2010大一暑假实验报告提取分离试验

10年7月18日星期日雨

按照陈老师说的，我们今天开始做黄酮分离的预试实验，大家每人各取20g粉碎过的蕨菜，包扎好放在干燥的索氏提取器中。接好在铁架台上，最上面接冷凝管，中间接所氏提取器，下面接平底烧瓶，接口一定要配套，是磨口的。蕨菜粉末袋要包好装在连通管顶的下端，以便于每次冷凝下来的水都能覆盖满粉末，从而充分浸泡，脱色。然后在冷凝管进水雨出水管口接上橡皮管，进水管橡皮管另一端套紧水龙头管口，等水浴锅温度上升到近50度才打开水龙头放水。

接下来迅速往烧瓶里倒入其2/3~3/4的乙醚，我快速倒了乙醚。那刺鼻味简直让人窒息，加之有毒，易爆炸，使人麻醉，我是百般小心，才避免了它的危害。倒完乙醚立刻将烧瓶接好，乙醚瓶要立刻盖紧，以防挥发。

脱脂装置开始正常运行了，注意水浴锅内水不能过少，温度保持

原样。只要等着其流出液体变为无色即可。过了好几个小时，终于完了，关掉水浴锅，取下装置，将乙醚包紧，留着处理。滤纸包仍置于所氏提取器中，放在空气流通的地方让其干燥。

中文名称：

旋转蒸发器

英文名称：

rotary evaporator

定义：

一种快速液体样品浓缩的装置。样品在球形的玻璃容器中加热、减压，并不断地旋转增大蒸发表面积，加快蒸发速度。

所属学科：

生物化学与分子生物学(一级学科) ；方法与技术(二级学科)

普通蒸馏最大的不同就是通过旋转，增大溶剂的蒸发面积，使蒸发更加顺畅！

现在的旋转蒸发仪也可以进行减压蒸馏，通过减压，还可以补充蒸发的液体而不需要用方法:

1.高低调节:手动升降,转动机柱上面手轮,顺转为上升,逆转为下降.

电动升降,手触上升键主机上升,手触下降键主机下降.

2.冷凝器上有两个外接头是接冷却水用的,一头接进水,另一头接出水,一般接自来水,冷凝水温度越低效果越好.上端口装抽真空接头,接真空泵皮管抽真空用的.

3.开机前先将调速旋钮左旋到最小,按下电源开关指示灯亮,然后慢慢往右旋至所需要的转速,一般大蒸发瓶用中,低速,粘度大的溶液用较低转速.烧瓶是标准接口24号,随机附500ml,1000ml两种烧瓶,溶液量一般不超过50%为适宜.

注意事项:

1.玻璃零件接装应轻拿轻放,装前应洗干净,擦干或烘干.

2.各磨口,密封面密封圈及接头安装前都需要涂一层真空脂.

3.加热槽通电前必须加水,不允许无水干烧.

4.RE-52B必须使(19)拧入保险孔内保险,以免损坏烧瓶.

5.如真空抽不上来需检查

(1)各接头,接口是否密封

(2)密封圈,密封面是否有效

(3)主轴与密封圈之间真空脂是否涂好

(4)真空泵及其皮管是否漏气

7月19日星期一晴

天气好转，经过一夜的烘干，我的蕨菜包是完全干了。所以可以重新组装装置进行提纯。重新找了一个冷凝管和圆底烧瓶，用橡皮

塞连接，并将蕨菜包打开，粉末倒入圆底烧瓶里，并加百分之七十的乙醇溶解其中，一切就绪后，打开水龙头进行冷凝。水浴锅温度要调为70度。就这样让酒精帮助脱脂，两三个小时后取下将烧瓶。用布氏漏斗过滤，再将残渣加乙醇继续脱脂，每隔两小时过滤一次，共做三次。乙醇要配好。获得干燥的蕨菜粉放好继续提纯。今天我们还对大孔树脂进行活化。

树脂在使用前必须进行预处理，具体方法如下：

1、树脂装入交换器后，用洁净水反洗树脂层，展开率为50-70%，直至出水清晰、无气味、无细碎树脂为止。

2、用约2倍树脂体积的4-5%HCl溶液，以2m/h的流速通过树脂层。全部通入后，浸泡4-8小时，排去酸液，用洁净水冲洗至出水呈中性，冲洗流速为10-20m/h。

3、用约2倍树脂体积的2-5%NaOH溶液，按上面进HCl溶液的方法通入和浸泡。排去碱液，用洁净水冲洗至出水呈中性，冲洗流速同上。

酸、碱溶液若能重复进行2-3次，则效果更佳。

经预处理后的树脂，在第一次投入运行时应适当增加再生剂用量，以保证树脂获得充分的再生。璃件是否有裂缝,碎裂停止蒸馏操作。

7月20日21日22日星期二雨 1.先不分段直接用100%乙醇纯化，再分段萃取：石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取。共得8个组分，TLC检测。（尹）

2.先纯化，30%、60%、100%乙醇洗脱，再分段萃取：环己烷/石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取。共得12个组分，TLC检测。（胡）

3.先萃取，再纯化。先用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，再不分段纯化，用乙醇直接冲柱。共得10个组分，TLC检测。（唐）

4.先萃取，再纯化。先用环石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，后分段纯化，用30%、60%、100%乙醇洗脱。共得12个组分，TLC检测。（袁）

先萃取，再纯化。先用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，再不分段纯化，用乙醇直接冲柱，再用TLC检测。

共得10个组分

对所得粗提液显除去其.含有的百分之七十的乙醇，要用旋转蒸发仪

进行旋蒸，.

先用70度，除去乙醇，再用80度除去一半水即可。要将提取液放在烧瓶里开启旋转蒸发仪旋蒸。使用旋转蒸发仪时，要先开温度开关，调节温度。再开电机旋钮。旋转转速要适宜，稍慢。这样就得到无乙醇的提取液，收集在另一个烧瓶中。

得到的液相再分别用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，各做五次。萃取后这四种试剂再用旋转蒸发仪旋蒸以回收再利用。萃取时水相与待萃取相体积比为1：1，先加待萃取剂于250ml的分液漏斗中，再加等体积萃取剂，经过震荡充分混合后并排完气，放在铁架台上。先静置一会儿，使其充分分层。然后打开旋钮让下层液体流下。石油醚、乙酸乙酯、正丁醇都在上层，而氯仿密度比水大，故在下层。萃取出黄酮。萃取时会出现许许多多问题，阻挡你继续实验。如：出现乳胶，导致无法正常分层。我们可以用玻璃棒是气泡破掉，消除乳胶。还可以加点水和有机试剂，使其分层。甚至取下溶液用超声波震碎等等。有时还可以单独将乳化层作为一个相提取出来，如果乳化现象较为严重的话。就这样萃取得到四个萃取后的向和水相，一共五个相。

接着就是把五个萃取相用旋转蒸发仪旋蒸蒸干，以回收期有机试剂。旋蒸前将放气孔关闭，调好温度，接好烧瓶。注意这五种旋蒸时水浴锅温度的调试。石油醚的回收温度是65~70度，氯仿为50度左右，乙酸乙酯为60度左右，正丁醇是85~90度。前面已经得知乙醇回收温度为70度左右，乙醚为20多度，而睡则为80度左右。然后就是慢慢的旋蒸了，由于旋蒸仪不够，我们四个排队使用，效率不是