppt课件
HPLC分离原理
最广的色谱法是反相色谱 主要用于分离非极性至中等极性的各类分子型
化合物，因为键合相表面的官能团不流失，溶 剂的极性可以在很大范围内调整，因此应用范 围很宽。 十八烷基（C18）化学键合相是最常用的非极性 键合相，反相键合相表面具有非极性烷基官能 团，及未被取代的硅醇基。硅醇基具有吸附性 能，剩余硅醇基的多寡，视覆盖率而定。因此， 分离机制比较复杂。
很大，相应源参数也应该改变，所以恒定比例 流动相能满足分离分析要求时，尽量不用梯度， 尤其定量分析时
39
流动相的选择
流动相中加入甲酸、乙酸等可提高正离子化效 率
(**)液质联用中，流动相有时需要加入缓冲盐 A CH3COONH4 B HCOONH4 C KH2PO3 是否加酸不是绝对的，具体应根据LC的分离情
18
离子化的方法(Ionisation Methods)
电子轰击电离 EI 化学离子化 CI 场电离，场解吸 FD 快原子轰击 FAB 基质辅助激光解析电离 电喷雾电离 ESI 大气压化学电离 APCI
MALDI
19
电喷雾电离源 Electrospray Ionization (ESI)
37
仪器测试条件的选择
液相色谱条件 质谱条件
38
HPLC条件的选择(流动相)
根据化合物类型选择流动相组成，甲醇-水，乙 腈-水或甲醇-乙腈-水（**DMF、DMSO、 DCSO、THF ）
某些化合物只有某种流动相体系才出峰 一般正离子方式用甲醇，负离子方式用乙腈好
些 梯度的设定：梯度变化太快对离子化效率影响
+ ++ ++ +
安捷伦-液质联用技术(LCMS)及其应用讲课资料PPT共75页
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26、我们像鹰一样，生来就是自由的 ，但是 为了生 存，我 们不得 不为自 己编织 一个笼 子，然 后把自 己关在 里面。 ——博 莱索
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27、法律如果不讲道理，即使延续时 间再长 ，也还 是没有 制约力 的。— —爱·科 克
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28、好法律是由坏风俗创造出来的。 ——马 克罗维 乌斯
❖ 知识就是财富 ❖ 丰富你的人生
71、既然我已经踏上这条道路，那么，任何东西都不应妨碍我沿着这条路走下去。——康德 72、家庭成为快乐的种子在外也不致成为障碍物但在旅行之际却是夜间的伴侣。——西塞罗 73、坚持意志伟大的事业需要始终不渝的精神。——伏尔泰 74、路漫漫其修道远，吾将上下而求索。——屈原 75、内外相应，言行相称。——韩非
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29、在一切能够接受法律支配的人类 的状态 中，哪 里没有 法律， 那里就 没有自 由。— —洛克
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30、风俗可以造就法律，也可以废除源自法律。 ——塞·约翰逊用讲课资料
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液质联用PPT
1. 质谱基本知识
1.4.4 质谱仪器类型-四极杆/线性离子阱质量分析器
Ion Accumulation (patented) Fragment Ion Generation
Q0
Q1
Q2
Q3
Ion trap MS Mass Selection
1、在串联四极杆的基础上，将Q3设计成线性离子阱 2、Q2中实现第一次的碎裂，进入Q3分析 ——空间串联 3、Q3的离子阱功能，可以进一步进行Frag/scan ，MSn－时间串联
2. 联用技术
2.2 液相色谱/质谱联用
• 高效液相色谱(HPLC)是分离化合物范围最广， 准确度高，对化合物破坏性小的快速分离方法， 特别适用于有机生物分子的分离。 • 质谱仪(MS)是灵敏度很高，对未知化合物的结构 分析定性准确，对被测定化合物和相应标准样品 的了解要求较低的定性手段。
2. 联用技术
2.2 .1 LC/MS连接时的主要问题 难挥发和/或热不稳定被分析物的离子化； 流速不兼容：LC的传统柱流速1ml/min.或 更高，而MS需在高真空条件下工作； 流动相不兼容：LC分离时经常加不挥发性 的缓冲液、添加剂等。
2. 联用技术
难挥发和/或热不稳定被分析物的离子化： ——应用软电离技术
☺ 快原子轰击(FAB)； ☺ 热喷雾(TS)； ☺ 电喷雾(ESI)； ☺ 基质辅助激光解吸离子化(MALDI)。
2. 联用技术
流动相不兼容：
☺ 尽量不使用不挥发性的流动相； ☺ 用挥发性溶剂置换不挥发性的缓冲液； ☺ 使用柱上连续流动液－液萃取技术； ☺ 利用双柱，进行相切换； ☺ 利用微膜离子抑制系统。
5. LC/MS/MS的应用
5.1 新生儿疾病的筛查
液质联用分析实讲义-2019
实验一液质联用分析一、实验目的1. 了解液相色谱仪和质谱仪的原理、基本构造。
2. 了解、熟悉质谱基本操作技术及质谱检测器的基本组成及原理。
3. 了解采集方法的编辑，掌握LC各模块和QQQ采集参数优化及设置。
4. 熟悉定性分析软件，能从所得的质谱图中指认出相应物质对应的质荷比，能对谱图做定性的描述。
二、实验原理1. 液相色谱-质谱联用（Liquid Chromatography/Mass Spectrometry，LC-MS）液相色谱-质谱法（Liquid Chromatography/Mass Spectrometry，LC-MS）将应用范围极广的分离方法——液相色谱法与灵敏、专属、能提供分子量和结构信息的质谱法结合起来，已成为一种重要的现代分离分析技术。
色谱分析是运用物种在固定相和流动相两相间的分配系数不同而达到分离的效果的一种分离技术，主要目的是对混合物中目标产物进行分离和定量的一种分析技术。
质谱是通过测定样品的质荷比来进行分析的一种方法。
通过液-质谱联用(LC-MS)技术可实现样品的分离和定量分析，达到快速灵敏的效果。
2. 液质联用系统的组成部分液质联用系统包括HPLC（色谱分离）、液质接口（样品引入）、离子源（离子化）、质量分析器、检测器（离子检测）和真空系统等。
本实验采用ESI离子源的三重四级杆质量分析器（如图1，Q1-质量分析器；Q2-碰撞室；Q3-质量分析器）为低分辨率质量分析器，其质量分析器由四根棒状电极组成，形成一个四极电场，该电场只允许一种质荷比的离子通过，通过四极杆的离子到达检测器被检测，其余离子则振幅不断增大，最后碰到四极杆而被吸收。
质谱仪的检测主要使用电子倍增器，由四极杆出来的离子打到高能打拿极产生电子，电子经电子倍增器产生电信号，记录不同离子的信号即得质谱。
图1三重串联四极杆质谱的系统结构图示意图两个四极杆在空间上串联起来，在分析测试的模式上多了以下选择：子离子扫描（Product Ion Scan）：MS1 使用SIM 方式选择某一个或多个特定质荷比的母离子通过四极杆1，在碰撞池施加碰撞能量产生碎片离子，然后在四级杆2中进行扫描分析。
《液质联用技术》课件
2 对样品有要求
样品需要经过处理才能适用于液质联用技术。
3 数据分析难度大
分析液质联用的数据需要专业知识和经验。
《液质联用技术》PPT课 件
液质联用技术是将液相色谱与质谱相结合的高级技术，利用这种技术可以确 定样品中分子的种类、数量和结构信息。
液质联高化合物的分析能力和准确 性。
分子信息
通过结合液相色谱和质谱， 可以得到有关分子的种类、 数量和结构信息。
应用广泛
在生物化学、药物研发、食 品安全和环境监测等领域有 广泛应用。
液质联用技术原理
1 液相色谱分离
利用不同成分在液相中的分配行为进行分离。
2 质谱获取结构信息
通过对每个成分进行质谱分析，获取结构信息和质量信息。
仪器和连接器
液相色谱仪
用于将样品分离成各种成分。
质谱仪
连接器
用于从每个成分中获取结构信息。
将液相色谱仪和质谱仪连接起来， 实现液质联用。
液质联用技术操作步骤
1
液相色谱分离
2
将样品中的各种成分分离开来。
3
数据分析
4
对得到的数据进行分析，获取有关样品 的信息。
样品制备
准备样品，使其适合液相色谱和质谱的 分析。
质谱检测
对每个成分进行质谱检测，获取结构信 息。
液质联用技术应用
生物化学
用于鉴定生物体内的化学成分和代谢产物。
食品安全
检测食品中的有害物质和添加剂。
药物研发
帮助分析药物的代谢途径和药效。
环境监测
用于检测环境中的污染物。
液质联用技术优点
1 分离效率高
2 灵敏度高
能够有效地将样品中的不同成分分离开来。
液质联用
9
6、GC-MS数据的采集
(1) 总离子流色谱图 (TIC)
10
(2) 质谱图
6、GC-MS数据的采集
由总离子流色谱图可以得到任何一组分的质谱图，离子流
进入质量分析器，只要设定好分析器扫描的质量范围和扫描时 间，计算机就可以采集到每个组分洗出过程中连续的质谱信号。 如果色谱分离良好，根据扫描速度，每个色谱峰可采集到多组 分全扫描质谱图，且同一组分不同色谱峰位置的质谱图应基本 一致，但强度不同。
7
3、对GC的要求
充分老化或限制使用温度的方法，尽量避免色谱柱 的固定液流失以降低质谱仪器检测噪声。 根据接口部件的特点选择不同类型的色谱柱。 载气必须纯度高、化学稳定性好、易于和待测组分 分离、易于被真空泵排出。通常在GC-MS中选用的 载气为氦气，纯度在99.995%以上。
4、对MS的要求
高的效率、大的排空容量，以利于将载气最大限度的抽 出质谱仪器，避免载气对待测样品的电离、分析等干扰。
2
12.3 分子质谱联用技术 一、GC-MS联用 二、 LC-MS联用 三、 CE-MS联用 四、 MS-MS联用
3
一、GC-MS联用 1、GC-MS联用仪器
4
2、GC-MS联用中的技术问题
GC-MS接口是成功实现GC与MS联用的关键。 理想的接口应当能够除去全部载气，然而却不损失
待测样品组分。 (1) 直接导入型接口
8、GC-MS的应用
(1) GC-MS检测猪肉中的克伦特罗
%
100.0 86
75.0
50.0
25.0
57 0.0
安捷伦液质联用培训教材(中文版)
=安捷伦 G6300 系列LC/MSD Trap现场培训教材质谱数据系统毛细管电泳液相色谱气相色谱注意包含在该文件中的信息将可能在未通知的情况下改变。
安捷伦科技有限公司不对与该材料有关的任何活动做担保。
这些活动包括但不仅限于为了某特殊目的而进行的销售和适应性。
安捷伦科技有限公司将不会对包含在材料里的与装备，表现和材料使用有关的错误或导致的损失负责。
这份文件中的任何部分都不得拷贝或复制或未经安捷伦科技公司的预先允许进行翻译。
安捷伦科技有限公司售后服务电话：800-8203278手机用户：400-8203278中文网站：/chem/cn2007年6月G6300A 系列离子阱软件概述以及开机关机操作仪器硬件概述1.1典型配置1.2仪器原理简介1.2.1离子阱的主体包含一个环电极和两个端电极，环电极和端电极都是绕Z轴旋转的双曲面，并满足r20=2Z20（ r0为环形电极的最小半径，Z0为两个端电极间的最短距离）。
射频电压V rf加在环电极上，两个端电极都处于零电位。
1.2.2与四极杆分析器类似，离子在离子阱内的运动遵循马修方程，也有类似四极杆分析器的稳定图。
在稳定区内的离子，轨道振幅保持一定大小，可以长时间留在阱内，不稳定区的离子振幅很快增长，撞击到电极而消失。
离子阱的操作只有射频RF电压，没有直流DC电压，因此离子阱的操作只对应于稳定图上的X轴。
对于一定质量的离子，在一定V rf下，不同质量数的离子按照m/z由小到大在稳定图的X轴上自右向左排列。
当射频电压从小到大扫描时，排在稳定图上的离子自左向右移动，振幅逐渐加大，依次到达稳定图右边界，从离子阱中抛出，经过高能打拿极然后由电子倍增器检测。
1.3仪器硬件概述1.3.1离子源1.3.2离子源原理1.3.3仪器构造-示意图1.3.4 仪器构造-实物离子阱整体离子阱分解图1.3.5 LC-MSD Trap 的典型操作模式（以MS2为例）：首先样品组分通过LC 进行分离，然后通过大气压电离源电离产生离子，离子阱在电场作用下，通过离子电荷控制（ICC ）在阱中进行离子累积存储一定数量的离子，然后通过扫描隔离掉低于目标离子质量数的离子，通过在端电极上施加附加电场排除掉阱中高于目标质量数的离子，这个过程为Isolation ，接下来通过在端电极上施加特定离子的共振波形，使其与He 碰撞导致离子内能增加而使离子碎裂，此过程称之为Fragmenation 或CID ，最后在离子阱上扫描Rf 电压得到二级质谱。
Waters_液质联用基础知识(waters中国培训中心)
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API LC/MS 的 Z-Spray接口
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Z-Spray 接口技术
苯海拉明, 10mM 磷酸盐缓冲液
第 1 次进样 第 509次进样 >25小时
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MS的电离技术
MS的历史
60’s-70’s 大气压电离(APcI)源被发现(但并未被广泛 应用) 70’s-80’s 开始广泛研究 LC/MS 1979年 1982年 1984年 1988年 …... 传送带式 LC/MS 接口成为商业产品 离子束LC/MS接口出现 第一台电喷雾 MS仪宣告诞生 电喷雾离子源 MS 首次应用于蛋白质的分析
*为了保持 3 x 10-6 torr (4 x 10-6 mbar)的真空
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LC/MS联用关键技术－接口
液相色谱的出口情况: 从液相色谱流出的组分存在于大 气压条件下的溶液之中 质谱的入口情况: 在高真空工作条件下的质谱仅接受气 相离子 因此液质联用的接口必须完成三个转变: – 物态转变: 液态 - 气态 – 带电状态: “中性” - 离子 – 真空变化: 760 torr - 10-5—10-8 torr(乇) 要求:雾化,去溶剂和电离同时完成
25小时?2005waterscorporationms的电离技术hplc离子源分析器检测器数据处理离子化质子过滤器离子检测器质谱图离子化质子过滤器离子检测器质谱图接口色谱分离样品引入数据采集及控制质量过滤器样品引入?2005waterscorporation质谱的种类及相关联用技术gclcceflowinjprobefbeiesiapcitspfabmaldiquadrupolemagneticsectortimeofflightiontrapftmselectronmultiplierphotomultipliermicrochannelplateturbomechanical?离子分离模式?质量分析器?离子检测?数据的采集及处理?样品的引入模式?溶剂的去除或抽真空方式溶剂的去除或抽真空方式?质子化模式?2005waterscorporation同一个样品的质谱图可能不一样sampledescription80859095100105110115120125130135140145150mz0100salicylamide10067cncen28000arscanes119e81380137012121002901881852939958114011021020133012391389143014932hydroxybenzamidemw
waters液质联用-质谱基础知识介绍讲义
1: Scan AP+ BPI 8.29e4
%
33.78 35.04 38.26 39.52 33.32
0 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00
Time 40.00
为什么使用 LC/MS? …...
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快速得到丰富的结果
世界上第一台现代意义质谱仪在英国剑桥Cavendish实验室出现 电喷雾(Electrospray) 物理现象被发现 (并非为了 MS) 世界上第一台实际意义质谱仪在美国芝加哥大学实验室出现 (扇型磁场MS) 世界上第一台商业质谱仪 四极杆质量分析器质谱仪 飞行时间质量分析器质谱仪 开发GC/MS 大气压电离(APcI)源被发现(但并未被广泛应用) 开始广泛研究 LC/MS 传送带式 LC/MS 接口成为商业产品 离子束LC/MS接口出现 第一台电喷雾 MS仪宣告诞生 电喷雾离子源 MS 首次应用于蛋白质的分析
LC/MS中的质谱
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Mass Spectrometry-质谱
质量是物质固有特征之一，不同的物质有不同的质量谱 分析物被转化为气相离子而被分析 这些离子按其质荷比 (m/z)被分离而被检测 质谱图即是相关的离子流对m/z的图
•灵敏度高 •定性/定量本领高 •脉冲扫描采集数据 •高真空环境工作 •溶剂参与反应(API电离源)
为什么使用 LC/MS?
极高的灵敏度 (2)
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为什么使用 LC/MS?
极佳的定量结果(3)
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5 orders of magnitude linear dynamic range . over the concentration range 0.1pg to 10000pg, producing a coefficient of determination of 0.9975 for sulfadimethoxine injected on column,
API5000training液质培训教材
Evaporation
Formation of Charged Droplets
Orifice (DP)
Curtain Gas (CUR)
TIS 任务原理同EI,不同的是TIS有辅佐加热气(GS2),可加大去溶剂(róngjì)的速度 可用于比拟大的液体流量
第十一页，共37页。
大气压化学(huàxué)电离源 (APCI)
第六页，共37页。
Turbo Vtm 离子源 ( API 3200, API 4000, 和 API 5000)
垂直精密调节 旋钮
水平精密调 节旋钮
两通或三通
离子源排气口
液体进入口
TIS or APCI 喷雾针
辅助气加热 头
喷雾针出口
APCI电晕针
第七页，共37页。
Turbo VTM 离子源
勇于开始，才能找到成功的路
• 在两种 Q1 scans方式下, Q3 处于 RF-only 方式 • Q3 传输一切(yīqiè)的离子到检测器
• 关于Q3 scan 方式-用 Q3 替代Q1 • 关于 Q3 scans ，Q2 是离子源. 用大批的 CAD 气作碰撞聚焦 • Q3 full scan 用于校准 Q3
第三十页，共37页。
.
A
第二十页，共37页。
RF
180° phase shift电信号180
度相移
Q0, Q2 & Stubbies always RF only.
Q3 RF only if selecting in Q1. Q1 RF only if selecting in Q3
离子簇在离子通道的运动方式 A极和B极上的RF交流电压及ROV直流偏
Q1 和 Q3 Scan
液质联用仪基本介绍和其应用技术专题培训课件
2.质量范围mass range
四极质谱：
4000以内
离子阱质谱： ~ 6000
飞行时间质谱： 无上限
四、液质联用技术
高效液相液质联用(HPLC/MS)是指高效液相液相色谱与质 谱串联的技术。HPLC-MS主要由HPLC仪、接口离子源(HPLC与MS 之间的连接装置)、质量分析器、真空系统和计算机数据处理 系统组成。
利用这个特点，我们用液质联用的软电离方式 可以得到化合物的准分子离子，从而得到分子量。 由机械真空泵(前极低真空泵)，扩散泵或分子泵(高 真空泵)组成真空机组，抽取离子源和分析器部分 的真空。只有在足够高的真空下，离才能从离子 源到达接收器，真空度不够则灵敏度低。
2.离子源
电离室原理与结构图
根据离子化方式的不同分类：
1.单聚焦质量分析器 特点：具有质量色散作用
2.双聚焦扇形磁场-电场串联仪器(sector). 3.四极杆质谱仪(Q).
特点：扫描速率快，结构简单，价格较低。 4.飞行时间质谱仪(TOF). 5.离子阱质谱仪（TRAP） 6.傅里叶变换-离子回旋共振质谱仪(FT-ICRMS). 7.串列式多级质谱仪 (MS/MS) ： 四极+TOF（Q-TOF）、三重四极杆（QqQ）、TOF+TOF
进样系统
离子源
质量分析器
检测器
1.气体扩散 2.直接进样 3.气相色谱 4.液相色谱
1.电子轰击 2.化学电离 3.场致电离 4.激光
1.单聚焦 2.双聚焦 3.飞行时间4.四极杆
5.离子阱 6.串列式多级
1.真空系统
质谱仪的离子源、质量分析器和检测器必须在 高真空状态下工作，以减少本底的干扰，避免发生 不必要的离子-分子反应,所以质谱反应属于单分子 分解反应。
液质联用培训讲义
Waters 四极杆质谱培训
仪器质量校正
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Waters 四极杆质谱培训
仪器质量校正
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10. 输入所欲储存之文件名称后按存盘即可，确认所 有的扫描模式都已经被校正。
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仪器质量校正
样品2. 对羟基苯甲酸甲酯/对羟基苯甲酸乙酯/对羟基苯甲 酸丁酯1ppm实验，调谐最佳实验锥孔电压（CV）/碰撞 能量（CE） ESI 对羟基苯甲酸甲酯 MRM :151/136,92 CV 30/ CE 15/ CE 20 对羟基苯甲酸丙酯 MRM :179/136,92 CV 30/ CE 15/ CE 20 对羟基苯甲酸丁酯 MRM :193/136,92 CV 30/ CE 18/ CE 25
• 此为第一段和第二段扫描模式参数。这是因为在进行质量
校正的时候必须同时校正两个质量分析器的三种模式（静 态扫描、动态扫描、扫描速率补偿）的缘故。
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仪器质量校正
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M+H+ 134 106 148 76 156 175 120 90 116 121 182 118 150 147 132 132 166 备注： * 碱性氨基酸 易中性丢失63(甲酸+NH3) ▼ 带苯环氨基酸 ● 仲氨酸 易中性丢失46(甲酸)
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定性实验 调谐仪器
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Guelph大学的分析化学讲义--液质联用
+++
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+
+ -
+
+ - -+
+
+
++ -
+ +
-+ - +
பைடு நூலகம்++
+ +-+++-+
+ +
IonSpray (ESI)
IonSpray:
- Electrospray ionization (ESI) - Gentlest ionization technique - Applicable to polar and ionic substances
12+
1414.0
11+
1542.5
10+
1696.0
Intensity, cps
800
1000
1200
1400
1600
m/z, amu
Molecules which can be multiply protonated or deprotonated can exist in more than one charge state
Heated Nebulizer - Atmospheric Pressure Chemical Ionization (APCI) source which ionizes compounds in the gas phase.
Ion Evaporation and Formation
++-
3) H3O+ & CH3OH2+ donate protons to analyte forming [M+H]+
第十二章 液质联用
第十二章液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)12.1 概述LC-MS联用的研究起步于20世纪70年代。
多数质谱仪具有对样品纯度要求较高、可进行有效定性分析的特点；色谱是分离复杂混合物中不同组分最常用的方法之一，但是在定性、定量结构分析方面相对质谱仪较差。
因此，将色谱技术和质谱技术联用既可以充分发挥色谱法高分离效率的优点又可以充分发挥质谱法高定性专属性的能力的优点，这为科研工作者提供了一种可以对复杂化合物进行高效定性定量分析的工具。
在色谱-质谱联用仪中，气相色谱-质谱(GC-MS)联用仪是最早开发的色谱联用仪器，但在自然界和人工合成的化合物中，不挥发或热不稳定的化合物约占80%，只能用液相色谱分离。
液相色谱-质谱联用(LC-MS)比气相色谱-质谱联用困难得多，主要是因为液相色谱的流动相是液体，如果让液相色谱的流动相直接进入质谱，则将严重破坏质谱系统的真空，也将干扰被测样品的质谱分析。
因此，液相色谱-质谱联用技术发展的比较缓慢。
进入20世纪90年代，液相色谱-质谱联用（LC-MS）技术的发展最为引人注目。
这是因为LC-MS中的MS应是“软的”多级串联质谱（MS n）。
一般情况下，LC-MS检测的是非挥发或热不稳定的样品，因此需要找到一种能将低浓度样品分子传到气相中的方法。
另外，热不稳定性化合物的检测应该采取“软电离”的方式以避免因失去分子离子峰而得不到化合物的分子量信息。
20世纪末发现的电喷雾接口（ESI）和大气压下电离接口（APCI），不仅解决了使用LC-MS时对液相色谱流动相的诸多限制，而且大大提高了检测的灵敏度。
此外，还可以根据“软电离”方式产生的准分子离子峰并结合多级质谱产生的丰富结构碎片，准确地推断未知化合物的结构。
利用MS-MS进行选择反应检测（SRM），具有很高的选择性，因而具有很高的定量灵敏度和可靠性。
通过大气压下的接口，液相色谱不仅可以与四级杆质谱联用，而且还可以与当今最先进的正交飞行时间质谱、基质辅助飞行时间质谱以及离子阱质谱联用。
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仪器质量校正
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8. 按OK键后会跳出步骤6的自动校正选单，此时 按此页面OK键就会开始进行质量校正。
9. 当所有的校正都完成后，将校正的结果储存起 来，从质量校正页面的档案（File）选取另存新 档（Save As）。输入所欲储存之文件名称后按 OK即可。
M+H+ 134 106 148 76 156 175 120 90 116 121 182 118 150 147 132 132 166
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备注： * 碱性氨基酸 易中性丢失63(甲酸+NH3) ▼ 带苯环氨基酸 ● 仲氨酸 易中性丢失46(甲酸)
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Cell
MS2
Products
Scanning (m/z M-46Da)
样品：混合氨基酸实验 中性丢失46(甲酸) 中性丢失63(甲酸+NH3)
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• 常见17种混合氨基酸m/z • 天门冬氨酸(Asp或D) • 丝氨酸(Ser或S) • 谷氨酸(Glu或E) • 甘氨酸(Gly或G) • *组氨酸(His或H) • *精氨酸(Arg或R) • 苏氨酸(Thr或T) • 丙氨酸(Ala或A) • ●脯氨酸(Pro或P) • 半胱氨酸(Cys或C) • ▼酪氨酸(Tyr或Y) • 缬氨酸(Val或V) • 蛋氨酸(Met或M) • *赖氨酸(Lys或K) • 异亮氨酸(Ile或I) • 亮氨酸(Leu或L) • ▼苯丙氨酸(Phe或F)
MRM(MS /MS)
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parent scan(MS/MS),neutral loss scan(MS/MS) 实验参数设置建议如下：
parent scan(MS/MS)
neutral loss scan(MS/MS)
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10. 输入所欲储存之文件名称后按存盘即可，确认所 有的扫描模式都已经被校正。
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在质谱调机页面（MS Tune）监看四个扫描质量： 172.9 ,622.6 ,1072.2 , 1971.6
确认讯号良好及注射针内样品量充足!
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:609 (CV=45)
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2．子离子扫描 daughter scan
Argon gas
Collision
MS1
实验要点:通过调谐仪器各项参数,不同化合物ESI/APCI的响应,毛细管电压,锥 孔电压,RF lens,离子能量,去溶剂化气温度,去溶剂化气流量,反吹气流量等参 数,找出目标化合物最佳响应参数,发挥最佳仪器检测灵敏度.
1．全扫描 full scan
Collision
MS1
Cell
MS2
Scanning (m/z M)
50
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2. 在质量分析器页面（Analyzer）设定以下的数值，括 号内的数值即为设定值：
• LM Resolution 1（15.0） HM Resolution 1（15.0） Ion Energy 1（0.5） • Entrance（50） Collision（2） Exit（50） • LM Resolution 2（15.0） HM Resolution 2（15.0） Ion Energy 2（0.5）
Cell
MS2
Precursor
Products
Static (m/z 609.1)
Scanning
利血平标样,根据全扫描获得最佳实验锥孔CV、毛细管电压、RF lens、 离子能量等参数，调谐碰撞能量collision energy (CE)、碰撞压力，进行
子离子扫描实验准备。 Daughter scan：609/195，448，397，174
ESI +
MRM :609 /195(CV=45,CE=55)
样品2. 对羟基苯甲酸甲酯/对羟基苯甲酸乙酯/对羟基苯甲 酸丁酯1ppm实验，调谐最佳实验锥孔电压（CV）/碰撞 能量（CE）
ESI 对羟基苯甲酸甲酯 MRM :151/136,92 CV 30/ CE 15/ CE 20 对羟基苯甲酸丙酯 MRM :179/136,92 CV 30/ CE 15/ CE 20 对羟基苯甲酸丁酯 MRM :193/136,92 CV 30/ CE 18/ CE 25
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5. 中性丢失扫描neutral loss：
MS1
Precursor
Scanning (m/z M)
Argon gas Collision
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11. 根据实验要求，分别按上述步骤实验LM/HM=15 ，LM/HM=14，LM/HM=13三条校正曲线。
用途:根据实验需求分别调用不同分辨率的校正曲线.
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Full scan(MS),daughter scan(MS/MS),MRM 实验参数设置建议如下：
Full scan(MS)
daughter scan(MS/MS)
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• static calibration静态精确校正:使四极杆质量分析器准
确地‘停’在指定的质荷比上 (如： Tuning， SIR ， MRM)。
• scanning calibration 扫描校正:能确保所采集到的质谱
3. 在质谱调机页面（MS Tune）选择校正仪器以开启 的质量校正页面。
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4. 开启质量校正页面后，质量校正前请先确定目前仪器处 于未校正的状态，所有六种校正都为未校正（No Calibration），若不然则开启一个未校正（Uncal.cal）的 档案。
峰进行准确质量测量 (如在全扫描方式)
• scan speed compensation扫描速度补偿: 当仪器进行
快速扫描时，对系统进行‘延时’补偿校正。
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7. 设定采集参数：
选择适当的校正质量范 围，校正大范围的全质 量从22校正到2000，其 余的参数可以使用预设 参数default即可，设定 完后按OK键。
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6. 混合扫描
• 样品：对羟基苯甲酸甲酯/对羟基苯甲酸丙酯/对羟
基苯甲酸丁酯与氨基酸混合液。
• 要求：一次实验同时完成多种扫描组合方式 • 羟基苯甲酸甲酯/对羟基苯甲酸丙酯/对羟基苯甲酸
丁酯采用母离子扫描
• 氨基酸采用中性丢失扫描
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Quattro LC/Micro 液质联用培训讲义
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• 仪器质量校正 • 定性实验 调谐仪器 • 定量实验 • 维护及故障排除 • 常用备件号
内容
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1. 注射泵注入校正溶液，以碘化钠铯（异丙醇/水 = 1：1, NaI 2ug/L , CsI 50ng/L）溶液为例，流速5ul/min
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4．母离子扫描
MS1
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Collision Cell
Argon gas MS2
PPrreeccuurrssoorr
PPrroodduuccttss
Scanning
Static m/z 92
样品：对羟基苯甲酸甲酯/对羟基苯甲酸丙酯/对羟基苯甲酸丁酯实验 与氨基酸混合液。 调谐最佳实验锥孔电压（CV）/碰撞能量（CE），对羟基苯甲酸甲 酯/对羟基苯甲酸乙酯/对羟基苯甲酸丁酯三种化合物有共同碎片92， 可进行母离子扫描将其与氨基酸区别开。
6. 按开始键后会跳出自动校正选单 请勾选所有种类（Type） 处理程序部分选择讯号采集和校正