实验六 柱色谱 次甲基蓝与甲基橙的分离
有机化学实验教案--6.柱色谱分离实验
重庆工业职业技术学院教案由于甲基橙和亚甲基蓝的结构不同,极性不同,吸附剂对它们的吸附能力不同,洗脱剂对它们的解析速度也不同,极性小、吸附能力弱、解析速度快的亚甲基蓝先被洗脱下来，而极性大、吸附能力强、解析速度慢的甲基橙后被洗脱下来，从而使两种物质得以分离。
本实验以硅胶为吸附剂，95%乙醇作为洗脱剂，先洗出亚甲基蓝，再用蒸馏水作洗脱剂把甲基橙洗脱下来。
甲基橙结构式亚甲基蓝结构式二、实验操作1.仪器锥形瓶、玻璃漏斗、色谱柱2.试剂柱层析硅胶、脱脂棉、乙醇（95%）甲基橙、亚甲基蓝。
H2O∶ 95 %乙醇 = 1∶ 1 (A 液)0. 2mol· L -1HCl∶ 95 %乙醇 = 1∶ 1 (B 液)3、装色谱柱：（1）取一支色谱柱，在柱子的收缩部塞一小团脱脂棉花将色谱柱垂直固定在铁架台上。
(2) 关闭活塞，向柱中倒入蒸馏水（也是洗脱剂，至柱体积的1/2）（3）填吸附剂：称取10g 硅胶于小烧杯中 ,加入 15mL 蒸馏水 ,用玻璃棒调好通过漏斗慢慢装入玻璃柱, 使其逐渐沉入底部。
用洗耳球敲打柱身使硅胶装填紧密，打开活塞，用小锥型瓶承接, 控制滴速为1 滴／秒,装完后在上面加一层脱脂棉（，操作时要注意吸附剂始终不能露出液面）。
4、加样：当液面刚好流至脱脂棉平面相切时，立刻关闭活塞，加入 5mL左右的A 液 ,当硅胶面又将要露出时 ,关紧活塞 ,用量筒准确加入 0. 50mL 以 A 液做溶剂的混合液(含甲基橙和亚甲基蓝各为 0. 400 g· L -1)5、洗脱：待此混合液将要渗入柱内时 ,立即用 A 液洗脱 ,此时可以观察到有鲜明的黄、蓝两条色带形成。
黄色的甲基橙色带随洗脱剂的加入不断下移 ,而其顶部蓝色带不移动 ,当黄色带到达柱底部时 ,更换接受器 ,全部收集此黄色带 ,洗脱时间约 10 min。
此后改用B 液做洗脱剂 ,这时可看到蓝色带开始下移 ,当亚甲基蓝色带到达底部时 ,更换接受器 ,全部收集此蓝色带 ,洗脱时间约 30 min。
色谱分离技术实验思考题及实验指导
附件3-5色谱分离技术的演变和发展（张卫*****************.cn）一、本探究实验需要讨论的问题：A组：(1) 什么是色谱分离技术？它经历怎样的发展、演变过程？(2) 简要说明色谱分析方法的基本原理，固定相和流动相的作用分别是什么？(3) 柱色谱的色谱柱如何进行填充？填充过程中需要注意哪些问题？(4) 简述柱色谱常用的洗脱剂及其洗脱能力的次序，如何选择合适的洗脱剂？采用柱色谱分离甲基橙和次甲基蓝混合染料时，为什么先用95%乙醇溶液作为洗脱剂，再用去离子水做洗脱剂进行洗脱，如果两者换一下次序是否可以？为什么？(5) 设计实验：利用纸层析法进行植物色素的提取与分离任意采集叶片、果皮等有色植物适量，经过烘干、研磨、溶剂浸提、离心分离、点样、展开等操作，提取与分离植物色素。
设计要求：通过文献查阅，判断所选的植物色素样本所含的色素种类有哪些？可以选取哪些合适的提取和分离色素的有机溶剂？如何分离各种不同的色素？设计相应的实验方法和步骤，给出所用的试剂及仪器。
拟提供的试剂与仪器：石油醚、丙酮、乙醇、碳酸钙、烘箱、纸层析滤纸、表面皿、培养皿、研钵、离心机等；B组：(6) 常用的色谱分析方法有哪些？分别有怎样的特点和适用范围？(7) 薄层色谱中，最常用的固定相（吸附剂）有哪些？其颗粒的大小对于分离效果有何影响？影响固定相活性的主要因素有哪些？(8) 薄层色谱的分离效果的评价指标是什么？如何进行计算？若化合物本身无色，薄层色谱的色谱图中组分迁移产生的展开斑点位置如何确定？试举例说明两种常用的确定方法。
(9) 采用薄层色谱分离顺式偶氮苯和反式偶氮苯的混合物时，若分别采用20:1环己烷-乙酸乙酯和10:1环己烷-乙酸乙酯作为展开剂，展开效果有何不同？为什么？(10) 设计实验：利用纸层析法进行植物色素的提取与分离任意采集叶片、果皮等有色植物适量，经过烘干、研磨、溶剂浸提、离心分离、点样、展开等操作，提取与分离植物色素。
柱色谱实验教学中甲基橙和亚甲基蓝的分离和测定方法
柱色谱实验教学中甲基橙和亚甲基蓝的分离和测定方法柱色谱是一种常见的分离和纯化化学物质的方法，本实验旨在通过柱色谱法对甲基橙和亚甲基蓝进行分离和测定。
通过实验发现，使用甲醇-水（70:30）混合溶剂作为流动相，可以实现对两种染料的有效分离。
同时，通过紫外可见光谱测定，可以得出染料的浓度和吸光度等相关参数。
该实验可以有效提高学生对柱色谱分离和测定方法的理解和掌握。
关键词：柱色谱，甲基橙，亚甲基蓝，分离，测定引言柱色谱是一种常见的分离和纯化化学物质的方法，其基本原理是通过样品在柱中的吸附、分配和排出等过程，实现对不同成分的分离。
柱色谱法有很多种，如薄层色谱、高效液相色谱、气相色谱等，其应用范围广泛，可用于生物、医药、化工等领域。
本实验旨在通过柱色谱法对甲基橙和亚甲基蓝进行分离和测定，以提高学生对柱色谱分离和测定方法的理解和掌握。
实验设计实验仪器和试剂仪器：柱色谱仪、分光光度计试剂：甲基橙、亚甲基蓝、甲醇、水实验步骤1. 准备样品溶液将甲基橙和亚甲基蓝各取适量，分别加入到10ml的容量瓶中，用甲醇-水（70:30）混合溶剂稀释至刻度线，摇匀后备用。
2. 柱层析实验将样品溶液注入柱色谱仪中，使用甲醇-水（70:30）混合溶剂作为流动相，调整流速至0.5ml/min，记录吸光度曲线。
根据染料的吸光度曲线，确定各染料的保留时间和峰面积，并计算出各染料的纯度和浓度等相关参数。
3. 分光光度计测定将染料样品分别加入到分光光度计中，测定其在不同波长下的吸光度。
根据吸光度和浓度的线性关系，计算出染料的浓度和摩尔吸光系数等参数。
实验结果1. 柱色谱实验使用甲醇-水（70:30）混合溶剂作为流动相，可以实现对甲基橙和亚甲基蓝的有效分离。
甲基橙的保留时间为3.2min，峰面积为0.034，纯度为98.2%，浓度为0.042mg/ml；亚甲基蓝的保留时间为5.7min，峰面积为0.047，纯度为99.1%，浓度为0.034mg/ml。
精细化工实验-柱层析分离甲基橙与亚甲基蓝
柱层析分离甲基橙与亚甲基蓝目的：1．理解柱层析分离有机化合物的原理及在精细有机分离中的应用；2．掌握柱层析分离的操作步骤；3．了解有机化合物层析分离的原理及应用。
原理：二十世纪初，人们就开始应用柱色谱法来分离复杂的有机物。
目前，仍是一种分离复杂有机化合物的有效方法。
柱色谱法涉及到被分离的物质在液相和固相之间的分配。
因此，可以把它看是一种固—液吸附色谱法。
固定相是固体，液体样品通过固体时，由于固体表面对液体中各组分的吸附能力不同而使各组分分离开。
图1 柱色谱柱法示意图柱色谱法是通过色谱柱(如图l)来实现分离的。
色谱柱内装有固体吸附剂(固定相)，如氧化铝或硅胶。
液体样品从柱顶加入，在柱的顶部被吸附剂吸附。
然后，从柱的顶部加入有机溶剂(作洗提剂)。
由于吸附剂对各组分的吸附能力不同，各组分以不同的速率下移，被吸附较弱的组分在流动相(洗提剂)里的百分含量比被吸附较强的组分要高，以较快的速率向下移动。
此过程与气相色谱过程相似。
各组分随溶剂以不同的时间从色谱柱下端流出，用容器分别收集之。
如各组分为有色物质则可以直接观察到不同颜色谱带，但如为无色物质，则不能直接观察到谱带。
有时一些物质在紫外光照射下能发出荧光，则可用紫外光照射。
有时则可分段集取一定体积的洗提液，再分组签定。
吸附剂选择吸附剂时，需考虑到以下几点：它不溶于所使用的溶剂；与要分离的物质不起化学反应，也不起催化作用等；具有一定的组成；一般要求是无色的；颗粒大小均匀。
颗粒越小，则混合物的分离程度越好，但溶液或溶剂流经柱子的速度也就越慢，因此要根据具体情况选择吸附剂。
最广泛使用的吸附剂是活性氧化铝，非极性的一些物质通过氧化铝的速率较极性物质为快。
有一些物质由于被吸附剂牢牢吸附，将不能通过。
活性氧化铝不溶解于水，也不溶于有机溶剂，含水的与无水的物质都可使用这种吸附剂。
吸附剂的吸附能力不仅取决于吸附剂本身，也取决于在色谱分离中所用的溶剂。
因此，对不同物质，吸附剂按其相对的吸附能力可粗略分类如下：(1) 强吸附剂：低水含量的氧化铝，活性炭。
介绍一个零排放的有机化学实验-柱色谱分离亚甲基蓝和甲基橙
介绍一个零排放的有机化学实验-柱色谱分离亚甲基蓝和甲基
橙
尹庚明;杨园园;陈汝萍
【期刊名称】《广东化工》
【年(卷),期】2018(045)012
【摘要】以层析用中性氧化铝为吸附剂,95％乙醇、蒸馏水为洗脱剂,分离亚甲基蓝和甲基橙,实验用时约15 min.实验结束后,所用试剂除蒸馏水外均可回收重复使用.【总页数】1页(P245)
【作者】尹庚明;杨园园;陈汝萍
【作者单位】五邑大学化学与环境工程学院,广东江门 529020;五邑大学化学与环境工程学院,广东江门 529020;五邑大学化学与环境工程学院,广东江门529020
【正文语种】中文
【中图分类】O62
【相关文献】
1.GO-PANI复合材料对亚甲基蓝和甲基橙吸附性能 [J], 王艳;郭勇;王存月;杨永芳
2.柱色谱实验教学中甲基橙和亚甲基蓝的分离和测定方法 [J], 张枫;宋学英;卢映霞;朱莹;刘锰;刘永利
3.三维花形层状双金属氢氧化物对甲基橙和亚甲基蓝的去除 [J], ZHANG Ping;PAN Xuemei;WANG Qinyuan;SUN Zhaoyi;MA Ruonan
4.氧化石墨烯对甲基橙/亚甲基蓝的吸附性能探究 [J], 刘雅娟; 王悦; 张锋
5.普鲁兰多糖菌丝球对亚甲基蓝和甲基橙染料的吸附 [J], 陈洁; 魏云霞; 赵苑; 赵丹因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
柱色谱法分离甲基橙和亚甲基蓝
柱色谱法分离甲基橙和亚甲基蓝实验目的1. 了解柱色谱的分离原理及应用。
2. 掌握柱色谱法的实验操作技术。
实验原理甲基橙和亚甲基蓝均为指示剂，它们的结构式如下:甲基橙亚甲基蓝由于甲基橙和亚甲基蓝的结构不同,极性不同,吸附剂对它们的吸附能力不同,洗脱剂对它们的解析速度也不同。
极性小，吸附能力弱，解析速度快的亚甲基蓝先被洗脱下来;而极性大，吸附能力强，解析速度慢的甲基橙后被洗脱下来，从而使两种物质得以分离。
本实验以中性氧化铝作为吸附剂，95%乙醇作为洗脱剂，先洗出亚甲基蓝，再用蒸馏水作洗脱剂把甲基橙洗脱下来。
主要装置装柱装样品亚甲基蓝先被洗脱甲基橙后被洗脱实验步骤1. 取口径10mm，长200mm洁净干燥的层析柱一支，在活塞处涂上一层薄薄的凡士林，向一个方向旋转至透明，竖直安装在铁架台上。
关闭活塞，向柱中倒入95%乙醇至柱高4/5处，通过一个干燥的玻璃漏斗慢慢地加入10g中性氧化铝，待氧化铝粉末在柱内有一定沉积高度时，打开柱下活塞，调节流速约1滴/秒，并用木棒轻轻敲打柱身下部，使氧化铝装填紧密。
装满100mm高度后在上面加一层石英砂(约5mm)。
在此过程中应始终保持吸附剂沉积面上有一段液柱。
2. 打开柱下活塞放出柱中乙醇，待液面降至刚好与石英砂平面相切时，立即关闭活塞，向柱内滴加10滴甲基橙和亚甲基蓝的混合物。
打开活塞，待液面降至刚好与石英砂平面相切时，用少量95%乙醇沿加样处冲洗柱内壁。
再打开活塞将液面降至与石英砂平面相切。
依上法重复操作直至柱壁和顶部的淋洗剂均无颜色。
3. 用95%乙醇作为洗脱剂，打开柱下活塞，控制流出速度为1滴/秒。
观察柱中色带下行情况。
随着色带向下行进逐渐分为两个色带，下方的为蓝色，上方为黄色。
当蓝色带(亚甲基蓝)到达柱底时更换接收瓶接收(在此之前接收的无色淋洗剂可重复使用)。
当蓝色带接收完后更换接收瓶接收空白带，并改用蒸馏水继续洗脱甲基橙。
当空白带接完后再换接收瓶接收黄色带(甲基橙)。
柱色谱实验教学中甲基橙和亚甲基蓝的分离和测定方法
资料范本本资料为word版本，可以直接编辑和打印，感谢您的下载柱色谱实验教学中甲基橙和亚甲基蓝的分离和测定方法地点：__________________时间：__________________说明：本资料适用于约定双方经过谈判，协商而共同承认，共同遵守的责任与义务，仅供参考，文档可直接下载或修改，不需要的部分可直接删除，使用时请详细阅读内容柱色谱实验教学中甲基橙和亚甲基蓝的分离和测定方法柱色谱是色谱分析方法中的一种 ,由于柱色谱能够较大量地有效分离和提纯有机化合物 ,所以广泛应用在化学分析 ,药物研究 ,天然物质提取 ,医学研究等领域。
在大学有机实验教学中 ,往往都设有柱色谱实验课。
在实验教材中 ,一般采用中性氧化铝为固定相分离甲基橙和亚甲基蓝的混合物[1～3 ],但此方法分离的色谱带有扩散现象 ,影响分离效果;且实验中只有定性观察 ,不进行定量操作。
在本实验中 ,我们改用硅胶为固定相 ,选用了新的样品溶剂和洗脱剂 ,在很大程度上抑制了色带扩散 ,而且色谱带分明 ,大大提高了分离效果。
在实验中还增加了定量测定的内容 ,通过计算回收率 ,可对同学们的实验情况进行评判 ,使你们能够认真收集分离物质 ,不断地提出问题 ,调动了你们做实验的积极性。
1 实验材料和方法1. 1 材料分光光度计(岛津 UV22201) ,玻璃色谱柱。
柱色谱用硅胶(100～140 目) ,甲基橙(指示剂) ,亚甲基蓝(指示剂) ,H2O∶ 95 %乙醇= 1∶ 1 (A 液) ,0. 2mol· L - 1HCl∶ 95 %乙醇= 1∶ 1 (B 液) 。
1. 2 甲基橙标准曲线的绘制用A 液做溶剂 ,配制甲基橙系列标准溶液 ,在λmax = 450nm处测得甲基橙吸光度(表 1) 。
1. 3 亚甲基蓝标准曲线的绘制用B 液做溶剂 ,配制亚甲基蓝系列标准溶液 ,在λmax = 661nm 处测得亚甲基蓝吸光度(表1) 。
柱色谱法分离甲基橙和碱性湖蓝BB
柱色谱法分离甲基橙和碱性湖蓝BB一、实验目的1、学习柱色谱法技术的原理和方法；2、掌握柱色谱技术分离甲基橙和碱性湖蓝BB的方法；3、掌握甲基橙的定量方法。
二、实验原理柱色谱有吸附色谱和分配色谱两种。
实验室中最常用的是吸附色谱，其原理是利用混合物中各组分在固定相上的吸附能力和流动相的解吸能力不同，让混合物随流动相流过固定相，发生反复多次的吸附和解析过程，从而使混合物分离成两种或多种单一的纯组分。
甲基橙为橙黄色的鳞状晶体或粉末，稍溶于水而成黄色，不溶于乙醇，用作pH值指示剂，变色范围3.1~4.4，其结构式为：碱性湖蓝BB又称为亚甲基蓝，可含有3~5个结晶水，三水合物是暗绿色结晶，其稀的乙醇溶液为蓝色，其结构时为：1、柱色谱装置色谱柱是一根下端具塞的玻璃管，柱高和直径比应为8：1。
在柱底部塞脱脂棉，上盖石英砂，中间是固定相，最上层再铺一层石英砂。
（如没有色谱柱，可用一根25mL酸式滴定管代替。
）2、装柱装柱前应先将色谱柱洗干净，进行干燥，在柱底铺一小块脱脂棉，再铺约0.5cm厚的石英砂，然后进行装柱。
装柱分为湿法装柱和干法装柱两种。
（1）湿法装柱将吸附剂（氧化铝或硅胶）用洗脱剂中极性最低的洗脱剂调成糊状，在柱内先加入约3/4高的洗脱剂，再将调好的吸附剂边敲边倒入柱中，同时，打开下旋活塞，在色谱柱下面放一个干净并且干燥的锥形瓶或烧杯，接收洗脱剂。
当装入的吸附剂有一定的高度时，洗脱剂下流速度变慢，待所有吸附剂全部装完后，用流下来的洗脱剂转移残留的吸附剂，并将柱内壁残留的吸附剂淋洗下来。
（注意若填装不紧密或留有气泡层等现象，会影响渗透速度和显色均匀。
但如果填装时过分敲击，又会因太紧密而流速太慢。
）在此过程中，应不断敲打色谱柱，以使色谱柱填充均匀并没有气泡。
柱子填充完成后，在吸附剂上端覆盖一层约0.5cm厚的石英砂。
在整个色谱柱过程中，柱内洗脱剂的高度始终不能低于吸附剂最上端，否则柱内会出现裂痕和气泡。
（加沙子目的是在加料时不致把吸附剂冲起，影响分离效果，若无沙子也可用玻璃毛或剪成比柱子内径略小的滤纸压在吸附剂下面。
柱色谱法分离甲基橙和亚甲蓝
柱色谱法分离甲基橙和亚甲蓝
主讲教师：王双燕色谱法又称为层析法，是目前广泛被运用分离纯化化合物的常用方法，按操作方式可以分为柱色谱、薄层色谱等。
柱色谱是将分离材料放入玻璃柱中，以适当的洗脱剂进行洗脱而使不同成分得以分离的方法。
常用的装柱方法有干法装柱和湿法装柱两种方法，我们本次试验使用湿法装柱分离两种染料。
操作步骤分为装—上样—洗脱与收集—后处理。
实验器材：铁架、铁夹、玻璃柱、玻璃棒、敲振棒、脱脂棉、烧杯、滴管、试管、试管架、硅胶、洗脱剂。
实验操作：（1）装柱：用烧杯称取6.0g硅胶，加入洗脱剂中，搅拌至无气泡，玻璃柱用铁夹固定在铁架台上，在管柱下方放一锥形瓶，承接洗脱液，玻璃柱内塞入一小团棉花防止固定相流出，用洗脱剂将棉花润湿，以赶走气泡，将搅拌好的固定相迅速倒入管柱中，用少量洗脱剂将粘附于管壁上的固定相冲洗至管柱中，沉降过程中可用敲振棒轻敲管壁赶出气泡，让固定相平整紧实，若不紧实会影响分离效果，若洗脱液流动较慢，可用干净的滴管将之从管中上方吸出，减少等待时间。
（2）上样：当洗脱液面和硅胶面平行时，将样品沿管壁靠近硅胶面顺着管壁环形小心加入，当被分离的甲基橙和甲基蓝混合试液下移至被固定相平面是，可沿管壁加入洗脱剂。
（3）洗脱与收集：加入洗脱剂至柱顶端，洗脱过程需要注意随时补充洗脱剂，切勿使洗脱剂流干，这会使管中填充材料内有空气，影响分离。
收集洗脱液，每3ml收集一支试管，注意收集先后顺序，也可以在试管壁上贴上标签，在收集过程中注意观察记录颜色变化，直至所有颜色被洗脱出来。
（4）后处理：实验结束后得到多只不同颜色的试管，试管内的收集液必须必须进一步用薄层色谱法分析以判定分离效果。
洗净试管，收拾好台面即可以离开。
实验项目柱层析分离甲基橙和次甲基蓝染料
九、实验方法指示及注意事项
1．色谱柱一定要装填紧密。若柱中装填时留有气泡或各部分松紧不匀时，会
影响渗滤速度和显色的均匀。
2．加料时须沿柱壁绕圈加入，防止局部样品过多，或者把吸附剂冲起而影响分离效果。
3．在分离过程中，自始至终须使整个吸附剂浸泡在溶剂中。否则当柱中溶剂或溶液流干时，就会使柱身干裂，影响渗滤和显色的均一性。
装柱可以采用湿法或干法，干法装柱是将干吸附剂倒入ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ内，填装均匀，
然后加入少量溶剂。无论采用哪种装柱都不要使吸附剂有裂缝或气泡，否则影响
分离效果，一般说来湿法装柱较干法紧密均匀。
本实验采用湿法装柱。
1、色带有重叠现象，即柱内出现彩色色带，这是由于样品进入带较宽，扩散现象严重之故，但由于甲基橙与次甲基兰极性相差甚大，随着洗脱进行，基本上可以得到单一化合物。
1．从分子结构看出,甲基橙中含—SO3Na基团,它具有比次甲基兰更大的极性，因此在用乙醇洗脱时只有次甲基兰可被洗脱下来，极性较大的甲基橙必须用水作洗脱剂。
2．装柱的紧密与否,样品吸收带是否狭对柱层析分离影响颇大.
加入样品量不宜过大,否则会引起过载,分离效果不好,将含样品的溶液进入吸附柱时,必须待样品液全部被吸附剂吸附后,才能用少量洗脱剂洗涤,洗涤液又全部进入柱后,才能开始用大量溶剂洗脱,否则样品色带宽大,在洗脱过程中,会因扩散现象造成色带彼此重叠,使分离难以进行。色谱柱装填要紧密、均匀,疏松或不均匀的柱子均会引起涌流扩散现象,导致分离效果欠佳。
酸>醇,胺,硫醇>酯,醛,酮>烃 >卤化物,醚>烯>饱和烃
强吸附性的化合物要用强极性溶剂来洗脱。
作为洗脱剂的溶剂要求其具有一定极性,适合于被分离物的分离,体积尽量要小,此外要求易挥发,易除去(乙醚等挥发性太大的溶剂不合适)。
柱色谱分离染料实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除柱色谱分离染料实验报告篇一：柱色谱实验报告柱色谱分离实验报告篇二：色谱实验报告色谱实验报告项目一：气相色谱流出曲线的研究一：实验目的1、2、3、掌握气相色谱仪的基本结构及工作原理理解色谱流出曲线中各参数的表示方法掌握气相色谱中定性、定量分析方法二、实验原理气相色谱的固定相是涂布在载体表面的固定液，试样气体由载气携带进入色谱柱，与固定液接触时，气相中各组分便溶解在固定液中。
随着载气的不断通入，被溶解的组分又从固定液中挥发出来，挥发出的组分随载气向前移动时又再次被固定液溶解。
由于各组分在固定液中的溶解能力不同，随着载气的流动，各组分在两相间经过反复的溶解-挥发过程，经过一段时间，最终实现彼此分离。
色谱图是指被测组分从进样开始，经色谱柱分离到组分全部流过检测器后，所产生的响应信号随时间分布的图像。
色谱图上有一组色谱峰，每每个峰代表试样中的一个组分。
色谱流出曲线是以组分流出色谱柱的时间或载气流出的体积为横坐标，以检测器对各组分的电信号响应值为纵坐标的一条曲线。
三、仪器与试剂1、仪器气相色谱仪2、试剂乙醇、正丁醇四、实验步骤1、调试气相色谱仪2、分别进行进样3、进乙醇和正丁醇的混合物样品，分别记录保留时间五、实验记录1、色谱条件:50m柱经：320μm固定液：聚乙二醇载气：氮气检测器类型：fid检测器温度：150℃柱温：95℃气化室温度：165℃气体流量：载气30ml／min2、色谱图参数六：实验结果分析从实验结果所占百分比可以看出该实验出峰效果较明显，乙醇先出峰，正丁醇后出峰。
在做实验时我们应注意一些问题，比如说乙醇和正丁醇要按一定的比例来混合，柱温要设置合理，最低要高于正丁醇的沸点，也不能过高，否则会使组分不易分开；过低封效果会不明显。
另外进样时要快、准、稳，避免出现拖尾现象。
项目二：白酒中甲醇含量的测定一、实验目的1、2、掌握用外标法进行色谱定量分析的方法。
了解氢火焰离子检测器的性能和操作方法。
柱色谱分离染料实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除柱色谱分离染料实验报告篇一：柱色谱实验报告柱色谱分离实验报告篇二：色谱实验报告色谱实验报告项目一：气相色谱流出曲线的研究一：实验目的1、2、3、掌握气相色谱仪的基本结构及工作原理理解色谱流出曲线中各参数的表示方法掌握气相色谱中定性、定量分析方法二、实验原理气相色谱的固定相是涂布在载体表面的固定液，试样气体由载气携带进入色谱柱，与固定液接触时，气相中各组分便溶解在固定液中。
随着载气的不断通入，被溶解的组分又从固定液中挥发出来，挥发出的组分随载气向前移动时又再次被固定液溶解。
由于各组分在固定液中的溶解能力不同，随着载气的流动，各组分在两相间经过反复的溶解-挥发过程，经过一段时间，最终实现彼此分离。
色谱图是指被测组分从进样开始，经色谱柱分离到组分全部流过检测器后，所产生的响应信号随时间分布的图像。
色谱图上有一组色谱峰，每每个峰代表试样中的一个组分。
色谱流出曲线是以组分流出色谱柱的时间或载气流出的体积为横坐标，以检测器对各组分的电信号响应值为纵坐标的一条曲线。
三、仪器与试剂1、仪器气相色谱仪2、试剂乙醇、正丁醇四、实验步骤1、调试气相色谱仪2、分别进行进样3、进乙醇和正丁醇的混合物样品，分别记录保留时间五、实验记录1、色谱条件:50m柱经：320μm固定液：聚乙二醇载气：氮气检测器类型：fid检测器温度：150℃柱温：95℃气化室温度：165℃气体流量：载气30ml／min2、色谱图参数六：实验结果分析从实验结果所占百分比可以看出该实验出峰效果较明显，乙醇先出峰，正丁醇后出峰。
在做实验时我们应注意一些问题，比如说乙醇和正丁醇要按一定的比例来混合，柱温要设置合理，最低要高于正丁醇的沸点，也不能过高，否则会使组分不易分开；过低封效果会不明显。
另外进样时要快、准、稳，避免出现拖尾现象。
项目二：白酒中甲醇含量的测定一、实验目的1、2、掌握用外标法进行色谱定量分析的方法。
了解氢火焰离子检测器的性能和操作方法。
薄层色谱法分离染料混合物实验报告
薄层色谱法分离染料混合物实验报告一、实验目的1、学习并掌握薄层色谱法（TLC）的基本原理和操作方法。
2、利用薄层色谱法分离和鉴别常见的染料混合物。
二、实验原理薄层色谱法是一种快速、简便、灵敏的分离分析技术。
它基于混合物中各组分在固定相（薄层板上的吸附剂）和流动相（展开剂）之间的分配系数不同，从而实现各组分的分离。
当样品点在薄层板的一端，放入装有展开剂的层析缸中时，展开剂由于毛细作用沿薄层板上升。
样品中的各组分在固定相和流动相之间不断进行吸附、解吸、再吸附、再解吸的过程。
由于不同组分的吸附和解吸能力不同，它们在薄层板上移动的速度就不同，从而实现分离。
三、实验仪器与试剂1、仪器层析缸硅胶 G 薄层板毛细管紫外灯点样器2、试剂展开剂（正丁醇：乙酸：水＝ 4:1:1）染料混合物（甲基橙、亚甲基蓝）四、实验步骤1、制备薄层板称取适量的硅胶 G 粉末，置于研钵中，加入适量的蒸馏水，研磨成均匀的糊状。
将糊状硅胶均匀地铺在干净的玻璃板上，使其厚度约为 025 05mm 。
放置在水平台上，自然晾干，然后在110℃的烘箱中活化30 分钟，取出后置于干燥器中备用。
2、点样用毛细管吸取少量的染料混合物，在距离薄层板底边 1 15cm 处，轻轻接触薄层板，点出一个直径约为 2 3mm 的斑点。
注意点样量要适中，过多会导致斑点扩散，过少则不易观察。
重复点样 2 3 次，每次点样后待溶剂挥发后再进行下一次点样，以保证斑点集中。
3、展开将适量的展开剂倒入层析缸中，深度约为 05 1cm 。
将点好样的薄层板小心地放入层析缸中，使其倾斜，点样端朝下，且斑点不能浸入展开剂中。
盖上盖子，让展开剂通过毛细作用沿薄层板上升。
当展开剂上升到距薄层板顶端约 1cm 处时，取出薄层板，用铅笔标记展开剂前沿的位置。
4、显色将展开后的薄层板放在紫外灯下观察，不同的染料会显示出不同的荧光斑点。
五、实验结果与分析1、实验结果在紫外灯下观察，甲基橙呈现出黄色荧光斑点，亚甲基蓝呈现出蓝色荧光斑点。
柱层析法分离甲基橙和亚甲基蓝
柱层析法分离甲基橙和亚甲基蓝
1、装柱（湿法）
取一支色谱柱（25ml酸式滴定管），在柱子的收缩部塞一小团脱脂棉花，注意松紧要适度。
将色谱柱垂直固定在铁架台上，往柱内加适量95%乙醇溶液，打开活塞，赶走气泡。
再向柱中倒入适量95%乙醇溶液，控制滴速为1滴/秒，用小锥型瓶承接，同时通过漏斗慢慢装入15g中性氧化铝（以95%乙醇混悬），使其逐渐沉入底部。
用洗耳球敲打柱子，使氧化铝装实、均匀。
2、加样
当溶剂的液面刚好流至氧化铝表面时关闭旋塞，立即用滴管加入待分离混合液（甲基橙和亚甲基蓝混合液）0.5mL，尽量避免分离混合液粘附在柱的内壁上。
打开旋塞，当此溶液流至接近表面时，立即用少量溶剂洗下管壁的有色物质，关闭旋塞。
3、洗脱
向柱内加入95%乙醇，打开旋塞进行洗脱。
用锥形瓶收集蓝色的亚甲基蓝溶液。
当蓝色溶液收集完后，等柱内柱内液面接近滤纸面时，加入水洗脱，用锥形瓶收集橙色的甲基橙溶液。
注意洗脱时切勿使溶剂流干！
实验结束后，应让溶剂尽量流干，然后倒置，用吸耳球从活塞口向管内挤压空气，将吸附剂从柱顶挤压出。
使用过的吸附剂倒入垃圾桶里。
实验六 柱色谱 次甲基蓝与甲基橙的分离
实验六 柱色谱—次甲基蓝与甲基橙的分离
Байду номын сангаас
一、实 验 目 的
1.掌握柱层析分离、装柱、洗脱、分离操作 2.分离次甲基蓝与甲基橙混合液
五、注 意 事 项
1.棉花主要是拖住氧化铝，不宜塞得太紧，否则影响流出速度
2.氧化铝与乙醇混合均匀即可，切勿捣碎成黏糊状，这样会使流出速度减慢 3.层析柱填装紧密与否，对分离效果影响很大。若柱中留有气泡或各部分松 紧不均匀时，会影响渗透速度和显色的均匀
4.甲基橙和次甲基蓝（亚甲基蓝）的结构式如上图，可以看到, 它们结 构中既有极性部分,又有非极性部分,亚甲基蓝溶于乙醇,而甲基橙不溶于 乙醇等有机溶剂, 但它们都可溶于水，实验室通常是用乙醇做溶剂进行 分离
三、实 验 装 置
层析柱装置
四、实 验 步 骤
1.选用直径1.5cm,长15cm的层析柱，垂直固定在铁架台上，夹子夹在柱的顶端。向柱 中加入乙醇至柱高的1/2，从柱的顶端用玻璃棒将少许棉花推到柱的底部，在棉花上可 加入一薄层石英砂 2.在小烧杯中称取约10g的氧化铝加入10-15ml乙醇调匀。 另外，预先将2g甲基橙和0.25g次甲基蓝溶于110ml乙醇中，备用。 3.打开柱下活塞，控制流出速度每秒一滴，将烧杯中氧化铝糊状物加进柱内，氧化铝 自然沉降，使填装紧密而均匀，当加至柱高的3/4时，用滴管吸取少量的乙醇轻轻冲洗 柱壁上的氧化铝，然后用玻棒敲击柱身，使柱面平整。事先剪好一张圆形滤纸覆盖在 氧化铝的面上。柱活塞下接一干净的锥形瓶，流下的乙醇反复套用。 4.当溶剂面刚好到达滤纸表面1mm时，立即用滴管加入1ml次甲基蓝和甲基醇的混合液。 当混合液面降至滤纸面1mm时用滴管吸取少量乙醇，淋洗粘附在柱壁上的溶液。用滴管 加入乙醇洗脱，控制流出速度。在整个洗脱过程中不要使柱干裂。在淋洗过程中可看 到色带的形成和分离。当蓝色的次甲基蓝色带到达柱底时，更换干净的接收器，收集 蓝色的色带。然后改为蒸馏水为洗脱剂更换接收器。当黄色的甲基橙色带到达柱底时， 再更换接收器，收集黄色的色带。
实验项目柱层析分离甲基橙和次甲基蓝染料
吸附剂的活性根据其含水量而定。
吸附剂活性等级 含水量
Ⅰ 0%
Ⅱ 3%
Ⅲ 6%
Ⅳ 10%
Ⅴ 15%
所以为了提高吸附剂活性,可以用加热脱水的方法来获得。
⒉溶剂
化合物的吸附能力与它的极性成正比，具有较大极性基团的化合物，其在吸附剂上吸附能力较强。
氧化铝对各化合物的吸附性按以下次序递减：
装柱可以采用湿法或干法，干法装柱是将干吸附剂倒入柱内，填装均匀，
然后加入少量溶剂。无论采用哪种装柱都不要使吸附剂有裂缝或气泡，否则影响
分离效果，一般说来湿法装柱较干法紧密均匀。
本实验采用湿法装柱。
1、色带有重叠现象，即柱内出现彩色色带，这是由于样品进入带较宽，扩散现象严重之故，但由于甲基橙与次甲基兰极性相差甚大，随着洗脱进行，基本上可以得到单一化合物。
3．洗脱速度要保持在1滴/秒，速度过快，物料还来不及平衡，影响分离效果；过慢，会导致柱内扩散现象严重，均会影响分离效果。
六、实验数据记录
1．用95%乙醇洗脱分出蓝色色带，得次甲基兰
2．然后改用水洗脱分出黄色色带，得甲基橙
七、实验结果计算及曲线
⒈吸附剂
柱层析常用吸附剂有氧化铝,硅胶, 氧化镁,碳酸钙及活性炭等, 吸附剂要求颗粒大小均匀,越细分离效果越佳,但此时洗脱阻力也会增大,所以要选择颗粒大小合适的吸附剂.
4．一旦样品加入开始过柱后，必须保持洗脱剂的流速恒定，不得关闭活塞，否则将会造成被分离样品在分离过程中重新混合，严重影响分离效果。
实验项目：柱层析分离甲基橙和次甲基蓝染料
一、实验目的
1．了解柱色谱分离有机化合物的原理；
2．初步掌握色谱柱装填和洗脱的操作方法。
色谱分离技术实验思考题及实验指导
附件3-5色谱分离技术的演变和发展（张卫*****************.cn）一、本探究实验需要讨论的问题：A组：(1) 什么是色谱分离技术？它经历怎样的发展、演变过程？(2) 简要说明色谱分析方法的基本原理，固定相和流动相的作用分别是什么？(3) 柱色谱的色谱柱如何进行填充？填充过程中需要注意哪些问题？(4) 简述柱色谱常用的洗脱剂及其洗脱能力的次序，如何选择合适的洗脱剂？采用柱色谱分离甲基橙和次甲基蓝混合染料时，为什么先用95%乙醇溶液作为洗脱剂，再用去离子水做洗脱剂进行洗脱，如果两者换一下次序是否可以？为什么？(5) 设计实验：利用纸层析法进行植物色素的提取与分离任意采集叶片、果皮等有色植物适量，经过烘干、研磨、溶剂浸提、离心分离、点样、展开等操作，提取与分离植物色素。
设计要求：通过文献查阅，判断所选的植物色素样本所含的色素种类有哪些？可以选取哪些合适的提取和分离色素的有机溶剂？如何分离各种不同的色素？设计相应的实验方法和步骤，给出所用的试剂及仪器。
拟提供的试剂与仪器：石油醚、丙酮、乙醇、碳酸钙、烘箱、纸层析滤纸、表面皿、培养皿、研钵、离心机等；B组：(6) 常用的色谱分析方法有哪些？分别有怎样的特点和适用范围？(7) 薄层色谱中，最常用的固定相（吸附剂）有哪些？其颗粒的大小对于分离效果有何影响？影响固定相活性的主要因素有哪些？(8) 薄层色谱的分离效果的评价指标是什么？如何进行计算？若化合物本身无色，薄层色谱的色谱图中组分迁移产生的展开斑点位置如何确定？试举例说明两种常用的确定方法。
(9) 采用薄层色谱分离顺式偶氮苯和反式偶氮苯的混合物时，若分别采用20:1环己烷-乙酸乙酯和10:1环己烷-乙酸乙酯作为展开剂，展开效果有何不同？为什么？(10) 设计实验：利用纸层析法进行植物色素的提取与分离任意采集叶片、果皮等有色植物适量，经过烘干、研磨、溶剂浸提、离心分离、点样、展开等操作，提取与分离植物色素。
柱色谱实验教学中甲基橙和 亚甲基蓝的分离和测定方法
柱色谱实验中用于甲基橙和亚甲基蓝分离和测定的方法有以下几种：1 单柱溶剂色谱法：这种方法使用一根柱子，用于分离甲基橙和亚甲基蓝。
通常使用含有甲醇和水的溶剂，将样品加入柱子内，然后用溶剂进行洗脱。
由于甲基橙和亚甲基蓝在溶剂中的溶解性不同，所以它们会在柱子中分离出来。
2 双柱溶剂色谱法：这种方法使用两根柱子，用于分离甲基橙和亚甲基蓝。
通常使用第一根柱子是含有甲醇和水的溶剂，第二根柱子是含有乙醚和水的溶剂。
将样品加入第一根柱子内，然后用溶剂进行洗脱。
由于甲基橙和亚甲基蓝在不同的溶剂中的溶解性不同，所以它们会在两根柱子中分离出来。
3 色谱分离加离子交换层析法：这种方法使用一根柱子，用于分离甲基橙和亚甲基蓝。
通常使用含有甲醇和水的溶剂，将样品加入柱子内，然后用溶剂进行洗脱。
在柱子中，甲基橙和亚甲基会在两根柱子中分离出来。
4 离子交换层析法：这种方法使用一根柱子，用于分离甲基橙和亚甲基蓝。
通常使用含有甲醇和水的溶剂，将样品加入柱子内，然后用溶剂进行洗脱。
在柱子中，甲基橙和亚甲基蓝会经过一层含有离子交换树脂的层，在这一层中，甲基橙和亚甲基蓝会与树脂中的离子结合，然后由于离子的电荷不同，甲基橙和亚甲基蓝就会在柱子中分离出来。
5 双柱色谱法：这种方法使用两根柱子，用于分离甲基橙和亚甲基蓝。
通常使用第一根柱子是含有甲醇和水的溶剂，第二根柱子是含有乙醚和水的溶剂。
将样品加入第一根柱子内，然后用溶剂进行洗脱。
由于甲基橙和亚甲基蓝在不同的溶剂中的溶解性不同，所以它们会在两根柱子中分离出来。
6 液相色谱法：这种方法使用一根柱子，用于分离甲基橙和亚甲基蓝。
通常使用含有甲醇和水的溶剂，将样品加入柱子内，然后用溶剂进行洗脱。
在柱子中，甲基橙和亚甲基蓝会经过一层含有某种固定物的层，在这一层中，甲基橙和亚甲基蓝会与固定物结合，然后由于固定物的特性不同，甲基橙和亚甲基蓝就会在柱子中分离出来。
7 超声波辅助提取法：这种方法使用超声波来辅助甲基橙和亚甲基蓝的提取。
柱色谱分离实验
精选可编辑ppt
27
三、实 验 内 容
收集 试样有色，在层析柱上可直接观察。洗脱后
分别收集各个组分。
试样无色，收集洗脱液时，多采用等份收 集，每份洗脱剂的体积随所用吸附剂的量及试样 的分离情况而定。收集的每份洗脱剂的体积越小， 分离效果越好。
精选可编辑ppt
28
三、实 验 内 容
鉴定
试样有色 依据颜色直接鉴定
22
三、实 验 内 容
装柱 干法装柱 湿法装柱
吸附剂装填紧密，排除 气泡。最终应使吸附剂的上 端平整，无凹凸面，无断层。
精选可编辑ppt
装柱
23
• 装柱时应该注意均匀，不能有气泡，裂缝 ，否则样品可能顺缝隙流动而不吸附，影 响样品的分离，应用质软的物体如吸耳球 等轻轻敲击柱身，促使吸附剂装填紧密， 排除气泡。最终应使吸附剂的上端平整， 无凹凸面．
•干法：10g 硅胶 +乙醇
•先用乙醇 后用水
•操作
•组分颜色
装柱
加样 洗脱
收集
鉴定
•1mL样品 •加样操作 •0.5mL×2乙醇洗涤
•组分颜色
精选可编辑ppt
35
仪器和试剂
• 1.仪器 • 锥形瓶、玻璃漏斗、色谱柱 • 2.试剂 • 柱层析硅胶、脱脂棉、乙醇（95%）甲
基橙、亚甲基蓝。
• H2O∶ 95 %乙醇 = 1∶ 1 (A 液) • 0. 2mol·L -1HCl∶ 95 %乙醇 = 1∶ 1 (B 液)
精选可编辑ppt
3
类色 谱 法 分
二、实 验 原 理
液—固色谱法
固定相、流动相的物理状态
气—固色谱法 气—液色谱法
液—液色谱法
柱色谱法（column chromatography）