维生素D2对哮喘大鼠肺组织ICAM-1及IL-4的影响
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Ｒ ２． ；３５ ７ ５ ６ Ｒ ６ 中图分类号
文 献 标 识 码 Ａ 文 章 编 号 １０ ０ ０—１ ９ （０ ２ ０ ０ １ ０ ４ ２ ２ １ ） ４— ４２— ３
维生 素 Ｄ（ ｉ ｍ ｎＤ， Ｄ） 固醇 类 衍 生 物 ， ｖｔ ｉ ａ Ｖ 为 主
要成 员有 Ｖ ２和 Ｖ ３ 这 ２种 Ｖ Ｄ Ｄ ， Ｄ在 体 内经 过 一 系 列代 谢 ， 成 具 有 生 物 学 活 性 的 １ ２ Ｏ ２ ３ 生 ，５（ Ｈ） Ｄ 。 Ｔｐｌ ｉ ｔ ｌ 现 Ｖ ｏｉｋ ｅ ａｌ发 ｓ １ Ｄ在 哮 喘模 型 中有 抗 炎 症 作 用 ； ｅｅｅｘｅ ａ＿ 发 现 妊 娠 期 妇 女 增 加 摄 人 Ｖ Ｄ ｖｒ ｔ ｌ ｕ ２ Ｄ 可 以减 少儿 童早 期 哮喘发 病 。该实 验 通过建 立 哮喘 动 物模 型 ， 予 Ｖ ２进行 干预 ， 给 Ｄ 研究 哮 喘大 鼠体 内 炎性介 质 变化 ， 讨 Ｖ 探 Ｄ在 哮 喘预 防及 治 疗 方 面 的
沉 淀细胞 用 生理盐 水 洗 涤 离 心 ２次 ， 入 生 理 盐 水 加 １ｍ ， ｌ吹打混 匀成 细胞 悬液 ， 于 改 良牛 氏计数 板 进 置
较空 白对 照组 明显升高 ， Ｄ Ｖ ２组炎症指标较哮喘组减低 。结 论 Ｖ ２对哮 喘大 鼠的气道 炎症 有一 定的减轻作用 。 Ｄ 关键词 哮喘 ； 细胞 间黏 附分 子一； １ 白介素 ４； 维生素 Ｄ ２
度 脱水 ， 蜡包埋 、 片 ， 用 免 疫 组 化方 式 ｉ 定 肺 石 切 应 贝 ０ 组 织 中 ＩＡ １阳性 细胞 数 。一 抗 二 抗 等试 剂依 次 Ｃ Ｍ一 按 照步骤进 行 ， 选择 切 片 中 比较完 整 的支 气管 ， 机 随 选取 ５个 高倍 视野 ， 用彩 色 病 理 图文 分 析 系 统 测 采 定 ＩＡ １阳性 细 胞平 均光 密度值 。 Ｃ Ｍ．
发前 给予腹腔注射 Ｖ ２ 哮喘组及空 白对照组 给予注射生理 Ｄ ， 盐水 。观察大 鼠肺泡灌洗液 （ Ａ Ｆ 细胞计数 和分类 及 白细 ＢＬ） 胞介素 ４（Ｌ 含 量 ， 组 织 标 本 中 细 胞 间 黏 附 分 子一 Ｉ４） 肺 １ （Ｃ Ｍ一） Ｉ Ａ １ 阳性 细胞平 均光密度值 。结果 哮喘组炎 症指标
司 ） 氢 氧 化 铝 粉 （ 海 凌 峰 化 学 试 剂 有 限 公 司 ） ； 上 ；
行 细胞 计 数 。沉 渣 细 胞 涂 片 行 Ｈ Ｅ染 色 ， 少 计 数 至 ２０个 细胞 做细 胞分类 计 数 。 ０
１ ２ ３ 肺 组 织标 本 采 集及 ＩＡ １测 定 ．． Ｃ Ｍ． 取 右 中 肺 组织 ， 于 １ ％ 甲醛 溶 液 中 固定 、 经 过酒 精 梯 置 ０ 后
模型， Ｄ Ｖ ２及哮喘组于第 １８ １ 天分别给予无菌腹 、、５
腔 注射 １ ％ Ｏ Ａ １ｍ （ ０ Ｖ ｌ 内含 卵蛋 白 １０ ｍ ０ ｇ及 氢 氧 化 铝 １０ ｍ ） 敏 ； Ｄ ０ ｇ 致 Ｖ ２及 哮喘 组 大 鼠于第 １ 开 ６天
始， 放入 不 完全 密 闭玻 璃箱 （５ｃ × ０ｃ ２ ｍ） ３ ｍ ３ ｍｘ ０ｃ 中 ， 予 １ Ｏ Ａ雾 化 吸入 ， 天激 发 ３ ｎ 持续 给 ％ Ｖ 每 ０ｍｉ， 雾化 １周 ， 使其 出 现 打 喷 嚏 、 息 、 吸 急促 或 困难 喘 呼 等表 现 ， 部病 理 切 片行 Ｈ 肺 Ｅ染 色 判 断造 模 是 否 成 功 ； 照组 给予 生理 盐水 代 替 Ｏ Ａ进 行 激 发 。Ｖ ２ 对 Ｖ Ｄ 组 自第 １ ５天 开 始 首 次 给 予 Ｖ ２ ５×１ ／ ｋ Ｄ ［ ０Ｕ （ ｇ・ ｄ］ ） 腹腔 注射 Ｊ以后分 别 于第 １ 、９天激 发前 １ｈ ， ７１ 给 予 Ｖ ２ ５×１ ／ ｋ ｄ ］ Ｄ［ ０Ｕ （ ｇ・ ） 腹腔 注射 ， ３次 ， 共 哮 喘组及 对照 组给予 等 量生 理盐 水腹 腔 注射 。 １２２ 肺 泡灌洗 液 收集 、 淀细胞 计数 及 分类 于 ．． 沉 末 次 激发 后 给 予 ３ ％戊 巴 比妥 （． ／ Ｏ ） ０ ３ｍｌｌ０ｇ 腹腔 注射麻 醉 ， 固定 大 鼠， 胸 暴 露 双肺 及 气 管 ， 管插 开 气 入导管 ， 根部结 扎 右肺 ， 经插 管缓 慢注 入生 理盐 肺 后 水 ３ｍｌ 留 ３ ， 行肺 泡灌 洗 ， 复 ３次 ， 停 ０Ｓ进 反 回收率 在 ８ ％ 以上 ， ０ 回抽 液 体 放 入 离心 管 ，℃ 保存 ， ００ ４ １ ０ ｒｍｎ离 心 １ ｉ， 清 液 置 于 一８ ℃ 冰 箱 保 存 。 ／ｉ ０ ｍｎ 上 Ｏ
可行 性 。 １ 材料 与方 法
１１ 实 验 动 物 与 试 剂 清 洁 级 Ｓ ． Ｄ雄 性 大 鼠 ３ ０ 只， 体重 １０～１０ｇ 购 自安 徽 医科大 学 实验动 物 中 ２ ５ ， 心， 标记 后 随机分 为 ３组 ， 为哮 喘组 、 Ｄ 分 Ｖ ２组 、 白 空 对 照组 ， 组 １ 每 Ｏ只 ； 卵 白蛋 白 （ Ｖ （ ｉ ａ公 鸡 Ｏ Ａ） Ｓｇ ｍ
摘要 目的 的影 响。方法 探讨维生素 Ｄ （ Ｄ ） ２ Ｖ ２ 对哮喘大 鼠的气道炎 症 ３ ０只 ｓ Ｄ大 鼠随 机分 ３组 ， 中哮 喘组 和 其
１ ２ 方 法 ．
１２ １ 哮喘模 型 建 立 ．．
参 照 参 考 文献 制 备 哮 喘
Ｖ ２组用卵清 白蛋 白致敏激 发制备 哮喘模 型 。Ｖ ２组于 激 Ｄ Ｄ
・
４ ２・ １
安徽 医科大学 学报
Ａ ｔ ｎ ｅ ｉ ｔ ｄ ｉａｉＡ ｈ ｉ ０ ２Ａ ｒ４ （ ） ｃ Ｕ ｉ ｒ ｔ ｉＭｅｉｎ ｌ ｎ ｕ ａ ｖ ｓａ ｓ ｅ ｓ ２ １ ｐ ；７ ４
维生 素 Ｄ ２对哮 喘大 鼠肺组织 Байду номын сангаас Ａ １ Ｉ － Ｃ Ｍ－ 及 Ｌ４的影响
李 忠强 ， 王亚 亭
文 献 标 识 码 Ａ 文 章 编 号 １０ ０ ０—１ ９ （０ ２ ０ ０ １ ０ ４ ２ ２ １ ） ４— ４２— ３
维生 素 Ｄ（ ｉ ｍ ｎＤ， Ｄ） 固醇 类 衍 生 物 ， ｖｔ ｉ ａ Ｖ 为 主
要成 员有 Ｖ ２和 Ｖ ３ 这 ２种 Ｖ Ｄ Ｄ ， Ｄ在 体 内经 过 一 系 列代 谢 ， 成 具 有 生 物 学 活 性 的 １ ２ Ｏ ２ ３ 生 ，５（ Ｈ） Ｄ 。 Ｔｐｌ ｉ ｔ ｌ 现 Ｖ ｏｉｋ ｅ ａｌ发 ｓ １ Ｄ在 哮 喘模 型 中有 抗 炎 症 作 用 ； ｅｅｅｘｅ ａ＿ 发 现 妊 娠 期 妇 女 增 加 摄 人 Ｖ Ｄ ｖｒ ｔ ｌ ｕ ２ Ｄ 可 以减 少儿 童早 期 哮喘发 病 。该实 验 通过建 立 哮喘 动 物模 型 ， 予 Ｖ ２进行 干预 ， 给 Ｄ 研究 哮 喘大 鼠体 内 炎性介 质 变化 ， 讨 Ｖ 探 Ｄ在 哮 喘预 防及 治 疗 方 面 的
沉 淀细胞 用 生理盐 水 洗 涤 离 心 ２次 ， 入 生 理 盐 水 加 １ｍ ， ｌ吹打混 匀成 细胞 悬液 ， 于 改 良牛 氏计数 板 进 置
较空 白对 照组 明显升高 ， Ｄ Ｖ ２组炎症指标较哮喘组减低 。结 论 Ｖ ２对哮 喘大 鼠的气道 炎症 有一 定的减轻作用 。 Ｄ 关键词 哮喘 ； 细胞 间黏 附分 子一； １ 白介素 ４； 维生素 Ｄ ２
度 脱水 ， 蜡包埋 、 片 ， 用 免 疫 组 化方 式 ｉ 定 肺 石 切 应 贝 ０ 组 织 中 ＩＡ １阳性 细胞 数 。一 抗 二 抗 等试 剂依 次 Ｃ Ｍ一 按 照步骤进 行 ， 选择 切 片 中 比较完 整 的支 气管 ， 机 随 选取 ５个 高倍 视野 ， 用彩 色 病 理 图文 分 析 系 统 测 采 定 ＩＡ １阳性 细 胞平 均光 密度值 。 Ｃ Ｍ．
发前 给予腹腔注射 Ｖ ２ 哮喘组及空 白对照组 给予注射生理 Ｄ ， 盐水 。观察大 鼠肺泡灌洗液 （ Ａ Ｆ 细胞计数 和分类 及 白细 ＢＬ） 胞介素 ４（Ｌ 含 量 ， 组 织 标 本 中 细 胞 间 黏 附 分 子一 Ｉ４） 肺 １ （Ｃ Ｍ一） Ｉ Ａ １ 阳性 细胞平 均光密度值 。结果 哮喘组炎 症指标
司 ） 氢 氧 化 铝 粉 （ 海 凌 峰 化 学 试 剂 有 限 公 司 ） ； 上 ；
行 细胞 计 数 。沉 渣 细 胞 涂 片 行 Ｈ Ｅ染 色 ， 少 计 数 至 ２０个 细胞 做细 胞分类 计 数 。 ０
１ ２ ３ 肺 组 织标 本 采 集及 ＩＡ １测 定 ．． Ｃ Ｍ． 取 右 中 肺 组织 ， 于 １ ％ 甲醛 溶 液 中 固定 、 经 过酒 精 梯 置 ０ 后
模型， Ｄ Ｖ ２及哮喘组于第 １８ １ 天分别给予无菌腹 、、５
腔 注射 １ ％ Ｏ Ａ １ｍ （ ０ Ｖ ｌ 内含 卵蛋 白 １０ ｍ ０ ｇ及 氢 氧 化 铝 １０ ｍ ） 敏 ； Ｄ ０ ｇ 致 Ｖ ２及 哮喘 组 大 鼠于第 １ 开 ６天
始， 放入 不 完全 密 闭玻 璃箱 （５ｃ × ０ｃ ２ ｍ） ３ ｍ ３ ｍｘ ０ｃ 中 ， 予 １ Ｏ Ａ雾 化 吸入 ， 天激 发 ３ ｎ 持续 给 ％ Ｖ 每 ０ｍｉ， 雾化 １周 ， 使其 出 现 打 喷 嚏 、 息 、 吸 急促 或 困难 喘 呼 等表 现 ， 部病 理 切 片行 Ｈ 肺 Ｅ染 色 判 断造 模 是 否 成 功 ； 照组 给予 生理 盐水 代 替 Ｏ Ａ进 行 激 发 。Ｖ ２ 对 Ｖ Ｄ 组 自第 １ ５天 开 始 首 次 给 予 Ｖ ２ ５×１ ／ ｋ Ｄ ［ ０Ｕ （ ｇ・ ｄ］ ） 腹腔 注射 Ｊ以后分 别 于第 １ 、９天激 发前 １ｈ ， ７１ 给 予 Ｖ ２ ５×１ ／ ｋ ｄ ］ Ｄ［ ０Ｕ （ ｇ・ ） 腹腔 注射 ， ３次 ， 共 哮 喘组及 对照 组给予 等 量生 理盐 水腹 腔 注射 。 １２２ 肺 泡灌洗 液 收集 、 淀细胞 计数 及 分类 于 ．． 沉 末 次 激发 后 给 予 ３ ％戊 巴 比妥 （． ／ Ｏ ） ０ ３ｍｌｌ０ｇ 腹腔 注射麻 醉 ， 固定 大 鼠， 胸 暴 露 双肺 及 气 管 ， 管插 开 气 入导管 ， 根部结 扎 右肺 ， 经插 管缓 慢注 入生 理盐 肺 后 水 ３ｍｌ 留 ３ ， 行肺 泡灌 洗 ， 复 ３次 ， 停 ０Ｓ进 反 回收率 在 ８ ％ 以上 ， ０ 回抽 液 体 放 入 离心 管 ，℃ 保存 ， ００ ４ １ ０ ｒｍｎ离 心 １ ｉ， 清 液 置 于 一８ ℃ 冰 箱 保 存 。 ／ｉ ０ ｍｎ 上 Ｏ
可行 性 。 １ 材料 与方 法
１１ 实 验 动 物 与 试 剂 清 洁 级 Ｓ ． Ｄ雄 性 大 鼠 ３ ０ 只， 体重 １０～１０ｇ 购 自安 徽 医科大 学 实验动 物 中 ２ ５ ， 心， 标记 后 随机分 为 ３组 ， 为哮 喘组 、 Ｄ 分 Ｖ ２组 、 白 空 对 照组 ， 组 １ 每 Ｏ只 ； 卵 白蛋 白 （ Ｖ （ ｉ ａ公 鸡 Ｏ Ａ） Ｓｇ ｍ
摘要 目的 的影 响。方法 探讨维生素 Ｄ （ Ｄ ） ２ Ｖ ２ 对哮喘大 鼠的气道炎 症 ３ ０只 ｓ Ｄ大 鼠随 机分 ３组 ， 中哮 喘组 和 其
１ ２ 方 法 ．
１２ １ 哮喘模 型 建 立 ．．
参 照 参 考 文献 制 备 哮 喘
Ｖ ２组用卵清 白蛋 白致敏激 发制备 哮喘模 型 。Ｖ ２组于 激 Ｄ Ｄ
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４ ２・ １
安徽 医科大学 学报
Ａ ｔ ｎ ｅ ｉ ｔ ｄ ｉａｉＡ ｈ ｉ ０ ２Ａ ｒ４ （ ） ｃ Ｕ ｉ ｒ ｔ ｉＭｅｉｎ ｌ ｎ ｕ ａ ｖ ｓａ ｓ ｅ ｓ ２ １ ｐ ；７ ４
维生 素 Ｄ ２对哮 喘大 鼠肺组织 Байду номын сангаас Ａ １ Ｉ － Ｃ Ｍ－ 及 Ｌ４的影响
李 忠强 ， 王亚 亭