KNAUER高效液相色谱仪的规范操作
安捷伦高效液相色谱仪操作流程及注意事项
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安捷伦高效液相色谱仪的规范操作
安捷伦高效液相色谱仪的规范操作安捷伦高效液相色谱仪 (Agilent High Performance Liquid Chromatography，简称HPLC) 是一种常用的色谱分析仪器，广泛应用于化学、生物、药学等领域中的分析和研究工作。
为了确保正确、可靠地操作 HPLC 仪器，以下是一些规范操作的步骤和注意事项。
1.仪器准备-开启仪器电源，并等待仪器自检完成。
-检查仪器的梯度系统、进样系统、柱温控制系统、检测系统等是否正常。
-检查注射器、柱、检测器等是否清洁干净，并按需更换柱筒。
2.试剂准备-准备所需的溶剂、标准品和样品，并确保其纯度和浓度符合实验要求。
-制备规范的稀释液或内标溶液，以便进行质量控制和校准。
3.方法设置-设置流速、梯度、柱温、检测器波长等实验参数。
-设定样品进样量、进样方式和柱温控制方式。
-根据实验要求选择合适的检测器（如紫外检测器、荧光检测器等）。
4.柱的装置和平衡-根据实验需求选取合适的柱，并将柱安装在柱底座上。
-将导线连接到柱温控制系统，并设置柱温。
-选择适当的流动相溶剂，用它们预平衡柱，以确保柱达到稳定状态。
5.校正与质控-使用标准品进行系统灵敏度和线性范围的校正。
-定期进行质控分析，以检验仪器的准确性和精确性。
-根据需要，进行合适的质量控制和校正操作。
6.样品进样-根据实验要求选择合适的进样方式（如自动进样器、手动进样器等）。
-通过进样器吸取样品，并确保进样量准确无误。
-进行一定的进样准备，如过滤、稀释等。
7.开始分析-确保所有仪器参数正确设置，样品进样准备完毕，并进行柱的平衡。
-点击“开始”按钮，启动分析程序。
-监测分离曲线或结果，确保分析结果的准确性与可靠性。
8.数据分析与存储-持续监测和记录实时分析结果。
-对结果进行后处理和数据分析，如绘制色谱图、峰面积计算等。
-存储数据，以备后续分析和查阅。
9.仪器维护与清洁-使用完毕后，关闭仪器并断开电源。
-清洗注射器和柱等关键部位，以防止残留的样品引起交叉污染。
高效液相色谱仪的操作步骤及注意事项
高效液相色谱仪的操作步骤及注意事项一、操作步骤：1.开机前先将流动相过滤和超声：水流动相用混合滤膜（0.2μm）过滤,有机流动相用有机滤膜过滤，之后超声脱气15-20分钟。
（过滤的目的是除去流动相里的杂质，以免杂质进入色谱柱堵塞色谱柱；超声的目的是排除流动相里面的气体，以防气体进入色谱柱损害色谱柱，影响柱效能）注：试验过程中由于只有0.45μm的混合滤膜，第一次使用时感觉效果不好，于是过滤水时同时使用两张混合滤膜过滤水流动相。
2.超声结束后，将流动相放置到规定位置（1号泵接水流动相，2号泵接有机流动相），开机逐个排气（先启动泵，排气结束后再打开检测器）。
3.排气结束后，关闭所有排气阀。
先用纯有机流动相冲洗色谱柱20-30分钟，基线走稳之后，再打开水流动相（注意：水流动相和有机流动相流速之和为1ml/min），继续走基线，直到基线平稳。
注意：实验结束后，再用纯有机流动相冲洗色谱柱20-30分钟，冲出色谱柱内残留的样品物质，预防长时间不使用仪器样品的残留物质沉积在色谱柱内，导致下次使用难以冲出，色谱柱柱压偏高，基线不稳，出现大量鬼峰。
（不同规格的色谱柱其所允许的最大流速之和不同）4.走基线时，应将进样阀处于Load状态，用注射器进样时应快速进样，进样后将进样阀立即扳回到Inject状态，此时液相系统开始进入采样状态。
采样结束后，可在数据分析里面查看分析结果并可进行编辑，也可以在脱机状态下查看样品的分析结果并编辑。
二、使用中常见的问题及注意事项1.过滤时有时会出现流动相漏液。
可能的原因是滤膜放置不正确（有点偏）和接头有点错位，导致流动相从缝隙中漏出。
注意：操作时，应先向滤瓶内倒入少量流动相，观察是否漏液并开始过滤，若未漏液，再向滤瓶中添加流动相。
2.超声时，瓶外液体的液面应高于瓶内流动相的液面，否则流动相内的气体可能无法排出液体，气体仍然残留在流动相内，以致开机排气时无气泡排出。
3.开机排气结束后，应先将流动相流量调小，再关闭排气阀，否则会导致柱压瞬间升高超过压力上限，致使泵停止工作。
高效液相色谱法操作步骤
高效液相色谱法操作步骤
高效液相色谱法的操作步骤如下:
1. 过滤流动相并根据需要选择不同的滤膜。
溶剂必须为色谱纯，且溶剂及样品必须过膜（0.45μm）。
超声脱气30分钟以上。
2. 用流动相冲洗金属过滤器，然后将过滤器浸入储液罐的流动相中。
有一段时间没用或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。
3. 将储液罐放置在一定的高度，以避免由于搬运和其他操作人员的移动而造成不必要的跌落。
4. 然后按以下顺序依次启动高效液相色谱仪：泵→检测器→高效液相色谱软件→设置软件参数，如分析时间、检测波长、流速等。
5. 启动泵，运行5分钟，主要是为了排除系统中的气泡，结束后关闭所有排气阀。
6. 然后按照预先计划的速度，以固定的速率，如1mL/min左右，运行流动相，走基线，直到基线平稳。
7. 基线平稳后，在软件中设置样品的运行参数，如流速和分析时间等。
分析时间会因样品、流速、柱长等因素变化。
8. 设计走样方法。
9. 在进样和进样后操作的过程中，需要及时调整和监控各项参数。
高效液相色谱仪操作技巧及操作规程
高效液相色谱仪操作技巧及操作规程高效液相色谱仪操作技巧任何颗粒物进进高效液相色谱仪后都会在柱子进口端被筛板挡住，最后的结果是将柱子堵塞，表现出的特征是系统压力加添并使色谱峰变形。
因此，要实行各种防备措施，包括操纵步骤和商品仪器自身的各种过滤设计，努力防止或削减颗粒物进进高效液相色谱仪中，从而延长仪器和色谱柱的使用寿命，并进步数据的牢靠性。
在高效液相色谱仪中，颗粒物的紧要来源有三个途径：活动相、被测样品和仪器系统部件的磨损物。
1、被测样品使用针筒式过滤器不可能100%得到通过过滤器的被测样品，总会或多或少的丢失。
丢失来自这样几方面：过滤器滤膜的吸附、过滤器滤出的颗粒物上的吸附、针筒式滤膜过滤器与针筒连接处的渗漏等。
2、活动相无论是高效液相色谱仪HPLC级的水还是在试验室使用超纯水净化系统制备的水，最后一步也是通过0.2μm微孔滤膜。
任何一种缓冲液中加进了固体物，必定活动相过滤将。
少量杂质颗粒存在于活动相中必定成为残渣。
解决方法：2.1.活动相制备仅接受HPLC级液体时不需要过滤，反之全部活动相构成在使用前必需过滤。
2.2.在连接储液瓶和泵的输液管的末端进口接受下沉式过滤器（常见材质有熔融玻璃砂芯滤板和微孔金属的两种）也是很紧要的。
这个过滤器的规格为≥10μm的微孔物质，所以它不能取代活动相过滤步骤，但是它能除往系统中的尘土并保证储液瓶、输液管使用的牢靠性。
2.3.推举在HPLC系统中接受一个0.45或0.5μm的在线多孔过滤器，接在自动进样器和柱子之间，即使已使用了保护柱。
这个在线过滤器将成为挡板代替柱头的滤板，而且如接受一个玻璃砂芯滤板，既便宜，更换又便利（几分钟就可更换）。
若接受在线过滤，高效液相色谱仪检测每批样品开始前记录下压力值，当压力上升确定值，例如25%或加添500psi，应当更换玻璃砂芯滤板了，更换以后冲洗几分钟系统将恢复到原来的压力值。
3、仪器系统部件的磨损物最后，在高效液相色谱仪HPLC系统中颗粒物的另一个紧要来源是输液泵密封垫和进样阀旋转轴的磨损。
高效液相色谱仪操作规程
高效液相色谱仪操作规程1开机先打开电脑，再依次接通2695分离单元、检测器和打印机的电源（注：在打开2424蒸发光散射检测器电源之前，先开启气体供应）。
接通2695分离单元后，约20秒仪器自检，约1分钟后，显示主屏幕，此时继续各部件的初始化，待主屏幕上主标题区出现“Idle”仪器自检通过，进入待命状态。
2溶剂管理系统的准备2.1流动相的脱气确认所有溶剂管路都充满溶剂，按[Menu/Status]，进入“Status（1）”屏幕，光标选“Degasser”按[Enter]显示选项屏幕，Mode为“on”。
2.2启动溶剂管理系统2.2.1干启动当溶剂的管路是干的或是需要更换溶剂时，在“Status（1）”屏幕下，按[Direct Function]，光标选中“Dry Prime”，按[Enter]，显示“Dry Prime”屏幕，按欲启动的溶剂管路的屏幕键，如[Open A]，光标选“Duration”，按数字键输入时间（一般为5分钟），按[Continue]，待限定时间结束后，重复操作，使实验所需的各溶剂管路均启动、排气并充满流动相。
2.2.2湿启动在“Status（1）”屏幕下，光标选“Composition”中欲使用的流动相，输入100%，按[Direct Function]，光标选“Wet prime”，按“Enter”，显示Wet prime”屏幕，输入流速和时间（5ml/min和5min）按[OK]。
待限定时间结束后，对每种流动相重复操作。
3样品管理系统的准备A管带黄色标记、B管带蓝色标记号、C管带红色标记、D管带绿色标记，绿色管为冲洗泵头用，白色管为冲洗进样器用，所用溶剂均为甲醇：水=50%（v/v）。
将样品瓶插到样品盘合适的位置，打开样品仓门，显示“Door is Open”屏幕，装入样品盘，按[Next]，直至所有样品盘装毕，关仓门。
4编辑分析方法及执行样品分析表4.1创建项目双击电脑桌面图标“Empower”，用户名输入“system”密码输入“manager”选中操作项目和色谱系统→确定。
高效液相色谱仪操作使用过程中的注意事项
高效液相色谱仪操作使用过程中的注意事项一，高效液相色谱仪操作过程：1、开机操作：（1）、打开电源，用Harb相连接时，注意Harb电源，打开计算机，打开Bootp Server（一般启动时已打开）；（2）、自上而下打开个组件电源，Bootp Server里显示有信号时（有六行字符），打开工作站（先打开On line）；（3）、打开冲洗泵头的10％异丙醇溶液的开关（需用针捅抽），控制流量大小，以能流出的最小流量为准；（4）、注意各流动相所剩溶液的容积设定，若设定的容积低于最低限会自动停泵，注意洗泵溶液的体积，及时加液；（5）、使用过程中要经常观察仪器工作状态，及时正确处理各种突发事件。
2、先以所用流动相冲洗系统一定时间（如所用流动相为含盐流动相，必须先用水冲洗20分钟以上再换上含盐流动相），正式进样分析前30min 左右开启D灯或W灯，以延长灯的使用寿命；3、建立色谱操作方法，注意保存为自己命名的Method，勿覆盖或删除他人的方法及实验结果；4、使用手动进样器进样时，在进样前和进样后都需用洗针液洗净进样针筒，洗针液一般选择与样品液一致的溶剂，进样前必须用样品液清洗进样针筒3遍以上，并排除针筒中的气泡；5、溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎，在更换流动相时注意保护，当发现过滤头变脏或长菌时，不可用超声洗涤，可用5%稀硝酸溶液浸泡后再洗涤；6、实验结束后，一般先用水或低浓度甲醇水溶液冲洗整个管路30分钟以上，再用甲醇冲洗。
冲洗过程中关闭D灯、W灯；7、关机时，先关闭泵、检测器等，再关闭工作站，然后关机，最后自下而上关闭色谱仪各组件，关闭洗泵溶液的开关；8、使用者须认真履行仪器使用登记制度，出现问题及时向老师报告，不要擅自拆卸仪器。
（续）1、操作过程若发现压力很小，则可能管件连接有漏，注意检查。
当出现错误警告（各组件指示灯均为红色），一般为漏液，其中一个感应器中已有溶剂，漏液故障排除后，擦干，点击On line操作界面中的Instrument/System Off，然后再点击操作界面中的Instrument/System On即可。
高效液相色谱仪操作规程
高效液相色谱仪操作规程高效液相色谱仪（HPLC）是一种重要的分析仪器，广泛应用于化学、生命科学、环境监测等领域。
为了保证色谱仪的正常运行和准确分析结果，需要遵守以下操作规程：1. 准备工作a. 首先，确保色谱仪及其附件的电源已接通，并确认仪器处于正常工作状态。
b. 检查溶剂桶内的溶剂是否充足并无杂质，并确认管路连接正常。
c. 检查流动相液位是否正常，并调整泵的流速和梯度程序参数。
2. 样品制备和准备a. 样品应充分溶解并过滤净化，以避免样品中的杂质对色谱分离产生干扰。
b. 选择合适的进样方式（自动或手动），并根据进样方式调整进样器的参数。
3. 进样器操作a. 将样品注射器插入进样口，并注意不要损坏色谱柱。
b. 设置进样体积和进样速度等参数，并进行一次空白进样以清洗进样器。
4. 色谱柱准备a. 定期检查色谱柱是否损坏，并根据需要更换。
b. 根据实验需要选择合适的色谱柱，并注意记录色谱柱的批号和使用次数。
5. 柱温控制a. 根据分析需要选择合适的柱温，并使用温度控制系统保持恒定。
b. 注意避免温度突变和波动，以保证分析结果的准确性和重复性。
6. 检测器操作a. 根据需要选择合适的检测器，如紫外-可见光检测器（UV-Vis）、荧光检测器、电导检测器等。
b. 设置检测器的参数，如波长、增益和灵敏度，并进行基线校准。
7. 数据采集与处理a. 启动数据采集系统，并设置采集参数，如采样率、数据类型和运行时间等。
b. 对采集到的数据进行处理和分析，如峰识别、定量分析和峰面积计算。
8. 清洗和维护a. 实验结束后，关闭色谱柱和进样器的阀门，并用溶剂清洗色谱柱和进样器，以防止堵塞和降低杂质残留。
b. 清洗完成后，注意关闭色谱仪的电源，并按照要求对色谱柱和进样器进行维护和保养。
总结：高效液相色谱仪的操作规程包括准备工作、样品制备、进样器操作、色谱柱准备、柱温控制、检测器操作、数据采集与处理以及清洗与维护等。
遵守这些规程可以确保色谱仪的正常运行和准确分析结果，提高实验效率。
高效液相色谱仪操作规程
高效液相色谱仪操作规程1．开关机顺序●开机顺序：打开LC各单元电源－控制器电源－电脑－LC-Solution工作站，开机后能听到“哔”声。
●关机顺序：与开机顺序相反，即先关闭LC-Solution工作站－控制器－LC各单元电源2．流动相及样品的准备●流动相配制所用的有机相必须是色谱级的，所用的水必须是双重蒸馏水。
流动相必须经0.45um 的微孔滤膜过滤后方能进入LC系统。
水和有机相所用的微孔滤膜不同，有机相（如甲醇）的过滤用F膜，水用水膜。
●样品溶液亦必须用0.45um 的微孔滤膜过滤后才能进样。
3．工作站的进入及系统的开启●双击桌面上的“labsolution”图标，选择“operation”项并单击，在弹出窗口后按OK进入工作站。
●首先打开A、B泵上的排空阀（open方向旋转180度）。
然后按二泵面板上的“purge”键开始自动清洗A、B流路3分钟，然后在分析参数设置页中设置流速1ml/min，BCONC 0％，并设置合适的检测波长，柱温，停止时间。
在完成后点击“Download”将分析参数传输至主机。
●分析方法的保存：选择file－save method file as－取名保存文件●系统的启动：点击“instrument on/off”键开启系统（此时泵开始工作。
4．进样准备●观察基线及柱压，待基线平直（－5～80mv），压力稳定（0.5Mpa内）时方可进样。
5. 进样●点击助手栏中的“single start”键，弹出对话框，在对话框中输入“sample name”“method”“data file”等。
●填完后点击“start”，出现触发窗口，进样，仪器开始自动采样分析。
6. 数据文件的调用及查看●点击助手栏中的“Postrun analysis”键，打开数据处理窗口。
●打开文件搜索器，定位至数据文件所在文件夹，选择文件的类型，双击文件名即可打开数据文件（此时可以查看峰面积、保留时间等参数）。
高效液相色谱（HPLC）操作规程
高效液相色谱（HPLC）操作规程一操作1.准备工作⑴流动相的准备应根据实验选择合适的流动相，所有流动相原则上应选择HPLC级别，水应选择超纯水，并应保持新鲜。
所有流动相在进行实验前应经过相应的脱气处理，脱气时间应根据流动相的量相应增加，但一般超声脱气不应少于20min。
在实验过程中应保证足够的流动相，流动相的量与流速、洗脱时间等有关，应根据具体情况进行准备。
⑵样品的准备对于待测的样品，在进样之前应经过滤膜过滤，根据样品的不同选择不同种类、不同直径的滤膜。
2. 排气打开purge阀，键入stop→prime，直到无气泡停止stop。
B泵同样操作。
关闭purge阀。
3. 开机打开电脑主机和显示器，点击Galaxie，进入工作站。
选择系统，点击Agilent HPLC.点击overview，可观察仪器各部分状态。
打开泵及检测器的电源。
二 分析方法建立1.进入工作站系统界面。
点击数据，文件→新建→方法，出现视窗，点击前进即可。
键入方法名和相应描述→点击ok后出现方法文档。
2.210的设定点击控制→210图标→Elution。
选择流动相A和B的种类。
Compressibility、Pressure Constant以及Refill Time属于内置参数无需设定。
设置A、B流动相的比例，通过改变B的比例设定。
如需梯度洗脱，则根据方法对Equilibrium Time 和Hold Time进行设定。
点击Misscellaneous。
Start Mode选择Inject Trigger on Pump A。
End of Sequence 选择Leave Pump on。
210设定结束。
3.325的设定点击325图标，选择Signal。
其中Detector Bunch Rate建议设置成2（10Hz），Noise Monitor Length建议设定成64，Response Time建议设定0.5。
根据方法设定相应波长。
高效液相色谱仪使用与操作规程
4 、检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正
常。
第二步、开 机
接通电源，依次开启不间断电源、四 元泵、自动进样器、柱温箱、检测器，待 泵和检测器自检结束后，打开电脑显示器、
主机，最后打开色谱工作站。
一）参数设定
1、 波长设定： 2 、流速设定： 3 、流动相规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积
的流动相。
检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。
观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。如
超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按检查管路后再操
作。
观察基线变化。如果冲洗至基线漂移<0.01mV/min，噪声
二、样品
1、采用过滤或离心方法处理样品，
确保样品中不含固体颗粒； 2、用流动相或比流动相弱（若为反
相柱，则极性比流动相大；若为
正相柱，则极性比流动相小）的 溶剂制备样品溶液，尽量用流动
相制备样品液；
3、手动进样时，进样量尽量小，使 用定量管定量时，进样体积应为 定量管的3～5倍；
第四步、注意事项
人的方法及实验结果；
3、使用手动进样器进样时，在进样前和进样后都需用洗针液洗净进样针筒， 洗针液一般选择与样品液一致的溶剂，进样前必须用样品液清洗进样针
筒3遍以上，并排除针筒中的气泡；
4、溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎，在更换流动相时注意保护，当发现过 滤头变脏或长菌时，不可用超声洗涤，可用 5%稀硝酸溶液浸泡后再洗
四、出现肩峰或分叉
1.样品体积过大
1.用流动相配样,总的样品体积小于第一峰 的15% 2.样品溶剂过强 3.柱塌陷或形成短路通道 4.柱内烧结不锈钢失效 2.采用较弱的样品溶剂 3.更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件
高效液相的标准操作规程(SOP)
WATERS高效液相的标准操作规程（SOP）1流动相的处理1.1过滤溶剂溶剂在使用前要用过滤器过滤，有机相和纯水相通常可以不过滤，如果使用固体化学试剂（缓冲盐）配制流动相，过滤特别重要，不能让固体微粒污染泵，阻塞进样器和柱头过滤片。
同时一些缓冲盐溶液过夜后易生菌，使用前要抽滤或者重新配制。
实验室应有水溶性和脂溶性两种过滤膜供选择（反光面朝上），过滤水相时，要先用1-2ml 水润湿过滤膜，有助于快速抽滤。
1.2保持储液瓶的清洁用普通溶剂瓶作流动相储液器应不定期废弃瓶子，最后一次应用HPLC级的水或溶剂清洗，不能在清洗过程中留下污迹。
流动相瓶子要保持清洁。
1.3保证溶剂的质量一定要用HPLC级的溶剂，水也应达到HPLC级，同样也要使用高纯度的缓冲盐。
1.4 故障及解决方法1.4.1 流动相脱气不充分流动相受热，或者流动相不同组分混合时会有气体产生，气泡进入泵内引起压力波动，增加噪音，色谱图上出现毛刺。
可试用下列方法解决问题：a、流动相再脱气；b、采用更有效的脱气方法（如抽滤）或两种方法配合使用；c、改系统内混合为系统外预混合。
1.4.2 流动相供给不畅流动相用完，管道中吸入气体引起泵压力不稳。
应经常观察储液器中流动相的量，加足流动相保证所有的样品分析完毕。
输液管道上装滤头沉至瓶底，储液器盖上留一小孔正好夹住进液管，使其不能上下移动。
过滤器阻塞会引起管道和泵腔进气泡，压力不稳。
压力不稳时，如果已经排除流动相混合不均匀的状况，则观察滤头外部是否长毛（一般水相滤头易长毛），去掉过滤器后如果系统运转正常，说明已找出问题，是过滤器被微粒所阻塞或长霉。
解决方法：a、换上新的过滤器（滤头）。
b、将滤头拆下，先用纯水超声15min，再换50%甲醇水溶液超声，再换纯甲醇超声，如果是水相的滤头，在安装前还需要用纯水超声。
如果上述还不能解决问题，则使用10%稀硝酸水溶液超声滤头，可起到除去菌类微生物的作用。
1.4.3 检测器和流动相管路被污染由于污染，噪音越来越大，检测器被污染。
高效液相色谱仪操作规程
高效液相色谱仪操作规程
《高效液相色谱仪操作规程》
一、实验目的
本实验旨在通过高效液相色谱仪分析样品，准确测定目标化合物的含量，并学习高效液相色谱仪的操作方法和技巧。
二、实验设备
1. 高效液相色谱仪
2. 注射器
3. 色谱柱
4. 移液管
5. 色谱仪软件
三、操作步骤
1. 打开高效液相色谱仪的电源并进行系统初始化，启动色谱仪软件。
2. 调整流速，进样量等参数，使得实验条件符合要求。
3. 将样品通过移液管注入色谱柱中，注意避免样品泡沫和气泡的产生。
4. 设置色谱条件，如梯度洗脱，流速等，启动色谱分析。
5. 记录实验数据和结果，并进行数据处理和分析。
6. 清洗色谱仪，保持设备清洁。
四、实验注意事项
1. 在操作色谱仪时，要严格按照操作步骤进行，严禁随意更改参数。
2. 在进行样品进样时，要小心操作，避免产生气泡和样品泡沫。
3. 在进行色谱分析时，注意梯度洗脱条件的设置，保证分析结果准确。
4. 在实验结束后，及时清洗色谱仪，保持设备干净。
五、实验结果
根据实验数据和结果，可以得出目标化合物的含量和纯度，并进行结果的解释和分析。
通过《高效液相色谱仪操作规程》的学习，使我们更加熟悉高效液相色谱仪的操作方法和技巧，能够准确进行样品分析，为科研工作的开展提供了重要的技术支持。
高效液相色谱仪的规范操作
安捷伦高效液相色谱仪的规范操作1使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气20min。
根据待检样品的需要更换合适的色谱柱（柱进出口位置应与流动相流向一致）和定量环。
配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45μm滤膜过滤。
检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常将待测样品按要求前处理，准备HPLC 所需流动相，检查线路是否连接完好，废液瓶是否够用等。
2打开计算机,进入中文Windows XP画面,并运行控制仪器软件的程序。
打开1200 LC 各模块电源。
待各模块自检完成后，双击[Instrument 1 Online]图标，化学工作站自动与1200LC通讯，进入的工作站画面。
3从[视图]菜单中选择[方法和运行控制]画面, 点击[视图]菜单中的[显示顶部工具栏]，[ 显示状态工具栏]，[系统视图],[样品视图]，使其命令前有[√]标志，来调用所需的界面。
4把流动相放入溶剂瓶中。
打开冲洗阀。
点击[泵]图标，点击[设置泵…]选项，进入泵编辑画面。
设流速：5ml/min，点击[确定]。
点击[泵] 图标，点击[控制…]选项，选中[启动]，点击[确定] ，则系统开始冲洗，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续冲洗，直到所有要用通道无气泡为止。
点击[泵] 图标，点击[控制…]选项，选中[关闭]，点击[确定]关泵，关闭冲洗阀。
点击[泵]图标，点击[设置泵…选项]，设流速：1.0ml/min。
点击泵下面的瓶图标，如下图所示（以单元泵为例），输入溶剂的实际体积和瓶体积。
也可输入停泵的体积，点击[确定]。
5从[方法]菜单中选择[编辑完整方法…] 项，如下图所示选中除[数据分析]外的三项，点击[确定]，进入下一画面。
在[方法注释]中加入方法的信息（如：测试方法）。
点击[确定]，进入下一画面。
在[流速]处输入流量,如1ml/min，在[溶剂B]处输入80.0,(A=100-B) ,也可[插入]一行[时间表] ,编辑梯度。
高效液相色谱仪操作规程
高效液相色谱仪操作规程
一、所需流动相经过滤、脱气处理后待用。
安装好色谱柱。
二、检查供电电源是否稳定，各部件连接是否牢固。
三、开启仪器检测器和泵电源，待检测器电源指示灯由黄灯变成绿灯后，开启
仪器工作站，即双击桌面上图标LCwin1.0。
四、点击工作站中控制采集，点击开启，待仪器自检通过后，进入仪器控制采
集界面。
五、依次用甲醇、甲醇：水=2：8、流动相进行冲洗色谱系统，每次更换更换溶
液时，均需拧开放空阀，选择菜单泵下的快速冲洗模式，选定合适的时间进行冲洗，赶走泵内气泡。
确定泵内无气泡后，停止冲洗模式，关闭放空阀。
六、更换换上流动相后，按样品分析条件设置选择合适的流速、波长。
待色谱
设备达到平衡状态（柱压稳定，工作站基线稳定，一般需30-40min）后，即可进样分析。
七、分析完毕后，流动相中存在缓冲盐等溶剂，需先用甲醇：水=2:8，进行冲洗
至少30min，再用甲醇冲洗，待柱压降至正常值（依色谱柱而定，即柱压稳定后），停泵。
柱压降为零后关闭检测器和泵的电源。
八、样品分析应做好原始纪录，内容包括分析样品名称、送样时间、分析时间、
样品编号、检测数据、报告结果、报告时间、送样单位、分析员以便统计和查阅。
九、仪器如出现故障，应及时报告专业维修单位或专职维修人员，未经专业维
修培训或未取得维修资格证书的不能进行维修工作。
十、仪器室内严禁吸烟或进行任何无关明火操作。
仪器室内应配备二氧化碳灭
火器，分析人员应能正确操作使用。
KNAUER高效液相色谱仪的规范操作
KNAUER高效液相色谱仪标准操作1. 目的：明确KNAUER高效液相色谱仪的规范操作，确保数据的准确性。
2. 范围：适用于KNAUER高效液相色谱仪。
3. 职责：检验人员对此负责。
4.操作规程：4.1. 系统组成：本系统由1个HPLC溶剂输送泵、手动进样阀、K-1001紫外-可见检测器、N2000色谱数据工作站和电脑等组成，另外还包括打印机、不间断电源等辅助设备。
4.2.准备4.2.1. 准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气20min。
4.2.2. 根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）。
4.2.3. 配制样品和标准溶液，用合适的0.45μm滤膜过滤。
4.2.4. 检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。
4.3. 开机：接通电源，依次开启不间断电源、泵、检测器，待泵和检测器自检结束后，打开打印机、电脑显示器、主机，最后打开色谱工作站。
4.4. 参数设定4.4.1. 波长设定：在检测器显示初始屏幕时，按方向键至波长处，按上下键确定波长值。
4.4.2. 流速设定：在泵显示初始屏幕时，按方向键至流速处，用数字键输入所需的流速（柱在线时流速一般不超过1ml/min）。
4.4.3. 最大柱压设定：在泵显示初始屏幕时，按方向键至柱压处，用数字键输入最大柱压。
4.5.更换流动相并排气泡4.5.1.将管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中；4.5.2. 逆时针转动泵的排液阀180°，打开排液阀；4.5.3. 按泵的[purge]键，用弯头注射器吸取流动相；4.5.4. 将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。
4.5.5. 如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。
4.6. 平衡系统4.6.1. 按《N2000色谱数据工作站操作规程》打开“在线色谱工作站”软件，输入实验信息并设定各项方法参数后，按下“数据收集”页的[查看基线] 按钮。
4.6.2. 按泵的[START STOP]键，泵将启动，用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。
安捷伦高效液相色谱仪操作说明
安捷伦高效液相色谱仪把持说明之南宫帮珍创作一、校枪及样品处置1. 校枪仪器：两个小烧杯、分析天平、移液枪1000μL、100μL步伐：翻开分析天平预热, 一只烧杯放到称量盘上调零, 一只装入纯水.将移液枪1000μL、100μL调至950μL、50μL, 分别吸取纯水称质量, 如偏年夜或偏小, 调节移液枪直至准确到0.001g.（如枪使用过久或气密性欠好, 可以准备一个小烧杯装入纯水,每次先轻轻沾湿枪口, 甩失落水或在用卫生纸吸取口上的水, 再插上枪头使用.）注意慢吸慢放, 不要挂珠.2. 样品处置：用1.5mL离心管取0.5mL发酵液, 取出样品后, 首现在离心机上离心（13000rap/min 3min）.然后将样品稀释20倍, 取950μL纯水、50μL发酵液于离心管中.混匀后在离心机上离心（13000rap/min 3min）.准备自动进样瓶（瓶中放上内衬管）, 取200μL待测液盖紧盖子.按顺序放到自动进样盘中.二、开机1、仪器各组件将在线脱气器、泵：四元、进样器：自动进样器（六通阀）、柱温箱、检测器：示差折光检测器开关翻开.翻开计算机,进入Windows XP 画面,并运行CAC Server法式, 翻开色谱仪各组件电源, 待显示已联上各组件的信息及各模块自检完成后, 双击Instrument 1 Online , 图标翻开工作站.化学工作站自动与1200LC通讯.流动相:将流动相（一般不主张使用偏酸、偏碱的流动相）放入溶剂瓶中, 翻开冲刷阀, 设流速为2ml/min, 单击确定 , 再依次单击泵→控制, 选中启动, 单击确定, 则系统开始冲刷, 至管路无气泡为止, 切换管路反复把持至所需管路均无气泡.在“控制”选项中选“关闭”, 关闭泵, 关闭冲刷阀.单击泵下面瓶图标, 输入溶剂的实际体积和瓶体积.每次四元泵开始前, 要翻开冲刷阀阀门以5ml/min的流速冲刷10分钟, 使脱气机与泵之间的流动相从冲刷阀流出, 以免隔夜的流动相损伤色谱柱.每次进样检测前, 要用流动相冲刷色谱柱30分钟, 到达柱温前20min流速设为0.2ml/min, 达柱温后再改为0.6ml/min.待1—1.5h检测器的基线稳定方可进行进样检测；检测结束后, 色谱柱要先用水冲刷20分钟, 然后用甲醇或乙腈冲刷至少20分钟,以延长色谱柱的使用寿命.绝对禁止偏酸、偏碱的流动相以及缓冲液在色谱柱中过夜.三、编纂分析方法新方法建立：法式菜单显示绿色, 即可进行参数设置及把持泵参数设定：设定流速、比例、运行时间、平衡时间、泵辅助设定（梯度）等.点击确定进入下一画面自动进样器参数设定：设定进样量（5μL）、抽取位置（调节针高度 3.0mm）、进样方式等.“序列”→序列参数→子目录（日期：年月日时间）“序列表”：拔出/批量输入向导→“追加”、“拔出”→“样品位置”、“开始位置”、“增量”、“拔出行数”标准进样：只能输入进样体积, 此方式无洗针功能.洗针进样：可以输入进样体积和洗瓶位置此方式针从样品瓶抽完样品后会在洗瓶中洗针.柱温箱参数设定：测按时75℃, 反冲时80℃.（在”温度”下面的方框内输入所需温度,并选中它,点击”更多>>”键,选中“与左侧相同”使柱温箱的温度左右一致, 点击“确定”进入下一界面.检测器参数设定－示差参比池冲刷：10min（校零）.不需要每次都冲刷.温度设置50℃（不要设很高, 与检测器温度相立即可）选中点击确定进入下一画面方法保管单击方法另存为输入一—方法名, 如test 单击确认选择已有方法：点击【Method】, 点击【Load method】选项, 选取已存的各种把持方法.四、样品分析与收集数据将样品放于样品盘中相应位置, 所有的样品均需廓清.“序列”→“序列参数”：依照自动进样盘上的样品瓶的顺序编写参数（样品瓶位置、名称、方法）.待仪器显示Ready, 基线平稳, 从【Run control】菜单中选择【Run Method】, 开始进样分析.或点击“开始”开始进样分析.数据处置：单击【View】菜单, 单击【Data analysis】选项, 进行数据分析.单击【View】菜单, 单击【Method and Run control】选项, 回到样品分析界面.数据分析方法编纂从File 菜单选择Load signal 选中您的数据文件名, 单击Ok积分：从“积分”中选择“积分”,如积分结果不理想,再从菜单中选择“积分事件”选项选择合适的斜率灵敏度、峰宽、最小峰面积、最小峰高从积分菜单中选择积分选项则数据被积分如积分结果不理想则修改相应的积分参数直到满意为止单击左边图标将积分参数存入方法五、标准曲线的绘制1.称取葡萄糖、果糖、蔗糖(恒重）各1g准确到, 稀释到1000mL容量瓶中.2.将标准溶液摇匀, 用离心管取糖标液, 准备自动进样瓶（瓶中放上内衬管）, 取200μL待测液盖紧盖子.3.设置：将样品放于样品盘中相应位置, 所有的样品均需廓清.“序列”→“序列参数”：依照自动进样盘上的样品瓶的顺序编写参数（样品瓶位置、名称、方法、进样量:相应成梯度的量）.用浓度和峰面积回归, 就获得了标准曲线7、关机冲刷系统：反相柱用10％的甲醇水冲刷系统30分钟, 再用100％甲醇冲刷系统20分钟, 然后关泵, 正相柱先用合适溶剂冲刷, 后用柱保管液冲刷.退收工作站, 关闭计算机.关闭10％异丙醇溶液控制阀.关闭仪器各组件关失落电源开关8、注意事项⑴、色谱柱使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书, 注意适用范围, 如pH值范围、流动相类型等；必需使用呵护柱；色谱柱长时间不用时, 柱内应布满溶剂, 两端封死保管.⑵、流动相使用前必需过滤, 不要使用多日寄存的蒸馏水（易长菌）.⑶、仪器运行时, 泵头必需用10%异丙醇水溶液虹吸冲刷, 不能干涸.⑷、注意各流动相所剩溶液的容积设定, 若设定的容积低于最低限会自动停泵.⑸、对手动进样器当使用缓冲溶液时要用水冲刷进样口同时挪动转移进样阀数次每次数毫升⑹、若使用含盐流动相, 开机时必需先用10%甲醇水溶液冲刷20分钟以上再换上含盐流动相.⑺、溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎, 在更换流动相时注意呵护, 当发现过滤头变脏或长菌时, 不成用超声洗涤, 可用35%稀硝酸溶液浸泡后再洗涤.⑻、检测器的灯有使用寿命限制, 一般在正式进样分析前30min 左右开启D灯或W灯, 分析结束, 立即关灯.⑼、使用双泵时, A、B、C、D四相中, 若所用流动相中有含盐流动相, 则A、D（进液口位于混合器下方）放置含盐流动相, B、C （进液口位于混合器上方）放置不含盐流动相.9、如何防止溶剂瓶内溶剂过滤器的梗塞及其处置请严格执行溶剂过滤请勿使用多日寄存的蒸馏水及磷酸盐缓冲液如果应用许可可在溶剂中加入0.0001---0.001M的叠氮化钠.在溶剂瓶内溶剂的上方小流量连续吹氩气,以隔绝空气防止使溶剂瓶流露在直射阳光下尽量使用琥珀色的溶剂瓶盛放水溶液或磷酸盐缓冲液梗塞后的处置法方法：将过滤头从组件中取下在35%硝酸液中浸泡1h, 然后用二次蒸馏水冲刷干净.不能超生清洗.10、泵的维护⑴、流动相使用前必需脱气过滤⑵、使用缓冲盐时要加在线Seal-wash选项⑶、关机前反相色谱柱用10%的甲醇水冲刷系统20分钟, 然后用有机溶剂冲刷系统10分钟, 然后关泵.正相色谱柱用适当的溶剂冲刷.⑷、及时更换Purge Valve内的过滤芯, 当翻开Purge Valve时压力高于10bar 标明过滤芯已堵⑸、使用合适的密封圈：标准密封圈能适合于年夜大都应用.但使用正相溶剂最好使用聚四氟乙烯密封圈, 泵的压力限制最年夜压力设为200bar.⑹、使用梯度比例时的注意事项：当盐溶液与有机溶剂溶液混合时盐溶液能与有机溶剂溶液完全混溶而不会呈现沉淀.由于在比例阀的混合点重力作用使盐颗粒沉淀下来通常阀A接水相/盐溶液D接有机溶剂此法连接可有效使盐回落到盐溶液中并被溶解若倒置过来盐可能落在有机溶剂中呈现问题当使用缓冲盐溶液和有机溶剂时推荐将缓冲盐通道接在A通道上有机溶剂通道直接接在A通道的上方D通道上按期用水冲刷所有的通道以除去阀口上可能呈现的盐沉淀11、自动进样器使用注意使用自动洗针功能自动洗针功能可以把法式设置为“带有洗针的进样”,或将自动洗针功能包含在进样器法式中.当使用自动洗针功能时, 进样针在。
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KNAUER高效液相色谱仪标准操作
1. 目的：明确KNAUER高效液相色谱仪的规范操作，确保数据的准确性。
2. 范围：适用于KNAUER高效液相色谱仪。
3. 职责：检验人员对此负责。
4.操作规程：
4.1. 系统组成：本系统由1个HPLC溶剂输送泵、手动进样阀、K-1001紫外-可见检测器、N2000色谱数据工作站和电脑等组成，另外还包括打印机、不间断电源等辅助设备。
4.2.准备
4.2.1. 准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气20min。
4.2.2. 根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）。
4.2.3. 配制样品和标准溶液，用合适的0.45μm滤膜过滤。
4.2.4. 检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。
4.3. 开机：接通电源，依次开启不间断电源、泵、检测器，待泵和检测器自检结束后，打开打印机、电脑显示器、主机，最后打开色谱工作站。
4.4. 参数设定
4.4.1. 波长设定：在检测器显示初始屏幕时，按方向键至波长处，按上下键确定波长值。
4.4.2. 流速设定：在泵显示初始屏幕时，按方向键至流速处，用数字键输入所需的流速（柱在线时流速一般不超过1ml/min）。
4.4.3. 最大柱压设定：在泵显示初始屏幕时，按方向键至柱压处，用数字键输入最大柱压。
4.5.更换流动相并排气泡
4.5.1.将管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中；
4.5.2. 逆时针转动泵的排液阀180°，打开排液阀；
4.5.3. 按泵的[purge]键，用弯头注射器吸取流动相；
4.5.4. 将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。
4.5.5. 如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。
4.6. 平衡系统
4.6.1. 按《N2000色谱数据工作站操作规程》打开“在线色谱工作站”软件，输入实验信息并设定各项方法参数后，按下“数据收集”页的[查看基线] 按钮。
4.6.2. 按泵的[START STOP]键，泵将启动，用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。
4.6.3. 检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。
4.6.4. 观察泵屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。
如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按4.4.5操作。
4.6.
5. 观察基线变化。
如果冲洗至基线漂移<1mV/min，噪声为<0.1mV时，可认为系统已
达到平衡状态，可以进样。
4.7.进样
4.7.1. 进样前按检测器[AUTO ZERO]键调零，按软件中[零点校正] 按钮校正基线零点，再按一下[查看基线] 按钮使其弹起。
4.7.2. 用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量，从进样器中打入（在2秒钟内打入）。
4.8.收据采集：采用N2000在线色谱工作站。
4.9. 液相色谱日常维护
4.9.1. 贮液器
清洁是保持流动相贮液器正常使用的关键，要尽可能使用HPLC级的溶剂和试剂含有缓冲盐和非HPLC级的流动相一定要通过0.45μm的过滤器以除去其中的微粒物质。
改变流动相时应防止交叉污染，陈旧的流动相和用久了的试剂瓶应定期废弃，防止生长微生物和组分改变。
贮器内壁定期清洗，里面的附件要经常更换。
4.9.2.泵
泵的密封圈是最易磨损的部件，密封垫圈的损坏可引起系统的许多故障。
采取下列措施可以延长垫圈的寿命：
A每天要把泵中的缓冲液体洗干净，防止盐沉积，泵要浸在无缓冲液的溶液或有机溶剂中；
B用HPLC级试剂；
C用烧结不锈钢沉子。
要注意防止因泵阻塞造成压力过高而损坏柱塞杆或烧坏电机。
4.9.3.进样器
停机后要用溶剂冲洗干净进样器内残留的样品和缓冲盐，防止无机盐沉积和样品微粒造成阀转子面磨损或阻塞，严禁用气相色谱那样的尖针头进样。
4.9.4.色谱柱
防止柱性能下降有以下几方面的措施：
A溶剂的化学腐蚀不能太强；
B避免微粒在柱头沉降；
C泵上要装压力限制器，防止压力过高冲击大；
D流动相pH>7时用大粒度同种填料作预柱；
E柱头加烧结片不锈钢滤片，需要时加保护柱；
4.9.
5.检测器
要保持检测器清洁，每天用后连同色谱柱柱一起冲洗。
提倡不定期用强溶剂反向冲洗检测池（拆开柱）。
用脱过气的流动相，防止空气泡卡在池内。
检测器灯有一定的寿命，不用时不要打开灯。
5.0. 当仪器出现故障时应及时与厂家联系，使用人员不得擅自拆开维修。
5.1. 使用人员应经过培训的且熟练操作仪器，每次使用应进行使用登记。